Спосіб відтворення цілісного зображення мікроструктури міокарда

Спосіб відтворення цілісного зображення мікроструктури міокарда, що включає дослідження структури міокарда, який відрізняється тим, що виготовляють гістологічні зрізи цілого серця або його ділянок залежно від його розміру, отримані гістологічні зрізи розподіляють на окремі поля зору, які фотографують з використанням мікроскопу, отримані зображення поєднують за допомогою програми обробки зображень в цілісне зображення мікроструктури міокарда. (19) (21) u201109552 (22) 29.07.2011 (24) 10.02.2012 (46) 10.02.2012, Бюл.№ 3, 2012 р. (72) САВЧУК ТЕТЯНА ВАСИЛІВНА, ЗАХАРОВА ВАЛЕНТИНА ПЕТРІВНА, ЛЕЩЕНКО ІВАН В'ЯЧЕСЛАВОВИЧ, БАЦАК БОГДАН ВАДИМОВИЧ (73) ДЕРЖАВНА УСТАНОВА "НАЦІОНАЛЬНИЙ ІНСТИТУТ СЕРЦЕВО-СУДИННОЇ ХІРУРГІЇ ІМ. М.М. АМОСОВА" АМН УКРАЇНИ 3 локон. Далі відділяють волокна, що проходять спіралеподібно позаду папілярних м'язів лівого шлуночка, доки не зустрінуться з відпрепарованими волокнами з протилежної сторони. Таким чином отримують стрічкоподібний м'язовий пласт, на кінцях якого розташовані з одного боку аорта, з другого - легенева артерія. Цей спосіб дозволяє отримати зображення структури міокарда та демонструє спіралеподібну будову міокарда, що забезпечує найбільш ефективне гвинтоподібне скорочення лівого шлуночка. До недоліків зазначеного способу належать: по-перше, методика, що базується на відварюванні серця, не є достатньо коректною по відношенню до людського матеріалу. По-друге, міокард представляє собою неперервне з'єднання клітин у вигляді синцитію, тому не має чітко відокремлених шарів навіть між протилежно направленими волокнами. Тому грубе розгортання міокарда у стрічку приводить до руйнування тонких зв’язків між волокнами і не дає уяви про істину структуру міокарда. В основу корисної моделі була поставлена задача розробки методики, яка дозволила б спостерігати одразу всю мікроструктуру міокарда, не руйнуючи при цьому тонкі зв'язки між волокнами. Спосіб відтворення цілісного зображення мікроструктури міокарда включає дослідження структури міокарда. Новим є те, що виготовляють гістологічні зрізи цілого серця або його ділянок залежно від його розміру, отримані гістологічні зрізи розподіляють на окремі поля зору, які фотографують з використанням мікроскопу, отримані зображення поєднують за допомогою програми обробки зображень в цілісне зображення мікроструктури міокарда. Технічний результат: завдяки виконанню фотографій гістологічних зрізів серця або його ділянок, та їх поєднання за допомогою програми обробки зображень, маємо можливість спостерігати одразу всю мікроструктуру міокарда. Перелік фігур креслень: Фіг.1. Поле зору поперечного зрізу міокарда. Передня частина стінки лівого шлуночка. Вид знизу. Компактний шар переходить в структури трабекулярної частини міокарда. Забарвлення гематоксиліном та еозином. 36x40. Фіг.2. Поле зору поперечного зрізу міокарда. Бічна частина стінки лівого шлуночка. Спостерігається компактний шар міокарда, волокна переходять в структури трабекулярної частини міокарда, які орієнтовані по відношенню до компактного шару під кутом, близьким до 90°. Забарвлення гематоксиліном та еозином 36x40. Фіг.3. Поле зору поперечного зрізу міокарда. Задня частина стінки лівого шлуночка, має таку ж будову, як на Фіг.2 Забарвлення гематоксиліном та еозином 36x40. Фіг.4. Передня частина стінки лівого шлуночка поблизу мішлуночкової борозни. Вид знизу. Спостерігається компактний шар міокарда, в центрі якого циркулярно розташовані волокна віялоподібно розходяться в сторони до епі- та ендокарду (хід волокон проти часової стрілки). Компактний шар переходить в структури трабекулярної частини міокарда Хід волокон поблизу міжшлуночкової 67298 4 борозни утворює переплетення в різних площинах. Забарвлення гематоксиліном та еозином.36x40. Фіг.5. Поле зору поперечного зрізу міокарда. Порожнина лівого шлуночка, трабекулярний міокард лівого шлуночка та частина міжлуночкової перегородки. Трабекули більш виражені зі сторони вільної стінки. Забарвлення гематоксиліном та еозином.36x40. Фіг.6. Поле зору поперечного зрізу міокарда. Частини стінок лівого та правого шлуночка в ділянці задньої міжшлуночкової борозни, задня частина міжшлуночкової перегородки, частини порожнин лівого та правого шлуночків. Хід волокон поблизу задньої міжшлуночкової борозни утворює переплетення в різних площинах. Забарвлення гематоксиліном та еозином 36x40. Фіг.7. Поле зору поперечного зрізу міокарда. Передні частини стінок обох шлуночків та міжшлуночкової перегородки. Хід волокон поблизу передньої міжшлуночкової борозни утворює переплетення. Забарвлення гематоксилін та еозином 36x40. Фіг.8. Поле зору поперечного зрізу міокарда. Середня частина міжшлуночкової перегородки, знизу трабекулярний міокард порожнини правого шлуночка, зверху частина порожнини лівого шлуночка. Забарвлення гематоксиліном та еозином 36x40. Фіг.9. Поле зору поперечного зрізу міокарда. Задня частина стінки правого шлуночка, частина порожнини правого шлуночка, компактний та трабекулярний міокард. Забарвлення гематоксиліном та еозином 36x40. Фіг.10. Поле зору поперечного зрізу міокарда. Частина порожнини правого шлуночка а також його компактного та трабекулярного міокарда. Забарвлення гематоксиліном та еозином 36x40. Фіг.11. Поле зору поперечного зрізу міокарда. Передня частина стінки правого шлуночка, компактний та трабекулярний міокард. Забарвлення гематоксиліном та еозином 36x40. Фіг.12. Поле зору поперечного зрізу міокарда. Передньобічна частина стінки правого шлуночка:порожнина, частини компактного та трабекулярного міокарда. Забарвлення гематоксиліном та еозином 36x40. Фіг.13. Поле зору поперечного зрізу міокарда. Задньобічна частина стінки правого шлуночка: порожнина, частини компактного та трабекулярного міокарда. Забарвлення гематоксиліном та еозином 36x40. Фіг.14. Цілісне зображення поперечного зрізу міокарда плода співставлене за допомогою програми обробки зображень. Вид знизу. Отримане зображення дає змогу оцінити морфологію міокарда в цілому: товщину стінок шлуночків, міжшлуночкової перегородки, співвідношення трабекулярного та компактного шарів, простежити хід волокон, формуючих стінки серця. В компактному шарі лівого шлуночка спостерігається циркулярний хід волокон, які віялоподібно розходяться проти часової стрілки. Субепікардіально та в трабекулярному шарі розташовані волокна, що беруть початок з 5 циркулярних шарів, які змінюють свій напрямок на взаємно перпендикулярний. Спостерігається найбільш складна структура міокарда міжшлуночкової перегородки, особливо в ділянках передньої та задньої міжшлуночкових борозен, де міокардіальні волокна мають «хаотичний» напрямок. Товщина перегородки збільшується спереду назад. В даному терміні вагітності відмічається явне перевалювання трабекулярного міокарда особливо у правому шлуночку. Трабекули більше виражені з боку вільних стінок шлуночків. Спосіб використання даної методики здійснюється наступним чином: Приклад 1: Ціле серце плода або новонародженого фіксується у 10 % нейтральному формаліні. Проведення по спиртами наростаючої концентрації та заливка у парафін за загально прийнятою методикою. З парафінових блоків на мікротомі Leica SM 2000 R виготовлялися серійні поперечні зрізи товщиною 5мкм. Зрізи фарбуються гематоксилін-еозином. (Р. Лилли. «Патологическая техника и практическая гистохимия». 1969г.) Мікроскопію проводимо за допомогою мікроскопа Olympus ВХ41 (обх4, окх10). Цілий гістологічний зріз розподіляли на 67298 6 окремі поля зору, які фотографували за допомогою фотоапарата Olympus SP-500 UZ і зображення вводилися в комп’ютер з використанням програми Quick Photo. За допомогою програми Adobe Photoshop CS5 проводилося поєднання фотографій окремих ділянок в ціле зображення з відтворенням цілісного зображення поперечного зрізу серця плода. Приклад 2: Для дослідження сердець великих розмірів цілі серця розтинають в поперечному напрямку, отримують зріз товщиною 1 см. Кожний зріз фіксують у формаліні, виробляють окремі маркіровані парафінові блоки. З кожного блоку виробляють гістологічні зрізи товщиною 5 мкм. Зрізи фарбуються гематоксилін-еозином. Мікроскопію проводимо за допомогою мікроскопа Olympus BX41 (обх4, окх10). Цілий гістологічний зріз розподіляли на окремі поля зору, які фотографували за допомогою фотоапарата Olympus SP-500 UZ і зображення вводилися в комп'ютер з використанням програми Quick Photo. За допомогою програми Adobe Photoshop CS5 проводилося поєднання фотографій окремих ділянок в ціле зображення з відтворенням цілісного зображення зрізу серця. 7 67298 8 9 Комп’ютерна верстка Мацело В. 67298 Підписне 10 Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601