Спосіб стандартизації ехінацеї пурпурової в багатокомпонентних рослинних сумішах

Спосіб ідентифікації сировини ехінацеї пурпурової в рослинних сумішах, який відрізняється тим, що корені, квітки, листя та трава ехінацеї пур 3 40829 4 Таблиця 1. Вміст цикорієвої кислоти в сировині ехінацеї пурпурової. Сировина ехінацеї пурпурової, n=5 Корені Листя Квітки Стебло Вміст цикорієвої кислоти (%) в перерахунку на висушену сировину, x ± ∆x 1,21±0,05 1,36±0,06 1,19±0,06 0,34±0,02 Процес ідентифікації та кількісного визначення цикорієвої кислоти як компоненту сировини ехінацеї пурпурової в багатокомпонентних рослинних сумішах полягає в знаходженні умов для хроматографічного розділення цикорієвої кислоти та біологічно активних речовин інших рослин. В основу корисної моделі "Спосіб ідентифікації ехінацеї пурпурової в багатокомпонентних рослинних сумішах" поставлено задачу - удосконалити ідентифікацію сировини ехінацеї пурпурової (коренів, листя, квіток, трави) в багатокомпонентних рослинних сумішах, що містять ехінацею пурпурову, шляхом підтвердження наявності цикорієвої кислоти та визначення її вмісту, за рахунок чого забезпечити можливість стандартизації багатокомпонентних рослинних сумішей, до складу яких входить сировина ехінацеї пурпурової. Поставлена задача вирішується тим, що запропонована ідентифікація та кількісне визначення цикорієвої кислоти як компонента ехінацеї пурпурової за допомогою методу ВЕРХ (високоефективної рідинної хроматографії) в присутності біологічно активних речовин інших рослин. Це досягається застосуванням твердофазної екстракції для очищення досліджуваних розчинів від заважаючих речовин. При цьому використовується рухома фаза наступного складу: ацетонітрил вода - оцтова кислота (17:80:3), застосування якої дозволяє добитися розділення піків цикорієвої кислоти ехінацеї пурпурової та біологічно активних речовин інших рослин. Приклад 1: 7г (точна наважка) подрібненої суміші лікарських рослин наступного складу: коренів ехінацеї пурпурової - 1г, трави деревію звичайного - 1г, листя кропиви дводомної - 1г, листя м'яти перцевої - 1г, коренів цикорію дикого - 1г, плодів шипшини - 1г, коренів з кореневищами елеутерококу колючого - 1г вносять в конічну колбу, обладнану зворотнім холодильником, додають 100мл суміші метанол - вода (70:30) та витримують на киплячому водяному огрівнику протягом 60 хвилин. Після цього екстракт охолоджують до кімнатної температури та фільтрують через фільтр "червона стрічка". До 5мл отриманого розчину додають таку кількість води, щоб концентрація метанолу становила 20%, та пропускають отриманий зразок через попередньо активований (метанол 5мл) та промитий 10мл води патрон для твердо-фазної екстракції "Superclean Іc-18 SPE Tubes 1 ml" виробництва фірми Supelco (США). Патрон промивають 30мл 20% розчином метанолу. Отриманий розчин випаровують у вакуумі досуха та сухий залишок розчи няють в 5мл 70% метанолу, фільтрують через фільтр з діаметром пор 0,45мкм. По 5мкл досліджуваного розчину та розчину стандарту цикорієвої кислоти поперемінно хроматографують в наступних умовах: колонка С18 ХТеrrа, розміром 250мм х 4,6мм, розмір часток 5мкм; рухома фаза: ацетонітрил - вода - оцтова кислота (17:80:3); температура колонки 30°С; довжина хвилі детектування 330нм; швидкість потоку рухомої фази 1мл / хв. Вміст цикорієвої кислоти в досліджуваній багатокомпонентній рослинній суміші (в %) обчислюється за наступною формулою: А пр * Сст * 100 * 100 * 100 ; X= А ст * mпр * (100 − W ) де Апр - площина піку цикорієвої кислоти на хроматограмі досліджуваного розчину; Аст - площина піку цикорієвої кислоти на хроматограмі стандартного розчину цикорієвої кислоти; Сст - концентрація цикорієвої кислоти в стандартному розчині цикорієвої кислоти, г/мл; mпр - наважка досліджуваної сировини, г; W - втрата в масі при висушуванні в досліджуваній рослинній суміші. Приготування стандартного розчину цикорієвої кислоти: 0,010г достовірного стандарту цикорієвої кислоти вміщують в мірну колбу місткістю 25мл, розчиняють в 30мл суміші метанол-вода (70:30), доводять тією ж сумішшю до мітки та перемішують. 1мл отриманого розчину вміщують в мірну колбу місткістю 50мл, доводять до позначки сумішшю метанол-вода (70:30) та перемішують. На хроматограмі досліджуваного розчину повинен бути присутній пік, час виходу якого відповідає часу виходу піку цикорієвої кислоти на хроматограмі стандартного розчину цикорієвої кислоти (Фіг.1, 2). На підставі експериментальних даних для сировини ехінацеї пурпурової нами рекомендований наступний граничний вміст цикорієвої кислоти: для листя не менше 1%, для квіток не менше 0,5%, для коренів не менше 0,5% в перерахунку на висушену сировину. За вказаних вище умов також було проаналізовано досліджувані розчини, приготовлені наступним чином: Модельна суміш без вмісту ехінацеї пурпурової. 7г (точна наважка) подрібненої суміші лікарських рослин наступного складу: трави деревію звичайного - 1г, листя кропиви дводомної - 1г, листя 5 40829 6 м'яти перцевої - 1г, коренів цикорію дикого - 1г, Отриманий розчин випаровують у вакуумі досуха плодів шипшини - 1г, корені з кореневищами елеута сухий залишок розчиняють в 5мл 70% метанотерококу колючого - 1г вносять в конічну колбу, лу, фільтрують через фільтр з діаметром пор обладнану зворотнім холодильником, додають 0,45мкм. 100мл суміші метанол - вода (70:30) та витримуХроматограми екстракту коренів ехінацеї пурють на киплячому водяному огрівнику протягом 60 пурової (А), досліджуваного розчину (Б) та модехвилин. Після цього екстракт охолоджують до кімльної суміші без вмісту ехінацеї пурпурової (В) натної температури та фільтрують через фільтр представлені на Фіг.3. "червона стрічка". До 5мл отриманого розчину доНа хроматограмах А і Б присутній пік цикорієдають таку кількість води, щоб концентрація метавої кислоти, на хроматограмі В - відсутній. нолу становила 20%, та пропускають отриманий На підставі отриманих даних нами зроблено зразок через попередньо активований (метанол висновок, що у рослинній суміші, до складу якої 5мл) та промитий 10мл води патрон для твердовходять корені з кореневищами ехінацеї пурпурофазної екстракції "Superclean Іc-18 SPE Tubes 1 вої, трава звіробою звичайного, листя м'яти перml" виробництва фірми Supelco (США). Патрон цевої, надземна частина трави материнки звичайпромивають 30мл 20% розчином метанолу. Отриної, трава деревію звичайного, кореневища маний розчин випаровують у вакуумі досуха та лепехи звичайної, сік плодів горобини звичайної та сухий залишок розчиняють в 5мл 70% метанолу, сік плодів горобини чорноплодної, присутність та фільтрують через фільтр діаметром пор 0,45мкм. вміст ехінацеї пурпурової можна визначати за наЕкстракт коренів ехінацеї пурпурової. явністю та кількісним вмістом цикорієвої кислоти. 1г коренів ехінацеї пурпурової вносять в конічВинахід обумовлює можливість ідентифікації ну колбу, обладнану зворотнім холодильником, та визначення кількісного вмісту сировини ехінацеї додають 100мл суміші метанол - вода (70:30) та пурпурової (коріння, листя, квітки, трава) в багатовитримують на киплячому водяному огрівнику прокомпонентних рослинних сумішах, до складу яких тягом 60 хвилин. Після цього екстракт охолоджувходить ехінацея пурпурова, трава деревію звиють до кімнатної температури та фільтрують через чайного, листя кропиви дводомної, листя м'яти фільтр "червона стрічка". До 5мл отриманого розперцевої, корені цикорію дикого, плоди шипшини чину додають таку кількість води, щоб концентрата корені з кореневищами елеутерококу колючого ція метанолу становила 20%, та пропускають за наявністю та вмістом цикорієвої кислоти як фіотриманий зразок через попередньо активований зіологічно активного компонента, що присутній в (метанол 5мл) та промитий 10мл води патрон для усіх частинах ехінацеї пурпурової. Порівняння спотвердо-фазної екстракції "Superclean Іc-18 SPE собів ідентифікації у прототипі та винаході навеTubes 1 ml" виробництва фірми Supelco (США). дено в таблиці 2. Патрон промивають 30мл 20% розчину метанолу. Таблиця 2. Характеристика способів стандартизації ехінацеї пурпурової. № п/п 1 2 Об'єкт Найближчий аналог Корисна модель Компонент Об'єкти дослідження Сума оксикоричних Моносировина ехінацеї пурпурової кислот Цикорієва кислота Багатокомпонентні рослинні суміші, до складу яких входять: ехінацея пурпурова (листя, корені, квітки, трава); трава деревію звичайного; листя кропиви дводомної; листя м'яти перцевої; корені цикорію дикого; плоди шипшини; корені з кореневищами елеутерококу колючого Перелік посилань: 1. Компендиум 2004 - лекарственные препараты / Под ред. В.Н. Коваленко, А.П. Вікторова / К.: Морион, 2004. - 1664 с. 2. Лавренов В.К., Лавренова Г.В. Современная энциклопедия лекарственных растений. - М.: ОЛМА Медиа Групп, 2007. - 272 с. 3. Самородов В. К, Поспелов С. В., Моисеева Г. Ф., Середа А. В. Фитохимический состав представителей рода эхинацея (Echinacea Moench.) и его фармакологические свойства (обзор) // Хими Метод визначення Метод УФ-спектрофотометрії Можливість кількісної стандартизації моно сировини ехінацеї пурпурової; неспецифічне визначення Метод ВЕРХ Можливість кількісної стандартизації сировини та багатокомпонентних рослинних сумішей ехінацеї пурпурової; специфічне визначення ко-фармацевтический журнал. - 1996. - № 4. - с. 32-37. 4. Чхиквишвили И.Д., Харебава Г.И. Цикориевая и хлорогеновая кислоты в некоторых растениях, произрастающих в Грузии // Прикладная биохимия и микробиология. - 2001. - Т. 37. - № 2. С. 214-217. 5. Куркин В.А., Авдеева О.И., Авдеева Е.В., Мизина П.Г. Количественное определение суммы гидроксикоричных кислот в надземной части Echinacea purpurea (L.) Moench // Растительные ресурсы. - 1998. - т. 34. - вып. 2. 7 40829 8 9 Комп’ютерна верстка В. Мацело 40829 Підписне 10 Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601