2-(4,6-диморфолін-4-іл-1,3,5-триазин-2-іл)-n-(4-етоксифеніл)гідразинкарботіоамід, що проявляє антивірусну активність по відношенню до вірусу iva(h1n1)

Реферат: 2-(4,6-Диморфолін-4-іл-1,3,5-триазин-2-іл)-N-(4-етоксифеніл)гідразинкарботіамід формули: H N S HN N N O NH O N N N O , який проявляє антивірусну активність по відношенню до вірусу H1N1. структурної UA 75511 U (12) UA 75511 U UA 75511 U Корисна модель належить до фармацевтичної хімії та медицини, а саме до фармакології засобів, зокрема, одержання біологічно активного 2-(4,6-диморфолін-4-іл-1,3,5-триазин-2-іл)-N(4-етоксифеніл)гідразинкарботіоаміду (сполука DAM 10874) загальної формули: H N S HN N N O 5 10 15 20 25 30 35 40 NH O N N N O , який виявляє антивірусну активність, що дозволяє передбачити використання його у практичній медицині як антивірусний лікарський засіб, а саме для лікування грипу, викликаного вірусом California/07/2009 IVA/H1N1/. Відомо, що вірус H1N1 викликає хворобу у людей та тварин під умовною назвою "свинячий грип" (переклад з англ. Swine influenza). Його штами виявлені серед вірусів грипу серотипу С та підтипу серотипу А (A/H1N1, A/H1N2, AH3N1, Α/Η3Ν2 та A/H2N3). За даними Всесвітньої організації охорони здоров я, кожного року під час епідемій грипу хворіє до 5 млн. людей. Висока інфекційність, постійна мутація віруса-збудника в результаті антигенного дрейфу або реасортації (обміну) генів веде до появи нових підтипів вірусу, проти яких у людей відсутній імунітет. Тому виникають пандемії з високою смертністю [1, 2]. Для лікування застосовують засоби імунокоригуючої, патогенетичної, симптоматичної терапії, вируліцидні та противірусні етіотропні препарати. Найбільш широкого застосування для профілактики та лікування знайшли етіотропні препарати. До першого покоління належать препарати адамантанового ряду, в США і в Західній Європі амантадин, в США, Канаді, Росії римантадин, в Росії для дітей римантадин в вигляді сиропу - орвірем, а також разом з жарознижуючими і протизапальними компонентами - антигрипін-максимум. Застосування препаратів адамантанового ряду обмежено відсутністю в них активності до вірусу групи В, побічною дією та швидким виникненням до них резистентності [4]. Препарати адамантановаго ряду є блокираторами іонних каналів М2 білка вірусу грипу А. До препаратів другого покоління, що ефективні до вірусів грипу А та В є інгібітори нейрамінідази - зенамівір [3,4]. У Росії широкого поширення набув препарат арбідол, який належить до класу індолів. В основу корисної моделі поставлена задача пошуку нових біологічно активних сполук з противірусною активністю, що перешкоджають реплікацію вірусу, і тому здатні лікувати грип, викликаний вірусом H1N1. Поставлена задача вирішується тим, що як біологічно активну сполуку запропоновано 2(4,6-диморфолін-4-іл-1,3,5-триазин-2-іл)-N-(4-етоксифеніл)гідразинкарботіоамід, ефективність якої підтверджується експериментально. У таблиці 1 наведені експериментальні дані активності 2-(4,6-диморфолін-4-іл-1,3,5-триазин2-іл)-N-(4-етоксифеніл)гідразинкарботіоаміду по відношенню до вірусу California/07/2009 IVA(H1N1). Ефективність цієї сполуки виражали показниками ECso, ІС5о та SI, які визначали в дослідах in vitro при дії сполук, що попередньо розчиняли в ДМСО в діапазоні концентрацій від 0,1 до 100 мкг/мл. Сполука DAM 10874 має перевагу в пригніченні вірусу у порівнянні з прототипом - рибавірином. В умовах експерименту сполука, що заявлена, виявила високу противірусну активність щодо вірусу California/07/2009 IVA(H1N1) (результати наведені в табл. 1). 1 UA 75511 U Таблиця 1 Противірусна активність 2-(4,6-диморфолін-4-іл-1,3,5-триазин-2-іл)-N-(4етоксифеніл)гідразинкарботіоаміду (DAM 10874) щодо вірусу California/07/2009 IVA(H1N1) Сполука мол. маса Структура HN N N ЕС50 ІС50, мкг/мл мкг/мл SI H N S DAM 10874 Тип вірусу NH O 460,56 N California/07/2009 0.075 IVA(H1N1) >100 >1300 244,2 N California/07/2009 IVA(H1N1) >320 >180 N O O O N HO Рибавірин N NH2 N O 1,8 OH OH 5 Примітки: 1. EC50 - ефективна концентрація, що визначається з кривої доза/ефект і є концентрацією речовини, при якій ефект спостерігається для 50% популяції після проходження певного часу дії. Виражається у мкг/мл. 2. ІС50 - концентрація, при якій інгібування клітин організму речовиною складає 50 %. Виражається у мкг/мл. 3. SI - індекс селективності, що є показником ефективності препарату, і виражається співвідношенням ІС50 до ЕС50. 10 15 Відповідно до табл. 1 2-(4,6-диморфолін-4-іл-1,3,5-триазин-2-іл)-N-(4-етоксифеніл)гідразинкарботіоамід за індексом селективності перевищує рибавірин більш ніж в 7,2 разу, а за ІС50 - у 3,2 разу. Заявлений 2-(4,6-диморфоліно-4-іл-1,3,5-триазин-2-іл)-N-(4-етоксифеніл)гідразинкарботіоамід одержано з високим виходом при взаємодії 2-гідразино-4,6диморфолінотриазину-1,3,5 та 4-етоксифенілізотіоціанатом в етанольному розчині. Схема синтезу: H N S HN NH2 N O HN S N N N O 20 25 30 NH O N N N N O N O N N O Приклади конкретного виконання. Приклад 1. Метод синтезу 2-(4,6-диморфоліно-4-іл-1,3,5-триазин-2-іл)-N-(4етоксифеніл)гідразинкарботіоамід. До 2,85 г (0,01 моль) 2-гідразино-4,6-диморфолінотриазину1,3,5 в 50 мл етанолу додавали 1,79 г (0,01 моль) 4-етоксифенілізотіоціанату. Перемішували протягом однієї години при температурі 75-78 °С, охолоджували до кімнатної температури і залишали на добу. Осад, що випав, відфільтровували і перекристалізовували з етанолу. Вихід 92 %. Т.пл. 181-183 °С. Знайдено,%: N 24,3; S 7,11 C20H28N8O3S. Вирахуваного N 24,3; S 6,92. Приклад 2. Експериментальне визначення противірусної активності було проведено у Південному дослідному інституті США (Southern Research Institute - SRI, Birmingham, Alabama). Для визначення противірусної активності сполуки DAM 10874 був проведений тест in vitro з використанням клітин Vero. Клітини Vero вирощували в 96-лунковому мікропланшеті до того часу, поки дно кожної лунки не покриється клітинами. Залишкове культуральне середовище повністю видаляли і кожну лунку двічі промивали фосфатним буфером. У кожну лунку додавали розчин вірусу IVA(HINI), скорегованого до необхідної концентрації. Сполуку DAM 10874 та противірусний засіб 2 UA 75511 U 5 10 15 20 рибавірин (Sigma) розчинили в диметилсульфоксиді, додали до кожної лунки до кінцевої концентрації від 0,1 до 10 мкг/мл. Після культивування протягом 48 годин, клітини Vero спостерігали в мікроскопі. Після додавання 100 мкл 70% ацетону кожну лунку витримували при 20 °С протягом 1 год. Після висушування в сушильній шафі додавали 100 мкл 0,4% (w/v) розчину SRB (сульфородаміну Б), розчиненого в 1% (ν/ν) оцтовій кислоті. Після 30 хвилин фарбування, розчин SRB, що не зв'язався з клітинами, 4 рази промивали 1% (ν/ν) оцтовою кислотою. Після висушування в кожну лунку додавали 100 мкл 10 тМ розчину Tris (pH 10,5) для розчинення забарвлюючої речовини на дні лунки. Для оцінки противірусної активності вимірювали оптичну густину. Клітини, що оброблені тільки DMSO, та клітини, що оброблені DMSO і вірусом IVA(H1N1), використовували як контрольні групи. Список посилань: 1. Emergence of novel swine -origin influenza A (H1N1) virus in human. Novel swine-origin influenza A (H1N1) virus investigation team. The New England Journal of Medicine 2009; 10:1-10. 2. MMWR Morb Mortal Wkly Rep. Update: drug susceptibility of swine-origin influenza A (H1N1) viruses, April 2009.Centers for Disease Control and Prevention (CDC) 2009; 58: 433-435. 3. FDA. Antiviral Drug Advisory Committee. Gaithersburg: Centre for Drug Evaluation and Research 2002; 1-266. 4. Hayden F. WHO Guidelines on the Use of Vaccines and Antivirals during Influenza. Annex 5Considerations for the Use of Antivirals during an Influenza pandemic, Geneva, 2-4 October, 2002. 5.Pandya U.H., Astik R.R., Thaker K.A. J. Studies On S-Triazine Derivatives. Part-lnst.Chem., 1981,53,№2,69-70 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 25 2-(4,6-Диморфолін-4-іл-1,3,5-триазин-2-іл)-N-(4-етоксифеніл)гідразинкарботіамід формули: H N S HN N N O структурної NH O N N N O , який проявляє антивірусну активність по відношенню до вірусу H1N1. Комп’ютерна верстка І. Скворцова Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3