Спосіб одержання екстракту ginkgo, що має зменшений вміст 4′-о-метилпіридоксину

1. Спосіб одержання екстракту Ginkgo biloba із зменшеним вмістом 4'-О-метилпіридоксину у порівнянні з оригінальним екстрактом, що має наступні стадії: (a) одержання розчину екстракту Ginkgo у розчиннику, і (b) застосування розчину кислого іоніту та елюювання очищеного екстракту від іоніту, використовуючи розчинник, де 4'-О-метилпіридоксин, що буде вилучений, залишається на іоніті, (с) концентрування і висушування розчину екстракту до сухого екстракту, де вміст 4'-Ометилпіридоксину у сухому екстракті становить не більше 20 ррm. 2. Спосіб за пунктом 1, де додатково до або після стадії (b) здійснюють стадію (d), що передбачає застосування абсорбційної смоли й елюювання очищеного екстракту від абсорбційної смоли, використовуючи розчинник, де біфлавони, що будуть вилучені, залишаються на абсорбційній смолі, причому вміст біфлавонів у сухому екстракті становить не більше 25 % його вмісту в оригінальному екстракті. МАЄ 84518 1 ЩО (11) ЕКСТРАКТУ UA (54) СПОСІБ ОД ЕРЖАННЯ МЕТИЛПІРИДОКСИНУ ОПИС (19) ДЕРЖАВНИЙ Д ЕПАРТАМЕНТ ІНТЕЛ ЕКТУАЛЬНОЇ ВЛАСНОСТІ 3 84518 18. Застосування за п. 16, де продукт є харчовим продуктом. 19. Продукт, що характеризується вмістом екстракту Gingko за будь-яким з пунктів 10-15. Даний винахід відноситься до способу одержання екстракту із Ginkgo biloba із зменшеним вмістом 4'-O-метил піридоксину та біфлавонів у порівнянні з оригінальним екстрактом, що характеризується наступними стадіями: (a) одержання розчину екстракту Ginkgo у прийнятному розчиннику й (b) нанесення розчину на абсорбційну смолу та елюювання очищеного екстракту із абсорбційної смоли, використовуючи прийнятний розчинник, де біфлавони, які будуть вилучені, залишаються на абсорбційній смолі, та, (c) нанесення розчину на кислий іоніт та елюювання очищеного екстракту із іоніту, використовуючи прийнятний розчинник, де 4'-О-метил піридоксин, який буде вилучений, залишається на іоніті, і довільно, (d) концентрування і висушування розчину екстракту, щоб одержати сухий екстракт, де стадії (b) і (с) можуть також бути виконані у зворотному порядку. Даний винахід, крім того, відноситься до екстрактів Ginkgo biloba із зменшеним вмістом 4'-0метил піридоксину та/або біфлавонів у порівнянні з оригінальним екстрактом, екстрактами Ginkgo biloba одержаних способом відповідно до представленого винаходу, так само як до їхнього використання. В останні десятиліття екстракти із листя Ginkgo biloba використовуються як медикамент. Вони в цей час використовуються для лікування різних типів деменції та її симптомів, так само як церебральної й периферичної дисциркуляції. Інгредієнти, чия ефективність пов'язана з терпенлактонами (гінкголіди A, B1 і C і білобаліди) так само як глікозиди флавонів (кверцетин, кемпферол і ізорамнетин). Однак, листя Ginkgo biloba також містять компоненти, які не сприяють бажаній ефективності, але які можуть бути відповідальними за ризики й побічні ефекти. На додаток до неполярних інгредієнтів рослини, таким як гінкголеві кислоти, ті компоненти - 4'-0-метил піридоксин та біфлавони. У екстракту Ginkgo, що є е фективним і у той же самий час настільки ж безпечний, наскільки можливо, й настільки ж має незначні побічні ефекти, наскільки можливо, ці сполуки не повинні таким чином бути присутніми в великій кількості. 4'-О-метил піридоксин може викликати симптоми отруєння, такі як конвульсивні напади й несвідомий стан. Таким чином, ця сполука також згадується як гінкготоксин. Біфлавони, що містяться в Ginkgo, показують іммунотоксичний потенціал і можуть виявити контактну алергію. Ці біфлавони, що містяться в Ginkgo, є переважно сполуками: аментофлавон, білобетин, гінкгетин, ізогінкгетин і сціадопітизин. 4 20. Продукт за п. 19, який є медикаментом. 21. Продукт за п. 19, який є харчовим продуктом. 4'-O-метил піридоксин: Біфлавони: Аментофлавон: R1=R2=R3=H Білобетин: R1 = R3 =Н, R2 =ОСН3 Гінкгетин: R3 =Н, R1 =R2=OCH3 Ізогінкгетин: R1=H, R 2=R3=OCH3 Сціадопітизин: R1 =R2 R3 =ОСН3 Способи деплеції 4'-О-метил піридоксину й біфлавонів? так само як і ожержання екстрактів уже описані в EP 1 037 646 В1. Там, 4'-О-метил піридоксин утримують, використовуючи кислий катіоніт і біфлавони адсорбуються на активованому вугіллі. Переважно ці стадії деплеції здійснюються після стадії f) Спосіб згідно EP 1 037 646 В1 (сторінка 3), тобто, після „оброблення розчину сполукою свинця або нерозчинним поліамідом". В EP 1 037 646 В1 деплеція біфлавонів і 4'-Ометил піридоксину виконана на стадії способу (стадія T)), у якій присутній відносно високий вміст солей свинця і солей амонію, таким чином, повинна використовуватися збільшена кількість іоніту. Однак, цей спосіб обмежений складною послідовністю декількох стадій. Крім того, деплеції біфлавонів і 4'-О-метил піридоксину описані й заявлені тільки в комбінації. Однак, залежно від меж, які будуть можливо встановлені в майбутньому й через вимогу настільки ж низької модифікації композиції екстракту наскільки можливо, може бути бажаним видалення біфлавонів або тільки 4'-О-метил піридоксину. Крім того, деплеції описані тільки з одним єдиним іонітом (Merck I) у випадку 4'-О-метил піридоксину і з одним адсорбентом (активоване вугілля) у випадку біфлавонів. Однак, активоване вугілля має недолік - неселективнсть абсорбції та неможливість регенерування. Таким чином, об'єктом, що лежить в основі представленого винаходу - забезпечення способу одержання екстракту Ginkgo, де 4'-О-метил піридоксин та/або біфлавони можуть піддані деплеції 5 84518 до найбільшого можливого ступеня, в порівнянні із оригінальним екстрактом і який може додатково бути виконаний в простій і ефективній по собівартості манері. Подальший предмет представленого винаходу - екстракти Ginkgo, які одержують відповідно до цього способу. Цей об'єкт міг бути вирішений, відокремлюючи біфлавони адсорбційними смолами та/або відокремлюючи 4'-О-метил піридоксин через кислі іоніти. У способі відповідно до представленого винаходу здійснюють наступні стадії: (a) одержання розчину екстракту Ginkgo у прийнятному розчиннику, так само як (b) нанесення розчину на абсорбційну смолу й елюювання очищеного екстракту із абсорбційної смоли, використовуючи прийнятний розчинник, де біфлавони, які будуть вилучені, залишаються на абсорбційній смолі й можуть елююватися із смоли, використовуючи органічні розчинники, такі як ацетон, так, щоб смолу можливо використовувати знову, та (c) застосування розчину кислого іоніту й елюювання очищеного екстракту від іоніту, використовуючи прийнятний розчинник, де 4'-О-метил піридоксин, що буде вилучений, залишається на іоніті й може бути вимитий від іоніту, використовуючи кислоту, таку як водна соляна кислота, так, що іоніт може використовуватися знову, і, довільно, (d) концентрування і висушування розчину екстракту, щоб одержати сухий екстракт, де стадії (b) і (с) можуть також бути виконані у зворотному порядку. Особливо прийнятні розчинники на стадіях (а), (b) і (с) є водні кетони, що мають 3 - 6 атомів вуглецю (таких як ацетон, 2-бутанон) і алканоли, що мають 1 - 3 атомів вуглецю (метанол, етанол, нпропанол і ізопропіловий спирт), переважно водний ацетон і етанол, концентрація 30 - 60мас.% переважна. Переважні абсорбційні смоли в стадії (b) є смоли на основі довільно заміщених стиролів/дивінілбензолів, таких як Diaion HP-20, НР-21 або SP Sepabeads 207 і SP 850. Особливо переважні абсорбційні смоли -співполімери на основі стиролу й дивінілбензолу й співполімери на основі хромованого стиролу й дивінілбензолу. Переважні іоніти на стадії (с) є сильно кислими іонітами, такими як Merck I або Amberlite IR-120. Для оцінювання використовували оригінальний екстракт, отриманий з оригінального розчину (розчин екстракту Ginkgo відповідно до стадії (а) при висушуванні до сухого екстракту. У стадії (b) способу відповідно до представленого винаходу, кількості використовуваної смоли, так само як полярність або склад використовуваного розчинника повинні бути пристосовані таким чином, що бажані компоненти екстракту спочатку елююються із смоли до найбільшого можливого ступеня, тоді як біфлавони залишаються на смолі Таким чином, більш високий вміст води в розчиннику приводить до кращої деплеції біфлавонів, тобто, біфлавони залишаються на смолі. Залежно від розчинності екстракту, вміст води в розчиннику 6 - в межах вищезгаданого діапазону 30-70мас.%. Як оригінальні екстракти (у формі розчинів екстракту Ginkgo відповідно до стадії (а) або отримані відтіля), які повинні бути вільними від 4'-Ометил піридоксину та/або біфлавонів за допомогою абсорбційної смоли, можна розглянути наступні: • однократні екстракти, одержані відповідно до способів, відомим, наприклад, відповідно до Європейської Фармакопеї, екстрагуючи висушені листя Ginkgo biloba органічними розчинниками або їх сумішами з водою, наприклад, використовуючи суміш етанол/вода або ацетон/вода, або • екстракти, склад яких відрізняється від основного однократного екстракту внаслідок однієї або більше додаткових стадій до більшого або меншого ступеня вмісту (так називані спеціальні екстракти). Останні екстракти можуть бути одержані, наприклад, рідинно-рідинним розподілом згідно EP 360556 В1 або деякими стадіями згідно EP 431535 В1, такі як стадії (а) до (с) або всім способом згідно EP 431535 В1 або згідно США 6117431. Розчини екстракту Ginkgo відповідно до стадії (а) можуть або бути отримані безпосередньо від процесу одержання екстракту або розчиняючи сухий екстракт або інший екстракт. Подальший предмет представленого винаходу - екстракти, зокрема сухі екстракти, які одержують способом представленого винаходу і які характеризуються зменшеним вмістом 4'-О-метил піридоксину та/або біфлавонів у порівнянні з використовуваними оригінальними екстрактами. Вміст 4'-Ометил піридоксину - не більше 20 ррт у випадку екстрактів відповідно до представленого винаходу, переважно не більше 10 ppm і, зокрема, не більше 5 ррт. Вміст біфлавонів становить не більше 25% значення оригінального екстракту, переважно не більше 11% і, зокрема, не більше 6%. Відповідно до Європейської Фармакопеї, сухі екстракти взагалі мають сухий залишок принаймні 95мас.%. Екстракти відповідно до представленого винаходу можна призначати у формі порошків, гранул, таблеток, драже або капсул, переважно перорально. Щоб одержати таблетки, екстракт змішують з фармацевтично прийнятними ад'ювантами, такими як лактоза, целюлоза, діоксид кремнію, кроскармелоза і стеарат магнію й пресують у таблетки, які довільно вкривають прийнятною оболонкою, виготовленою з, наприклад, гідроксиметилцелюлози, поліетиленгліколю, пігментів (таких, як двоокис титану, окис заліза) і тальку. Екстракт відповідно до представленого винаходу може також бути заповнений у капсули, довільно при додаванні ад'ювантів, таких як стабілізатори, наповнювачі й т.п. Призначувана доза - 1-2000мг, переважно 50-1000мг, і особливо переважно 100-500мг екстракту на добу. Крім того, предмет представленого винаходу медикамент, харчові продукти або інші препарати, які містять ці екстракти, довільно в комбінації з іншими речовинами, такими як активні інгредієнти та/або ад'юванти. Термін „харчовий продукт" як використовується тут, особливо стосується дієти 7 84518 чних продовольчих продуктів, дієтично збагачених продуктів, так само як і харчування за медичними показаннями й дієтичних добавок Приклади Оригінальний розчин для Порівняльного Прикладу 1 і Прикладів 1-3 згідно з даним винаходом 200г висушеного листя Ginkgo biloba екстрагували двічі, використовуючи щораз 7 частин їхньої ваги (ваг/ваг) та етилового спирту/води 60/40 (ваг/ваг) при температурі приблизно 50°C і фільтрували. Порівняльний Приклад 1 (одержання однократного екстракту як оригінального екстракту) 25% оригінального розчину, отриманого вище, концентрували під зниженим тиском і сушили сублімацією: 14.0г (28.0% від висушеного листя). Приклад 1 відповідно до винаходу (видалення біфлавонів) 25% оригінального розчину, отриманого вище, застосовували до колонки із 100мл Sepabeads на SP 850 адсорбційної смоли та елюювали із 300мл 40мас.% етанолу. Елюат концентрували під зниженим тиском і піддавали сублімації: 11.5г (23.0%, від висушеного листя). Приклад 2 відповідно до винаходу (видалення 4'-О-метил піридоксину) 25% оригінального розчину, отриманого вище, застосовували до колонки з 20мл сильно кислого іоніту Amberlite IR-120 і елюювали із 60мл 60мас.% етанол. Елюат концентрували під зниженим тиском і піддавали сублімації: 13.0г (26.0%, від висушеного листя). Приклад 3 відповідно до винаходу (видалення біфлавонів і 4'-О-метил) піридоксину) 25% оригінального розчину, отриманого вище, застосовували до першої колонки з Sepabeads на 100мл SP 850 адсорбційної смоли й елюювали із 300мл 40мас.% етанолу. Елюат застосовували до др угої колонки з 20мл сильно кислого іоніту Amberlite IR-120 і елюювали з 100мл 40мас.% етанолу. Одержаний розчин, концентрували під зниженим тиском і піддавали сублімації: 10.1г (20.2%, від висушеного листя). Оригінальний розчин для Порівняльного Прикладу 2 і Прикладів 4 - 6 відповідно до представленого винаходу 200г висушеного листя Ginkgo biloba екстрагували двічі, використовуючи щораз сьому частину 8 їхньої ваги (ваг/ваг) і етилового спирту/води 60/40 (ваг/ваг) при температурі приблизно 50°С і фільтрували. Розчин екстракту сильно концентрували (145г), розбавляли водою приблизно до 400м і витримували приблизно 19год при 10°C. Одержаний осад видаляли фільтрацією. Порівняльний Приклад 2 (одержання спеціального екстракту як оригінального екстракту) 25% оригінального розчину, отриманого вище, концентрували під зниженим тиском і піддавали сублімації: 9.4г (18.8%, від висушеного листя). Приклад 4 відповідно до представленого винаходу (видалення біфлавонів) 25% оригінального розчину, отриманого вище, застосовували до колонки з 50мл Sepabeads SP 207 адсорбційної смоли й елюювали із 150мл 40мас.% етанолу. Елюат концентрували під зниженим тиском і піддавали сублімації: 9.4г (18.8%, від висушеного листя). Приклад 5 відповідно до представленого винаходу (видалення 4'-O-метил піридоксину) 25% оригінального розчину, отриманого вище, застосовували до колонки з 20мл сильно кислого іоніту Amberlite IR-120 і елюювали із 100мл 40мас.% етанолу. Елюат концентрували під зниженим тиском і піддавали сублімації: 8.7г (17.4%, від висушеного листя). Приклад 6 відповідно до представленого винаходу (видалення біфлавонів і 4'-O-метил піридоксину) 25% оригінального розчину, отриманого вище, застосовували до першої колонки з 50мл Sepabeads SP 207 адсорбційної смоли й елюювали із 150мл 40мас.% етанолу. Елюат застосовували до другої колонки з 20мл сильно кислого іоніту Ambedite IR-120 і елюювали з 100мл 40мас.% етанолу. Одержаний розчин концентрували під зниженим тиском і піддавали сублімації: 8.3г (16.6%, від висушеного листя). Вміст біфлавонів і 4'-О-метил піридоксину у одержаних екстрактах, можуть бути взяті із наступної таблиці. Потрібно відмітити, що сума біфлавонів у Прикладах 1, 3, 4 і 6 відповідно до представленого винаходу значно нижче, ніж у відповідних Порівняльних Прикладах 1 і 2, відповідно. Аналогічно, вміст 4'-О-метил піридоксину значно зменшений в Прикладах 2, 3, 5 і 6 відповідно представленого винаходу в порівнянні з відповідними Порівняльними Прикладами 1 і 2, відповідно. 9 Комп’ютерна в ерстка Л. Купенко 84518 Підписне 10 Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601