Застосування екстракту солодкового кореня як противірусного засобу по відношенню до коронавірусів

Реферат: Застосування екстракту солодкового кореня як противірусного засобу по відношенню до коронавірусів. UA 95889 U (54) ЗАСТОСУВАННЯ ЕКСТРАКТУ СОЛОДКОВОГО КОРЕНЯ ЯК ПРОТИВІРУСНОГО ЗАСОБУ ПО ВІДНОШЕННЮ ДО КОРОНАВІРУСІВ UA 95889 U UA 95889 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Корисна модель належить до фармації та медицини, а саме до засобів рослинного походження з противірусною дією по відношенню до коронавірусів (KB), і може бути використана у комплексній етіотропній терапії вірусних захворювань, викликаних вказаним інфекційним збудником. Для більшості вірусних інфекцій людини важливим засобом боротьби, особливо за відсутності вакцин або їх малій ефективності, є хіміотерапія - застосування речовин хімічного або природного походження, які здатні специфічно пригнічувати репродукцію вірусу в інфікованих клітинах (in vitro) і в біологічній системі - макроорганізмі (in vivo) [5, 7]. На сьогоднішній день відомо і впроваджено в лікарську практику декілька противірусних препаратів з різним механізмом дії. Але їх перелік не можна вважати достатнім з урахуванням кількісного нозологічного складу збудників, їх поширеності і особливостей клінічних проявів [3, 7, 10]. Актуальність пошуку противірусних засобів по відношенню до KB, які є збудниками розповсюджених захворювань респіраторного і кишкового тракту, обумовлена майже повною відсутністю препаратів етіотропної дії. Спорадичні випадки і спалахи КВ-інфекції з респіраторними і шлунково-кишковими проявами (інфекційного гастроентериту, ентероколіту у новонароджених), а також поява високо контагіозного захворювання наприкінці 2002 р. - тяжкого гострого респіраторного синдрому (ТГРС, SARS-Severe Acute Respiratory Syndrome) або "атипової пневмонії" з високим рівнем летальних випадків (до 50 %) спонукали світову медичну спільноту активізувати пошук протикоронавірусних препаратів. Відомо, що KB є складними РНК-вірусами, суперкапсидна оболонка яких вкрита своєрідними виступами - шипами розміром 12-20 нм. Вони формують "корону" навколо віріонів і складаються із глікопротеїдів (ГП). Основною функцією ГП є забезпечення механізму проникнення вірусу у клітину. Тобто, як білки прикріплення вони розпізнають клітинні рецептори і здійснюють прикріплення вірусу до чутливих клітин [6]. Крім білків прикріплення на поверхні KB є білки злиття, що здійснюють трансмембранне проникнення вірусу у клітину шляхом об'єднання вірусних оболонок з оболонками клітин. Цей період у репродукції KB виділяють як ранню стадію інфекційного процесу. В останні три десятиліття став інтенсивно розвиватись пошук біологічно активних речовин з противірусними властивостями серед природних сполук, у тому числі й серед біологічноактивних речовин кореня солодки голої. Лікування за допомогою екстрактів кореня солодки було розвинуто ще східною середньовіковою медициною і відображено у роботах Авіцени [8, 9]. Серед наявних противірусних засобів природного походження по відношенню до KB варто відзначити фенольний гідрофільний препарат прополісу (ФГПП). Він випускається промисловістю і має протизапальну, репаративну, антиоксидантну, гепатозахисну та противірусну активність. Відомо також, що ФГПП знижує гемаглютинуючу активність KB [4]. Але недоліком даного засобу є те, що він не може бути використаний у "чистому" вигляді безпосередньо як лікарський препарат. Крім цього застосування ФГПП заборонено у дитячому віці. На сьогоднішній день відомі лікарські препарати російського виробництва (гліцирам, глідеринін, ніглізин) на основі гліциризинової кислоти (ГК), як одного із найцінніших компонентів кореню солодки голої, які були відображені в огляді Г.А. Толстикова зі співавторами та представлені як високоактивні противірусні препарати [1]. Але в інструкціях по їх застосуванню вони рекомендовані як препарати, в основному, протизапальної і протиалергійної дії. Окрім ГК із кореня солодки голої добувають також й екстракти, що містять у своєму складі не менше 14 % ГК. Екстракти кореня солодки мають протизапальну, протиалергійну, репаративну та інші види фармакологічної активності, а враховуючи їх природне походження мінімальні побічні ефекти. На сьогоднішній день в умовах Луганської фармацевтичної фабрики ЛОКПП "Фармація" виробляють сироп солодки кореня із вмістом густого екстракту солодкового кореня 4 %. Борщагівський хіміко-фармацевтичний завод випускає сировину - солодковий корінь у картонних коробках по 50 і 100 г, а також солодки кореня сироп у флаконі скляному по 50 і 100 г, по 1 флакону в пачці з дозувальною ложкою. До складу сиропу входять солодки кореня екстракт сухий (у перерахунку на 8,0 % вміст 18-гліциризинової кислоти), натрію бензоат, калію сорбат, гліцерин, сахароза, гідроксіетилцелюлоза, кислота лимонна. Сироп кореня солодки використовується у складі комплексної терапії інфекційно-запальних захворювань дихальних шляхів, що супроводжуються кашлем та утрудненим відходженням мокротиння (хронічні та гострі бронхіти, бронхопневмонії, бронхоектатична хвороба). 1 UA 95889 U 5 10 15 20 25 30 35 Препаратів з екстрактами солодкового кореня противірусної дії на сьогоднішній день не зареєстровано. Противірусна активність екстракту солодкового кореня по відношенню до KB невідома з джерел інформації. Задача корисної моделі полягає у розширенні переліку противірусних препаратів за рахунок використання відомого засобу за новим призначенням. Поставлена задача вирішується шляхом застосування екстракту солодкового кореня як засобу з противірусною дією по відношенню до KB. З метою доведення противірусної дії екстракту кореня солодки голої по відношенню до KB вивчали його інгібуючу активність за ступенем зниження інфекційного типу вірусу в системах in vitro. У дослідженнях був використаний оригінальний штам KB (Xapків//343/86), який був депонований в колекцію вірусів при Інституті вірусології ім. Д.Й. Івановського (м. Москва). Рівні об'єми KB у робочій дозі (4 гемаглютинуючі одиниці - 4АЕ) і різні розведення екстракту солодкового кореня змішували і після періоду адсорбції суміші протягом 30 хв. при кімнатній температурі визначали ступінь гальмування гемаглютинуючої активності вірусу під впливом екстракту солодкового кореня. Контролями були: KB у робочій дозі без екстракту солодкового кореня і еритроцити мишей. Еритроцити готували на фізіологічному розчині (рН =7,2) і використовували у вигляді 1 % концентрації. Метод визначення був заснований на тому, що клітини інфікували 100 ЦПД вірусу і після його адсорбції інкубували з різними концентраціями екстракту солодкового кореня до часу максимального накопичення вірусу в контролі [2, 11]. Після цього клітини тричі заморожували і розморожували, клітинний детрит осаджували при 2000 об/хв. і в надосаді реєстрували інфекційний титр вірусу. Визначали зменшення врожаю вірусу (у %) по формулі: титр вірусу в контролі  титр вірусу в досліді % зниження врожаю вірусу   100 титр вірусу в контролі Зниження гемаглютинуючої активності KB в 4 і більше разів розцінювали як блокування препаратом гемаглютинуючої активності вірусу. Корисна модель ілюструється наступним прикладом. Приклад. Враховуючи гемаглютинуючі властивості кишкових типів KB, нами було використано для досліджень реакцію гемаглютинації (РГА) еритроцитів мишей та її гальмування (РГГА) у разі інгібіції вірусних гемаглютинінів. Постановку РГА і РГГА здійснювали, згідно з стандартними методами, в лунках планшетів для імунологічних досліджень. В РГА визначали гемаглютинуючий титр KB Харків/343/86, який був попередньо розтитрований після зберігання у низькотемпературному холодильнику при (20)°С. Він склав 1:128 гемаглютинуючих одиниць. Динаміку зміни титру KB після контакту з екстрактом солодкового кореня при 37 °C протягом години відображено у табл. Доза екстракту була вибрана на підставі попередньо проведених досліджень по вивченню його цитотоксичності і склала 0,035 г ГК в 1,0 мл розчину екстракту. 40 Таблиця Результати вивчення дії екстракту солодкового кореня на гемаглютинуючу активність KB Харків/343/86 Інгредієнти РГГА Контроль еритроцитів мишей 45 Титр гемаглютинінів KB Харків/343/86 до і після контакту з екстрактом кореня солодки до дії екстракту після дії екстракту 1:128 1:32 Відсутність гемаглютинації Згідно з результатами табл., екстракт солодкового кореня в вибраній дозі знизив у 4 рази (з 1:128 до 1:32) гемаглютинуючий титр KB шляхом руйнування структурних елементів суперкапсиду. Встановлення цього факту дає перспективу для створення противірусних препаратів для профілактики і комплексного етіотропного лікування КВ-інфекцій (гастроентеритів, ентероколітів тощо). Враховуючи новітні дані щодо протікання респіраторних інфекцій з гастроінтестинальним синдромом, важливим напрямком застосування противірусних препаратів на основі екстрактів 2 UA 95889 U 5 10 15 20 25 30 солодкового кореня повинно стати їх використання при поєднаних респіраторно-кишкових захворюваннях. Таким чином, екстракт солодкового кореня може бути рекомендований до застосування як противірусний засіб по відношенню до КВ-безпосередньо або у складі будь-яких лікарських засобів. Джерела інформації: 1. Глицирризиновая кислота / Г.А. Толстиков, Л.А. Балтина, Э.Э. Шульц и др. // Биоорганическая химия. - 1997. - Т. 23, № 9. - С. 691-709. 2. Доклинические исследования лекарственных средств: метод. рек. / под ред. А.В.Стефанова. - К.: "Авиценна", 2002. - 568 с. 3. Компендиум 2012 - лекарственные препараты / под ред. В.Н. Коваленко. - К.: Морион, 2012. - http://compendium.com.ua. 4. Лікарський засіб, що має антивірусну та антимікробну активність. Тихонов О.І., Ярних Т.Г., Ткачук І.О., Тихонова C.O., Панченко Л.О., Сілаєва Л.Ф., патент на винахід 28428 A (UA), МПК А61K 45/06 (2006.01), А61Р 31/12 (2006.01), заявл. 10.02.1997, опубл. 16.10.2000. 5. Медична вірологія / за ред. Н.К. Казимірко. - Луганськ, 2002. - 357 с. 6. Осидак Л.В. Острые вирусные инфекции с сочетанным поражением респираторного и желудочно-кишечного трактов у детей / Л.В. Осидак, Е.А. Дондурей, В.П. Дриневский - СПб.: "Фармстандарт", 2007. - 89 с. 7. Посібник з хіміотерапії вірусних інфекцій: навч.-метод, посіб. для лікарів / за ред. І.В. Дзюбик. - К., 2004. - 176 с. 8. Рябоконь А.А. Солодка, или лакричный корень (аналитический обор) / А.А. Рябоконь // Провизор. - 2003. - № 2. - С. 2-5. 9. Синтез производных растительных тритерпенов и исследование их противовирусной и иммуномодулирующей активности / А.Г. Покровский, О.А. Плясунова, Т.Н. Ильичева и др. // Химия в интересах устойчивого развития. - 2001. - № 9. - С. 485-491. 10. Фролов А.Ф. Персистенция вирусов (Механизмы и клинико-эпидемиологические аспекты) / А.Ф. Фролов. - Винница: изд-во Винницкого мед. ун-та им. Н.И. Пирогова, 1995. - 233 с. 11. Частная вирусология: рук. / под ред. В.М. Жданова, С.Я. Гайдамович, АМН ССР. - М.: "Медицина", 1982. - Т. 2-520 с. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 35 Застосування екстракту солодкового кореня як противірусного засобу по відношенню до коронавірусів. Комп’ютерна верстка Л. Литвиненко Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 3