Спосіб одержання фармакологічно активної субстанції з протизапальною та антимікробною дією

Реферат: Спосіб одержання фармакологічно активної субстанції з протизапальною та антимікробною дією з трави хамерію вузьколистого (Chamerion angustifolium (L.)) включає етап екстрагування, фільтрації, упарювання та ліофілізації. Процес екстрагування проводять шляхом мацерації рослинної сировини сухої трави хамерію вузьколистого 40 % етанолом упродовж 24 год. при кімнатній температурі та постійному перемішуванні з наступною двократною екстракцією шроту гарячою водою, очищеною на водяній бані впродовж 2 годин. Потім спиртову та водну витяжки об'єднують, упарюють до видалення етанолу та ліофілізують. UA 122804 U (12) UA 122804 U UA 122804 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель стосується фармації, зокрема способів одержання рослинної субстанції з лікарської сировини, а саме з трави хамерію вузьколистого (Chamerion angustifolium (L.)) комплексу з протизапальною та антимікробною активністю, як песпективного джерела для створення лікарських засобів з протизапальною та антимікробною дією. Перед вітчизняною охороною здоров'я стоїть задача пошуку та розробки нових джерел біологічно активних речовин (БАР) рослинного походження. Відомо багато способів одержання БАР із протизапальною та антимікробною активністю з різних рослин. Відомий спосіб одержання біологічно активних речовин з антимікробною, протизапальною та репаративною активністю [1]. За відомим способом ліпофільний та фенольний комплекс із рослинної сировини бруньок тополі китайської одержують методом екстрагування рослинної сировини органічними розчинниками: хлорорганічним розчинником та 50-65 % етанолом. Недоліком відомого способу є недостатній рівень технологічності, а саме одержання шляхом органічного екстрагування із рослинної сировини лише ліпофільного та фенольного комплексу. Отже, рослинна субстанція, приготовлена за відомою технологією, не забезпечує в достатній мірі розширення спектру фармакологічної активності одержаного кінцевого продукту в цілому. Відомий також спосіб одержання комплексу біологічно активних речовин з протизапальною, антимікробною та діуретичною дією з листя груші [2]. За відомим способом комплекс біологічно активних речовин одержують шляхом екстракції листя груші 10 % етанолом протягом 9-11 годин з подальшим випарюванням до 1/18-1/20 попереднього об'єму. Недоліком відомого способу є недостатній рівень технологічності, який не забезпечує повного вилучення і збереження в отриманому водному розчині достатньої кількості біологічно активних речовин. Тому одержаний у результаті відомого технологічного процесу комплекс біологічно активних речовин характеризується невисокою стабільністю, що в свою чергу веде до суттєвого скорочення терміну його придатності. В основу корисної моделі поставлено задачу вдосконалити відомий спосіб, в якому шляхом зміни технологічного прийому, спрямованого на максимальне вилучення з рослинної сировини трави хамерію вузьколистого необхідного комплексу БАР, як основних активно діючих складових, та збереження їх в одержаній субстанції у формі ліофілізованого екстракту, досягають одержання високоефективних лікарських засобів нового покоління з яскраво вираженою протизапальною та антимікробною діями. Джерела науково-популярної літератури характеризують траву хамерію вузьколистого (Chamerion angustifolium (L.) як лікарську рослину, яка у народній медицині використовується як протизапальний, знеболювальний, протисудомний, антитоксичний, фунгіцидний, кровоочисний, депуративний, кровоспинний, ранозагоювальний і протипухлинний засіб [3, 4, 5]. За результатами проведених нами досліджень встановлено, що трава хамерію вузьколистого містить такі біологічно активні речовини: флавоноїди, дубильні речовини, гідроксикоричні кислоти, органічні кислоти, ефірні олії, які проявляють протизапальну активність, а отриманий з неї ліофілізований екстракт є перспективним для використання як протизапальний засіб. При вирішенні технічної задачі було взято до уваги те, що, забезпечення максимального вилучення з рослинної сировини трави хамерію вузьколистого цінних біологічно активних речовин та забезпечення їх подальшого збереження в отриманому екстракті можливе лише при комплексному поєднані у технологічному процесі екстрагування подрібненої сухої трави двох чинників: етанолу та води очищеної. Про переваги застосування як екстрагенту саме 40 % етанолу, а також використання теплового чинника при здійсненні етапів екстрагування шроту водою очищеною свідчить високий вміст екстрактивних речовин. Виходячи з наведеного, спосіб одержання фармакологічно активної субстанції з протизапальною та антимікробною дією із трави хамерію вузьколистого (Chamerion angustifolium (L.)), що включає етап екстрагування, фільтрації та ліофілізації, відповідно до корисної моделі, процес екстрагування проводять шляхом мацерації рослинної сировини сухої трави хамерію вузьколистого 40 % етанолом до утворення "дзеркала" на поверхні упродовж 24 год. при кімнатній температурі та перемішуванні з наступною двократною екстракцією шроту водою, очищеною на водяній бані впродовж 2 годин, після чого спиртовий та водні витяжки об'єднують, упарюють до видалення етанолу та ліофілізують. Спосіб здійснюють наступним чином. Повітряно-суху сировину (траву хамерію вузьколистого) подрібнену до розміру часток, які проходять крізь сито з діаметром отвору № 2800, заливають 40 % етанолом до утворення "дзеркала" на поверхні. Процес екстрагування етанолом проводять шляхом настоювання рослинної сировини сухої трави хамерію вузьколистого 40 % етанолом упродовж 24 год. при кімнатній температурі та безперервному помішуванні. Отриману спиртову витяжку фільтрують крізь складчастий фільтр. Віджимають 1 UA 122804 U 5 10 15 20 25 30 35 шрот і екстрагують його двічі гарячою водою очищеною (t=60 °C). При першому і другому екстрагуванні шроту використовують однакову кількість води очищеної. Перший водний екстракт охолоджують і фільтрують, віджимають шрот і екстракцію повторюють ще раз. Процеси екстрагування здійснюють шляхом використання теплового чинника, а саме на водяній бані впродовж 2 годин. Об'єднують спиртову та водну витяжки упарюють до видалення етанолу та ліофілізують. Одержаний ліофілізований екстракт з трави хамерію вузьколистого - гігроскопічний порошок світло-коричневого кольору, зі специфічним, сильним запахом, гіркий на смак, помірно розчинний у воді. Приклад 1. Повітряно-суху сировину трави хамерію вузьколистого у кількості 15 г подрібнили до розміру часток, які проходили крізь сито з діаметром отвору № 2800, залили 40 % етанолом у кількості 200 мл до утворення "дзеркала" на поверхні. Процес екстрагування етанолом здійснювали шляхом мацерації (настоювання) рослинної сировини сухої трави хамерію вузьколистого 40 % етанолом упродовж 24 год. при кімнатній температурі та безперервному помішуванні. Отриману спиртову витяжку профільтрували крізь складчастий фільтр. Шрот віджали і здійснили процес його екстрагування двічі гарячою водою очищеною. При першому і другому етапах екстрагування шроту використовували однакову кількість води очищеної - по 200 мл. Перший водний екстракт охолодили і профільтрували, віджали шрот і повторили ще раз етап екстрагування шроту гарячою водою очищеною. Процеси екстрагування здійснювали шляхом використання теплового чинника, а саме на водяній бані впродовж 2 годин при температурі 60 °C. Потім об'єднали спиртову і водну витяжки та упарили їх при 40 °C до видалення етанолу. З 550 мл рідкого екстракту одержали 10,25 г сухого екстракту, що становило 1,86 %. Одержаний ліофілізований екстракт з трави хамерію вузьколистого - гігроскопічний порошок світло-коричневого кольору, зі специфічним, сильним запахом, гіркий на смак, помірно розчинний у воді. Приклад 2. З метою визначення протизапальної та антиексудативної властивостей ліофілізованого екстракту трави хамерію вузьколистого використовували модель карагенінового набряку у мишей [7]. Гострий карагеніновий набряк викликали у мишей субплантарним уведенням у праву задню стопу 0,02 мл 1 % розчину карагеніну. Досліджуваний розчин ліофілізованого екстракту хамерію вводили мишам внутрішньошлунково у дозах 10, 20 та 50 мг/кг. Виразність місцевої реакції оцінювали за співвідношенням величини маси стоп дослідної та контрольної лап у кожній групі тварин, розраховували індекс реакції (IP). Дані дослідів наведено у таблиці 1. Таблиця 1 Протизапальна активність ліофілізованого екстракту трави хамерію вузьколистого на моделі караген і нового набряку лапи у мишей Групи тварин Позитивний контроль Ліофілізований екстракт хамерію 40 45 50 n 7 5 5 5 Дози, мг/кг 10 20 50 Індекс реакції 31,1 (24,3; 37,7) 19,0 (15,8; 23,5) 27,5 (20,4; 38,3) 17,1 (5,7; 28,5) ПЗА, % 39 12 45 Ліофілізований екстракт хамерію проявив виражену активність (табл. 1). За профілактичного введення екстракту у дозах 10 та 50 мг/кг набряк лапи у мишей був меншим ніж у групі позитивного контролю на 39 % та 45 % відповідно. Ефективна доза ліофілізованого екстракту з трави хамерію вузьколистого становить 20 мг/кг. Отже, одержана за цією технологією субстанція характеризується яскраво вираженою протизапальною дією, за рахунок комплексу біологічно активних речовин (флавоноїдів, дубильних речовин, гідроксикоричних кислот), як основних активно діючих складових, максимально вилучених з рослинної сировини трави хамерію вузьколистого. Приклад 3. Антимікробну активність розчинів ліофілізованого екстракту трави хамерію вузьколистого, одержаного за заявленим способом, вивчали загальноприйнятими у мікробіологічній практиці 2 UA 122804 U 5 методами серійних розведень та дифузії в агар (метод "колодязів") з використанням ряду музейних тест-штамів мікроорганізмів: Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Candida spp., Escherichia coli. За методом серійних розведень у рідкому живильному середовищі готували 4 пробірки з двократними послідовними розведеннями фітопрепарату. Метод дифузії в агар ґрунтується на здатності активнодіючих речовин дифундувати в агарове середовище, попередньо засіяне культурами мікроорганізмів. Результати досліджень наведено в таблиці 2 і 3. Таблиця 2 Результати дослідження протимікробної активності ліофілізованого екстракту трави хамерію вузьколистого методом серійних розведень 30 % розчин ліофілізованого екстракту трави хамерію вузьколистого Нативний Штам мікроорганізмів 1:2 1:4 1:8 Контроль розчин Staphylococcus aureus ++ – Bacillus cereus ++ Candida spp. + Escherichia coli 50 % розчин ліофілізованого екстракту трави хамерію вузьколистого Нативний Штам мікроорганізмів 1:2 1:4 1:8 Контроль розчин Staphylococcus aureus ++ – Bacillus cereus ++ Candida spp. + Escherichia coli Примітка: наявність бактерицидних властивостей - «++», наявність бактеріостатичних властивостей - «+», відсутність бактерицидних та бактеріостатичних властивостей - «-» 10 Таблиця 3 Результати дослідження протимікробної активності ліофілізованого екстракту трави хамерію вузьколистого методом дифузії в агар Штам мікроорганізмів Staphylococcus aureus Bacillus cereus Candida spp. Escherichia coli 15 20 25 Діаметр зон затримки росту, мм 30 % розчин екстракту 50 % розчин екстракту 17,5±1,5 20±2,3 17,0±1,2 25±2,2 ≤10±1,2 15±1,5