Спосіб одержання біологічно активного комплексу ліпідів для застосування в косметичних кремах і лікувальних мазях

Способ получения биологически активного комплекса липидов для примене ния в косметических кремах и лечебных мазях, включающий измельчение вилочковой железы крупного рогатого скота, гомогенизацию ее в водном растворе, центрифугирование с выделением флотирующей фракции и экстракцию липидов органическим растворителем, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что жировую фракцию, полученную на стадии центрифугирования, экстрагируют в одну стадию гексаном в соотношении 1:5-7 и из гексанового раствора после концентрации и фильтрации получают липидный комплекс. с > Изобретение относится к фармацевтической и парфюмерно-косметической промышленности. Комплекс липидов, полученный заявляемым способом, может быть использован как компонент, способствующий регенерации клеток эпителия. Известны способы получения липидов и их комплексов путем экстракции органическими растворителями из различных источников сырья. Наиболее близким к заявляемому по технической сущности является способ получения комплекса липидов "Тимихол" из животного сырья. Этот способ предусматривает получение комплекса липидов из вилочковой железы КРС с применением двух органических растворителей. Сырье после измельчения гомогенизируют s физиологическом растворе, цент рифугируют, флотирующую фракцию супернатанта экстрагируют изопропанолом, дополнительно центрифугируют и осадок, содержащий целевой продукт, растворяют в гексане. Экстракцию супернатанта изопропанолом и растворение осадка в гексане проводят в соотношении 1:5-10. Полученный по способу-прототипу комплекс содержит, мас.%: Глицериды 30,0-45,0 Глицерофосфаты (фосфолипиды) 40,0-70,0 Холестерин (в свободном и этерифицированном состоянии) 1,5-4,0 Неомыляемые вещества 3,0-5,0 Жирные насыщенные кислоты в массовом отношении к ненасыщенным составляют 2:1. KJ О 14932 К недостаткам прототипа следует отнести получение липидного комплекса в две стадии. Кроме того, полученный комплекс имеет жидкую консистенцию, что обусловлено большим содержанием фос- 5 фолипидов (до 70%), чем глицеридов (30%). Такая консистенция менее приемлема для использования в качестве жировой основы е косметических кремах и лечебных мазях. 10 В основу изобретения поставлена задача разработать способ получения биологически активного липидного комплекса из вилочковой железы крупного рогатого скота (КРС), позволяющий путем про- 15 ведения экстракции липидов из флотирующей фракции гексаном в одну стадию получить фракцию с большим содержанием жира, упростить технологию и расширить спектр биологического действия 20 получаемого яипидного комплекса. Для этого в способе получения биологически активного комплекса липидов, включающем измельчение вилочковой железы КРС, гомогенизацию ее в водном 25 растворе, центрифугирование с выделением флотирующей фракции и экстракцию липидов органическим растворителем, жировую фракцию, полученную на стадии центрифугирования, экстрагируют 30 в одну стадию гексаном в соотношении 1:5-7 и из гексанового раствора липидов После концентрации и фильтрации получают липидный комплекс. Полученный комплекс липидов содер- 35 жит следующие компоненты в мас.%: Глицериды 40-50 Глицерофосфатиды (фосфолипиды) 40-50 Жирные кислоты 5-Ю 40 Неомыляемые вещества 2-9 Холестерин 1-4 Массовое соотношение насыщенных и ненасыщенных жирных кислот 2,5:1,0. 45 В табл. 1 приведен состав фосфолипидов, входящих в лилидные комплексы, полученные по заявляемому способу и по способу-прототипу. Состав комплекса, полученный заяв- 50 ляемым способом, обогащен фосфатидилхолином, за счет чего усиливаются его эмульгирующие свойства и обеспечивается нужная для кремов и мазей консистенция. 55 Заявляемый способ исключает экстракцию липидов изопропанолом, что упрощает процесс, а проведение экстракции гексаном позволяет обогатить комплекс глицеридами и фосфолипидами, не насыщенными жирными кислотами, что способствует улучшению эмульгирующих свойств комплекса и расширяет спектр его биологического действия. Синергетическое действие триглицеридов, фосфолипидов и жирных кислот обеспечивает противовоспалительное, смягчающее и регенерирующее действие полученного комплекса, что подтверждается испытаниями его биологической активности. Способ осуществляют следующим образом. П р и м е р 1. 10 кг вилочковой железы измельчают на мясорубке, гомогенизируют в 20 л физиологического раствора, центрифугируют 30 мин при 3000 об/мин и температуре 4°С. Полученную флотирующую фракцию липидов (верхний слой в центрифужном стакане) собирают для дальнейшей очистки. Осадок может быть использован для выделения препарата ДНК, а супернатант - для производства препарата типа "Вилозен". Липидную фракцию повторно центрифугируют 15 мин при 3000 об/мин для максимального удаления влаги. После центрифугирования 3,5 кг липидов загружают в стеклянный реактор и заливают гексаном в соотношении 1:5, т.е. 17,5 л гексана. Экстракцию липидов проводят при 40°С и перемешивании в течение 2 ч. После отделения гексанового раствора липидов его концентрируют вакуумной отгонкой, фильтруют и сушат до получения целевого продукта. П р и м е р ы 2 и 3, Операции осуществляются в той же последовательности, изменяется только соотношение липидной фракции и гексана и температура экстракции. В табл. 2 приведены условия осуществления способа (примеры 1, 2, 3), а в табл. 3 - составы полученных липидных комплексов. В табл. 4 приводятся данные по заживлению нарушений эпителия кожи при бритье после обработки комплексом, полученным по заявляемому способу и по способу- прототипу. Противовоспалительное действие комплекса, полученного заявляемым способом, иллюстрируется табл. 5. На объем лапки животного наносится 0,1 мл 1%-ного раствора формалина, который уже через 1 ч вызывает увеличение объема лапки. Затем на лапку наносят липидный комплекс, и через определенное время объем лапки восстанавливается до первоначального. 14932 Как видно из табл. 5, противовоспалительное действие комплекса проявляется уже через 1 ч у 3 опытных животных из 5, а через 3 ч восстанавливается первоначальный объем лапки, т.е. полностью устраняется воспалительная реакция кожи, вызванная действием формалина. Изучение влияния комплекса, полученного заявляемым способом, и комплекса, полученного по способу-прототипу, на процессы репаративной регенерации проводили на 21 белой крысе обоего пола массой 200-230 г. У крыс на спине деепилировали участок кожи. Спустя 3 дня под эфирным наркозом иссекали участок кожи с подкожной клетчаткой размером 2 х 2 см (400 мм2). Крысы были распределены на 3 группы по 7 в каждой. Одна группа служила контролем, вторая и третья получали наружно соответственно комплексы, полученные заявляемым способом и способом-прототипом, путем нанесения на раневую поверхность 1 раз в день. На 10, 15, 20 день лечения проводили измерения площадей ран. Был определен средний срок 5 10 15 20 25 6 полного закрытия раны и процент ускорения заживления по отношению к контрольной группе животных, не получавших лечения. Результаты ранозаживляющей активности липидных комплексов приведены в табл. 6. Как видно из табл. 6, комплекс, полученный по заявляемому способу, ускоряет заживление плоской раны кожи крыс на 30% в сравнении с контролем. Таким образом* этот комплекс стимулирует регенерацию не только эпителиальных клеток кожи, но и клеток мягких тканей. В настоящее время вилочковая железа КРС используется нерентабельно, исключительно как сырье для белковых иммунокоррегирующих препаратов типа "Вилозен* и для выделения суммарной ДНК. В процессе производства этих препаратов липидный компонент анализируется. Заявляемый способ позволяет наряду с получением указанных препаратов использовать флотирующую фракцию для получения биологически активного липидного комплекса. Фосфолипиды В комплексе, полученном по заявляемому способу Фос фати ди лхоли н Фосфати дилэтаноламин Офингомиелин Фосфати дилинозитол 60 30 7 3 Т а б л и ц а 1 В комплексе, полученном по способу-прототипу 45 45 5 5 * • Т а б л и ц а Пример 1 Условия Пример 3 • Липидную фракцию смешивают с гексаном в соотношении Время экстракции, ч Температура, °С Выход целевого продукта по отношению к весу липидной фракции 1:5 2 40 1:7 02 50 1:5 2 69 25 Состав Глицериды Глицерофосфатиды (фосфолипиды) вободные жирные кислоты s Неомыляемые вещества Холестерин Пример 2 2 35 30 Пример 1 С 40 42 8 6 4 Т а блица 3 Пример 3 Пример 2 40 45 8 5 2 50 40 5 4 1 14932 Таблица Количество полных циклов обработки нарушений эпителия кожи (цикл обработки после бритья 2-3 с, выдержка 15-20 с Комплексы липидов вилочковой железы 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Эффект действия 10 Процесс заживления небольших нарушений эпителия кожи после 6 циклов По способупрототипу По заявляемому способу Процесс заживления небольших нарушений эпителия кожи после 4 циклов * * * * Таблица Исходный объем лапки Объем лапки через период времени после нанесения 0,1 мл 1%-ного формалина 1ч 3,0 3,2 3,1 3,3 3,3 3,0 3,1 3,2 3,0 3.2 4 2ч Зч 3,2 3,5 3,3 3,4 3,4 3,2 3,3 3,4 3,2 3,5 3.3 3,6 3,3 3,5 3,4 3.4 3.7 3,5 3,6 3,7 5 Объем лапки через период времени после нанесения комплекса, полученного заявляемым способом 1ч 2ч Зч 3.1 3,2 3.4 3,2 3,4 3,1 3,1 3,2 3.1 3,3 3.0 3,1 3.2 3,0 3,2 Таблица 10-й Комплексы липидов Контроль Комплекс, полученный заявляемым способом Комплекс, полученный по способу-прототипу 15-й 20-й Средний срок полного закрытия раны, сут. 166±9 б5±8 36±7 25,0±0,5 84±4 42±4 Закрытие раны 17,5±0,5 30,0 55±4 36І5 Закрытие раны 17,6±0,5 29,6 Площадь раны, ым2, по дням наблюдения Ускорение заживления, % к контролю 6 14932 Упорядник Техред М. Келемеш Коректор Л.Пчолинська Замовлення 522 Тираж Підписне Державне патентне відомство України, 254655, ГСП, Київ-53, Львівська пл., 8 Відкрите акціонерне товариство "Патент", м. Ужгород, вул. Гагаріна, 101