Спосіб прискореного визначення стійкості зразків соняшнику до вовчка (orobanche cumana wallr.)

Реферат: Спосіб прискореного визначення стійкості зразків соняшнику до вовчка (Orobanche cumana Wallr.), що включає отримання проростків соняшнику та визначення стійкості до вовчка, причому диференціація стійких та сприйнятливих зразків здійснюється на 13-16 денних проростках за активністю ферменту каталази. UA 79519 U (54) СПОСІБ ПРИСКОРЕНОГО ВИЗНАЧЕННЯ СТІЙКОСТІ ЗРАЗКІВ СОНЯШНИКУ ДО ВОВЧКА (OROBANCHE CUMANA WALLR.) UA 79519 U UA 79519 U 5 10 15 20 25 30 35 40 Корисна модель належить до галузі сільського господарства, зокрема селекції соняшнику (Helianthus annum L.), а саме біохімічних методів добору. Важливим напрямком селекції соняшнику є створення стійких форм до хвороб, зокрема до вовчка (Orobanche cumana Wallr.), шкідливого голопаразиту, що уражує посіви соняшнику в країнах Середземномор'я та Східної Європи. Відомі способи визначення стійкості вихідного матеріалу соняшнику до вовчка вегетаційний [1], гістологічний [3,4], біохімічний [4-7], молекулярний [8]. Недоліками зазначених способів є тривалість проведення, недостатня інформативність та висока енергоємність. Прототипом корисної моделі є спосіб визначення стійкості до вовчка зразків соняшнику за допомогою вегетаційного методу [1, 2]. Він полягає в отриманні проростків і їх диференціації на стійкі та сприйнятливі на штучному інфекційному фоні в умовах фітотрону при контрольованих температурі та освітленні. Ураженість соняшнику визначають на 25-у добу після сходів, підраховуючи кількість бульбочок на одну уражену рослину в відсотках [2]. Недоліком цього способу є тривалість проведення та висока затратність. В основу корисної моделі поставлено задачу прискорення процесу диференціації зразків соняшнику (Helianthus annum L.) на стійкі та сприйнятливі до вовчка (Orobanche cumana Wallr.). Поставлена задача вирішується шляхом використання способу прискореного визначення стійкості зразків соняшнику до вовчка (Orobanche cumana Wallr.), що включає отримання проростків соняшнику і диференціацію стійких та сприйнятливих зразків на 13-16-денних проростках за активністю ферменту каталази. Фермент каталази (КФ 1.11.1.6) відіграє важливу роль у відповіді на біотичний стрес, зокрема у формуванні стійкості рослин до паразитів та патогенів і свідчить про потенційну стійкість рослин. Спосіб був експериментально розроблений та апробований в лабораторії генетики, біотехнології та якості біосировинних ресурсів Інституту рослинництва ім. В.Я. Юр'єва НААН впродовж 2011-2012 років. Дослідження здійснено на матеріалі зразків соняшнику, створених в лабораторії селекції та генетики соняшнику Інституту рослинництва ім. В.Я. Юр'єва. Спосіб здійснюється визначенням активності каталази в 13-16-денних проростках стерильних материнських (♀) та фертильних батьківських (♂) лініях соняшнику, отриманих в умовах штучного клімату. Дібрані генотипи характеризувались різною стійкістю до вовчка [9]. З проростків із довжиною стебла 12-16 см. відбирали наважку 500 мг зеленого матеріалу і розтирали в фарфоровій ступці з фосфатним буфером [10]. Отриману ферментну витяжку центрифугували 10 хв при 5000 об/хв на центрифузі ЦУМ-1 та визначали активність каталази фотоколориметричним методом [11] на фотоелектроколориметрі КФК-2-УХЛ 4.2. Для визначення активності каталази у кювету для аналізу приливали 2 мл реакційної суміші, що містила 0,06 Μ розчин Н2О2 та 0,06 Μ фосфатний буфер рН 7,0 в співвідношенні 1:1, 0,2 мл ферментної витяжки та інкубували 10 хв при 37 °C. Після цього додавали 1 мл 4 % розчину молібдату амонію. Оптичну густину вимірювали проти контролю реактивів при довжині хвилі 405 нм. Активність ферментів позначали в умовних одиницях на 1 г сирої тканини (ум. од./г тк.) та обробляли стандартними методами варіаційної статистики [12]. Визначена активність каталази (табл.) дозволяє диференціювати зразки соняшнику на стійкі та сприйнятливі. Таблиця Активність каталази у ліній соняшнику у порівнянні з стандартами стійкості та сприйнятливості до вовчка (ум. од./г тк.) Назва лінії, ♀ PR64A71 Х720В Х762В Сх1002А Сх4021А Сх503А X114В Х908Б Стійкість, визначена вегетаційним методом стандарт стійкості висока висока висока середня середня середня стандарт сприйнятливості Активність каталази, ум. од./г тк. 5,6±0,64* 7,1±1,3* 7,7±2,0* 4,0±0,5* 8,8±0,7* 6,3±1,4* 3,4±0,5* 2,0±0,4 Примітка. *Різниця за показниками активності ферменту між зразком і стандартом сприйнятливості достовірна при Р