2-[1-(2,5-диметилфеніл)-1н-тетразол-5-ілсульфаніл]-n-фенілацетамід, що проявляє антивірусну активність відносно вірусу грипу h1n1

Реферат: 2-[1-(2,5-Диметилфеніл)-1Н-тетразол-5-ілсульфаніл]-N-фенілацетамід, що проявляє антивірусну активність відносно вірусу грипу H1N1. Винахід належить до хіміко-фармацевтичної промисловості, зокрема, до біологічно активних сполук синтетичного походження з антивірусною активністю до вірусу грипу H1N1. Заявлено сполуку 2-[1-(2,5-диметилфеніл)-1Н-тетразол-5-ілсульфаніл]-N-фенілацетамід формули: N H N N N N S O H3C CH3 , що проявляє антивірусну активність відносно вірусу грипу H1N1. UA 108368 C2 (12) UA 108368 C2 N H N N N N S O H3 C C H3 UA 108368 C2 5 10 Винахід належить до хіміко-фармацевтичної промисловості, зокрема, до біологічно активних сполук синтетичного походження з антивірусною активністю до вірусу грипу H1N1. Вірус H1N1 викликає хворобу під умовною назвою "свинячий грип". Його штами виявлені серед вірусів грипу серотипу С та підтипу серотипу А (A/H1N1, A/H1N2, AH3N1, A/H3N2 та A/H2N3). Пошук нових синтетичних противірусних засобів є актуальною проблемою сучасної фармації. За даними Всесвітньої організації охорони здоров’я щороку від грипу помирає до 500 тис. осіб. Постійна мутація вірусу-збудника у результаті антигенного дрейфу або реасортації (обміну) генів веде до появи нових підтипів вірусу, проти яких у людей відсутній імунітет. Аналогом заявленої сполуки за фармакологічною дією є препарат "Рибавірин", діючою речовиною якого є 1-β-D-рибофуранозил-1Н-1,2,4-триазол-карбоксамід загальної формули (І), який проявляє противірусну активність (Машковский М.Д. Лекарственные средства: - 15-е изд., М.: ООО "Издательство Новая Волна", 2005. - 1200 с. - С. 877). HO O N HO OH N O N NH2 15 20 (I) В основу винаходу поставлена задача пошуку нових біологічно активних сполук з противірусною активністю, що перешкоджають реплікації вірусу і тому здатні лікувати грип, викликаний вірусом H1N1. Поставлена задача вирішується таким чином, що як біологічно активну сполуку запропоновано 2-[1-(2,5-диметилфеніл)-1Н-тетразол-5-ілсульфаніл]-1Н-фенілацетамід загальної формули: N H N N N N S O H3C CH3 . (ІІ) Заявлений 2-[1-(2,5-диметилфеніл)-1Н-тетразол-5-ілсульфаніл]-N-фенілацетамід одержано з високим виходом при взаємодії 1-(2,5-диметилфеніл)-1Н-тетразол-5-тіолу з 2-хлор-Nфенілацетамідом у лужно-етанольному розчині відповідно схеми: N O N N N SH H3C 25 30 35 N Cl PhNH H N N N N S O H3 C K2CO3 CH3 CH3 . Винахід ілюструється наступними прикладами: Приклад 1. Метод синтезу 2-[1-(2,5-диметилфеніл)-1H-тетразол-5-ілсульфаніл]-Nфенілацетаміду. До 3,39 г (0,01 моль) 1-(2,5-диметилфеніл)-1Н-тетразол-5-тіолу у 50 мл етанолу додавали 0,56 г (0,01 моль) гідроксиду калію. Після розчинення реакційної суміші при перемішуванні додавали розчин 1,70 г (0,01 моля) 2-хлор-N-фенілацетаміду у 20 мл етанолу. Реакційну суміш кип'ятили 3 години, охолоджували, виливали у 200 мл води. Осад, що випав, відфільтровували і перекристалізовували з етилового спирту. Вихід - 92 %. Т. пл. - 190 °C. Знайдено, %: N-20,70; S-9,49 C17H17N5OS. Вирахувано, %: N-20,63; S-9,45. Спектр ПМР (ДМСО-d6, ТМС): 2,01 (с, 3Н, СН3), 2,36 (с, 3Н, СН3), 4,38 (с, 2Н, СН2), 6,95-7,42 (м, 8Н, Аr), 10,42 (с, 1Н, NH). 1 UA 108368 C2 5 10 15 20 Приклад 2. Експериментальне визначення противірусної активності було проведено у Південному дослідному інституті США (Southern Research Institute-SRI, Birmingham, Alabama). Для визначення противірусної активності по відношенню до вірусу грипу H1N1 заявленої сполуки II був проведений тест in vitro з використанням клітин Vero. Клітини Vero вирощували в 96-лунковому мікропланшетi до того часу, поки дно кожної лунки не покриється клітинами. Залишкове культуральне середовище повністю видаляли, і кожну лунку двічі промивали фосфатним буфером. У кожну лунку додавали розчин вірусу IVA(H1N1), скорегованого до необхідної концентрації. Сполуку І та противірусний засіб - рибавірин (Sigma) розчинили в диметилсульфоксиді, додали до кожної лунки до кінцевої концентрації від 0,1 до 10 мкг/мл. Після культивування протягом 48 годин, клітини Vero спостерігали у мікроскопі. Після додавання 100 мкл 70 % ацетону кожну лунку витримували при -20 °C протягом 1 год. Після висушування у сушильній шафі додавали 100 мкл 0,4 % (w/v) розчину SRB (сульфородаміну Б), розчиненого в 1 % (v/v) оцтовій кислоті. Після 30 хвилин фарбування, розчин SRB, що не зв'язався з клітинами, 4 рази промивали 1 % (v/v) оцтовою кислотою. Після висушування у кожну лунку додавали 100 мкл 10 mМ розчину Tris (pH 10,5) для розчинення забарвлюючої речовини на дні лунки. Для оцінки противірусної активності вимірювали оптичну густину. Клітини, що оброблені тільки DMSO, та клітини, що оброблені DMSO і вірусом IVA(H1N1), використовували в якості контрольних груп. У таблиці наведені експериментальні дані активності 2-[1-(2,5-диметилфеніл)-1Н-тетразол5-ілсульфаніл]-1Н-фенілацетаміду відносно вірусу California/07/2009 IVA(H1N1). Ефективність цієї сполуки виражали показниками ЕС50, ІС50 та SI, які визначали у дослідах in vitro при дії сполук, що попередньо розчиняли в ДМСО у діапазоні концентрацій від 0,1 до 100 мкг/мл. Сполука II має значну перевагу у пригніченні вірусу у порівнянні з прототипом - рибавірином. Таблиця Противірусна активність 2-[1-(2,5-диметилфеніл)-1Н-тетразол-5ілсульфаніл]-N-фенілацетаміду (II) щодо вірусу California/07/2009 IVA(H1N1) Сполука Мол. маса Сполука II 339,42 Рибавірин 244,2 Тип вірусу California/07/2009 IVA(H1N1) California/07/2009 IVA(H1N1) EC50, мкг/мл мкг/мл SI 4.6 >100 >22 8.7 >320 >37 Примітки: 1. EC50 - ефективна концентрація, що визначається з кривої доза/ефект і є концентрацією речовини, при якій ефект спостерігається для 50 % популяції після проходження певного часу дії. Виражається у мкг/мл. 2. ІС50 - концентрація, при якій інгібування клітин організму речовиною складає 50 %. Виражається у мкг/мл. 3. SI - індекс селективності, що є показником ефективності препарату, і виражається співвідношенням ІС50 до EC50. 25 30 Відповідно до таблиці 2-[1-(2,5-диметилфеніл)-1Н-тетразол-5-ілсульфаніл]-N-фенілацетамід за індексом селективності перевищує рибавірин майже у 2 рази. Заявлена сполука за антивірусною активністю перевищує відомий антивірусний засіб. Це дозволяє передбачити можливість його застосування у медичній практиці для лікування грипу, викликаного вірусом H1N1. Заявлена сполука може бути одержана в умовах хімікофармацевтичних підприємств за доступною технологією без використання токсичних реагентів. ФОРМУЛА ВИНАХОДУ 35 2-[1-(2,5-Диметилфеніл)-1Н-тетразол-5-ілсульфаніл]-N-фенілацетамід формули: 2 UA 108368 C2 N H N N N N S O H3C CH3 , що проявляє антивірусну активність відносно вірусу грипу H1N1. Комп’ютерна верстка В. Мацело Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Василя Липківського, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3