Спосіб імпрегнації парафінових гістозрізів азотнокислим сріблом

Реферат: Спосіб імпрегнації парафінових гістозрізів азотнокислим сріблом включає видалення ксилолом парафіну з гістозрізів, їх зневоднення у етиловому спирті, окиснення, просвітлення у 5 % розчині щавлевої кислоти, і проявленням у 2 % розчині амоніакального срібла (1-3 хв.), зневоднення у етиловому спирті, просвітлення у карбол-ксилолі та ксилолі, поміщення зрізів у бальзам. Окиснення проводять свіжоприготовленим водним розчином 0,5 % марганцевокислим калієм та відновлення виконують в 5 % водному розчині нейтрального формаліну. UA 92763 U (54) СПОСІБ ІМПРЕГНАЦІЇ ПАРАФІНОВИХ ГІСТОЗРІЗІВ АЗОТНОКИСЛИМ СРІБЛОМ UA 92763 U UA 92763 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до галузі ветеринарної медицини і може бути використана для виявлення ретикулярних волокон у дослідному матеріалі з використанням азотнокислого срібла. У відомому способі [Келемен И. Новый видоизменненный метод импрегнации ретикулиновых волокон / И. Келемен. - Румынское медицинское обозрение. - 1971. - С. 18-23], що складається з наступних етапів: видалення ксилолом парафіну з гістозрізів, їх зневоднення у етиловому спирті, окиснення у свіжоприготовленому 0,1 % водному розчині марганцевокислого калію, експозицією гістозрізів у 2 % водному розчині азотнокислого срібла (30 хвилин) в термостаті при t=56° з послідуючим їх охолодженням (10-15 хв.) і проявленням у 2 % розчині амоніакального срібла (1-3 хв.) та відновленні у 1 %, 3 % і 5 % водних розчинах нейтрального формаліну, зневоднення у етиловому спирті, просвітлення у карбол-ксилолі та ксилолі, поміщення зрізів у бальзам. Недоліком відомого способу є низький відсоток отримання якісних гістозрізів, а також його значна тривалість і трудомісткість. Задача корисної моделі створити спосіб імпрегнації ретикулярних волокон у парафінових гістозрізах шляхом зміни концентрації розчину марганцевокислого калію з 0,1 % на 0,5 %, а також виключення з способу аналога етапів протравлювання гістозрізів у розчині солянокислого спирту, імпрегнації у 2 % водному розчині азотнокислого срібла і його охолодження, відновлення гістозрізів у 1 % і 3 % розчинах нейтрального формаліну. Приклад здійснення способу Після забою тварин методом гострого знекровлення відбирають матеріал для досліджень. Відібрані органи або їх шматочки етикетують і фіксують протягом 24 годин 10 % водним розчином нейтрального формаліну. Зафіксований матеріал промивають водопровідною водою і зневоднюють у етанолі зростаючої концентрації. Для виготовлення гістозрізів матеріал ущільнюють в парафіні. Гістозрізи виготовляють за допомогою полозкового або ротаційного мікротома і переносять на предметні стекла. Для імпрегнації гістозрізів азотнокислим сріблом використовують лише хімічно чисті реактиви і абсолютно чистий скляний посуд та допоміжне обладнання Методика імпрегнації гістозрізів азотнокислим сріблом. 1. Із гістозрізів видаляють парафін ксилолом (протягом 2-3 хв.). 2. Після цього гістозрізи проводять через 96° і 70° (відповідно) етиловий спирт (по 3 хв. у кожному). 3. Промивають гістозрізи у водопровідній і двох змінах дистильованої води (відповідно по 3 і 1 хв.). 4. Окиснюють гістозрізи у свіжоприготовленому 0,5 % водному розчині марганцевокислого калію (до 3 хв.). 5. Промивають гістозрізи у чотирьох змінах дистильованої води (по 1 хв.). 6. Просвітлюють гістозрізи у 5 % водному розчині щавлевої кислоти - 10 хв. (до їх побіління). 7. Промивають гістозрізи у трьох змінах дистильованої води - по 1 хв. 8. Імпрегнують гістозрізи у свіжоприготовленому 2,0 % водному розчині амоніакального азотнокислого срібла протягом 1-3 хв. 9. Промивають гістозрізи у трьох змінах дистильованої води - по 1 хв. 10. Відновлюють зрізи у 5 % водному розчині нейтрального формаліну (під контролем мікроскопа). 11. Швидко ополіскують гістозрізи у дистильованій воді - до 10 сек. 12. Ополіскують гістозрізи в аміачному спирті - 2 хв. 13. Промивають гістозрізи у підкисленій дистильованій воді - 5 хв. 14. Зневоднюють гістозрізи у 70° і 96° спирті - по 2 хв. 15. Просвітлюють гістозрізи у карбол-ксилолі - 2 хв. 16. Просвітлюють гістозрізи у ксилолі - 2 хв. 17. Заводять гістозрізи у бальзам. Приготування азотнокислого амоніакального срібла. До 10 мл 10 % водного розчину азотнокислого срібла додають 10 крапель 25 % водного розчину NaOH. При цьому утворюється темно-бурий осад гідрату окису срібла. Осад, що утворився обережно (краплями) титрують 25 % розчином NH4OH майже до повного розчинення. Після того, як залишилася незначна частина осаду до титрованого розчину додають такий же об'єм дистильованої води. Для імпрегнації використовують щойно виготовлений і профільтрований розчин. Приготування водного розчину нейтрального формаліну. До 5 мл нейтрального формальдегіду додають 95 мл водопровідної води. 1 UA 92763 U 5 Приготування аміачного спирту. До 100 мл 96 спирту додають 10 крапель концентрованого водного розчину аміаку. Підкислена дистильована вода. До 100 мл дистильованої води додають 10 крапель льодяної оцтової кислоти. Імпрегнація гістозрізів азотнокислим сріблом запропонованим способом є менш тривалою та дозволяє отримати якісні гістопрепарати. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 10 15 Спосіб імпрегнації парафінових гістозрізів азотнокислим сріблом, який включає видалення ксилолом парафіну з гістозрізів, їх зневоднення у етиловому спирті, окиснення, просвітлення у 5 % розчині щавлевої кислоти, і проявленням у 2 % розчині амоніакального срібла (1-3 хв.), зневоднення у етиловому спирті, просвітлення у карбол-ксилолі та ксилолі, поміщення зрізів у бальзам, який відрізняється тим, що окиснення проводять свіжоприготовленим водним розчином 0,5 % марганцевокислим калієм та відновлення виконують в 5 % водному розчині нейтрального формаліну. Комп’ютерна верстка М. Мацело Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 2