Спосіб прискореного виявлення метицилінорезистентних штамів стафілокока

Реферат: Спосіб прискореного виявлення метицилінорезистентності стафілококів включає використання стандартного диско-дифузійного методу. Після 4-5 годин інкубації чистої культури стафілокока в присутності диска з антибіотиком на поверхню живильного середовища накладають фільтрувальний папір, зволожений 1 % розчином ТΤΧ, та інкубують ще 30 хвилин при 35 °C. Після чого враховують наявність і діаметр нефарбованої зони навколо диска. UA 89974 U (54) СПОСІБ ПРИСКОРЕНОГО ВИЯВЛЕННЯ МЕТИЦИЛІНОРЕЗИСТЕНТНИХ ШТАМІВ СТАФІЛОКОКА UA 89974 U UA 89974 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до медичної мікробіології, зокрема до способів лабораторної діагностики бактерійних інфекцій, а саме є способом виявлення метицилінорезистентних штамів стафілокока (MRS). Згідно з діючою нормативною документацією, [1] детекція метицилінорезистентних штамів стафілокока може бути здійснена наступними методами: диско-дифузійний, метод скринінгу на агарі з оксациліном, визначення мінімальної інгібуючої концентрації (МІК) оксациліну, молекулярно-генетичні методи (виявлення гена mес А за допомогою полімеразно-ланцюгової реакції (ПЛР). Найбільш доступним та поширеним в загальній лабораторній практиці є диско-дифузійний метод [1], що передбачає виділення чистої культури збудника із клінічного матеріалу згідно зі стандартною процедурою [2], приготування стандартного інокулюма цієї культури (0,5 Од McF 8 3 або 1,5×10 КУО/см ), його посів на щільне поживне середовище Мюллера-Хінтона. На підсушену протягом 10-15 хвилин поверхню наносять стандартні паперові диски з антибактерійними препаратами. Відразу після аплікації дисків чашки Петрі поміщають в термостат догори дном і інкубують при температурі 35 °C протягом 18-24 годин. Врахування результатів проводиться шляхом вимірювання діаметрів зон затримки росту мікроорганізмів навколо дисків. До суттєвих ознак вказаного методу, які співпадають з суттєвими ознаками способу, що заявляється, належать. - виділення чистої культури стафілокока; - її висів на агар Мюллера-Хінтона в концентрації, що відповідає щільності 0,5 Од McF; - створення зони з градієнтом концентрації оксациліну шляхом нанесення на поверхню середовища стандартного паперового диска з оксациліном; - інкубація при 35 °C; - оцінка чутливості культури за розміром зони затримки росту культури. До причин, що заважають отриманню бажаного технічного результату належить загальна тривалість дослідження: від моменту одержання клінічного матеріалу вона складає 72 години. В основу корисної моделі поставлена задача розробити спосіб прискореного виявлення метицилінорезистентних штамів стафілококів, в якому за рахунок використання індикатора метаболічної активності бактерійної культури в комбінації зі стандартним диско-дифузійним методом забезпечити скорочення терміну одержання результату дослідження. Поставлена задача вирішується тим, що детекції змін окислювально-відновлювального потенціалу середовища (rH2) в присутності хімічного редокс-індикатора трифенілтетразолій хлориду (ТТХ). Вказані зміни відбуваються під впливом метаболічної активності мікроорганізмів та, при дослідженні кулі, тури стафілокока стандартним диско-дифузійним методом, можуть бути зареєстровані після 4-5 годин росту (lag фаза), коли rН2 потенціал сягає значень 25-23. Чутливі до метициліну мікроорганізми в зоні дифузії оксациліну не розмножуються і не змінюють rH2, унаслідок цього колір індикатора навколо диска не змінюється. Визначення MRS-штамів проводять наступним чином: із клінічного матеріалу виділяють чисту культуру стафілокока згідно зі стандартною процедурою. Готують стандартний інокулюм (0,5 Од McF), стерильним тампоном наносять його на поверхню агара Мюллера-Хінтона та накладають диск з оксациліном. Після аплікації диска чашки Петрі поміщають в термостат догори дном і інкубують при температурі 35 °C протягом 4-5 годин. Далі на поверхню живильного середовища накладають фільтрувальний папір, зволожений 1 % розчином ТΤΧ, накривають кришкою. Інкубація 30 хвилин при 35 °C. Чашки Петрі виймають і в перевернутому положенні враховують наявність і діаметр нефарбованих зон навколо дисків. Відсутність зони затримки росту культури навколо диска з оксациліном, тобто наявність рожевого забарвлення фільтрувального паперу або наявність незабарвленої зони з діаметром менш ніж 13 мм розцінюють як ознаку метицилінорезистентності (MRS). Спосіб може бути застосований для прискорення оцінки чутливості і інших видів бактерій до інших антибактерійних препаратів диско-дифузійним методом, однак оптимальна тривалість періоду інкубації та граничні значення діаметра зон затримки росту можуть бути іншими. ПЕРЕЛІК ПОСИЛАНЬ: 1. Наказ МОЗ України № 167 Про затвердження методичних вказівок "Визначення чутливості мікроорганізмів до антибактеріальних препаратів" [Електронний ресурс] / Міністерство охорони здоров'я України. - Режим доступу: http://mozdocs.kiev.ua. 2. Методические указания по применению унифицированных микробиологических (бактериологических) методов исследования в клинико-диагностических лабораториях [Текст] / Приложение № 1 к приказу МЗ СССР № 535 от 22 апреля 1985 г. - 45 с. 60 1 UA 89974 U ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 10 1. Спосіб прискореного виявлення метицилінорезистентності стафілококів, що включає використання стандартного диско-дифузійного методу, який відрізняється тим, що після 4-5 годин інкубації чистої культури стафілокока в присутності диска з антибіотиком на поверхню живильного середовища накладають фільтрувальний папір, зволожений 1 % розчином ТΤΧ, та інкубують ще 30 хвилин при 35 °C, після чого враховують наявність і діаметр нефарбованої зони навколо диска. 2. Спосіб за п. 1, в якому відсутність зони затримки росту або наявність незабарвленої зони з діаметром менш ніж 13 мм, розцінюють, як ознаку метицилінорезистентності. Комп’ютерна верстка Д. Шеверун Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2