Моноетаноламонієва сіль 6-нітро-3н-хіназолон-4-іл-3-оцтової кислоти, що має антиоксидантну та протиішемічну активність

"Моноэтаноламмониевая соль 6-нитро-ЗН-хиназолон-4-ил-3-уксусной кислоты, проявляющая антиоксидантную и противоишемическую активность". Изобретение относится к новым биологически активным соединениям. Известно биологически активное соединение но авторскому свидетельству СССР №1287515 от 04.01.85г. "Моноэтаноламмониевая соль (3,4-дигидро-4-оксохиназолил-3)уксусной кислоты, формулы: ускоряющая процессы регенерации роговицы и проявляющее антиоксидантную активность. Данное биологическое соединение принимаем за прототип. Недостатком этого соединения является то, что оно не обладает противоишемическим действием. В основу изобретения поставлена задача создания нового биологически активного вещества в ряду 4(ЗН)хиназолона, обладающего антиоксидантным и противоишемическим действием на ткани головного мозга. Решение этой задачи обеспечивает Моноэтаноламмониевая соль 6-нитро-ЗН-хиназолон-4-ил-Зуксусной кислоты, формулы: В отличие от прототипа, новое соединение содержит в положении 6 хиназолонового ядра нитро-группу. Это отличие приводит к появлению специфического действия на мозговую ткань, что выгодно отличает новое соединение от прототипа, В отличий от других широкоизвестных биологических аналогов (α-токоферола ацетат, дибунол, пирацетам) соединение по изобретению оказывает антиоксидантное действие на всех этапах развития ишемии, повышая активность ферментов антиоксидантной защиты, уровень эндогенного α-токоферола и снижая уровень накопления продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) с одновременным уменьшением расхода макроэргических фосфатов и углеводов. Получают заявленное соединение взаимодействием 6-нитро-ЗН-хиназолон-4-ил-З-уксусной кислоты с моноэтаноламином в среде этанола. Пример: 2,49г (0,01моль) 6-нитро-3,Н-дигидрохиназолон-4-ил-3-уксусной кислоты растворяют в 20мл этанола при нагревании, к полученному раствору прибавляют 0,67г (0 > 0,011моль) свежеперегнанного моноэтаноламина и реакционную смесь кипятят 10 - 15минут, последние 3 минуты с активированным углем. Уголь отфильтровывают, раствор охлаждают, образовавшийся осадок отфильтровывают и сушат. Получают целевой продукт с выходом 58%. Желтое кристаллическое вещество с Тпл. = 179 - 181°С (из спирта), растворимо в воде, спирте, диоксане, ДМФА. Найдено, %: С 46,9 Н 4,9 N 17,7. Вычислено, %: С 46,5 Н 4,6 N 18,1 C12H14N4O6. В ИК-спектрах наблюдаются характерные полосы поглощения карбонильных групп в области 1720 1600см-1, а также валентные колебания нитро-группы в области 1500см-1 (ассим.) и 1450см-1 (сим.). Индивидуальность подтверждена методом тонкослойной хроматографии на пластинках "Силуфол" в системах растворителей: бензол-уксусная кислота-вода (1:2), бутанол-уксусная кислота-вода (4 : 1 : 5). Значение Rf · 100 равно — 74, 78 соответственно. Острая токсичность соединения при внутрибрюшинном введении мышам равна 890 мг/кг. Антиоксидантную и противоишемическую активности синтезированного соединения исследовали на модели острого нарушения мозгового кровообращения на белых крысах-самцах линии Вистар, массой 180 - 220г. Исследуемые животные были разбиты на 7 экспериментальных групп, по 6 животных в каждой группе, Одностороннюю перевязку общей сонной артерии проводили под этаминал-натриевым наркозом (этаминал-натрий вводился в дозе 40мг/кг), путем выделения сосуда и наложения на него лигатуры. Исследуемое вещество вводили в дозе 1/100 ЛД50 дибунол и пирацетам в дозах 50мг/кг и 100мг/кг соответственно внутрибрюшинно, а остокоферол в дозе 50мг/кг подкожно, 1 раз в сутки в течение 4х дней параллельно формированию ишемии. Через 2 часа после последнего введения исследуемого вещества, животные выводились из эксперимента путем декапитации, В тканях мозга определяли содержание конечных и начальных продуктов ПОЛ, активность ферментов антиоксидантной защиты, уровень эндогенного атокоферола, интенсивность углеводного и энергетического обмена. Использовались следующие методы исследования: определение уровня диеновых конъюгатов (ДК) методом прямой спектрофотометрии гептановой вытяжки (В.С.Коган и др. Проблема анализа эндогенных продуктов перекисного окисления липидов. — М.: Медицина. 1986); определение малонового диальдегида (МДА) по тесту с тиобарбитуровой кислотой (Л.И.Андреева и др. Модификация метода определения перекисей липидов в тесте с тиобарбитуровой кислотой // Лаб.дело. — 1988, — №11. — С. 41 - 43); определение супероксид-дисмутазы (СОД) (Чеварин С. и др. Роль супероксидцисмутазы в окислительных процессах клетки и метод ее определения //Лаб. дело. — 1985, — №11. — С. 678 - 681); определение активности глутатионпе-роксидазы (ГПР) (Гаврилова А. Р. и др. Определение активности глутатионпероксидазы эритроцитов при насыщающих концентрациях субстрата // Лаб. дело. — 1986. — №12. — С. 721 - 723); определение ката-лазы (Королюк М«А. и др. Метод определения активности каталазы //Лаб.дело, — 1988. — №1. — С, 16-19); определение содержания субстратов углеводного обмена (Методы биохимических исследований /Под ред. Прохоровой М,И. — Л.: Из-во ЛГУ, 1982, — 278 с,); определение содержания макроэргических фосфатов хроматографически (Захарова Н.Б.? Рубил В. И. Тонкослойная хроматография нуклеотидов на пластинках "Силуфол" //Лаб.дело. — 1980. — №12. — С, 735-738.); определение α-токоферола спектрофотометрически (Способ определения а-токоферола в биологическом материале /И.Ф.Белени-чев и др. //Тез. докл. IV научного съезда специалистов поклинической лаб,диагностике респуб. Беларусь, Гродно. — 1992. — С. 132,). Результаты экспериментов, приведенные в таблицах 1, 2, 3, 4 показывают, что в условиях односторонней перевязки общей сонной артерии происходит угнетение активности ферментов антиоксидантной защиты в тканях головного мозга, накопление в ней содержания продуктов ПОЛ, нарушение анаэробных и аэробных путей образования энергии, снижение содержания адениловых нуклеотидов* т.е. наблюдалось уменьшение утилизации кислорода энергопродуцирующими системами и ускорение процессов свободно-радикального окисления (СРО). Введение соединения на фоне ишемии головного мозга приводило к активации антиоксидантных систем защиты, что проявилось в увеличении активностей СОД в 2,9 раза, каталазы в 1,9 раза, ГПР в 0,68 раза, что выгодно отличает изучаемое соединение от антиорсси-дантов "прямого" действия — дибунола и α-токоферола ацетата (таблица 1). Под влиянием соединения существенно снижалось содержание продуктов ПОЛ на 45 - 54% (таблица 2). Как показывают результаты исследований соединение активирует как анаэробные, так и аэробные пути образования энергии (повышая уровень пирувата и малата на 58,3, 43,7%% соответственно), при этом наблюдалась тенденция к повышению уровня адениловых нуклеотидов (АТФ и АМФ на 42,7%, 54,5% соответственно), Ингибируя процессы ПОЛ и нормализуя отдельные звенья углеводного обмена, синтезированное соединение оказывает выраженный антиоксидантный и протекторный эффекты на клетки мозга, превышая действие таких антиоксидантов, как α-токоферол ацетат и дибунол, приближаясь по силе действия к пирацетаму — противоишемическому препарату.