Бактерицидний засіб пролонгованої дії

Бактерицидний засіб пролонгованої дії, який відрізняється тим, що як антибактеріальний агент містить 8-метил-2-оксо-2,4,5,6-тетрапдропіроло(1,2-С)-піримідин, а також альгінат кальцію та наповнювач при такому співвідношенні компонентів, мас % 8-метил-2-оксо-2,4,5,6тетрапдропіроло-(1,2-С)-піримідин 0,1 альгінат кальцію 10 наповнювач решта Винахід стосується медицини, біологи й може бути використаний для лікування та профілактики інфекції банального характеру локалізованої та генералізованої, благотворно впливає на функцію серцево-судинної, нервової, м'язової системи, органи дихання, опірно-рушійний апарат, покращує обмін речовин, при захворюваннях органів малого тазу (простатит, геморой, уретрит, гінекологічних захворюваннях запалювального характеру), запальних процесах додаткових пазух носу, бронхолегеневої системи Засіб складається з бактерицидного препарату, який одержано з синьозеленої водорості Oscillatona neglecta Lemm, та сорбуючого препарату - альгінату кальцію ких веществ, М Наука, 1974 - 256с, Кирпенко Ю А , Сиренко Л А , Орловский В М , Лукина Л Ф Токсины синезеленых водорослей и организм животного, К Наукова думка, 1977 - 232с, Kirpenko Yu A , Kirpenko N I Cyanobactenal (BlueGreen Algal) Toxins A Resourse Guide // Subject Area Water Resources Printed in the U S A ISBN89867-824, 1995 - 227p , Kirpenko Yu A , Sirenko L A , Kirpenko N I Influence of metabolites of certain algae on human and animal cell cultures // International Journal on Algae, 1999, 1(1) - P 122 126] Найбільш близьким до заявленої природної сполуки з мікроводоростей є біологічно активна речовина подібної структури з синьозеленої водорості Aphamzomenon flos-aquae (Carmichael W W The Cyanotoxms // Advances in Botanical Reseach, vol 27, ISBN-12-005927-4 - P 211 256), яку одержують шляхом висушування клітин водорості виморожуванням, повторним ресуспензуванням у 0,1 N HCL з наступною обробкою супернатанту 1 N КОН до рН 5,5, центрифугуванням та люфілізацією з загальною назвою «мікропистин» (М) Розподіл та очищення одержаної речовини проводиться хроматографічно й за рахунок елюції 0,01 N HCL Активна сполука являє собою за агрегатним станом аморфну склоподібну гігроскопічну масу, що погано кристалізується З спеціальної літератури відомо, що природні ХІМІЧНІ сполуки, ПОХІДНІ 8-метил-2-оксо-2,4,5,6 тетрапдропірроло-(1,2-С)-піримідину та його похідних за рахунок заміщення водню у бокових радикалах піримідину та пірролу, а також включення сполук сірки відносяться до групи фармакологічно-активних речовин і можуть бути використані як антимікробні й ганглюблокуючі природні препарати з дінофітових водоростей, що відносяться до родів Gonyaulax, Gym nod і mum, Peridimum (Bower D I , Hart R I , Matthews P A , Howden M E H Nonprotem neurotoxms // Clm Toxicol , 1981 ,vol 18,7 -P 813-863), молюсків (там же, де й попередні), синьозелених водоростей (Горюнова С В, Демина Н С Водоросли - продуценты токсичес Головним недоліком вказаної сполуки є часткова денатурація продукту при виділенні й недостатня чистота речовини, що впливає на спектр О 00 ю 52718 біологічної дм та невелика тривалість терапевтичної дії, що примушує застосовувати повторні введення її для підтримки діючих концентрацій Зазначені недоліки в певній мірі усунуті Ives [Ives К I Algae and Water suppliers 5The removal of algae by chemical coagulalts // J Water and Water Eng , 1957, vol 61,741 - P 481 - 488] за рахунок виділення індивідуалізованої речовини та и ідентифікації з штамів мікроводоростей (ціанобактерій) Anabaena, Hepalosiphon, Microcystis, Nostoc, Oscillatona низки біологічно активних сполук під назвою «мікроцистини», з М м від 909 до 1115Да й загальною формулою від C46H67N7O12 до C52H81N11O14S Однак виділені й очищені сполуки не ідентифікувались як ПОХІДНІ 8-метил-2оксо-2,4,5,6-тетрапдропорролопіримідин і відзначались надто високою токсичністю для теплокровних Задачею даного винаходу є одержання з природних популяцій водоростей (наприклад, Microcystis aerugmosa Kutz em Elenk, Oscillatona neglecta Lemm , та ІНШІ, а також з біомаси водоростей, що вирощуються у індустріальній культурі Spirulma platensis (Nordst) Geitl та інших) природно активної речовини 8-метил-2-оксо-2,4,5,6тетрапдропірроло-(1,2-С)-піримідину, який може бути використаний як лікарський засіб з пролонгованою дією 8-метил-2-оксо-2,4,5,6-тетрапдропірроло(1,2-С)-піримідин та його ПОХІДНІ одержували з біомаси дезштегрованих клітин мікроводоростей після попередньої екстракції водою на активованому аніоніті АВ-22 з наступним елююванням 70% етанолом, перекристалізацією, очисткою діалізом або хроматографуванням і крюсублімацією Вказаним способом можна одержати кристалічну речовину, що розчиняється у воді й органічних розчинниках (п-бутиловий, етиловий, метиловий спирти, ацетон), з температурою плавлення 81,2°С У розчиненому вигляді речовина витримує стерилізацію кип'ятінням та автоклавуванням За ХІМІЧНОЮ будовою речовина має бути віднесена до поліцукриднополіпептидних сполук Продукт гідролізу речовини 2% фосфорною кислотою при 2атм являє собою 8-метил-2-оксо2,4,5,6-тетрапдропірроло-(1,2-С)-піримідину з загальною формулою наступного складу OR3 СІ СІ C700H1187N307O75 х 2НСІ Молекулярна маса 16800Да Залежно від заміщення кінцевих радикалів та з'єднання кілець гетероциклів речовина 8-метил2-оксо-2,4,5,6-тетрапдропірроло-(1,2-С)-піримідин може утворювати низку похідних 4 Альгінат кальцію додано до складу комплексного засобу у зв'язку з його здатністю при просяканні бактерицидною речовиною тривалий час зберігати протимікробну та противірусну активність, затримувати всмоктування радіоактивного стронцію [Зайцев В П , Ажгихин И С , Гандель В Г Комплексное использование морских организмов - М Пищевая промышленность, 1980 280с] Взагалі альпнова кислота (АК) - представник водоростевих поліуронідів Накопичується у всіх крупних бурих морських водоростях (Lammana, Macrocystis, Fucus), де її вміст досягає 40% сухої маси [McNeely N Н Algm In Industrial gums Polysacchandes and their denvates, Press New York and London, 1959 - P 5 5 - 8 2 ] Але здебільшого КІЛЬКІСТЬ альпнової кислоти коливається від 15 до 30% [Возжинская і др Промысловые водоросли СССР / А С Цап ко, Е И Блинова, А А Калугина, Ю Е Петров - М Пищевая пром-сть, 1971 - 270с], хоча в окремих випадках у деяких видів (напр Lammana japomca, L cichonoides) його КІЛЬКІСТЬ може досягати 54,6 та 49,6% ВІДПОВІДНО [Хоменко В А Общая характеристика полисахаридов бурых водорослей - Химия и биохимия углеводов -М Химия, 1967 -124с] Хімічна структура АК, як і ХІМІЧНІ структури багатьох других полюз з водоростей, непостійна й залежить від виду водорості та других факторів Так, співвідношення у ній D-маннуроновоі та L-гулуроновоі кислот коливається від 0,5 до 3,0 Молекули АК побудовані з залишків p-D-анпдроммануронової кислоти, яка має лінійну структуру та зв'язана (1^4)-зв'язками, які поєднують окремі моноцукри Результати рентгеноструктурного аналізу альпнових фібрил свідчать, що арпдроманнозні ланки мають структуру піраноідних кілець [Йиргенсонс Б Природные органические макромолекулы - Пер с английского Л Н Акимовой и М С Хлудовой - М Мир, 1965 - С 203 206, 210-212] Є ВІДОМОСТІ, що АК навіть з одного виду водоростей, може являти собою суміш поліцукрів неоднакового складу, тому що окремі методи осадження можуть давати фракції, одна частина яких збагачена D-маннуроновою кислотою, а друга - L-гулуроновою Але обидві уронові кислоти обов'язково входять до складу одної полімерної молекули, тому що відновлення всіх карбоксильних груп АК та м'який частковий плроліз нейтрального поліцукриду, що утворюється, приводить до одержання ВІДПОВІДНОГО гетеродицукриду 4-ОР-О-маннопіранозил^-гулози [Percival E, McDovell R Chemistry and enzymology of marine algae polysachandes, London and New York Academic Press, 1967 - 219p, Levrmg T, Hope H A, Schmid О J Marine algae Asurvey of research and utilization Gram De Guryer and Co , Hamburg, 1969 -421p] Загальний випуск АК та альгінатів (А) значно перевищує випуск всіх других водоростевих продуктів за виключенням водоростевого борошна, і складає близько 4000т на рік у США, 2000т у Англії, 1000т у Франції, більше 500т у Японії, Канаді, Іспанії, Норвегії 52718 Відомо декілька методів одержання АК - за Стенфордом, Гріном, Глоахен-Хертером й др [Кизеветтер И В , Грюнер В С , Евтушенко В А Переработка морских водорослей и других промысловых водных растений - М Пищевая промсть, 1967 - 416с, Возжинская Промысловые водоросли СССР / А С Цап ко, Е И Блинова, А А Калугина, Ю Е Петров - М Пищевая пром-сть, 1971 - 270с , Чепмен В Морские водоросли и их использование / Пер, с англ С В Максимовой М ИЛ, 1953 - 248с, Levnng T, Норе Н А , Schmid О J Marine algae Asurvey of research and utilization Gram De Guryer and Co, Hamburg, 1969 -421p] У нашій країні розповсюджений метод, який засновано на комплексному використанні бурих водоростей [Зайцев В П , Ажгихин И С , Гандель В Г Комплексное использование морских органи змов - М Пищевая промышленность, 1980 280с] Спершу з водоростей вилучають маніт, який являє собою шестиатомний спирт, що застосовується у медицині та деяких галузях промисловості, а водоростевий залишок використовують для одержання розчинної солі альтової кислоти - альгінату натрію Для цього водоростевий залишок та водорості завантажують у реактор, додають гарячу воду (у співвідношенні 10 15 частин води на 1 частину водоростей) та кальциновану соду (до рН 10 - 12) Суміш варять протягом 2 - Згод при температурі 75 - 80°С і безперервному помішуванні До кінця варки суміш повинна мати однорідну консистенцію Ця методика використана для одержання альгінату кальцію у наших дослідженнях Для полегшення утворення альгінатів невилужену водорость замочують у 0,5% сірчаної кислоти, нагрівають до 40 - 50°С й витримують протягом 1 год Кислий водний розчин зливають, водорості промивають водою, подрібнюють та варять у розчині лугу, як подано вище Після завершення варки до маси додають гарячу воду, суміш ретельно перемішують шляхом барбатування стисненого повітря та залишають відстоюватись 3 - 4год Відстояний розчин зливають за допомогою сифону через тканинний фільтр, залишок тричі промивають водою, поєднують зливи з першим, після чого залишок відкидають Зібрані розчини фільтрують, альпнову кислоту осаджують мінеральною кислотою, ВІДДІЛЯЮТЬ ВІД кислого маточника й ретельно відми вають водою від залишків мінеральної (частіше сірчаної) кислоти Сиру альпнову кислоту переносять у змішувач та змішують з гідрокарбонатом натрію В'язкий розчин альгінату натрію висушують на вальцевих сушарках при температурі поверхні вальців не вище 120°С Вихід альгінату натрію складає біля 10% маси повітряно-сухої водорості Готовий продукт має вигляд пластинок неправильної форми й товщини або порошку з вологістю біля 18% Пакують його у ящики (нето 20кг) та картонні коробки (нето 10кг) Випускають технічний та харчовий АН Харчовий АН відрізняється від технічного більш світлим забарвленням, меншим вмістом золи (25 та 35% ВІДПОВІДНО), речовин, які нерозчинні у холодній воді (0,5тв 0,3% ВІДПОВІДНО), ВІЛЬНОГО лугу, більшим вмістом альпнової кислоти (70 - 60% ВІДПОВІДНО) та його 1% розчин має більш високу в'язкість (2,5 та 1,5п ВІДПОВІДНО) Харчовий АН високої якості випускається з використанням технологи, яка розроблена ТНІРО [Зайцев В П , Ажгихин И С , Гандель В Г Комплексное использование морских органи змов - М Пищевая промышленность, 1980 - 280с] Його пакують у мішки або пакети з крафт-паперу Комплексний препарат антибактеріальної пролонгованої дії має компонентний склад антибактеріальний засіб - 8-метил-2-оксо2,4,5,6-тетрапдропірроло-(1,2-С)-піримідин (ТГПП)-0,1%, альгінат кальцію -10%, наповнювач (вода, глюкоза) до 100% Враховуючи складові частини комплексного препарату, з нього є можливість приготувати декілька лікформ - порошки, таблетки, грануляти, розчини, мазі Переваги запропонованого комплексного засобу показані прикладами виконання ПРИКЛАД 1 Спектр та тривалість антимікробної дії комбінованого засобу та генерика «мікроцистин» визначені на коковій, палочковій, сапрофітній та патогенній, спорогенній та неспорогенній мікрофлорі Для цього визначені бактеріостатичні та бактерицидні концентрації речовин для конкретних випадків, які використані для визначення тривалості бактерицидного ефекту через 24, 48, 72, 96 годин методом пересівів з рідких на тверді поживні середовища (табл 1) Таблиця 1 Антимікробні, антимікозні та тривалість антимікробної дії ТГПП та мікроцистину на різні штами мікроорганізмів властивості Ung Algophymim та Ung Algovit Штами мікроорганізмів Staphylococcus aureus Staphylococcus albus Staphylococcus aureus 209 Staphylococcus haemohticus Staphylococcus nonhaemohticus Streptococcus faecahs Тривалість бактерицидної дм ТГПП та мікроцистину у бактерицидній концентрації для обох засобів (0,001 мг/мл) ТГПП Мікроцистин -96 -48, +72 -96 -48, +72 -96 -24,+48 -96 +48 -96 -24, +48 -96 +48 52718 8 Продовження таблиці 1 Тривалість бактерицидної дм ТГПП та мікроцистину у бактерицидній концентрації для обох засобів (0,001 мг/мл) ТГПП М ікро цистин -96 +48 -96 +48 -96 +48 -96 -24, +48 -96 -24, +48 -96 +48 -96 +24 -96 +48 -96 +48 -96 +48 -96 -24, +48 -96 +24 -96 +48 -96 +48 -96 +48 -96 +24 -96 +48 -96 +24 -96 +72 -96 +48 -96 +48 -96 +48 -96 +72 -96 +48 Штами мікроорганізмів Salmonella typhi Salmonella paratyphi A Salmonella paratyphi В Salmonella paratyphy Breslau Salmonella paratyphi Gertncn Proteus Morgann Salmonella paratyphy Suipestifer Salmonella pillorum Schigella Flexnen Schigella dysentenal Shiga Eschenchia coh Vibrio cholerae Bacterium rhusiopathiae suis Chromobactenum prodigiosum Pseudomonas aerugmosa Proteus vulgans Bacterium Fndlenden Corynebactenum diphtenae Bacillus subtihs Bacillus megatenum Bacillus mesentenum Bacillus anthracis Bacillus macroides Candida Примітка знак (-) означає відсутність росту - стерильне середовище, знак (+) означає проростання мікроорганізмів, цифра поряд знаків означає години, коли проведено контрольний висів на тверде середовище З наведених даних витікає, що заявляємий комбінований засіб зберігає бактерицидну активність протягом 96 годин, а мікроцистин втрачує ці властивості через 24 - 48 годин ПРИКЛАД 2 Бактерицидна активність комбінованого засобу (ТГПП) та мікроцистину визначена також на гостросептичній моделі на білих мишах, яку одержували внутрішньоочеревинним введенням змиву добової культури Staphylococcus aureus 209 у КІЛЬКОСТІ 400ТИС мік робних ТІЛ за оптичним стандартом, досліджувані речовини вводили також внутрішньоочеревинно через 4 години після введення мікроорганізмів та контролювали дію антисептиків висівами асцитичної рідини та методом відбитків внутрішніх органів (печінка, легені, міакард, селезінка) Ці ВІДОМОСТІ представлені у табл 2 Таблиця 2 Дія ТГПП та мікроцистину in vivo на тлі гостросептичної моделі, викликаної Staphylococcus aureus 209 у КІЛЬКОСТІ 400тис мікробних тіл Групи та КІЛЬКІСТЬ тва рин Контроль (ЗО білих мишей) ТГПП (ЗО білих мишей) Мікроцистин (ЗО білих мишей) Асцитична рідина Печінка Легеня Міокард Селезінка Загибель тварин + + + + + + + + ЗО тварин, через 20 ± 6,5год 18 тварин через 48год Умовні позначення знак (-) означає відсутність росту мікроорганізмів, знак (+) - мікроорганізми висіваються з ВІДПОВІДНИХ органів Таким чином, ТГПП зберігає бактерицидну активність до кінця експерименту, в результаті чого явища септикопіємм відсутні, мікроцистин має бактерицидну активність протягом 48год і патогенні мікроорганізми висівають з асцитичної рідини, печінки та селезінки 52718 ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24 10