Спосіб моделювання печінкової недостатності

Реферат: Спосіб моделювання печінкової недостатності включає уведення тваринам олійного розчину 2ацетиламінофлуорену з наступною частковою гепатектомією. Олійний розчин 2ацетиламінофлуорену уводять протягом 5 діб у дозі 30 мг на 1 кг маси тварини. UA 72094 U (54) СПОСІБ МОДЕЛЮВАННЯ ПЕЧІНКОВОЇ НЕДОСТАТНОСТІ UA 72094 U UA 72094 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до регенеративної медицини і може бути використана для досліджень у галузі клітинної трансплантології. У дослідженнях репараційних властивостей клітин печінки використовується широкий спектр моделей, зокрема і такі, що формуються шляхом уведення тваринам хімічних речовин, які пошкоджують гепатоцити піддослідних тварин і унеможливлюють їх проліферацію (алілалкоголь, ретрорзин, дипін, 2-ацетиламінофлуорен (ААФ)) [1, 2]. Найбільш близьким до способу, що заявляється, є спосіб моделювання печінкової недостатності шляхом уведення тваринам інгібітора проліферації гепатоцитів - ААФ [3]. Уведення ААФ здійснюють за такою схемою: олійний розчин ААФ уводять у дозі 10 мг/кг ваги тіла протягом 7 діб, на сьому добу проводять 68 % часткову гепатектомію (ЧГЕ) за Хіггінсом, після чого додаткових 7 діб уводять ААФ у тій самій дозі. Недоліком способу є те, що сформована таким шляхом модель не може бути використана для досліджень в галузі клітинної трансплантології. Це пов'язано з уведенням ААФ після проведення ЧГЕ, яка, зазвичай, проводиться одночасно з трансплантацією клітин для зменшення інвазивності процедури. ААФ, як хімічний агент, може діяти також і на трансплантовані клітини, інгібуючі їх проліферацію. В основу корисної моделі поставлена задача удосконалити відомий спосіб моделювання печінкової недостатності таким чином, щоб він забезпечував можливість одержувати модель, придатну для досліджень у клітинній трансплантології. Ця задача вирішується тим, що в способі моделювання печінкової недостатності, який включає уведення тваринам олійного розчину ААФ з наступною ЧГЕ, згідно з корисною моделлю, олійний розчин ААФ уводять протягом 5 діб в дозі 30 мг на 1 кг маси тварини. Зміна схеми уведення ААФ дозволяє виключити уведення ААФ після ЧГЕ і таким чином забезпечити можливість використання моделі у будь-яких дослідженнях в галузі клітинної трансплантології. Спосіб пояснюється прикладом. Дослідження здійснювали на нелінійних білих щурах-самцях вагою більше 250 г і віком близько 6 місяців, які знаходились на стандартному харчовому раціоні в умовах віварію. Усі маніпуляції з тваринами проводили згідно з правилами Європейської конвенції захисту хребетних тварин, що використовуються в експериментальних та інших дослідних цілях. Піддослідним тваринам протягом 5 днів інтрагастрально вводили розчин ААФ на кукурудзяній олії із розрахунку 30 мг ААФ на 1 кг маси тварини. На 5 добу під інгаляційним ефірним наркозом проводили 68 % ЧГЕ за Хіггінсом. На 1 та 8 доби після ЧГЕ тварин забивали, печінку відмивали від крові, після чого зразки тканини фіксували у 10 % формаліні для подальших гістологічних досліджень. Зафіксовані зразки тканини печінки відмивали від фіксатора, зневоднювали у батареї спиртів зростаючих концентрацій, заливали у парафін та отримували зрізи за допомогою санного мікротома. Отримані зрізи забарвлювали гематоксиліном та еозином і вивчали у світловому мікроскопі. На фіг. 1 видно, що на першу добу після ЧГЕ дрібні базофільні клітини з високим співвідношенням ядро-цитоплазма (овальні клітини, показані стрілками) спостерігались у портальних трактах і поблизу них. Овальні клітини розташовувались поблизу гепатоцитів в зонах базальних мембран. Морфологічна картина, наведена у прототипі (фіг. 1 А) повністю відповідає такій, що отримана при формуванні моделі заявленим способом (фіг. 1 Б) На фіг. 2 видно, що кількість овальних клітин збільшувалась з часом і на 8 добу після проведення ЧГЕ вони утворювали довгі ланцюги клітин, які сягали перипортальних і мідзональних ділянок як у прототипі (фіг. 2 А), так і на отриманих нами препаратах (фіг. 2 Б). Овальні клітини на 8 добу після ЧГЕ, як показано на фіг. 3 (А - ілюстрація з прототипу, Б мікрофотографія зрізу печінки, отриманого після моделювання печінкової недостатності заявленим способом), також формували невеликі просвіти, оточені кластерами клітин епітелію жовчних протоків (показані стрілками). Одночасно, як показано у прототипі (фіг. 4 А), перипортальні зони колонізувалися дрібними базофільними гепатоцитами, але невеликі ланцюжки овальних клітин можна було спостерігати на периферії кластерів базофільних гепатоцитів. Вивчення отриманих нами гістологічних препаратів (фіг. 4 Б) дозволяє констатувати, що моделювання печінкової недостатності заявленим способом цілком повторює перебіг моделі, описаної у прототипі. Таким чином, отримані результати свідчать, що формування моделі печінкової недостатності заявленим способом дозволяє чітко відтворити морфологічну картину розвитку модельної патології, описану у прототипі, при цьому створена модель, на відміну від прототипу, може бути використана для досліджень у галузі клітинної трансплантології. Джерела інформації: 1 UA 72094 U 5 1. Е. Mandache, Cristina Vidulescu, Mihaela Gherghiceanu, P. Dragomir, L. M. Popescu. Neoductular progenitor cells regenerate hepatocytes in severely damaged liver: a comparative ultrastructural study // J. Cell. Моl. Med.-2002. -Vol. 6, No 1.-P. 59-73. 2. Petersen B.E., Zajac V.F., Michalopoulos G.K. Hepatic Oval Cell Activation in Response to Injury Following Chemically Induced Periportal or Pericentral Damage in Rats // Hepatology.-1998. Vol. 27, No. 4. - P. 1030-1038. 3. Park D.Y., Suh K.S. Transforming Growth Factor-1 Protein, Proliferation and Apoptosis of Oval Cells in Acetylaminofluorene-Induced Rat Liver Regeneration // J Korean Med Sci.-1999. - Vol. 14. P. 531-538. 10 ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 15 Спосіб моделювання печінкової недостатності, що включає уведення тваринам олійного розчину 2-ацетиламінофлуорену з наступною частковою гепатектомією, який відрізняється тим, що олійний розчин 2-ацетиламінофлуорену уводять протягом 5 діб у дозі 30 мг на 1 кг маси тварини. 2 UA 72094 U Комп’ютерна верстка В. Мацело Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3