Спосіб визначення активності дезінфектантів за мінусових температур

Реферат: Спосіб визначення активності дезінфектантів за мінусових температур включає визначення бактерицидних властивостей дезінфікуючого препарату щодо Escherichia coli та Staphylococcus aureus суспензійним методом, виготовлення бактеріальної зависі, підготовку батистових тестоб'єктів, контамінацію тест-об'єктів бактеріями Е. соlі та St. aureus. Додатково проводять їх знезараження випробовуваним дезінфектантом за мінусової температури -20, -15, -10, -5, -1 °C. UA 117390 U (54) СПОСІБ ВИЗНАЧЕННЯ АКТИВНОСТІ ДЕЗІНФЕКТАНТІВ ЗА МІНУСОВИХ ТЕМПЕРАТУР UA 117390 U UA 117390 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до галузі ветеринарної мікробіології та санітарії і може бути використана для визначення активності дезінфікуючих препаратів, що застосовуються для профілактичної та вимушеної дезінфекції при інфекційних захворюваннях сільськогосподарських тварин і птиці за мінусових температур навколишнього середовища. Відомий спосіб визначення строків придатності деззасобів [Патент на корисну модель № 60420 Україна, МПК А61К 39/00. Спосіб визначення терміну придатності дезінфектантівтуберкулоцидів [Текст] / А.І. Завгородній, А.П. Палій, Н.В. Калашник. - № u201010947; заявл. 13.09.2010; опубл. 25.06.2011, Бюл. № 12.] та спосіб визначення норми витрати дезінфікуючих препаратів [Патент на корисну модель № 30045 Україна, МПК A61L 2/16. Спосіб визначення норми витрати дезінфектантів при знезараженні об'єктів контамінованих мікобактеріями [Текст] / А.П. Палій, А.І. Завгородній. - № u200710837; заявл. 01.10.2007; опубл. 11.02.2008, Бюл. № 3]. За цими способами визначають оптимальні строки використання та норми витрати дезінфікуючих препаратів з метою знезараження об'єктів ветеринарного нагляду, контамінованих мікобактеріями, проте дані способи не регламентую порядку щодо апробації дезінфектантів за різних позитивних та негативних температур навколишнього середовища. Існує спосіб вивчення фізико-хімічних, бактерицидних, дезінфікуючих властивостей та параметрів токсичності нових препаратів для дезінфекції об'єктів ветеринарного нагляду, порядок вивчення і дослідження препаратів в лабораторних і виробничих умовах [Ветеринарна дезінфекція (інструкція та методичні рекомендації) / За ред. О.М. Якубчак. - К.: «Компанія Біопром», 2010. - 152 с]. За цим способом визначають температурний коефіцієнт препарату, який характеризує ступінь активності дезінфікуючого засобу залежно від температури його розчинів. Недоліком даного способу є те, що він не передбачає апробації дезінфектантів за мінусових температур. Найбільш близьким за технічною суттю до способу, що заявляється, є спосіб оцінки ефективності нових дезінфектантів у лабораторних умовах [Методические указания о порядке испытания новых дезинфицирующих средств для ветеринарной практики / Госагропром СССР. - М., 1987 - 90 с]. Це рішення обрано за найближчий аналог. За цим способом проводять визначення антимікробної дії дезінфікуючих препаратів у дослідах з тест-культурами кишкової палички та золотистого стафілококу лише за кімнатної температури. В основу корисної моделі поставлено задачу розробити спосіб визначення активності дезінфектантів за мінусових температур при знезараженні об'єктів, контамінованих тесткультурами, що включає визначення бактерицидних властивостей дезінфікуючого препарату щодо Escherichia coli та Staphylococcus aureus суспензійним методом, виготовлення бактеріальної зависі, підготовку батистових тест-об'єктів, контамінацію тест-об'єктів бактеріями Е. соlі та St. aureus шляхом додаткового їх знезараження випробовуваним дезінфектантом за мінусової температури -20, -15, -10, -5, -1 °C при експозиції 1 година, щоб забезпечити ефективність способу. Порівняльний аналіз заявляємого способу та найближчого аналога показує, що спосіб, який заявляється, відрізняється від існуючого широким спектром експериментальних досліджень щодо визначення температури, за якої дезінфікуючий препарат знезаражує контаміновані мікроорганізмами тест-об'єкти, дозволяє отримати конкретні дані щодо можливості застосування дезінфікуючого препарату за мінусових температур навколишнього середовища. Спосіб виконується таким чином: Добову культуру штаму кишкової палички та золотистого стафілококу окремо висівають на скошений м'ясо-пептонний агар (МПА) і вирощують у термостаті за температури 37 °C протягом 18-24 годин. Контроль чистоти росту культур здійснюють шляхом мікроскопування мазків, пофарбованих за Грамом. З метою виготовлення бактеріальної зависі культуру заливають на 1/3 пробірки стерильним фізіологічним розчином і залишають на 3-5 хвилин у нахиленому положенні з таким розрахунком, щоб рідина покрила всю поверхню середовища. Після цього, струшуючи пробірку, змивають культуру. Важко змиваємі колонії зскрібають стерильною петлею. Отриману завись зливають у стерильну колбу з бусами, струшують до утворення гомогенної суміші, фільтрують та розводять стерильним фізіологічним розчином до концентрації 2 млрд. мікробних тіл в 1 мл зависі (за оптичним стандартом). Для визначення бактерицидної дії потенційного дезінфектанту готують його водні розчини 3 3 різної концентрації, які вносять по 10 см у флакони ємністю 20 см . Контролем досліду є 3 флакони, в які замість розчинів дезінфектантів вносять по 10 см стерильного фізіологічного 3 розчину. У кожний флакон за кімнатної температури вносять по 0,2 см зависі тестових культур мікроорганізмів. 1 UA 117390 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Для кожного розведення препарату при різних експозиціях застосовують не менше 3-х пробірок. Після витримування заданої експозиції з кожної пробірки роблять висіви на чашки Петрі з 3 поживним середовищем (в об'ємі 0,5 см ). Висіви інкубують за температури 37,0 °C. Облік росту посівів проводять через 18-24 годин і остаточно - через 6-7 діб. Контроль росту здійснюють візуально та шляхом мікроскопування мазків. Після визначення бактерицидних властивостей препарату суспензійним методом проводять дослідження із застосуванням батистових тест-об'єктів. При виготовленні батистових тест-об'єктів кусок батисту занурюють на 24 години у холодну водопровідну воду, потім його ретельно перуть з милом, кип'ятять, сушать і прасують. Приготовлену таким чином тканину розрізають ножицями на тест-об'єкти розміром 5×10 мм і по 10 штук розкладають в чашки Петрі, які загортають в папір і стерилізують в автоклаві 30 хвилин за температури 110 °C (0,5 атм). З метою контамінації стерильних батистових тест-об'єктів в чашки Петрі заливають 10-20 мл бактеріальної зависі, рівномірно змочуючи всі тест-об'єкти. Чашки Петрі закривають кришкою і залишають на 20 хвилин. Потім в асептичних умовах батистові тест-об'єкти, просочені культурою, переносять на поверхню стерильного фільтрувального паперу (два шари на дні чашки Петрі), покривають їх зверху стерильним папером і закривають чашку кришкою. Через 10 хвилин після видалення надлишкової рідини для фіксації мікроорганізмів на батистових тестоб'єктах, останні переносять на поверхню сухого стерильного фільтрувального паперу в чашку Петрі і зверху покривають стерильним листом фільтрувального паперу, підсушують в термостаті за температури 37,0 °C протягом 20 хвилин з прочиненими кришками. Зберігають контаміновані тест-об'єкти в чашках Петрі в холодильнику за температури 4,0 °C. Строк зберігання тестів з кишечкою паличкою - одна доба, з золотистим стафілококом - 4 доби. Контаміновані тест-об'єкти розташовують у металевих емальованих кюветах, які розміщують у стерильному боксі. Кожний дослідний тест-об'єкт обробляють розчином випробуваного дезінфектанту, який наносять окремо на кожний тест-об'єкт. На контрольні тестоб'єкти наносять стерильний фізіологічний розчин. Дослідні тест-об'єкти поміщають у морозильні камери з мінусовою температурою окремо -20 °C, -15 °C, -10 °C, -5 °C та -1 °C. Після витримування заданої експозиції тест-об'єкти відмивають у стерильному фізіологічному розчині Осад, що утворився, ресуспендують стерильним фізіологічним розчином 3 та висівають на поживне середовище у об'ємі 0,5 см . Висіви інкубують за температури 37,0 °C. Облік росту посівів проводять через 18-24 годин і остаточно - через 6-7 діб. Контроль росту здійснюють візуально та шляхом мікроскопування мазків. Для досліду використовували дезінфікуючий препарат «Віроцид», виготовлений окремо на воді та водному розчині пропіленгліколю. Приклад 1. За вищезазначеним способом визначали бактерицидні властивості препарату «Віроцид», виготовленого на воді, при знезараженні тест-об'єктів, контамінованих Е. соlі та St. aureus. Приклад 2. За вищезазначеним способом визначали бактерицидні властивості препарату «Віроцид», виготовленого на 10,0 % водному розчині пропіленгліколю, при знезараженні тестоб'єктів контамінованих Е. соlі та St. aureus. Приклад 3. За вищезазначеним способом визначали бактерицидні властивості препарату «Віроцид», виготовленого на 20,0 % водному розчині пропіленгліколю, при знезараженні тестоб'єктів контамінованих Е. соlі та St. aureus. Приклад 4. За вищезазначеним способом визначали бактерицидні властивості препарату «Віроцид», виготовленого на 40,0 % водному розчині пропіленгліколю, при знезараженні тестоб'єктів контамінованих Е.соlі та St. aureus. Результати проведених досліджень наведені в таблицях 1 і 2. Як видно з матеріалів таблиць, препарат «Віроцид» проявляє бактерицидні властивості щодо тест культур мікроорганізмів Е. соlі та St. aureus у концентрації 0,5 % за експозиції 1 година при розведенні у 10-40 % водному розчині пропіленгліколю. Дезінфікуючий препарат «Віроцид» може бути застосований для проведення профілактичної та вимушеної дезінфекції приміщень в благополучних і неблагополучних щодо інфекційних захворювань сільськогосподарських тварин у зимову пору року в залежності від температури навколишнього середовища. Результати проведених досліджень свідчать про те, що запропонований спосіб визначення активності дезінфектантів за мінусових температур володіє конкретною спрямованістю, ефективністю і високою точністю. 2 UA 117390 U Таблиця 1 Спосіб визначення активності дезінфектантів за мінусових температур Препарат Тест-культура Е. соlі Віроцид (на St. aureus водопровідній воді) Е. coli St. aureus Е. coli Віроцид (на 10,0 % St. aureus водному розчині Е. coli пропіленгліколю St. aureus Е. coli Віроцид (на 20,0 % St. aureus водному розчині E. coli пропіленгліколю St. aureus E. coli Віроцид (на 40,0 % St. aureus водному розчині E. coli пропіленгліколю St. aureus Режим застосування концентрація експозиція 0,1 % 1 год. 0,5 % 1 год. 0,1 % 1 год. 0,5 % 1 год. 0,1 % 1 год. 0,5 % 1 год. 0,1 % 1 год. 0,5 % 1 год. Результат досліджень дослід контроль + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + Примітки: «-» - ріст мікроорганізмів відсутній; «+» - ріст мікроорганізмів наявний. Таблиця 2 Тесткультура Віроцид (на Е. coli водопровідній воді) St. aureus Віроцид (на 10,0 % Е. coli водному розчині St. aureus пропіленгліколю Віроцид (на 20,0 % E. coli водному розчині St. aureus пропіленгліколю Віроцид (на 40,0 % E. coli водному розчині St. aureus пропіленгліколю Препарат Режим застосування 0,5 % /1 год. 0,5 %/1 год. -20 + + + Температура, °C -15 -10 -5 + + + + + + + + + -1 + + Контроль + + + + + + + + + + 0,5 % /1 год. + + 0,5 % /1 год. + + + Примітки: «-» - ріст мікроорганізмів відсутній; «+» - ріст мікроорганізмів наявний. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 10 Спосіб визначення активності дезінфектантів за мінусових температур, що включає визначення бактерицидних властивостей дезінфікуючого препарату щодо Escherichia coli та Staphylococcus aureus суспензійним методом, виготовлення бактеріальної зависі, підготовку батистових тестоб'єктів, контамінацію тест-об'єктів бактеріями Е. соlі та St. aureus, який відрізняється тим, що проводять додатково їх знезараження випробовуваним дезінфектантом за мінусової температури -20, -15, -10, -5, -1 °C. Комп’ютерна верстка В. Мацело Міністерство економічного розвитку і торгівлі України, вул. М. Грушевського, 12/2, м. Київ, 01008, Україна ДП “Український інститут інтелектуальної власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3