Тест-система імуноферментна “dia-hcv-igg-igm” для визначення антитіл класів igg та igm до вірусу гепатиту с

Реферат: Тест-система імуноферментна "DIA-HCV-IgG-IgM-uni" для визначення антитіл класів IgG та IgM до вірусу гепатиту С, в якій використовують імуносорбент, в лунки якого внесено суміш рекомбінантних поліпептидів core, NS3, NS4, NS5 аналоги антигенів вірусу гепатиту С і кон'югат. В складі кон'югатів використовують моноклональні антитіла проти IgG та IgM людини, мічені ферментом, а як проявник - однокомпонентний розчин хромогену. UA 72457 U (12) UA 72457 U UA 72457 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до біотехнології, імунохімії та медицини і може бути використана для виявлення антитіл класів IgG та IgM до вірусу гепатиту С в сироватці або плазмі крові людини методом імуноферментного аналізу. Гепатит С (ГС) - вірусне захворювання, що характеризується не тільки широким розповсюдженням, але й вкрай згубними наслідками, до яких може призвести ця інфекція. Гострий гепатит у більшості випадків перебігає з мінімальною клінічною симптоматикою. Жовтяниця та інші клінічні прояви інфекції відмічаються приблизно лише у 20 % хворих, тоді як у 50-85 % інфікованих вірусом гепатиту С (ВГС) розвивається хронічний гепатит, який і є основною клінічною формою цього захворювання. Багаторічна персистенція вірусу при хронічному ГС може викликати розвиток цирозу печінки з наступним високим ризиком виникнення гепатоцелюлярної карциноми. Лабораторна діагностика ГС базується на виявленні специфічних антитіл (IgG та IgM) в сироватці крові або інших біологічних рідинах поряд з різними методами виявлення антигену та РНК вірусу. Серед серологічних методів діагностики ВГС найбільш поширеним є метод імуноферментного аналізу (ІФА), який характеризується високою чутливістю та специфічністю. В Україні розроблена і випускається тест-система для визначення антитіл класу IgG проти вірусу гепатиту С (DIA-HCV) виробництва НВК Діапроф-Мед [1]. В основу корисної моделі поставлено задачу створити імуноферментну тест-систему для виявлення антитіл класів IgG та IgM до вірусу гепатиту С (ВГС) як на ранніх стадіях сероконверсії, так і при хронічному перебігу захворювання. Задачею корисної моделі є створення імуноферментної тест-системи на основі рекомбінантних поліпептидів аналогів структурного корового (core) і неструктурних (NS3, NS4, NS5) антигенів ВГС, суміш яких засорбовано в лунках полістиролового планшету, як кон'югат використовуються моноклональні антитіла проти IgG та IgM людини, дає змогу виявляти гепатит С на різних стадіях, як гостру так і хронічну фази. Поставлена задача вирішується тим, що отримують імуносорбент, в лунки якого засорбовано рекомбінантні поліпептиди core, NS3, NS4, NS5 - аналоги антигенів ВГС. В складі кон'югатів використовуються моноклональні антитіла проти імуноглобулінів людини класів G та М, мічені ферментом. Ферментативну реакцію визначають за допомогою однокомпонентного субстратного розчину з хромогеном. За одну постановку (2 години) можна проаналізувати 80 сироваток. Приклад. Визначення антитіл до окремих антигенів вірусу гепатиту С у сироватці крові хворої X., 1965 року народження. Визначення проводять за відомою методикою [2] твердофазного імуноферментного аналізу. Після однократного промивання планшету у лунки імуносорбенту, з сорбованими антигенами ВГС, вносять по 80 мкл розчину для розведення сироваток і по 20 мкл досліджуваних зразків сироватки від хворої для виявлення антитіл до окремих білків ВГС і контрольні зразки: 4 позитивних і 4 негативних. Накривають планшет клейкою плівкою або кришкою та інкубують при температурі 37 °C протягом 60 хв. При наявності в зразку специфічних антитіл до ВГС, вони зв'язуються з антигенами на твердий фазі, утворюючи комплекс антиген-антитіло. Після відмивання планшету в лунки додають кон'югат - суміш моноклональних антитіл проти IgG та IgM людини, мічені пероксидазою і інкубують при 37 °C протягом 30 хв. Після відмивання 6 разів в лунки додають розчин проявника (однокомпонентний субстратний розчин з хромогеном) та інкубують при 18-22 °C у темряві 30 хв. Зупиняють кольорову реакцію, вносячи до всіх проб по 100 мкл стоп-реагенту. Не більш як через 5 хв. після зупинення кольорової реакції визначають оптичну густину (ОГ) в лунках у двохвильовому режимі за допомогою спектрофотометра. Значення ОГ зразка прямо пропорційне кількості антитіл до відповідних антигенів ВГС у сироватці. Позитивні значення ОГ хоча б двох з чотирьох антигенів ВГС свідчить про наявність антитіл до ВГС і захворюваність на гепатит С. У хворої X визначені антитіла до ВГС. Джерела інформації: 1. Деклараційний патент UA № 57639 А. Заявка № 2002076165. Тест-система діагностична імуноферментна для визначення антитіл проти вірусу гепатиту С у сироватках або плазмі крові людини (DIA-HCV). Семиноженко В. П. Гураль A. Л, Шевчук О. А. 16.06.2003. бюл. № 7. 2. Михайлов А. Т., Симирский В. Н. "Методы иммунохимического анализа в биологии развития". М.: "Наука", 1981. 1 UA 72457 U ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 Тест-система імуноферментна "DIA-HCV-IgG-IgM-uni" для визначення антитіл класів IgG та IgM до вірусу гепатиту С, в якій використовують імуносорбент, в лунки якого внесено суміш рекомбінантних поліпептидів core, NS3, NS4, NS5 аналоги антигенів вірусу гепатиту С і кон'югат, яка відрізняється тим, що в складі кон'югатів використовують моноклональні антитіла проти IgG та IgM людини, мічені ферментом, а як проявник - однокомпонентний розчин хромогену. Комп’ютерна верстка Л.Литвиненко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2