Спосіб моделювання хронічного нейродегенеративного захворювання головного мозку судинного генезу

Реферат: Спосіб моделювання хронічного нейродегенеративного захворювання (НДЗ) головного мозку судинного ґенезу характеризується тим, що моделюють повторний гострий інсульт, а через 1 місяць курсом вводять кальцієвмісні лікарські засоби. UA 82084 U (12) UA 82084 U UA 82084 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до галузі медицини і стосується способу моделювання хронічного нейродегенеративного захворювання головного мозку судинного ґенезу. Більш детально, корисна модель стосується області експериментальної медицини, біології та фармакології, а саме, моделювання нейродегенеративної патології, і може бути застосована при дослідженні механізмів розвитку патологічних процесів в головному мозку експериментальних тварин з метою їх корекції розвитку або терапії відповідними лікарськими засобами. В сучасній неврології розроблено та активно застосовуються декілька моделей експериментальної судинної деменції: хронічна оклюзія або штучна емболізація загальних сонних артерій, 4-судинна оклюзія магістральних судин голови у гіпертензивних щурів, деякі інші. Встановлено, що у піддослідних тварин через 1 місяць після проведення моделювання гострого інсульту, розвивається субкортикальний інфаркт, який супроводжується появою виражених когнітивних розладів [1-5]. Недоліком цих методів відтворення нейродегенеративних захворювань є розвиток саме субкортикального варіанта нейродегенеративного процесу, проте різним типам моделювання кортикальних дисфункцій автори значної уваги не приділяють. В зв'язку із цим нами розроблено експериментальну модель розвитку постінсультної нейродегенерації у дослідних тварин (ссавців), яка характеризується вираженим ушкодженням нервових клітин в кіркових та підкоркових структурах головного мозку щурів і розвитком відповідних порушень когнітивних функцій у щурів. Як прототип нами був відібраний метод моделювання повторного церебрального інсульту в різних структурах головного мозку у експериментальних тварин [6]. Ця методика характеризується тим, що у піддослідних тварин моделюють гострий інтрацеребральний аутогеморагічний інсульт шляхом локальної деструкції кровоносних судин в області внутрішньої капсули на тлі попередньо виконаної оклюзії іпсілатеральної загальної сонної артерії. Недоліком дного способу моделювання є недостатня ефективність моделі. Задачею корисної моделі нейродегенеративного захворювання стала індукція в ЦНС відтермінованого нейродегенеративного процесу на тлі попередньо викликаної моделі повторного інсульту. Поставлена задача вирішується за рахунок створення способу моделювання хронічного нейродегенеративного захворювання (НДЗ) головного мозку судинного ґенезу у щурів, який відрізняється тим, що включає моделювання повторного гострого інсульту, а через 1 місяць підсилюється курсовим введенням кальцієвмісних лікарських засобів. Основна відмінність прототипу від методики моделювання хронічного нейродегенеративного процесу у ссавців, що пропонується, полягає в тому, що через 1 місяць після обох операцій впродовж 10 днів тваринам щоденно вводили кальцієвмісний лікарський засіб. Головною причиною, що сприяла розробці і апробації способу моделювання хронічної нейродегенеративної патології стало те, що відтворення інтрацеребрального вогнища крововиливу на тлі ішемії певних ділянок мозку супроводжується загибеллю значної кількості пірамідних нейронів кори великих півкуль головного мозку. Відомо, що в механізмах розвитку нейродегенеративних процесів ключову роль відіграють іони кальцію, у зв'язку з чим додаткове курсове введення інсультним тваринам кальцієвмісного лікарського засобу збільшило темп загибелі нервових клітин в області крововиливу в ядерній зоні і межових відділах, що можна розглядати як ефективну експериментальну модель відтворення судинної деменції. Спосіб моделювання реалізують наступним чином. Спосіб виконують в декілька етапів. Перший етап включає проведення оклюзії (перев'язку) правої загальної сонної артерії у тварини, наркотизованої 1 % розчином тіопенталу натрію (60 мг/кг, внутрішньочеревно). Білому щуру в положенні на спині в області шиї справа здійснюють надріз довжиною 1,5-2 см відносно до проекцій a. carotis communis dextra. Відділивши підшкірну тканину та м'язи, здійснюють доступ до правої загальної сонної артерії і підводять під неї дві лігатури. Повну перев'язку, тобто оклюзію судини проводять на рівні 10-15 мм до ділянки біфуркації на зовнішню та внутрішню гілки сонної артерії, користуючись шовковими нитками 6/0 (EthiconLtd., Edinburgh, UK). Після цього рану наглухо зашивали, використовуючи поліамідні нитки 2 USP (Олімп, Україна), а область до розрізу найближчих ділянок шкіри обробляли 5 % спиртовим розчином йоду. Другий або відтермінований етап моделювання нейродегенеративного захворювання судинного ґенезу полягає у експериментальному відтворенні локальної посттравматичної гематоми в області внутрішньої капсули правої півкулі головного мозку щурів через 10 днів з моменту виконання оклюзії правої загальної сонної артерії. Для цього тварин наркотизують 1 % розчином тіопенталу натрію (60 мг/кг, внутрішньочеревно), а моделювання гематоми аутокров'ю у тварин здійснюють із використанням стереотаксичного методу, механічним руйнуванням 1 UA 82084 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 тканини внутрішньої капсули (capsula interna dextra, L=3,5-4,0; Н=6,0; AP=0,6-1,0) (Paxinos, 1981) в раніше ушкодженій ішемічним інсультом правої півкулі головного мозку тварин. В область внутрішньої капсули за допомогою стереотаксичного приладу (СТМ-3, Росія) вводять мандренніж, а безпосередній процес моделювання внутрішньомозкової гематоми здійснюється 4-6 обертовими рухами зігнутого мандрена і наступним введенням в зону деструкції 0,15-0,2 мл аутокрові тварини. Після проведення оперативного втручання і комплексу послідовно виконаних маніпуляцій рану в області черепа наглухо зашивають поліамідними нитками 2 USP (Олімп, Україна) і обробляють сусідні ділянки шкіри 5 % спиртовим розчином йоду. Останній етап моделювання НДЗ полягає в тому, що через 1 місяць після відтворення повторного інсульту тваринам інтраперитонеально вводиться курсове призначення кальцієвмісного лікарського засобу (кальцію глюконат), в дозі 10 мг/кг впродовж 10 днів. Отримані результати переконливо свідчать, що впродовж першого місяця після моделювання нейродегенеративного захворювання судинного генезу смертність піддослідних тварин із повторним інсультом склала 30 %, а через 7 місяців - 56,6 %. На фронтальних зрізах щурів гематоми локалізовані в зоні внутрішньої капсули, при цьому площа гематоми на 2 поперечних зрізах склала в середньому 8,71±0,42 мм . В сенсомоторному цереброкортексі іпсілатеральної гематоми півкулі головного мозку відмічено значне зниження щільності нервових клітин. Так, щільність нейронів в фронтальному цереброкортексі іпсілатеральної 2 2 півкулі склала 427,2±16,7 кл/мм , а в контралатеральній - навіть 418,4±16,9 кл/мм , що відповідно на 13-24 % менше від тварин із геморагічним інсультом і на 40 % менше від показників, отриманих у здорових контрольних тварин. Процес моделювання завершується розвитком вираженого нейродегенеративного процесу судинного ґенезу навколо області інтрацеребральної гематоми через 7 місяців після відтворення гострого інсульту (посттравматичної інтрацеребральної гематоми). Висока етіологічна і патогенетична відповідність цієї моделі нейродегенеративного захворювання судинного ґенезу, що пропонується клінічним формам судинної деменції у пацієнтів, дозволяє рекомендувати її для широкого використання при проведенні відповідного типу досліджень в галузі загальної нейропатології, патологічної фізіології і експериментальної нейропсихофармакології. Джерела інформації: 1. Saito Η., Togashi H., Yoshioka Μ., Nakamura Ν., Minami Μ., Parvez H. Animal models of vascular dementia with emphasis on stroke-prone spontaneously hypertensive rats // ClinExpPharmacolPhysiol Suppl.-1995. - Vol. 22(1). - P. 257-259. 2. Stasiak Α., Mussur Μ., Unzeta Μ., Lazewska D., Kiec-Kononowicz K., Fogel W.A. The central histamine level in rat model of vascular dementia // J PhysiolPharmacol.-2011. - Vol. 62(5).-P. 549558. 3. Kitamura Α., Fujita Y., Oishi N., Kalaria R.N., Washida K., Maki Т., Okamoto Y., Hase Y., Yamada M., Takahashi J., Ito H., Tomimoto H., Fukuyama H., Takahashi R., Шага М. Selective white matter abnormalities in a novel rat model of vascular dementia // Neurobiol Aging.-2012. - Vol. 33(5). P. 25-35. 4. Li R.P., Wang Z.Z., Sun M.X., Hou X.L., Sun Y., Deng Z.F., Xiao K. Polydatin protects learning and memory impairments in a rat model of vascular dementia // Phytomedicine.-2012.-Vol. 19(8-9).-P. 677-681. 5. Xu X, Li Z, Yang Z, Zhang T. Decrease of synaptic plasticity associated with alteration of information flow in a rat model of vascular dementia // Neuroscience.-2012. - Vol. 206.-P. 136-143. 6. Савосько С.І., Чайковський Ю.Б., Макаренко О.М. Патент № 64193. Спосіб моделювання повторного інсульту у щурів. Бюл. № 20, 25.10.2011, с. 5.143. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 50 Спосіб моделювання хронічного нейродегенеративного захворювання (НДЗ) головного мозку судинного ґенезу, який характеризується тим, що моделюють повторний гострий інсульт, а через 1 місяць курсом вводять кальцієвмісні лікарські засоби. Комп’ютерна верстка Л. Бурлак Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2