Спосіб одержання ліпофільного комплексу з протимікробною дією з лікарської рослинної сировини

Реферат: Спосіб одержання ліпофільного комплексу антимікробної дії шляхом багаторазової екстракції рослинної сировини хлороформом при загальному співвідношенні сировина: екстрагент - 1:101:12 до знебарвлення розчинника, при постійно підтримуваній температурі 55-60 °C, з рециркуляцією екстрагента у замкненому циклі з наступним упарюванням та сушінням, згідно з корисною моделлю як сировину використовують збір ЛРС, а цикл рециркуляції екстрагенту складає 5-6 годин. UA 89737 U (12) UA 89737 U UA 89737 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до хіміко-фармацевтичної галузі, а саме до способів одержання з рослинної сировини комплексів ліпофільних біологічно активних речовин (БАР) з антимікробною дією, які можуть бути використані як лікарські субстанції при створенні протитуберкульозних препаратів у різних лікарських формах. Відомий спосіб одержання ліпофільного екстракту з природної сировини - обніжжя бджолиного [1], шляхом екстракції подрібненої сировини зрідженим газом 2 дихлордифторметаном при тиску 4,5-5,5 кгс/см , що перевищує атмосферний, при співвідношенні сировини екстрагент 1:5-1:6, температурі 18-25 °C протягом 2,75-3,25 годин з наступним видаленням екстрагенту з екстракту при випарюванні. До недоліків зазначеного способу можна віднести високу вартість та складність технологічного процесу, а також необхідність використання спеціального обладнання для проведення екстракції при високому тиску. Найближчим до заявленого способу за сукупністю ознак є спосіб одержання ліпофільного комплексу антимікробної дії [2], згідно з яким - як сировину використовують траву підмаренника справжнього (Galium verum L.), екстракцію здійснюють хлороформом при загальному співвідношенні сировина: екстрагент 1:10-1:12, з рециркуляцією екстрагента у замкненому циклі протягом 28-32 годин, з наступним упарюванням та видаленням екстрагенту і отриманням сухого залишку. До недоліків зазначеного способу слід віднести довготривалий час екстракції. Задачею корисної моделі є створення способу одержання засобу рослинного походження шляхом екстракції хлороформом збору з лікарської рослинної сировини (ЛРС), в результаті чого одержують ліпофільний комплекс БАР з вираженою антимікробною дією. Поставлена задача вирішується таким чином, що у способі одержання ліпофільного комплексу антимікробної дії шляхом багаторазової екстракції рослинної сировини хлороформом при загальному співвідношенні сировина: екстрагент - 1:10-1:12 до знебарвлення розчинника, при постійно підтримуваній температурі 55-60 °C, з рециркуляцією екстрагента у замкненому циклі з наступним упарюванням та сушінням, згідно з корисною моделлю як сировину використовують збір ЛРС наступного складу (мас. %): плодів анісу звичайного (Anisi vulgaris fructus) - 10,5, трави деревію звичайного (Millefolii herba) - 10,5, трави материнки звичайної (Origani herba) - 10,5, квіток нагідок лікарських (Calendula flos) - 10,5, бруньок сосни звичайної (Ріnі sylvestris gemma) - 10,5, трави споришу звичайного (Poligoni avicularis herba) - 10,5, трави фіалки триколірної (Violae herba) - 10,5, трави чебрецю плазкого (Serpylli herba) - 10,5, плодів ялівцю звичайного (Juniperi fructus) - 5,5, коріння та кореневища оману високого (Inulae helenii rhizomata et radices) - 10,5, а цикл рециркуляції екстрагенту складає 5-6 годин. Кожен вид лікарської рослинної сировини, що входить до складу збору, подрібнювали окремо до розміру часток, що проходять крізь сито за ТУ 23-2-2068-89 з отворами діаметром 7 мм і крізь сито з отворами діаметром 0,5 мм взявши середню частину, яка пройшла крізь сито діаметром 7 мм і не пройшла крізь сито діаметром 0,5 мм. Змішали відповідно до пропорції. Екстракцію здійснювали хлороформом до знебарвлення останнього при загальному співвідношенні сировина: екстрагент - 1:10-1:12, при постійно підтримуваній температурі 5560 °C з рециркуляцією екстрагенту у замкненому циклі протягом 5-6 годин. Корисною моделлю передбачено, що як рослинна сировина використовується збір рослин морфологічно-анатомічний опис яких представлений у ДФУ та ГФ 11 видання [3, 4, 5] Сировина використовується у науковій та народній медицині з лікувальною метою як: протизапальна, відхаркувальна, антиспастична, болетамувальна, протиглисна, ранозагоювальна, спазмолітична, гіпотензивна, седативна, в'яжуча, антитоксична, гіпосенсибілізуюча, антисклеротична, антимікробна, кровоспинна, протитуберкульозна, бактерицидна. Отриманий нами ліпофільний комплекс містить хлорофіли, терпеноїди, ароматичні сполуки, флаваноїди [6]. Вибір хлороформу як органічного розчинника обумовлений його здатністю максимально екстрагувати ліпофільні сполуки ЛРС. Експериментальним шляхом встановлено, що оптимальним при здійсненні заявленого способу є використання співвідношення сировини до екстрагенту як 1:10-1:12. При цьому, якщо співвідношення менше 1:10, не забезпечується достатня екстракція БАР, що приводить до зниження фармакологічної активності та виходу цільового продукту. Навпаки, якщо співвідношення більше 1:12, це веде до ускладнення та подовження технологічного процесу, 1 UA 89737 U 5 10 15 20 25 30 35 збільшення використання розчинника та енерговитрат. Експериментальним шляхом встановлено, що екстракція протягом 5-6 годин забезпечує максимальне вилучення ліпофільних сполук з сировини. Згідно з заявленим способом, упарювання проводять до видалення екстрагенту з подальшим отриманням сухого залишку. Отриманий залишок представляє собою темно-коричневу порошкоподібну масу із різким характерним запахом. Заявлений спосіб здійснюють в умовах рециркуляції екстрагента у замкненому циклі, що запобігає виходу хлороформу в оточуюче середовище. Спосіб здійснюють за простою технологією, яку можливо здійснити на стандартному заводському обладнанні, екстракцію проводять до повного вилучення ліпофільного комплексу БАР з сировини. Одержують субстанцію рослинного походження з ефективною антимікробною дією, придатну до тривалого застосування, оскільки як відомо субстанції рослинного походження викликають менше звикання та побічну дію. Для здійснення заявленого способу існує достатня вітчизняна сировинна база. Корисна модель ілюструється прикладами. Приклад 1. 1 кг заготовленого збору завантажують у циркуляційний екстрактор, заливають 10 л хлороформу до "дзеркала" та вичерпно екстрагують при постійно підтриманій температурі 55 °C протягом 32 годин при загальному співвідношенні сировини: екстрагент 1:10 з рециркуляцією екстрагента у замкненому циклі до знебарвлення екстрагента. Отриманий екстракт упарюють до видалення парів хлороформу при вакуумі до отримання сухого залишку. Вихід ліпофільної фракції становить 7,05 %. Приклад 2. Антимікробну дію ліпофільного комплексу, отриманого за заявленим способом, вивчали у дослідах in vitro за відомими методиками [7, 8] методом дифузії в агар та методом серійних розведень. Для оцінки активності ліпофільного комплексу використовували стандартні штами мікроорганізмів, регламентовані ВООЗ для вивчення антимікробної дії препаратів: Staphylococcus aureus ATCC 25923, Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Proteus vulgaris ATCC 4636, Bacillus subtilis ATCC 6633, Candida albicans 885-663. Для визначення антимікробної дії культури мікроорганізмів вирощували на м'ясо-пептонному агарі при t=37 °C. Термін культивування мікроорганізмів складав 24 години. Для кількісної оцінки антимікробної дії ліпофільного комплексу та визначення мінімальної пригнічуючої ріст мікроорганізмів концентрації використовували метод серійних розведень. Ліпофільний комплекс використовували у вигляді 2 % спиртового розчину. Результати проведених досліджень наведені в таблиці. Протимікробна активність ліпофільного комплексу збору, одержаного за заявленим способом Тест - штами мікроорганізмів S. aureus ATCC 25923 Е. coli ATCC 25922 P. aeruginosa ATCC 27853 P. vulgaris ATCC 4636 B. subtilus ATCC 6633 С albicans ATCC 885663 Діаметр зон затримки росту в мм 31,2±0,4 12,8±0,1 *МБсК, мкг/мл **МБцК, мкг/мл 60 245 120 500 20,4±0,2 120 250 17,2±0,3 20,2±0,3 250 120 500 250 X >1000 >1000 Примітки: *МБсК - мінімальна бактеріостатична концентрація **МБцК - мінімальна бактерицидна концентрація X - зони затримки росту мікроорганізмів не спостерігається 40 Аналіз даних таблиці 1 свідчить про те, що діаметри зон затримки росту по відношенню до S. aureus, E.coli P. aeruginosa, P. vulgaris та В. subtilis складають 12-30 мм, що вказує на чутливість мікроорганізмів до ліпофільного екстракту. Отже, ліпофільний комплекс збору має виражену антимікробну дію по відношенню до грам-позитивних та грам-негативних бактерій. Досліджуваний комплекс виявився не активним лише по відношенню до С. albicans. 2 UA 89737 U 5 10 15 20 25 Таким чином, заявлено спосіб одержання ліпофільного комплексу збору з антимікробною дією. Заявлений спосіб простий, економічний, передбачає використання доступної вітчизняної сировини, є екологічно безпечним і може бути здійснений на будь-якому фармацевтичному підприємстві зі стандартним обладнанням. Ліпофільний комплекс БАР, одержаний заявленим способом, може бути використаний як лікарська субстанція для створення препаратів з антимікробною дією у різних лікарських формах. Джерела інформації: 1. Пат. 25670А Україна, Заявл. 30.12.1997, Опубл. 25.12.1998, Бюл. № 6/1998. 2. Пат. UA 64792 U, Україна, МПК А61К 36/74, А61К 135/00, А61Р 31/04, Заявл. 22.02.2011; Опубл. 25.11.2011, Бюл. № 22, 2011 р. 3. Державна Фармакопея України / Державне підприємство "Науково-експертний фармакопейний центр". - 1-е вид. - Доповнення 2. - Харків: Державне підприємство "Науковоекспертний фармакопейний центр", 2008. - 620 с. 4. Государственная фармакопея СССР: Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. / МЗ СССР. - 11-е изд., доп. - М: Медицина, 1990. - 400 с. 5. Державна Фармакопея України / Державне підприємство "Український науковий фармакопейний центр якості лікарських засобів". - 1-е вид. - Доповнення 3. - Харків: Державне підприємство "Український науковий фармакопейний центр якості лікарських засобів", 2009. 280 с. 6. Лікарські рослини. Енциклопедичний довідник. / За редакцією академіка АН УССР Л.М. Гродзинського. - Київ: видавництво "Українська радянська енциклопедія імен. Н.П. Бажана", 1992. - с. 544. 7. Методические рекомендации определения активности антибактериальных средств наружного применения для лечения гнойно-воспалительных инфекций: Метод, реком. / Калиниченко Н.Ф., Волянский Ю.Л., Старобинец З.Г. и соавторы / Харьков. - 1991. - 16 с. 8. Вивчення специфічної активності протимікробних лікарських засобів: Метод. Реком. / Волянський Ю.Л., Гриценко І.С., Широбоков В.П. і співавт. - Київ, - 2004. - 40 с. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 30 35 Спосіб одержання ліпофільного комплексу антимікробної дії шляхом багаторазової екстракції рослинної сировини хлороформом при загальному співвідношенні сировина: екстрагент - 1:101:12 до знебарвлення розчинника, при постійно підтримуваній температурі 55-60 °C, з рециркуляцією екстрагента у замкненому циклі з наступним упарюванням та сушінням, згідно з корисною моделлю як сировину використовують збір з ЛРС (лікарсько-рослинної сировини) наступного складу (мас. %): плодів анісу звичайного (Anisi vulgaris fructus) 10,5 трави деревію звичайного (Millefolii herba) 10,5 трави материнки звичайної (Origani herba) 10,5 квіток нагідок лікарських (Calendulae flos) 10,5 бруньок сосни звичайної (Ріnі sylvestris gemma) 10,5 трави споришу звичайного (Poligoni avicularis herba) 10,5 трави фіалки триколірної (Violae herba) 10,5 трави чебрецю плазкого (Serpylli herba) 10,5 плодів ялівцю звичайного (Juniperi fructus) 5,5 коріння та кореневища оману високого (Inulae helenii rhizomata et radices) 10,5 а цикл рециркуляції екстрагенту складає 5-6 годин. Комп’ютерна верстка І. Мироненко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3