Спосіб лікування і профілактики маститу у корів

1. Спосіб лікування і профілактики маститу у корів, що включає інтрацистернальне введення лікарського препарату в інфіковані чверті вимені, який відрізняється тим, що як лікарський препарат використовують водний колоїдний розчин наночастинок металу, наночастинок оксиду металу, наночастинок гідроксиду металу, при цьому використовують щонайменше один метал з групи, що складається з срібла, міді, цинку, магнію, кобальту, U 2 (19) 1 3 кози, при наступному співвідношенні компонентів, мас.%: розчин новокаїну 2%-й - 20-40; антисептикстимулятор Дорогова фракція 2 - 1-3, димексид 13-15 і розчин глюкози 40%-й - решта. Препарат нагрівають до 37-38°С і вводять внутрішньочеревне з боку правої «голодної» ямки в дозі 100-150мл один раз в день (Патент России №2180221. Способ лечения субклинического мастита у коров. МПК А61К31/00, А61К31/205. Опубл 10.03.2002). Недоліком відомого способу є низька ефективність лікування. Відомий спосіб лікування маститу у корів шляхом застосування антибіотика геліоміцина, ланоліну і вазелінового масла при певному співвідношенні компонентів відповідно, мас.%: 2,0-4,0; 20,040; до 100,0. (Патент России №2058781. Препарат для лечения и профилактики мастита крупного рогатого скота в сухостойный период. МПК А61К35/74. Опубл 1996.04.27). Недоліком відомого способу є низька ефективність лікування. Найбільш близьким до пропонованого є спосіб профілактики маститу у корів, що включає інтрацистернальне введення лікарських препаратів в інфіковані чверті вимені, а в якості препаратів використовують стафілококовий анатоксин в дозі 0,91,0мл, отриманий з використанням стафілококів, виділених з секрету вимені хворих маститом корів окремо або у поєднанні із стрептококовим анатоксином 1:1 (Патент России №2116085. Способ профилактики мастита у коров. МПК А61К39/085, А61К39/09. Опубл 2008.03.27). Недоліком відомого способу є низька ефективність лікування. В основу корисної моделі поставлена задача створення ефективнішого способу лікування і профілактики маститу у корів. Запропонований, як і відомий спосіб лікування і профілактики маститу у корів включає інтрацистернальне введення лікарського препарату в інфіковані чверті вимені і, відповідно до цієї пропозиції, в якості лікарського препарату використовують водний колоїдний розчин наночастинок металу, наночастинок оксиду металу, наночастинок гідроксиду металу, при цьому використовують щонайменше один метал з групи, що складається з срібла, міді, цинку, магнію, кобальту, заліза, а колоїдний розчин наночастинок отримують абляцією металевих гранул у воді. При цьому компоненти водного колоїдного розчину наночастинок узяті в наступних кількостях, мг/л: наночастинки цинку, оксиду цинку, гідроксиду цинку - 30-100, наночастинки срібла, оксиду срібла, гідроксиду срібла - 5100, наночастинки магнію, оксиду магнію, гідроксиду магнію - 80-150, наночастинки міді, оксиду міді, гідроксиду міді - 15-100, наночастки кобальту, оксиду кобальту, гідроксиду кобальту - 0,1-10, наночастинки заліза, оксиду заліза, гідроксиду заліза - 10-100, вода - до 1000мл, а водний колоїдний розчин наночастинок використовують в дозі 520мл двічі на день. У пропонованому способі в якості лікарського препарату використовують водний колоїдний розчин наночастинок металу, наночастинок оксиду металу, наночастинок гідроксиду металу, при цьо 42290 4 му використовують щонайменше один метал з групи, що складається з срібла, міді, цинку, магнію, кобальту, заліза. Це підвищує ефективність способу лікування за рахунок розширення спектру антимікробної дії наночастинок металів, їх оксидів, гідроксидів. Колоїдний розчин наночастинок отримують абляцією металевих гранул у воді. Це дозволяє отримати наночастинки у водному середовищі, що підвищує їх активність у складі препарату, дозволяє проникати глибоко в тканини і не викликає дратівливої дії на тканині вимені. Компоненти водного колоїдного розчину наночастинок узяті в наступних кількостях, мг/л: наночастинки цинку, оксиду цинку, гідроксиду цинку 30-100, наночастинки срібла, оксиду срібла, гідроксиду срібла - 5-100, наночастинки магнію, оксиду магнію, гідроксиду магнію - 80-150, наночастинки міді, оксиду міді, гідроксиду міді - 15-100, наночастки кобальту, оксиду кобальту, гідроксиду кобальту - 0,1-10, наночастинки заліза, оксиду заліза, гідроксиду заліза - 10-100, вода - до 1000мл. При вмісті компонентів діючих речовин менш нижніх значень знижується ефективність лікування. Вміст компонентів більше верхніх значень призводить до дорожчання способу. Водний колоїдний розчин наночастинок використовують в дозі 5-20мл двічі на день. При використанні препарату менше 5мл знижується ефективність профілактики і лікування. Збільшення кількості препарату більше 20мл не призводить до скорочення термінів лікування мастита. Спосіб лікування маститу у корів здійснюють таким чином. В якості вихідної сировини використовують гранули металів і воду. До чинників, що обумовлюють отримання високого лікувального ефекту, відноситься процентне співвідношення між компонентами, що входять у вживаний препарат, і послідовність виконання операцій його приготування і застосування. Для цього отримують водний колоїдний розчин наночастинок шляхом абляції металевих гранул у воді (наприклад, електроімпульсною абляцією) (див. Патент Україні на корисну модель №23550. Спосіб ерозійновибухового диспергування металів. МПК B22F 9/14. Опубл.25.05.2007. Бюл.№7). Сумісне використання наночастинок декількох металів, їх оксидів, їх гідроксидів дозволяє розширити спектр біоцидної дії як за рахунок застосування декількох металів, що мають різну спрямованість біоцидної дії, так і за рахунок взаємного синергетичного посилення дії металів, оксидів і гідроксидів при сумісному їх використанні. Наночастинки металів, їх оксидів, гідроксидів забезпечують виражений антимікробний ефект, причому бактерицидна і фунгіцидна дія окремого металу, що підсилюється іншими компонентами, попереджає утворення лікостійких штамів умовнопатогенної мікрофлори і дизбактеріоз. Використання в пропонованому способі наночастинок декількох металів, завдяки синергетичній дії, надає протизапальну, кровоспинну, антиалергічну, знеболюючу дію, стимулює регенеративні процеси в зоні ураження. Активізація захисних механізмів тканин вимені, що забезпечується наночастинками 5 42290 бактерицидних металів, підкріплюється включенням до складу препарату наночастинок оксидів, наночастинок гідроксидів металів. Водний колоїдний розчин наночастинок використовують інтрацистернально в дозі 5-20мл двічі на день. Приклад. Метою досліджень було встановити порівняльну ефективність антибіотикотерапії маститу та його лікування колоїдним розчином наночастинок Ag, Cu, Zn, Mg, Co, Fe у високопродуктивних корів української чорно-рябої породи. Для дослідження відбирали хворих на клінічний і субклінічний перебіг маститу корів, з яких за принципом аналогів сформували дві групи тварин. У всіх хворих на мастит корів проводили стандартні мікробіологічні дослідження (див. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии / Т.С.Костенко, Е.И.Скаршевская, С.С.Гительсон. М.: Агропромиздат, 1989. - 347с.). Корів першої групи лікували інтрацистернальним уведенням комплексу антибіотиків за стандартними методиками. Корів другої групи лікували інтрацистернальним уведенням у кожну уражену чверть вимені Мастієт Форте (1 шприц з інтервалом 12 годин). Зазвичай використовували рекомендовані 3 уведення. У випадках лікування гострих з важким перебігом маститів додатково використовували ін'єкції антибіотиків. Корів третьої групи лікували інтрацистернальним уведенням колоїду комплексу наночастинок металів у дозі 15мл двічі на день (ранком і увечері). 6 За гострого клінічно вираженого маститу стан молочної залози оцінювали візуально 1 раз на добу і остаточно досліджували молоко через 5-7 діб після лікування на наявність підвищеного рівня соматичних клітин. Мастит вважали вилікуваним за концентрації соматичних клітин у молоці менше 300тис/мл і негативного стандартного маститного експрестесту «Профілак реагент». Одночасно провели дослід по профілактиці маститу шляхом інтрацистернального уведення (після завершення видоювання) у кожну чверть вимені 10мл колоїдного розчину наночастинок Ag, Cu, Zn, Mg, Co, Fe. Також досліджували характер мікрофлори секрету хворої молочної залози та її чутливість до антибіотиків згідно відповідної настанови. Обов'язково диференціювали перехід клінічно вираженого маститу у субкілінічну форму. Тих, у яких виявили субклінічний мастит, продовжували лікувати тими ж препаратами. Мікробіологічними дослідженнями (висіви на рідкі і поживні середовища згідно відповідних інструкцій) виявили, що мастит у високопродуктивних корів зазвичай зумовлюють стафілококи, стрептококи, кишкова паличка та мікоплазми. При бактеріологічному дослідженні проб секрету з уражених часток вим'я виділяли асоціації й монокультури мікроорганізмів. Чутливість виділених мікроорганізмів до антибіотиків і колоїдного комплексу наночастинок металів представлено в Таблиці 1. Таблиця 1 Препарати Staph. aureus Тилозин + Полі міксин ± Тетрациклін + Доксициклін + Амоксициклін + Енрофлоксацин ± Гентаміцин ± Цефалексин + Неоміцин ± Колоідний розчин наночастинок Ag, + Cu, Zn, Mg, Co,Fe. Strept. agalactie ± ± + ± ± ± ± ± + Escherichia coli Mycoplasma bovis ± ± ± ± ± ± ± + ± ± ± ± + + Примітка: - - нечутливі (зона затримки росту 16мм). З Таблиці 1 видно, що мікроорганізми, які найбільш часто зумовлюють виникнення маститу, найбільш чутливі до доксицикліну, тилозину, цефалексину. Окремі з них чутливі до різних антибіотиків. Так, Staphylococcus aureus чутливий до всіх перевірених антибіотиків і фторхінолонів. Streptococcus agalactiae виявився нечутливим до поліміксину, Esherichia coli до тетрацикліну і неоміцину, Mycoplasma bovis до поліміксину, енрофлоксацину і гентаміцину. Застосовуючи антибіотикотерапію маститу (згідно з настановами щодо використання цих препаратів) у зв'язку з різною чутливістю мікроорганізмів, отримали відносно невисокий процент виліковування хворих тварин, який склав 63%, що пояснюється, певною стійкістю мікроорганізмів до антибіотиків, особливо у випадках полімікробної етіології ураження. У 26% тварин хвороба набула субклінічної форми й у 9% хворих корів настало переродження уражених часток вим'я. На відміну від антибіотиків і фторхінолонів, до колоїдного розчину наночастинок Ag, Cu, Zn, Mg, Co, Fe високочутливими виявились всі мікроорганізми; виліковування хворих на мастит корів відмічено в 91% випадків, у 8% клінічно виражений мастит набув субклінічного перебігу і лише в 1% спостерігалась атрофія уражених часток молочної залози. 7 42290 Відсутність 100% виліковування маститу наночастинками металів пояснюється тим, що в етіопатогенезі запалення молочної залози поряд з мікробним фактором, який вважається основним, 8 задіяні і інші чинники, частина з яких, можливо, ще залишається невідомими. Клітинні домішки до молока за різних способів лікування маститу наведено в Таблиці 2. Таблиця 2 Показники Нелікований мастит Поліантибіотикотерапія Поліантибіотикотерапія + преднізолон Колоїдний розчин наночастинок Ag, Cu, Zn, Mg, Co, Fe. Мікроорганізми 190тис. - 2,5млн в 1мл 20-27тис. в 1мл Лейкоцити 5-15тис. в 1мл 2-3тис. в 1мл Соматичні клітини 500-950тис в 1мл 400-450тис в 1мл 22-28тис. в 1мл 550-1350 в 1мл 270-310тис. в 1мл 1-2,5тис. в 1мл 280-450 в 1мл 95-120тис. в 1мл Як видно з Таблиці 2, застосування в терапії маститів колоїдного розчину наночастинок Ag, Cu, Zn, Mg, Co, Fe виражено зменшує в молоці вміст бактерій та лейкоцитів, а також рівень соматичних клітин, що значно покращує якість молока. Крім того, вдається уникнути контамінації молока анти біотиками, які негативно позначаються на здоров'ї людей (зниження імунітету, алергії тощо). Важливим у порівняльній оцінці обох способів лікування маститу у високопродуктивних корів є визначення частоти рецедивів запалення молочної залози, яке, нерідко, настає через певний час після успішної терапії (Таблиця 3). Таблиця 3 Комплексна антибіотикотерапія 55 19(34,5%) 11 (52,6%) 6 (54,4%) Показники Досліджено хворих на мастит корів, голів Рецедиви маститу, голів Повторно вилікувано, голів Повторний рецидив, голів Колоїдний розчин наночастинок Ag, Cu, Zn, Mg,Co, Fe 54 8 (14,8%) 6 (75%) 2 (3,3%) При дослідженні чутливості мікрофлори до лікувальних препаратів у разі переходу клінічно вираженого маститу у субклінічну (приховану) форму встановлено помітне зниження чутливості мікрофлори до антибіотиків і фторхінолонів (Таблиця 4). Як видно з Таблиці 3, рецедиви маститу значно частіше спостерігались у разі лікування комплексом антибіотиків, ніж за терапії наночастинками металів - більше на 42,9%. І навіть після повторного виліковування дана тенденція не змінилась: повторний рецедив знову більш часто спостерігався при комплексному лікуванні антибіотиками. Таблиця 4 Препарати Staph. aureus Strept. agalactie Escherichia coli Тилозин Поліміксин Тетрациклін Доксициклін Амоксициклін Енрофлоксацин Гентаміцин Цефалексин Неоміцин Колоїдний розчин наночастинок Ag, Cu, Zn, Mg,Co, Fe ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± ± Mycoplasma bovis ± ± ± + ± + + + + Примітка: - - нечутливі (зона затримки росту 16мм). При порівнянні даних Таблиць 1 та 4 видно, що зниження чутливості щодо Staph. aureus мало місце у тилозину, тетрацикліну, доксицикліну, амо ксицикліну, гентаміцину, неоміцину; щодо Strept. agalactie у доксицикліну, гентаміцину; щодо 9 42290 Escherichia coli у тилозину, поліміксину, доксицикліну; щодо Mycoplasma bovis у неоміцину. Таким чином, повторна антибіотикотерапія при переході маститу у субклінічну форму пов'язано з вираженим посиленням антибіотикорезистентності бактерій, які зумовлюють виникнення запалення молочної залози. До колоідного розчину наночастинок Ag, Cu, Zn, Mg, Co, Fe стійкість мікроорганізмів не відмічена. Проведені досліди засвідчили, що застосування наночастинок металів в лікарській практиці є альтернативою використанню антибіотиків. Наночастинки в колоїдному розчині покриті гідратними оболонками, утвореними молекулами води, і знаходяться в хелатній формі у вигляді наноаквахелатів Ag, Cu, Zn, Mg, Co, Fe. Це підвищує їх активність і біосумісність і дозволяє легко проникати через мембрани клітин. Проведення нанопрофілактики маститу корів дозволило скоротити кількість випадків запалення молочної залози у високопродуктивних корів зазвичай з 8-13% до 5-7%. Такий виразний терапевтично-профілактичний ефект наночастинок металів зумовлений їх біоцидними і біостимулювальними властивостями. Наноаквахелат срібла, суміш наноаквахелатів срібла і міді та наноаквахелат магнію володіють широким спектром антимікробної активності, яка значно перевищує активність антибіотиків, наприклад, Комп’ютерна верстка М. Ломалова 10 гентаміцину сульфату. Крім того, необхідно враховувати і те, що до наноаквахелатів срібла не утворюється стійкість (звикання) бактерій. Особливо чутливі до наноаквахелатів Ag, Ag+Cu, Mg кокові мікроорганізми. Біостимулювальна активність наночастинок найбільш характерна для Cu, Zn, Mg, Co, Fe, які є кофакторами для більшості біохімічних реакцій, задіяних в пластичних (синтетичних та репаративних), енергетичних і захисних процесах в усіх органах і тканинах. Таким чином, згідно виконаних досліджень, лише лікування маститу у високопродуктивних корів молочних комплексів наноаквахелатами металів дає змогу не тільки витримати, але і перевершити параметри загальноприйнятої оптимальної програми боротьби з маститом (Див. Олейник О.В. Противомаститная программа шеринг плау - интервет // Ветеринария. - 2008. - №10. - 2008. - С. 1819), згідно якої рекомендовані наступні показники: а) рівень корів із субклінічним маститом у стаді не повинен перевищувати 10%; б) кількість випадків клінічного маститу не більше 5 в рік на 100 лактуючих корів; в) рівень соматичних клітин в молоці не повинен перевищувати 250тис/мл; г) бактеріальна обсіміненість молока має бути не більше 10тис/мл. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601