Спосіб одержання з морських організмів комплексного лікувального засобу, репаруючого мембрани функційно різних клітин людини

Винахід відноситься до фармацевтичної і харчової промисловості та може бути використаний в профілактичних цілях і як засіб для лікування порушень функції печінки, легень різної етнології, дихальної недостатності при тяжких інфекційне-токсичних станах, для зменшення концентрації холестеролу в крові при серцево-судинних захворюваннях, для лікування чоловічої неплідності та гормональних відхилень у системі гіпофіз-гонади. Крім того, засіб може бути використаний для нормалізації метаболічних порушень, активації захисно-детоксикуючих, регуляторних функцій організму та неспецифічних імуно-захисних механізмів, а також в якості природнього антиоксиданту, мембраностабілізатора та імуномодулятора. Встановлено, що за патологічних станів розмаїтої етнології в мембранах функційно різних клітин відбуваються зміни у складі та рівні певних ліпідів, що свідчить про їх важливу роль у забезпеченні нормального функціювання організму. При цьому виявлено можливість корекції цих змін за допомогою деяких екзогенних ліпідів. Існують способи одержання з морських організмів косметичних препаратів: Мельник Е.А., Ющенко В.А., Даценко З.М. и др. Моющее средство для тела.- Авт. свид. N 1528494, А61К 7/06, 1989, БИ N 46; комплексу фосфоліпідів з властивостями сурфактанту: Даценко З.М., Белебезьев Т.И., Дужак В.Г. и др. Способ получения вещества, обладающего свойствами сурфактанта. Авт. свид. N 1392685, А61К 35/56, 1988, неоприлюднене. За прототип винаходу прийнято "Спосіб обробки морських організмів" (п. UA №16988). Спосіб обробки морських організмів включає подрібнення сировини, екстракцію етанолом, перерозчинення в гексані, відстоювання на холоді до утворення осаду і супернатанту, з останнього випаровують гексан, перерозчинюють в етанолі, очищують активованим вугіллям, стабілізують вітаміном Е і одержують комплекс фосфоліпідів; осад переосаджують сумішшю етанола з ефіром у співвідношенні (13):1, розділяють на тверду та рідку фазу, після чого останню випаровують, перерозчиняють в етанолі, очищують активованим вугіллям та ультрафільтрацією до одержання речовини з тестостероногенними властивостями. Цей спосіб включає три етапи виділення двох окремих продуктів: фосфоліпідного комплексу та речовини із тестостероногенними властивостями. Практичне значення має тільки одержання комплексу поверхнево-активних речовин з виходом до 6%. Одержання гормоноподібної речовини з тестостероногенними властивостями не має практичного значення через низький її вихід - до 0,6%. У зв'язку з цим прототип має вузький спектр властивостей, що обмежує лікування різних захворювань. Спосіб обробки морських організмів трудомісткий. Крім того, він потребує застосування таких небажаних хімічних реактивів як гексан та ефір, що може завадити впровадженню способу в промислове виробництво. В основу винаходу поставлено задачу розробити спосіб одержання з морських організмів засобу, репаруючого мембрани функційно різних клітин людини. Новий спосіб одержання біологічно активних речовин (БАР) з морських організмів дозволяє шляхом застосування нової схеми обробки морських організмів забезпечити одержання засобу з необхідним спектром властивостей, та збільшити вихід специфічних речовин, призначених для лікування багатьох захворювань до 10 - 12%. Поставлена задача вирішується в способі одержання з морських організмів - комплексного лікувального засобу, репаруючого мембрани функційно різних клітин людини, що включає подрібнення сировини, екстракцію етанолом, відстоювання на холоді до поділу на тверду та рідку фазу, очищення активованим вугіллям та стабілізацію вітаміном Е, в якому згідно з винаходом, екстракцію ведуть етанолом, підкисленим оцтовою кислотою, а рідку фазу декантують від осаду і після очищення та стабілізації концентрують випарюванням у вакуумі. Етанол для екстракції підкислюють оцтовою кислотою до рН не нижче 4,0. Екстракцію ведуть протягом 3 - 5год. Новий спосіб дозволяє виділити високоактивну субстанцію, яка може бути використана як лікувальний засіб для терапії різних захворювань, пов'язаних із порушенням ліпідного статусу мембран функційно різних тканин людини, а також як харчова домішка. Перевага нового способу порівняно з прототипом є: скорочення технологічних операцій; одержання більшого виходу необхідних БАР завдяки екстрагуванню сировини етанолом, підкисленим оцтовою кислотою; усунення небажаних білків завдяки очищенню екстракту відстоюванням на холоді. Суть винаходу ілюструються конкретними прикладами його здійснення 1 - 5 та результатами дослідження одержаного кінцевого продукту. Приклад 1. 100г відібраних частин молюсків (кальмар) подрібнюють на м'ясорубці, заливають 10 об'ємами етилового спирту, підкисленого оцтовою кислотою до рН4.0, перемішують 5год. в реакторі з мішалкою. Одержаний екстракт фільтрують від залишків сировини та відстоюють на холоді до випадіння білкового осадку. Освітлений розчин декантують і після очищення активованим вугіллям та стабілізації вітаміном Е, концентрують випарюванням у вакуумі. Одержують кінцевий продукт субстанції -12г. Приклад 2. 100г молюсків (рапан) подрібнюють на м'ясорубці, заливають 10 об'ємами етилового спирту, підкисленого оцтовою кислотою до рН4.5, перемішують 5год. в реакторі з мішалкою. Одержаний екстракт фільтрують від залишків сировини та відстоюють на холоді до випадіння осадку. Освітлений розчин декантують, очищують активованим вугіллям, та після фільтрації додають вітамін Е до кінцевої концентрації 0.03%, концентрують випарюванням у вакуумі. Одержують кінцевий продукт субстанції - 10г. Приклад 3. 100г відібраних частин молюсків подрібнюють на м'ясорубці, заливають 10 об'ємами етилового спирту, перемішують Згод. в реакторі з мішалкою. Одержаний екстракт фільтрують від залишків сировини та відстоюють на холоді до випадіння осадку. Освітлений розчин декантують, очищують активованим вугіллям, та після фільтрації додають вітамін Е до кінцевої концентрації 0.03%, концентрують випарюванням у вакуумі. Одержують кінцевий продукт субстанції - 10г. Приклад 4. 100г відібраних частин молюсків (кальмар) подрібнюють на м'ясорубці, заливають 10 об'ємами етилового спирту, перемішують 3год. в реакторі з мішалкою. Одержаний екстракт фільтрують від залишків сировини та відстоюють на холоді до випадіння осадку. Освітлений розчин декантують і після фільтрації додають вітамін Е, концентрують випарюванням у вакуумі. Одержують кінцевий продукт субстанції -8г. Приклад 5. 100г відібраних частин морських риб (хек, тріска, скумбрія, оселедці, лосось, тунець) подрібнюють на м'ясорубці, заливають 10 об'ємами етилового спирту, перемішують 5год. в реакторі з мішалкою. Одержаний екстракт фільтрують від залишків сировини та відстоюють на холоді до випадіння осадку. Освітлений розчин декантують, очищують активованим вугіллям, та після фільтрації додають вітамін Е до кінцевої концентрації 0.03%, концентрують випарюванням у вакуумі. Одержують кінцевий продукт субстанції – 7,6г. Результати дослідження хімічного складу засобу, одержаного запропонованим способом, наведені у табл.1. Примітка: ФХ - фосфатидилхолін, ФЕА - фосфатидилетанлоамін, CM - сфінгоміелін, ФС фосфатидилмерин, ЛФХ -лізо-фосфатидилхолін, ДФГ - дифосфатидилгліцерол. Вивчення мембранопротекторної дії засобу, тобто його вплив на репарацію пошкоджених мембран клітин при розвитку патологічного стану проводили після введення щурам токсичної речовини тетрахлорметану протягом доби і після лікування тварин запропонованим засобом з морських організмів. Критерієм репарації мембран є відновлення ліпідного складу мембран та зниження швидкості утворення вільних радикалів. Примітка: ФХ - фосфатидидхолін, ФЕА - фосфатидилетанлоамін, CM - сфінгоміелін, ДФГ дифосфатидилгліцерол, ЛФЕА -лізо-фосфатидилетаноламін, ЛФХ - лізо-фоофатидилхолін. Як випливає з табл.2, після введення токсичної речовини підвищується рівень лізо-форм фосфоліпідів, спостерігається зменшення загального рівня фосфоліпідів та збільшення кількості холестеролу. При цьому індекс холестерол/фосфоліпіди збільшується в 3 рази порівняно з контролем. Введення запропонованого нового лікувального засобу з морських організмів спричиняє відновлення вмісту як сумарних фосфоліпідів мембрани, так і основного компоненту фосфоліпідів - фосзфатидилхоліну. Тимчасом спостерігається зменшення рівнів цитотоксичних ЛФХ, ЛФЕА та вільних ліпідних радикалів. Мемраностабілізуючу дію вказаний засіб може проявляти завдяки наявності в його складі фосфоліпідів з поліненасиченими жирними кислотами та ейкозаноідами, оскільки відомо, що есенційні фосфоліпіди можуть усувати ушкодження ліпідного бішару мембрани. Деякий внесок у мембраностабілізуючу дію препарату вносить природній вітамін Е завдяки утворенню комплексів з неетерифікованими жирними кислотами або обмеженням молекулярної мобільності компонентів. Таким чином, новий засіб з морських організмів як мембранопротектор може здійснювати метаболічний контроль насиченості ліпідів мембрани, що є дуже важливим у регуляції мембранних функцій. Дослідження біологічних властивостей одержаного за новим способом засобу проводили за тестом на визначення тестостеронової активності та показників спермограми осіб реподуктивного віку. Визначення тестостероновоі активності провадили радіоімунологічним методом за допомогою тест-наборів kit на щурах самцях у віці 2 – 2,5роки (вагою 500 - 550г), яких поділили на 2 групи: 1 група - контрольна, 2 група дослідна. Одержаний засіб вводили внутрішньом'язево по 0,1мг на 100г ваги протягом 10 днів. Вимірювали рівень тестостерону крові на початку досліду та після 10-ти добового курсу. Результати наведено в табл.3. Примітка: позначкою * помічено вірогідні зміни порівняно з контролем. Як випливає з табл.З, введення старим тваринам одержаного засобу дає значний ефект, збільшуючи концентрацію тестостерону в крові. Дослідження показників еякуляту провадили на кількох неплідних добровольцях-чоловіках репродуктивного віку, яким призначили одержаний засіб перорально протягом 3-х тижнів. Результати наведено в табл.4. Як показано на табл.4, за неплідності значно знижується кількість та рухомість сперматозоїдів, а також збільшується кількість патологійних форм. Після дії досліджуваного засобу кількість сперматозоїдів в еякуляті значно збільшується. Подібно збільшується і кількість рухомих сперматозоїдів, навіть в порівнянні з нормою. Досліджуваний засіб впливає на секрецію статевих гормонів, покращує морфо-функційні характеристики еякуляту, корегуючи зміни мембранних ліпідів сперматозоїдів, що обумовлює його ефективність при усуненні порушень статевої функції та сприяє реалізації здатності до запліднення. Таким чином, запропонований винахід вирішує задачу одержання з морських організмів засобу, до якого входять фосфоліпіди, вільні жирні кислоти та речовини з гормоноподібною дією у співвідношенні, необхідному для проявлення мембранопротекторної дії та збільшує вихід специфічної речовини до 10 12%. Одержаний запропонованим способом засіб репарує склад мембранних ліпідів функціонально різних клітин і тим самим сприяє лікуванню різних патологічних станів. Здатність вказаного засобу коригувати та репарувати змінений ліпідний склад мембранних структур клітин функційно різного походження: сперми, печінки, легень, міокарду, мозку, нирок тощо, а також знижувати рівень холестеролу, лежить в основі лікувального ефекту цього засобу за розмаїтих патологій вказаних органів.