Жовчогінний та антилітогенний засіб з нативної жовчі свійської птиці та спосіб його одержання

УКРАЇНА (19) (11) 2 b u S 7 O (13) (51) 6А61К35/413 МІНІСТЕРСТВО ОСВІТИ І НАУКИ УКРАЇНИ ДЕРЖАВНИЙ ДЕПАРТАМЕНТ ІНТЕЛЕКТУАЛЬНОЇ ВЛАСНОСТІ ДО ПАТЕНТУ НА ВИНАХІД (54) ЖОВЧОГІННИЙ ТА АНТИЛІТОГЕННИЙ ЗАСІБ З НАТИВНОЇ ЖОВЧІ СВІЙСЬКИХ ПТАХІВ ТА СПОСІБ ЙОГО ОДЕРЖАННЯ (21)97073818 (22)17.07.1997 (24)16.10.2000 (33) UA (41)29.12.1999, Бюл № 8 (46) 16.10.2000, Бюл. № 5, 2000 р (72)Філіпов Юрій Олександрович, Шелекетіна Інна Іванівна, Аверянова Людмила Павлівна, Діденко Володимир Ізотович (73) Товариство з обмеженою відповідальністю Медичний комплекс "Гастроентерологія" (56) 1. Домашнева Н. А., Рафес Ю. И. Экспериментальное исследование препарата из птичьей желчи // Тез. докл. V съезда фармакологов УССР. Запорожье, 1985.-С. 131. 2. RU, № 2034849, С 1 тивної жовчі свійської птиці, який містить жовчні кислоти, ліпіди та білкові речовини, який відрізняється тим, що він містить жовчні кислоти в основному у вигляді таурокон'югатів, при такому співвідношенні компонентів, мг/г сухої речовини: кон'юговані жовчні кислоти 450-800 причому з них таурохолева кислота 20-40% таурохенодезоксихолева кислота 60-80% вільні жовчні кислоти сліди ліпіди 152,0-221,0 білкові речовини 74,0-94,0 2. Засіб за п. 1, який відрізняється тим, що представлений у вигляді капсул/.. 3. Спосіб одержання жовчогінного та антилітогенного засобу з нативної жовчі свійської птиці, який включає стерилізацію та висушування жовчі, відрізняється тим, що для отримання засобу за п. 1 жовчні міхури подрібнюють разом з їх вмістом, жовч відділяють, розводять перед стерилізацією, а потім ліофільне висушують 4. Спосіб за п. З, який відрізняється тим, що розведення жовчі здійснюють Ізотонічним розчином хлориду натрію або дистильованою водою у співвідношенні 2:1 5. Спосіб за п. З, який відрізняється тим, що відділення жовчі від тканини здійснюють фільтрацією через марлю і центрифугуванням протягом 20 хв. при 3000 об/хв. Винахід належить до медицини, а саме, до способів одержання лікарських засобів і може бути використаний для одержання препаратів, які мають жовчогінну та антилітогенну активність і використовуються для лікування захворювань печінки і жовчовивідних шляхів. Жовч - це рідкий секрет, що виділяється печінковими клітинами (гепатоцитами) Основними компонентами ЖОВЧІ ЛЮДИНИ Б ЖОВЧНІ КИСЛОТИ У ВИГЛЯДІ глікокон'югатів і таурокон'югатів, фосфоліпіди, холестерин, білірубін, білки і низка фізіологічно активних речовин (гормони та ін.). Вона має важливе фізіологічне значення в процесах травлення І всмоктування харчових продуктів, у першу чергу, жирів і інших речовин ліпідної природи. Жовч забезпечує нормальне функціонування кишечнику, підшлункової залози, грає важливу роль в обміні речовин І інших фізіологічних процесах. її недостатність внаслідок порушення жовчоутворення або жовчовиділення призводить до розвитку тяжких патологічних станів, а порушення співвідношення ЇЇ компонентів - до виникнення каменів у жовчному міхурі і розвитку жовчнокам'яної хвороби, іноді з тяжкими наслідками і ускладненнями. Для усунення порушень, що виникають внаслідок недостатньої холесекрецГї, у медичній практиці застосовують жовчопнні засоби алохол, дехолін, кукурудзяні рильця, магнію сульфат, сорбіт, ксиліт, холагол, холосас та ін (див. Дашковський М. Д. - Лікарські засоби - Вид. 13. - Харків, 1997.- С. 508-517). У тих випадках, коли недостатність жовчі обумовлені змінами в гепатоцитах і порушенням утворення і виділення жовчі, використовують препарати жовчі, одержані з жовчі тварин, які містять специфічний комплекс біологічно активних речовин (жовчні кислоти, жовчні пігменти, фосфоліпіди та інші речовини, притаманні жовчі). Препарати жовчі, які приймають у середину, відшкодовують певною мірою недостачу активних її компонентів. Однак відомі засоби не завжди забезпечують високий терапевтичний ефект, тому дослідниками проводиться постійний пошук більш ефективних засобів для нормалізації холесекреції, більш до (67) 1. ЖОВЧОГІННИЙ та антилітогенний засіб з на м О о о оо зг 28093 сконалих способів їх одержання При цьому перевага віддається засобам які одержують з жовчі тварин Способи одержання лікарських засобів з жовчі тварин ВІДОМІ Відомий ЖОВЧОГІННИЙ засіб (а п № 434943, СРСР, оприлюднене 5 07 1974 р ) , який отримують шляхом люфілізованого сушіння жовчі великої рогатої худоби Його випускають у вигляді таблеток по 0,2 г сухої жовчі у одній таблетці Отриманий цим способом засіб (любіл) містить жовчні кислоти, в основному, у вигляді глікокон'югатів і значно менше (25-30%) таурокон'югатів У зв'язку з низьким вмістом таурокон'югатів ліобіл не завжди забезпечує достатній терапевтичний ефект при лікуванні деяких захворювань жовчного міхура, жовчовивідних шляхів і кишечнику, наприклад, хронічного калькульозного холецисти ту, постхолецистектомічного синдрому, хронічного ентероколіту Відомий спосіб одержання жовчогінного засобу "Алохол" (а п №1343593 СРСР, А 61 К 35/78) шляхом подрібнення висушеного листя кропиви, часнику і сухої жовчі їх змішування з активованим вугіллям і допоміжними речовинами, грануляції, таблетування покриття оболонкою При цьому кропиву часник 1 жовч беруть у співвідношенні компонентів (масові частини) (2,385-2,505) (19,120,05) (38,01-40,05) Алохол помірно підвищує секрецію жовчі, пригнічує процеси бродіння та гниття у кишечнику Приймають усередину по 1-2 таблетки при хронічних холециститах гепатитах, запорах Недоліком цього засобу є низька терапевтична ефективність виникнення у окремих хворих алергічних реакцій, проносу Препарат протипоказаний при дистрофії печінки, обтураційній жовтянці, гострих гепатитах Відомий спосіб одержання жовчогінного засобу (патент РФ № 1836093 А 61 К 35/413) із сухої жовчі ведмедя, яку розчиняють у дистильованій воді (15,0 г в 200 мл), стерилізують через керамічні фільтри типу Ф-7, в порцію жовчі додають стерильний цукор і зброджують у два прийоми по 24 години кожний після чого висушують шляхом розкладки маси шаром 2-3 см при звичайному атмосферному тиску і температурі від +22°С до +3538°С Технологія одержання засобу виконується у приміщеннях, які відповідають вимогам операційних Цей спосіб, як найбільш близький до заявленого прийнятий за прототип Недоліком способу є те, що вихідна сировина - жовч ведмедя - є важкоступним і обмеженим за КІЛЬКІСТЮ, особливо в умовах України Здійснення способу повинно проходити в умовах стерильних приміщень (типу операційних) що мають два компоненти (блока) В основу винаходу поставлено завдання створити такий спосіб одержання препарату із жовчі, який був би менш трудомістким, не вимагав особливих умов його здійснення забезпечував одержання продукту з високою жовчогінною І антилітогенною активністю із доступної сировини Поставлене завдання, згідно з винаходом, досягається збором жовчних міхурів свійської птиці разом з їх вмістом, їх подрібненням, очисткою одержаного продукту шляхом фільтрації через 2 шари марлі і центрифугуванням одержаного фільтрату, розведенням його водою або ІЗОТОНІЧНИМ розчином хлориду натрію у співвідношенні 2 1, стерилізацією продукту з допомогою керамічних свічок або мембранних фільтрів t ліофільним висушуванням цільового продукту Зіставлення прототипу і заявленого способу виявило СПІЛЬНІ ознаки - одержання цільового продукту із жовчі, і'і фільтрація, стерилізація через керамічні фільтри та висушування ВІДМІННИМИ ознаками є - використання як сировини нативної жовчі, - використання як сировини жовчі свійської птиці, - механічне подрібнення жовчних міхурів разом з ЇХ ВМІСТОМ - відділення жовчі від часток тканини жовчного міхура і інших механічних домішок шляхом фільтрування через марлю з наступним центрифугуванням протягом ЗО хвилин при швидкості 3000 об/хвилину, - розведення жовчі водою або ІЗОТОНІЧНИМ розчином хлориду натрію у співвідношенні 2 1, - ліофільне висушування жовчі ВІДМІННІ ознаки є необхідними і достатніми сумісно з загальною ознакою вирішити поставлене завдання У той же час вони не виявлені у ВІДОМІЙ техніці, отже, спосіб відповідає вимозі патентоспроможності "новизна" Заявлений спосіб явно не витікає з рівня техніки він відповідає вимозі патентоспроможності винаходу "винахідницький рівень" Заявлений спосіб може бути застосований у медичній промисловості отже він промислово застосований Заявлений спосіб здійснюється так У забойному цеху птахофабрики під час потрошіння тушок свійської птиці (курей, качок, гусей ІНДИКІВ) ЗДІЙСНЮЮТЬ виймання жовчних міхурів разом з їх вмістом Видобуті жовчні міхури збирають у поліетиленові пакети і помішують у морозильну камеру при температурі -18-20°С у випадках, копи необхідно їх зберігання і накопичення або зразу ж направляють на переробку При переробці жовчні міхури (у випадку заморожування їх перед переробкою треба розморозити) подрібнюють на промисловій м'ясорубці з решіткою овальної форми (35x75 мм) і діаметром отворів 6 мм Одержану масу фільтрують через 2 шари марлі, фільтрат центрифугують протягом ЗО хвилин при 3000 об/хв Супернатант (жовч) ВІДДІЛЯЮТЬ ВІД осаду розводять дистильованою водою або ІЗОТОНІЧНИМ розчином хлориду натрію у співвідношенні 2 1 Розведену рідину стерилізують крізь дрібнопористі керамічні свічі марки Ф-7 або дрібнопористі мембранні фільтри з розміром пор 0,46-0,55 мкм Простерилізований продукт розливають в касети або флакони МІСТКІСТЮ 0,5 Л, заморожують при температурі -ЗО^С, після чого піддають ліофільному висушуванню У періоді сублімації максимальна температура оболонки котла +40°С, продукту від 0°С до -10°С, температура поверхні конденсатору-50°С глибина вакууму 100-200 мм рт ст Видалення остаточної вологи здійснюють при температурі оболонки сушильного котла палиць і продукту не вище +37°С, температура поверхні конденсатору -60°С і розрідження у системі 10050 мм рт ст Здійснення засобу пояснюються конкретними прикладами Приклад 1 Зібрано 2 3 кг жовчних міхурів птиці 3 жовчю, їх подрібнення проведено на м ясорубці з 28093 кретними прикладами Приклад 1. Зібрано 2,3 кг жовчних міхурів птиці з жовчю, їх подрібнення проведено на м'ясорубці з решіткою овальної форми (35x75 мм) і діаметром отворів 6 мм. Для відділення часток тканин жовчного міхура і інших домішок жовч фільтрували крізь 2 шари марлі, вихід жовчі 1,55 кг, відходи на цьому ступені складали 0,75 кг. Потім жовч центрифугували при 3000 об/хв. протягом ЗО хвилин Після видалення осаду залишилось 1,5 кг жовчі Розбавили жовч у співвідношенні 2:1, додаючи 0,75 кг дистильованої води. Стерилізували жоач крізь керамічні свічі типу Ф-7. Після стерилізації одержали 2,24 кг жовчі, яку розлили у флакони місткістю 0;5л по 50 мл, заморозили і провели ліофільне сушіння при таких параметрах: у періоді сублімації максимальна температура оболонки котла +40°С, продукту -8°С, температура поверхні конденсатору 2-50°С, глибина вакууму 185 мм рт. ст. Видалення остаточної вологи здійснювалося при температурі оболонки сушильного котла, полиць і продукту +35°С, температурі поверхні конденсатору -60°С і розрідженні у системі 185 мм рт, ст. Вихід сухо) люфілізованої жовчі 190 г. Приклад 2. Одержали 15 кг жовчних міхурів птиці з жовчю, подрібнення здійснили на промисловій м'ясорубці з решіткою овальної форми (35x75 мм) і діаметром отворів 6 мм. Для вида лення часток тканин жовчного міхура і Інших домішок жовч профільтрували крізь 2 шари марлі, вихід жовчі 10,8 кг, відходи на цьому ступені складали 4,2 кг Потім ЖОВЧ центрифугували при 3000 об/хв протягом ЗО хвилин для очистки від більш дрібних часточок Після видалення осаду залишилося 10,1 кг жовчі Далі, для зменшення в'язкості жовчі, м розбавили дистильованою водою у співвідношенні 2 1, додаючи 5,05 кг дистильованої води Провели стерилізацію крізь керамічні свічі Ф-7 Після стерилізації КІЛЬКІСТЬ ЖОВЧІ, ЩО йде на висушування, 15,38 кг. Жовч розлили у касети шаром 1 см, заморозили і провели ліофільне висушування при таких параметрах, у періоді сублімації максимальна температура оболонки котла +40°С, продукту -9°С, поверхні конденсатору -50°С, глибина вакууму 190 мм рт. ст Видалення остаточної вологи здійснювалося при температурі оболонки сушильиого котла, полиць і продукту +36°С, температурі поверхні конденсатору -60°С І розрідженні у системі 90 мм рт ст Вихід сухої ліофілізованоі жовчі 1250 г Цільовий продукт, одержаний заявленим способом, це порошок світло-зеленого кольору з жовтуватим відтінком і специфічним запахом, гіркого смаку Він добре розчинюється у воді, слабких лужних розчинах ізотонічному розчині хлориду натрію. Склад одержаного засобу поданий у табл. 1. Таблиця 1 Склад цільового продукту (сухої ліофілізованої жовчі) Одиниця виміру КІЛЬКІСТЬ у 1,0 Г сухої речовини мг 450-800 Таурохолева кислота % 20-40 ТаурохенодезоксІхолева кислота % 60-80 Вільні ЖОВЧНІ КИСЛОТИ % СЛІДИ ЛІПІДИ мг 152,0-221,0 Білкові речовини мг 74,0-94,0 Жовчні кислоти ІЗ НИХ' З поданої таблиці видно, що засіб, одержаний заявленим способом, містить до 80% таурокон'югованих жовчних кислот на одиницю маси Такий вміст таурокон'югатів є найбільш високим серед відомих жовчогінних засобів. Дослідами встановлено, що таурокон'юговані жовчні кислоти володіють найбільш високою холеретичною активністю, поліпшують склад секретованої жовчі, більш ефективно активують панкреатичні ферменти, стимулюють панкреатичну секрецію, забезпечують колоїдальну стійкість жовчі Дія одержаного засобу на холесекрецію вивчена у дослідах на тваринах. У дослідах на 3-х собаках з виведеним на шкіру загальним жовчним протоком протягом трьох днів і протягом чотирьох годин визначали кількість виділеної жовчі і вміст у ній основних інгреді єнтів. У наступні три дні після збору вихідної (натщесерце) часової порції жовчі тварині перорально вводили одержаний засіб у дозі 0,1 г/кг маси тіла і збирали жовч протягом чотирьох годин окремо за кожну годину. Об'єм виділеної жовчі і вміст у ній основних інгредієнтів подано у табл 2. Як витікає з таблиці 2, ПІСЛЯ введення одержаного засобу об'єм жовчі і вміст у ній основних специфічних інгредієнтів підвищується порівняно з результатами фонових досліджень \ вихідними даними Ці зміни мають фазовий характер найбільш суттєвий зріст усіх покажчиків - у 2,1-5,2 рази - відмічений протягом перших трьох годин після уведення засобу порівняно з вихідним рівнем Результати дослідів свідчать про жовчогінну дію одержаного засобу. 28093 Таблиця 2 Порція ЖОВЧІ (години) Фонові дослідження Статистичний Об'єм, покажчик мл Вихідна год ина год ина го дина год ина 1,44 0,7 1,82 0,8 1,24 0,6 0 83 0,1 М ±т М ±т М ±т М ±т М ±т Жовчні КИСЛОТИ, г/л 10,4 1,2 10,9 0,9 14,1 1,3 16,9 1 ,2 Дослід (0,1 мг/кг засобу) ЛІПІДНИЙ Білірубін, мкмоль/л 190,6 21,6 124,3 13,7 148,7 11,9 164,5 15,4 Дія засобу, одержаного заявленим способом, вивчена також у дослідах на 4-х собаках з хронічною втратою жовчі Вивчали вплив одержаного засобу на об'єм і склад жовчі | комплекс, г/л 2,26 0,3 2,61 0,3 2,84 0,4 2,97 0,40 Об'єм, мл 1,37 0,8 2,85 07 1,25 04 2,65 08 1,05 0,3 Жовчні КИСЛОТИ, г/л 9,8 0,8 28,7 1,3 22,9 0,9 40,6 3,6 6,2 0,4 ЛІПІДНИЙ Білірубін, мкмоль/л 196,8 18,4 581,5 49,7 324,9 41,3 1144,2 86,9 249,7 19,7 комплекс, г/л 2,18 0,16 4,25 0,34 3 27 0,27 5,57 0,43 2,45 0,26 У табл 3 подані середні дані, одержані за три дні досліджень до прийому засобу і за три дні після його прийому Жовч збирали щоденно протягом чотирьох годин Таблиця З Час дослідження Статистичний покажчик До прийому засобу Після прийому засобу Р М ±гп М ±ГП р КІЛЬКІСТЬ ЖОВЧІ за 3 дні 4,7 0,5 10,4 2,6 /_0,05 Примітка ТХ - таурохолева кислота, ТХДХ - таурохенодезоксихолева кислота Як витікає з табл 3, уведення тваринам засобу приводило до збільшення об'єму жовчі і вмісту в ній жовчних кислот, особливо таурохенодезоксихолевої кислоти - у 3,5 рази Ці дані дозволяють зробити висновок, що засіб не тільки підсилює жовчовиділення, але й стимулює жовчоутворення, корегує склад жовчі Ці властивості засобу можуть бути використані для лікування хворих із захворюваннями жовчного міхура, жовчовивідних шляхів і печінки У дослідах in vitro на моделі літогенної жовчі був вивчений вплив одержаного засобу на колоїдну стабільність жовчі Додання засобу у досліджувану жовч у КІЛЬКОСТІ 5% ПОВНІСТЮ попереджувало реакцію коагуляції у 5% ДОСЛІДІВ, у 60% дослідів реакція коагуляції була незначною (+), у 25% - помірною (++), у 10% випадків - вираженою (+++) У контрольних дослідах без додання одержаного засобу реакція коагуляції була вираженою (+++) в усіх випадках Отже, засіб попереджує або значно зменшує випадання осаду жовчі У дослідах in vitro був також вивчений вплив засобу, одержаного заявленим способом, на розчинність холестеринових і змішаних жовчних каменів Жовчні камені вміщували у 10%-ний розчин засобу і інкубували при температурі 38°С протягом 7 днів, щоденно замінюючи розчин свіжим Через 7 днів у 6 випадках з Концентрація інгредієнтів жовчі Холестерин, Білірубін, мкмоль/л ммоль/л ТХЙХ_ Разом 7,8 20,6 1171,6 3,05 0,31 1,8 3,6 164,0 27,6 52,4 5,0 1659,0 4,4 2,2 416,4 0,65 /_0,05 /J3.05 /.0,01 /_0,001 Жовчні КИСЛОТИ ТХ 12,7 3,3 24,4 2,9 /_0,05 7 спостерігалось розпушування змішаних жовчних каменів і відпадання від них окремих шматочків У чотирьох випадках змішані камені при легкому надавлюванні скляною паличкою розсипались, перетворюючись у піскоподібну масу Від холестеринових каменів відпадали окремі шматочки У дослідах на 15 морських свинках масою 400500 г був вивчений вплив одержаного засобу на літогеннють жовчі 1 група тварин - 3 інтактні морські свинки - була контрольною, 2 група - 6 тварин - утримувалась на літогенному раціоні щоденно разом з харчами морські свинки одержували холестерин із розрахунку 100 мг на 100 г маси, 3 група - 6 тварин також утримувалась на літогенному раціоні, але щоденно з харчами одержувала, крім холестерину, засіб, одержаний заявленим способом, у кількості 50 мг на 100 г маси Через 1 місяць у тварин досліджували жовч У жовчі тварин 2-і групи містився осад І окремі щільні грудки Жовч тварин 3-1 групи не відрізнялась від жовчі тварин 1-1 (контрольної) групи Результати даної сери дослідів свідчать про те, що засіб, одержаний заявленим способом, має антилітогенні властивості Таким чином, заявлений спосіб передбачає одержання цільового продукту у звичайних умовах з доступної сировини - жовч! свійської птиці {курей гусей, качок, індиків) Для зменшення трудомісткості і складності одержання жовчі птахів виділення і збір жовчних міхурів проводять разом з їх вмістом Потім проводять їх подрібнення і наступне аідді 2S093 лення жовчі шляхом фільтрування через марлю і центрифугування Розведення жовчі водою або ІЗОТОНІЧНИМ розчином хлориду натрію у співвідношенні 2 1 зменшує П в'язкість і дозволяє проводити стерилізацію жовчі за допомогою керамічних свічок типу Ф- 7 або мембранних фільтрів ЛюсЬільне висушування жовчі забезпечує зберігання властивостей нативної жовчі і одержання засобу у вигляді порошку який готовий до вживання у капсулах або використовується для виготовлення таблеток Спосіб дозволяє одержати засіб котрий стимулює жовчовиділення і жовчоутворення, корегує склад жозчі і має ачтмлітогенні властивості Враховуючи склад засобу, одержаисго заявленім способом, t його фізюлопчну дію, він може бути використаний у медичній практиці для лікування хворих із захворюваннями жовчного міхура, жовчовивідних иляхів І печінки профілактики і лікування жовчнокам'яної хвороби і інших захворювань при яких порушені утворення і виведення жовчі і и фізіологічні і фізико-хімічні властивості ДП "Український інститут промислової власності" (Укрпатент) Бупьв Лесі Українки, 26, Київ, 01133, Україна (044)254-42-30,295-61-97 Підписано до друку 6, £/£•/ 2001 р Формат 60x84 1/8_ Обсяг О б*/ обл -вид арк Тираж 50 прим Зам 7 у УкрІНТЕІ Вул Горького, 180, Київ 03680 МСП, Україна (044) 268-25-22