Біологічна тест-система для виявлення та вивчення токсичного впливу важких металів

Біологічна тест-система для виявлення токсичного впливу важких металів, що включає вико ристання культури клітин тваринного організму, яка відрізняється тим, що як культуру клітин тваринного організму використовують культуру клітин гранульозного шару фолікулів яєчника корів, яку шкубують протягом 10-12 год з наростаючими дозами важких металів в середовищі PRMI-1640, при цьому для встановлення особливостей впливу важких металів на окремі ланки генерації АТФ та процеси, що зумовлюють споживання кисню, в середовище для інкубації вносять інгібітори окремих ланок дихального ланцюга Винахід відноситься до галузі біологи, зокрема контролю забруднення довкілля важкими металами, а саме до модельних тест-систем для виявлення та з'ясування механізмів реалізації токсичного впливу важких металів на обмін речовин Винахід може бути застосований у ветеринарносанітарній практиці при ОЦІНЦІ негативного впливу техногенного забруднення зовнішнього середовища солями важких металів на тваринний організм і вирішенні питання ДОЦІЛЬНОСТІ ведення тваринництва у господарствах з різними формами власності в умовах техногенного навантаження Відома велика КІЛЬКІСТЬ КЛІТИННИХ культур, які застосовуються в санітарно-токсикологічних дослідженнях в якості модельних тест-систем Найчастіше користуються перещеплюваними ЛІНІЯМИ Нер-2 (карцинома гортані), НеІ_а (карцинома шийки матки) (СОЦ (серце мавпи), Аі (амніона людини) Багато досліджень проводиться на культурі клітин фібробластів людини та тварин, що обумовлено її високою чутливістю до дії ХІМІЧНИХ речовин, відносною подібністю метаболічних процесів з тими, що мають місце в цілісному організмі (Svoboda E L , Deporter D A Phagocytosis of exogenory collagen by cultured murme fibroblast and macrophages A guantative electron microscopus comparison - J Ultra-struct Res , 1980, vol 72, №2, p 169 173 Truchhnski J Badama nad wplywem wybsanych pesticydow-fosforoorgamczych na funkzje fibroblastow ludzkich w hodowh "in vitro" - Med dosw mikrobiol , 1977, vol 29, № 1, p 61-62) 3 первинних культур людини застосовуються, в основному, гепатоцити і кератиноцити, первинні культури клітин тварин включають в себе ембріональні нейрони, гепатоцити, фібробласти курчат, клітини печінки культура гепатоцитів, епітеліальні клітини печінки, короткоживучі культури клітин печінки та І d Н c Y Ш e U t t a h i c n a l s 1 e i s n m D C l r o u l n b o e g e t U t R p i v h e a P e c s s r o e l a p d n d B i l p e i r u r s t n t c l f v o s L o o r H s s 0 s t t e d i l , a e g a n e o x t f s 9 o u S 1 w J l h c e u n o i N s o e r f , s e o u o i m f u t n 2 B b e l o l y a M u i a b c t , a f l c M d a l a , n e e f J c E o o o u e o l i d t s h u g P a m a o n p s P s D o i P s r e n 0 u e h a p 1 s r f h x 2 l o o c E 3 c d e m w 2 r e s e e 1 e l M g l W t , l a e a 9 t t o u I 7 a e t a 9 R g J v — g n m e G i c h d a t y s n e o d n a , y u G t m k a t s c e r G s e h o ( І t e 7 r b (О i 8 , Basel e a , 1980, p 253 - 258) Такі клітини, як гепатоцити, нервові клітини, міокардюцити, клітини шкіри, слизових оболонок дихальних шляхів, макрофаги можуть бути використані для аналізу тропізму лікарських препаратів (Ekwal I Bjorn, Screening of toxic compounds in tissue - culture Toxicology, 1980, vol 17, №13 p127 - 142) В дослідженнях мітотичних процесів особливо часто застосовують КЛІТИННІ культури сірійського та китайського хом'яків (Huang Shin Lan Amosite, chrysotile and crocidohte asbestos are mutagemc in Chinese hamster lung cells,-Mutat Res, 1979, vol 68, №3, p 265 - 274 Kannan К , Sharma I D Defective lymphocyte transformation by DDT in vitro responsiveness of rabbit peripheral blood lymphocytes to PNA -Indian J exp Biol , 1979, vol 17, № 8,p 805 806) Запропоновано, як тест-систему ендотеліа ю 56414 льні клітини судин (Ohkawara S , KJI Т, Yamaaoto З Суть винаходу С , Fujiwara Y , Sakamoto M , Kozuka H Interaction З 1 Суть винаходу і суттєві ознаки between cadmium and zinc in the production and В основу винаходу покладено завдання розsulfation of glycosaminoglycans in cultured bovine робити ефективну та доступну у застосуванні біоvascular endothehal cells // Journal of Toxicology and логічну тест-систему для оцінки механізмів реаліEnvironmental Health 1996-47(2)- P183 - 193, зації токсичного впливу важких металів Mishima A, Kaji T, Yamamoto С , Sakamoto M , Використання культури клітин гранульозного шару Kozuka H Zinc-induced tolerance to cadmium cytoфолікулів яєчників корів в якості експрес-методу toxicity without metallothionein induction in cultured забезпечує визначення ступеня токсичності і з'ясуbovine aortic endothehal cells Toxicology Letters вання механізмів взаємодії з клітиною, процесів 1995 - 75(1 - 3) - P 85 - 92, Kaji Toshiyuki, Mishima метаболізму важких металів в КЛІТИНІ та виявлення Atsushi, Koyanagi Emi, Yamamoto Chika, Sakamoto найбільш чутливих ланок до токсичної дії Michiko, Kozuka Hiroshi Possible mechanismforzmc Інтенсивність та особливості споживання кисprotection against cadmium cytotoxicity in cultured ню культурою клітин - чутливий тест при визнаvascular endothehal cells//Toxicology -1992 -76 ченні змін біохімічного статусу та характеру мета№3 - P 257 - 270, Kaji T , Mishima A , Yamamoto С , болічних процесів, що відбуваються у КЛІТИНІ Fujiwara Y , Sakamoto M , Kozuka H , Koizumi F внаслідок проникнення важких металів Для встаBismuth induces metallothionein but does not protect новлення особливостей впливу важких металів на against cadmium cytotoxicity in cultured vascular enокремі ланки генерації АТФ і процеси, які обумовdothehal cells // Bulletin of Environmental Contaminaлюють споживання кисню, використовували інгібіtion & Toxicology 1996 -56(4) -P 630-634 тори гліколізу - натрію фторид (NaF) 10 3 М, НАДзалежної ділянки дихального ланцюга - амітал ВІДОМІ модельні тест системи які є культурою 5 10 3 М, термінальної (цитохромоксидази) - натрію клітин для вивчення дії шкідливих чинників на кліазид (ІЧаІЧз 5 10 3 М, вільнорадикальне окислення тину, зокрема ядерний апарат, процеси репродукжирних кислот інгібували ІЧаЕДТАб 10 4 М ції, інтенсивність перебігу мітохондріальних кисеньзалежних процесів Біологічна тест-система (культура клітин гранульози) забезпечує високу чутливість і відтворюОскільки існує своєрідна спеціалізація клітинваність, низьку вартість, швидке отримання рених культур, то для вивчення змін тих чи інших зультатів, надійність контролю за якістю процесів обміну речовин в КЛІТИНІ доцільно викопроведення досліджень Отримані результати на ристовувати певну модельну тест систему модельній тест-системі дозволяють прогнозувати Для вивчення шкідливих чинників на ядерний вплив на організм тварин та людини і проводити апарат, процеси репродукції клітин, інтенсивність цілеспрямоване вивчення дії важких металів перебігу мітохондріальних кисень залежних процесів та ш Крім цього використання клітинних З 2 ВІДОМОСТІ, ЩО розкривають суть винаходу культур дозволяє виявити дію токсичних речовин При проведенні інформаційно-патентного побезпосередньо на клітину, без впливу захисних шуку авторами і заявником знайдено технічне рісистем організму До того ж, культура клітин є мошення (Schah V С , Adhvaryn S G Effects of benдельною тест-системою, використовуючи яку можsamide on cell division in cultured HeLa cell - Indian на за короткий термін отримати ВІДПОВІДІ про зміни BioL, 1975, vol 11, №1, p 248 - 2520), яке містить внутрішньоклітинних процесів зумовлених дією найбільшу КІЛЬКІСТЬ суттєвих ознак, спільних із шкідливих факторів довкілля заявленим джерелом інформації (в якості біологічної тест-системи для виявлення і вивчення негаНайбільш близькою біологічною тест систетивного впливу важких металів використовують мою для виявлення токсичної дії солей важких культуру клітин тваринного організму) металів вважають культуру MDBK (клітини нирки телят) Відома культура клітин (Schah V С , AdhvaАле наявність зазначених, спільних з прототиryn S G Effects of bensamide on cell division in culпом ознак не забезпечує одержання технічного tured HeLa cell - Indian Biol , 1975, vol 11, № 1, p результату, що досягають заявленим винаходом 248-2520) забезпечує виявлення стану обміну реТехнічних рішень, які б за сукупністю ознак почовин у КЛІТИНІ інтенсивність мітохондріальних вністю співпадали із заявленим, не виявлено Це кисень залежних процесів, зміни репродуктивних дозволяє зробити висновок про ВІДПОВІДНІСТЬ запроцесів, стан ядерного апарату і використовуєтьявленого технічного рішення критерію винаходу ся для вивчення цитотоксичної та цитогенетичної "новизна" дії пестицидів У патентній і науково-технічній інформації не знайдено технічних рішень, в яких були б описані Заявлена тест система забезпечує виявлення ВІДОМОСТІ про ознаки, що відрізняють заявлений дії токсичних речовин безпосередньо на клітину винахід від прототипу і забезпечують досягнення при усуненні впливу захисних систем організму, а технічного результату (в якості біологічної тестсаме на окремі ланки генерації АТФ і процеси, що системи для вивчення токсичного впливу важких обумовлюють споживання кисню ГЛІКОЛІЗ, НАДметалів використовують культуру гранульозного залежна ділянка дихального ланцюга, процеси шару яєчника корови, яку шкубують з наростаювільнорадикального окислення жирних кислот чими дозами важких металів в середовищі PRMI Отже, рекомендації, щодо застосування тієї чи 1640, при цьому для встановлення особливостей іншої культури клітин різноманітні Відзначається впливу важких металів на окремі ланки генерації своєрідна спеціалізація клітинних культур для виАТФ та процеси, що зумовлюють споживання кисвчення тих чи інших процесів, що необхідно враню, в середовище для інкубації вносять інгібітори ховувати при виборі певної лінії клітин для експеокремих ланок дихального ланцюга рименту 56414 Отже, заявлене технічне рішення не випливає них проявів токсичної дії важких металів провоявним чином з рівня техніки, що дозволяє зробити дять дослідження інтенсивності дихання висновок про ВІДПОВІДНІСТЬ його критерію винаходу гранульози - як показника, що характеризують ме"винахідницький рівень" Заявлений винахід налетаболічні процеси у КЛІТИНІ Для вивчення впливу жить до галузі біологи, зокрема контролю забрудважких металів на інтенсивність споживання кисню нення довкілля важкими металами, а саме до мокультурою клітин гранульози та кисень залежних дельних тест-систем для вивчення і з'ясування процесів у середовище вносять хлорид кадмію у механізмів токсичного впливу важких металів на дозах з розрахунку на кінцеву концентрацію чистообмін речовин го металу 1, 10, 100нг/мл, 1, 10мкг/мл та ацетат свинцю у дозах 10, 20, 40, 100 і 200нг/мл суспензії Винахід може бути застосований у ветеринарІнтенсивність дихання клітин визначають поляроно-санітарній практиці при ОЦІНЦІ негативного графічне (нг - атом О/мл суспензії клітин/ хвилину) впливу техногенного забруднення зовнішнього у термостатованій кюветі (t 38°C) з автоматичною середовища солями важких металів на тваринний реєстрацією перебігу процесу Для встановлення організм і вирішенні питання ДОЦІЛЬНОСТІ ведення особливостей впливу важких металів на окремі тваринництва у господарствах з різними формами ланки генерації АТФ і процеси, які зумовлюють власності в умовах техногенного навантаження, а споживання кисню використовують інгібітори глітому відповідає критерію винаходу "промислова колізу - натрію фторид (NaF) 10 3 М, НАД - залежної придатність" Таким чином, заявлений винахід є ділянки дихального ланцюга - амітал 5 10 3 М, терновим, промислово придатним і має винахідницьмінальної (цитохромоксидази) - натрію азид (№N3 кий рівень, тобто відповідає всім умовам патент5 10 3 М, вільнорадикальне окислення жирних кисноспроможності винаходу ВІДПОВІДНО до ст 7 розлот інгібували натрійетилендиамідтетраацетатом ділу II Закону України "Про охорону прав на (NaEDTA)6 10 4 M винаходи і корисні моделі" № 1771-111, 2000р 4 0 ВІДОМОСТІ, ЩО підтверджують можливість здійснення способу В якості модельної тест системи для визначення токсичного впливу важких металів на тваринний організм використовують культуру клітин гранульозного шару фолікулів яєчника корів, яку шкубують 10 - 12год разом з наростаючими дозами хлориду кадмію та ацетату свинцю у середовищі RPMI-1640 (T-low Laboratories) Культивування проводять за загальновживаним методом (Методические рекомендации по культивированию ооцитов и фоликулов коров Под ред А К Голубева - Ленинград-1989- ВНИИР и Т С ж - С 17) Здійснюють візуальну оцінку забарвлення, після чого визначають рН середовища інкубації яке зміщується у кислий бік Спостерігають за зміною забарвлення індикатора (фенолового червоного) від рожевого кольору до солом'яно-жовтого При цьому враховують, що загибель клітин є кінцевим результатом токсичної дії важких металів Цьому передують порушення різноманітних процесів ЖИТТЄДІЯЛЬНОСТІ клітин 3 метою з'ясування прихова 4 1 Приклад конкретного виконання способу При інкубуванні культури клітин гранульози без додавання кадмію (контроль) та у присутності металу у дозах від 1 до ЮОнг встановили зміну рН у кислий бік, а ВІДПОВІДНО - забарвлення індикатора (феноловий червоний) змінювалось з рожевого у жовтий При 1мкг кадмію забарвлення змінювалося менш інтенсивно, а при Юмкг залишалось рожевим При інкубуванні культури клітин гранульози без додавання свинцю (контроль) та у присутності металу у дозах від 10 до 40нг встановили зміну рН, а ВІДПОВІДНО - забарвлення індикатора з рожевого у жовтий При 100нг/мл свинцю забарвлення змінювалося менш інтенсивно, а при 200нг/мл залишалось рожевим Отже, Cd внесений у середовище інкубації у дозі 10мкг/мл і свинець у дозі 200нг/мл повністю пригнічували ЖИТТЄДІЯЛЬНІСТЬ культури клітин гранульози Дихання культури клітин гранульози, шкубованоі 12 год, становило 6,3±0,27нг атом О/0,1мл суспензії за хв (табл 1) Таблиця 1 Дихальна активність культури клітин гранульози за дії кадмію (нг атом 0/0,1 мл клітин/хв) Умови досліду Контроль 1нг Юнг ЮОнг 1мкг Юмкг о2 6,3±0,27 7,0±0,47 8,7±1,44 10,00±1,63 6,3±0,98 5,7±0,27 NaF 5,3±0,27 4,7±0,54 6,00±1,25 8,7±1,78 5,3±0,27 5,0±0,01 Присутність кадмію в середовищі інкубації впливала на споживання кисню При цьому дози 1, 10, і 100 нг стимулювали дихальну активність, порівняно з контролем, на 11,1, 38,1 та 58,7%, 1мкг не змінював величину показника (6,6±0,78нг атом 0/0,1 мл суспензії нм за хвилину), а при Юмкг встановлено його зниження на 9,2 % Для виявлення частки реалізації кисню куль Амітал 4,0±0,01 4,0±0,47 5,7±1,78 7,0±2,45 4,7±0,27 4,00±0,01 NaN3 3,3±0,22 3,5±0,63 4,8±1,36 5,7±2,18 4,0±0,47 3,7±0,27 ЕДТА 2,5±0,24 2,0±0,47 3,5±1,04 4,1±1,58 2,7±0,27 3,7±0,27 турою клітин гранульози у окремих ланках дихального ланцюга використані інгібітори Так, у контролі, ціанідчутливе дихання становило 47,6%, немітохондріальне - 52,4% При цьому, із загальної КІЛЬКОСТІ КИСНЮ, ЩО реалізувалася в мітохондріях, 15,8% припадало на ГЛІКОЛІЗ, 24,5% на НАД- і 23,3% на ФАД-залежний шляхи Величина ПОЛ складала 24,2% від загальної КІЛЬКОСТІ 56414 немггохондріального дихання (табл 2) Таблиця 2 Споживання кисню в ланках дихального ланцюга за дії кадмію (%) Умови досліДУ Контроль 1нг Юнг ЮОнг 1мкг Юмкг Мітохондріально-залежна компонента Ціанідрезистентна компонента % від загальної % від загальної Втому числі інтенсивності спо- NaF-чутлива НАД-залежна ФАД-залежна інтенсивності споПОЛ живання кисню живання кисню 47,6 33,3 43 3 23,3 52,2 24,2 50,0 65,7 20,0 14,3 50,0 42,8 44,8 69,2 7,7 23,1 55,2 27,1 43,0 30,2 39,5 30,2 57,0 28,0 36,5 43,5 26,1 30,4 63,5 32,5 35,1 35,0 50,0 15 64,9 0 Інкубування клітин гранульози протягом 12год в присутності 1нг кадмію забезпечувало однакову активність мітохондріального та ціанідрезистентного шляхів дихання - по 5 0 % від загальної КІЛЬКОСТІ СПОЖИТОГО КИСНЮ При цьому зросла до 65,7% частка дихання, яка була чутлива до натрію фториду За рахунок НАД- та ФАД-залежних ділянок дихального ланцюга реалізувалося ВІДПОВІДНО 20 і 14% кисню Додавання кадмію у більших дозах (10, ЮОнг та 1 і Юмкг) змінювало величину дихальної активності клітин у бік зменшення мітохондріальної та зростання ціанрезистентної компоненти Так, при Юнг відношення споживання кисню мітохондрм ціанрезистентний шлях було 44,8 55,2, при ЮОнг 43 57, 1мкг36,563,5і Юмкг 35,1 64,9 Із загальної КІЛЬКОСТІ КИСНЮ, ЩО реалізува лась, при Юнг кадмію натрію фторид чутливе дихання високе - 69,2%, знижувалось при ЮОнг до 30,2% і було в межах 35 - 43% при більшій (1 і Юмкг) Одночасно за рахунок НАД- та ФАДзалежних ділянок дихального ланцюга використовувалось кисню при Юнг кадмію у пробі, ВІДПОВІДНО, 7,7 І 23,1%, при ЮОнг-39,5 і 30,2%, 1мкг -26,1 і 30,4% та при Юмкг-50 і 15% Додавання у проби наростаючих доз кадмію, порівняно з контролем, підвищувало інтенсивність перекисного окислення ЛІПІДІВ Частка ІЧаЕДТА-чутливого дихання у його ціанрезистентній компоненті при дозі металу 1 нг - максимальна (42,8%), при 10,100 і 1мкг - майже однакова (27,28 і 32%) Особливістю культури клітин, яка шкубувалася в присутності 1мкг кадмію була повна втрата чутливості до шпбітора перекисного окислення ЛІПІДІВ Отримані результати дослідження показали вплив кадмію на інтенсивність та особливості споживання кисню за рахунок зростання частки процесів, що не пов'язані з диханням мітохондрій Кореляційне відношення складає 0,66 Незважаючи на приріст поглинання кисню культурою клітин при дозах 1 нг, 10 та ЮОнг, виявлено перерозподіл споживання кисню за рахунок зростання частки процесів, що не пов'язані з диханням мітохондрій Виключення складає культура клітин, інкубована з 1нг кадмію Виявлено як зростання загальної інтенсивності дихання, так і частки мітохон дріального дихання Проте, показник зростав за рахунок збільшення використання ГЛІКОЛІТИЧНИХ субстратів при одночасному суттєвому зниженні НАД- та ФАД-залежної ланки дихального ланцюгу Слід ВІДМІТИТИ, ЩО кадмій у всіх дозах стимулював процеси перекисного окислення ЛІПІДІВ, але при дозі 1мкг найбільше Показник частки ПОЛ від ціанідрезистентного дихання становив 42,8%, що майже в два рази вище, ніж у контролі При дозі Юмкг основним джерелом постачання субстратів у дихальний ланцюг є ГЛІКОЛІЗ, що складає 69,2% від ціанідчутливого дихання, проте рівень використання НАД-залежних субстратів надзвичайно низький (7,7%) Вищі концентрації кадмію у пробі (100 та 1мкг) знижували величину показника ціанідчутливого дихання до 43 та 36,5% ВІДПОВІДНО При дозі елементу 1мкг найбільше кисню реалізується за рахунок гліколізу (43,5), найменше за рахунок НАД-залежної ланки (26,1%) Інкубування культури разом з Юмкг кадмію викликало зростання процесів, не пов'язаних з диханням мітохондрій до 64,9% Внесення азиду незначно змінювало інтенсивність споживання кисню культурою Реакція на внесення ІЧаЕДТА взагалі відсутня Крім цього, якщо у контролі та пробах із нижчим вмістом кадмію величина рН змінювалася в кислий бік, що пов'язано з ЖИТТЄДІЯЛЬНІСТЮ КЛІТИН, то при внесенні в середовище інкубації Юмкг кадмію через 12год зміни рН не виявлено Можна вважати, що метал у даній дозі проявляє згубну дію на ЖИТТЄДІЯЛЬНІСТЬ та розвиток клітин гранульози, а споживання кисню може бути обумовлене процесами розпаду Проведено комплексне дослідження впливу ацетату свинцю на кисеньзалежні процеси Встановлено, що культура клітин гранульози фолікула споживає в середньому 8,44+0,40нг-атом 0/мл за хв Інгібування метаболізму глюкози, зменшувало інтенсивність дихання у клітинах гранульози на 27,8%, НАД-залежної ланки ланцюга - на 38,4%, кінцевої ланки (цитохромоксидаза) - на 52,1% (контроль) Додавання до культури клітин гранульози наростаючих доз ацетату свинцю пригнічувало їх дихальну активність Так, внесення Юнг/мл елемента знижувало споживання кисню клітинами гранульози на 19,5%, а 20нг/мл - на 10% Збільшення дози ацетату свинцю у два рази - 40нг/мл 56414 призвело до зниження дихальної активності клітин гранульози на 29%, а при 100нг/мл вона становила 38,4% від вихідного значення Максимальна доза свинцю викликала зменшення споживання кисню на 63,1% Отже, додавання до 10 культури клітин наростаючих доз ацетату свинцю пригнічувало їх дихальну активність, на що вказувало зниження КІЛЬКОСТІ спожитого ними кисню і зменшення швидкості його поглинання (табл 3) Таблиця З Дихальна активність культури клітин гранульози за дії ацетату свинцю (нг-атом Омл за хв, М±т, п=10) Культура клітин гранульози без ацетату свинцю та інгібіторів генерації АТФ 8,44±0,40 8,44±0,40 8,44±0,40 8,44±0,40 8,44±0,40 8,44±0,40 Доза нг/мл Ацетат свин- Фторид нацю трію 10 20 40 100 200 Вплив РЬ на окремі ланки дихального ланцюга у клітинах гранульози яєчника був неоднозначним і залежав від КІЛЬКОСТІ елемента, внесеного у середовище Так, при 10нг/мл свинцю після додавання NaF (інгібітор гліколізу) споживання кисню культурою клітин, порівняно до контролю, знизилось на 34,9%, при 40 і 100нг/мл різниця становила ВІДПОВІДНО 45,5% і 51,5%, а при 200нг/мл зниження було максимальним - 77,5% Виключення складала доза 20нг/мл, при якій досліджуваний показник знизився всього на 18,3% порівняно до контролю Блокування НАД-залежної ділянки дихального ланцюга аміталом, при додаванні у середовище свинцю, ще більшою мірою зменшувало споживання кисню клітинами гранульози При цьому найбільше зниження дихальної активності клітин на (66,9% і 82,3%) встановлено при додаванні ВІДПОВІДНО 100 і 200нг/мл ацетату свинцю При додаванні 20нг/мл свинцю дихальна активність клітин знизилася всього на 37,3% Аналогічні результати отримані при дослідженні інтенсивності поглинання кисню культурою клітин після додавання до середовища ацетату 6,8±0,4 7,6±0,5 6±0,3 5,2±0,6 3,1±0,2 6,1±0,3 5,5±0,9 6,9±0,4 4,6±0,1 4,1±0,2 1,9±0,8 Амітал Азид натрію 5,2±0,7 4,7±0,6 5,3±0,8 4±0,4 2,8±0,2 1,5±0,5 4,05±0,02 3,8±0,8 4,5±0,6 2,9±0,5 2,3±0,7 1,5±0,4 свинцю і азиду натрію Так, споживання кисню при дозі свинцю 10нг/мл зменшилось до 55%, при 20нг/мл - на 46,7%, при 40нг/мл - 65,6%, при 100нг/мл -72,8% та при 200нг/мл - 82,2% Виявлене дозозалежне зниження дихальної активності культури клітин гранульози яєчника корів при додаванні у середовище ацетату свинцю зумовлено комплексним впливом цього елемента на різні ланки генерації АТФ у КЛІТИНІ та кисеньзалежні процеси в цілому Цей ефект може бути обумовлений, з одного боку, інактивацією та інгібуванням активності SH-вмісних ферментів, а з другого -інших, чутливих до свинцю процесів, які локалізовані у цитозолі і мітохондріях Разом з тим, при збільшенні вмісту свинцю у середовищі інкубації підвищується його вміст у мембранах клітин, що може впливати на їх ультраструктуру і проникність Отриманий експериментальний матеріал показує перспективність використання культури клітин гранульозного шару фолікулів яєчника корів у якості біологічної тест-системи, для вивчення токсичного впливу важких металів, особливостей клітинного метаболізму, механізмів токсичної дії Підписано до друку 05 06 2003 р Тираж 39 прим ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24