Спосіб корекції вікових змін обміну гідрогенсульфіду в тканинах препаратом “есмін”

Реферат: Спосіб корекції вікових змін обміну гідрогенсульфіду (H2S) шляхом призначення фармакологічного засобу - полімікроелементного препарату "Есмін" в дозі 1/7 капсули на 1 кг маси 1 раз на добу інтрагастрально упродовж 14 діб. UA 87885 U (12) UA 87885 U UA 87885 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до медицини, а саме до медичної біохімії та фармакотерапії, та призначена для корекції обміну біологічно-активного метаболіту гідрогенсульфіду (H2S) в тканинах за допомогою полімікроелементного препарату "Есмін". Результати досліджень останніх років показали, що в процесі старіння зменшується активність ензимів транссульфування гомоцистеїну та цистеїну, які беруть участь в синтезі H2S - вазодилятатора, нейромедіатора, антиоксиданта та цитопротектора, знижується рівень H2S в тканинах. Зниження ендогенної продукції H2S асоціюється з формуванням різних патологічних станів. Таким чином, актуальним залишається пошук препаратів, які здатні коригувати обмін H2S в процесі старіння. Спосіб корекції обміну H2S в органах тварин фармакологічним засобом є відомим [Carvedilol induces endogenous hydrogen sulfide tissue concentration changes in various mouse organs / Wilinski B, Wiliiiski J, Somogyi E [et al.] // Folia Biol (Krakow). - 2011. Vol. 59, № 3-4. - P. 151-155]. Недоліками вказаного способу є застосування карведилолу, який впливає на обмін H2S тільки при тривалому застосуванні високих доз препарату, вплив препарату на вміст H2S в різних органах істотно відрізняється, засіб призначений для лікування кардіоваскулярної патології і має гіпотензивний ефект. Тому вказаний спосіб не може бути використаний для корекції вікових змін обміну H2S в тканинах. Найбільш близьким за технічним вирішенням до способу, що заявляється, є спосіб фармакологічної корекції композицією вітамінів В6, В9, В12 та мікроелементного комплексу "Есмін" цирозу печінки на фоні гіпергомоцистеїнемії [Фармакологічна корекція композицією вітамінів В6, В9, В12 та мікроелементного комплексу Есмін прогресування експериментального цирозу печінки на фоні гіпергомоцистеїнемії / Н.О. Пентюк, М.Б. Луцюк, Г.С. Григор'єва, Н.Ф. Конахович // Раціональна фармакотерапія. - 2012. - № 1. - С. 72-76], який взято за прототип. "Есмін" належить до нового класу фармакологічних речовин, створених на основі поліядерних композицій есенціальних мікроелементів (залізо, мідь, цинк, кобальт, марганець, хром, ванадій, молібден, селен) з органічними лігандами. Частина вказаних мікроелементів входить до складу ензимів та кофакторів обміну сірковмісних амінокислот та синтезу H2S. Згідно з цим способом "Есмін" застосовують в дозі 1/7 капсули на 1 кг маси щура 1 раз на добу інтрагастрально на 1 % розчині крохмалю в комплексі з вітамінами В6, В9, В12. Недоліком цього способу є те, що він не дозволяє оцінити ефективність корекції вікових змін обміну H2S в різних органах, оскільки "Есмін" застосовують в композиції з вітамінами для корекції біохімічних порушень у структурних елементах печінки. В основу корисної моделі поставлена задача розробити спосіб адекватної фармакологічної корекції вікових змін обміну H2S в тканинах полімікроелементним засобом. Технічний результат, який досягається при вирішенні поставленої задачі, полягає в підвищенні ефективності геропротекції. Це забезпечується тим, що, згідно з корисною моделлю, з метою корекції вікових змін обміну H2S призначають "Есмін" в дозі 1/7 капсули на 1 кг маси щура 1 раз на добу інтрагастрально на 1 % розчині крохмалю упродовж 14 діб. Застосування способу. Досліди проводять на білих лабораторних щурах-самцях трьох вікових груп: 1-2 міс. (статевонезрілі), 6-8 міс. (дорослі), 24-26 міс. (старі). Тварин кожної вікової групи ділять на 2 підгрупи: перша - контроль (інтактні щури), друга - дослідна, якій щодня вводять "Есмін" в дозі 1/7 капсули на 1 кг маси щура 1 раз на добу інтрагастрально на 1 % розчині крохмалю 14 діб. Всі маніпуляції з тваринами проводять в стандартних умовах. Для оцінки ефективності впливу "Есміну" на процеси обміну H2S в тканинах після евтаназії виділяють органи тварин, виготовляють з них гомогенати, отримують постядерний супернатант, в якому визначають вміст H2S та швидкість утворення сульфід-аніону з цистеїну відомими спектрофотометричними методами. Конкретний приклад застосування способу. Для дослідження беруть 60 білих лабораторних щурів: група 1 (n=20) - 1-2 міс., група 2 (n=20) - 6-8 міс., група З (n=20) - 24-26 міс. Кожну групу ділять на 2 підгрупи по 10 особин в кожній: "Контроль" та "Есмін". Щурам трьох підгруп "Есмін" щоденно вводять мікроелементний препарат "Есмін" виробництва ВАТ "Київський вітамінний завод" в дозі 1/7 капсули на 1 кг маси щура 1 раз на добу. Безпосередньо перед введенням 1 капсулу "Есміну" ретельно змішують в ступці з 70 мл 1 % крохмального клейстеру та вводять зондом у шлунок по 1 мл на 100 г маси тіла щура. Під час експерименту всі тварини знаходяться на стандартному раціоні віварію з водним режимом ad libitum та 12-годинним світловим режимом день/ніч. Всі маніпуляції 00 00 проводять в стандартних умовах з 9 до 10 упродовж 14 діб. На 15 добу всіх тварин виводять з експерименту шляхом дислокації шийних хребців. 1 UA 87885 U 5 10 15 20 В кожної особини виділяють серце, аорту, мозок, нирки, промивають органи холодним 1,15 % розчином калію хлориду. Наважки тканин (1-2 г) подрібнюють ножицями, гомогенізують нирки та мозок в середовищі 1,15 % розчину калію хлориду, міокард та аорту - в середовищі 0,25 М сахарози, 0,01 М Трис (рН 7,4) у співвідношенні 1:5 (маса/об'єм) при 3000 об./хв (тефлонскло). Гомогенати центрифугують 30 хв. при 600 g при температурі 4-6 °C, відбирають аліквоти постядерного супернатанту в мікропробірки Eppendorf для біохімічних досліджень. В гомогенатах тканин визначають вміст H2S спектрофотометричним методом за реакцією з N,Nдиметил-пара-фенілендіаміном [Carvedilol induces endogenous hydrogen sulfide tissue concentration changes in various mouse organs / Wilinski B, Wilinski J, Somogyi E [et al.] // Folia Biol (Krakow). - 2011. - Vol. 59, № 3-4. - P. 151-155]. Визначають активність тканинної продукції H2S з цистеїну за швидкістю утворення сульфід-аніону [Утворення гідроген сульфіду в органах щурів / Н.В. Заічко, Н.О. Пентюк, А.В. Мельник [та ін.] // Медична хімія. - 2009. - ТЛІ, № 4. - С. 7-13]. Результати наведені в таблиці. В підгрупах "Контроль" у статевонезрілих щурів вміст H2S в міокарді, нирках, аорті та мозку був достовірно вищим на 16,4; 19,5; 14,1 та 19,7 %, ніж у дорослих щурів, а у дорослих - на 15,6; 14,2; 19,3 та 18,8 % вищим, ніж у старих. В підгрупах "Есмін" вміст H2S в тканинах щурів всіх вікових груп виявився вищим, ніж в підгрупах "Контроль". Найбільший приріст цього показника спостерігався у щурів підгрупи "Есмін" віком 24-26 міс.: в міокарді - на 28,3 %, аорті - на 25,9 %, нирках - на 18,9 %, мозку - на 21,9 %. У статевонезрілих щурів реєструвалась лише тенденція до підвищення вмісту H2S в тканинах. У щурів в підгрупах "Есмін" віком 24-26 міс. швидкість продукції H2S з цистеїну була на 30-55 % (р