Спосіб діагностики передпатологічних та патологічних станів організму

КПК в А61В 5/І4 СПОСІБ ДІАГНОСТИКИ ПЕРЕДПАТОЛОГІЧНИХ ТА ПАТОЛОГІЧНИХ СТАНІВ ОРГАНІЗМУ Винахід відноситься до медицини і може бути застосований для діагностики передпатологічних та деяких патологічних станів, що обумовлені наявністю хронічних вогнищ інфекції в організмі (хронічні холецистіти,- хронічні холангіти, хронічні гастродуоденіти, хронічні тонзіліти), та сприяють активації перекисного окислення ліпідів (ПОЛ). Це дасть можливість попередити розвиток або загострення існуючих в організмі патологічних процесів, а також адекватно застосувати лікувально-профілактмчні заходи. Відомий спосіб інтегрального визначення стану перекисного окислення ліпідів, за яким реєструють кількість світлових спалахів оптичного випромінення, що виникають у результаті ініціюємих у біологічних пробах хімічних реакцій (засіб ініціюємо! хемілюмінесценції). У оптично-прозору термостатируєму при 30° С кювету наливають 8,5 мл 0, 020 М фосфатного буферу на основі 0,105 М КС1 рН 7,45, до якого додають 0,5 мл досліджуємо! плазми крові, після чого вмикають скляну мішалку, одночасно ведуть реєстрацію ХЛ-фону хемілюмінометра при діафрагмованому ФЭУ. Через 1 хвил. при відкритій шторці приладу роблять дозовану подачу Імл 5*10~2М розчину FeSO^ * 7Н2 и і реєструють хемілюмінограму на протязі б хвил. Далі повторно вводять розчин солі заліза і вимірють люмінесценцію ще 4 хвилини, після чого протягом І хвилини записують фон приладу [Барабой В.А., Орел В.Э., Карнаух И.М. Перекисное окисление и радиация.- К иев, Наукова дум ка.-1991.- С.59 60.]. Тривалість приблизно 20 проведення хвилин. В даного результаті дослідження проведених становить досліджень отримуємо дані, що характеризують загальний стан перекисного окислення ліпідів. 2 Недоліком способу є сумарна оцінка інтенсивності вільнорадикального окислення без конкретної ідентифікації окремих біохімічних продуктів ПОЛ, відсутність уявлення щодо активності антиоксидантної системи крові, що, в свою чергу, не дозволяє всебічно оцінити стан патологічних процесів у організмі. Відомо спосіб визначення стану перекисного окислення ліпідів за вмістом кінцевого продукту ПОЛ (малонового діальдєгіду) у сироватці крові при реакції з тіобарбітуровою кислотою з утворенням забарвленого триметілового комплексу а максимумом вбирання 532 нм [Гаврилов В.П., Гаврилова А. Р., Матуль М.М. Методика определения МДА (малонового диальдегида) в сыворотке крови // Вопросы мед. химии. - 1987.- № 1. - С.118-122.]. Засіб полягає у тому, що беруть 1 мл венозної крові, центрифугують 10 хвилин при 2 000 об/хв., відбирають 0,2 мл сироватки крові (у контрольній пробі 0,2 мл води), яку вміщують у пробірку; потім до неї додають 2 мл 1% Н3 РО, і 0,6 мл 1% 2-тіобарбітурової кислоти та витримують 45 хв. на водяній лазні при t - 100° С, охолоджують при кімнатні? температурі. Проводять вимірювання на спектрофотометрі прідовжині хвилі 532 нм і 580 нм проти контрольної проби. Підраховування рівню малонового діальдегиду (Е) проводять Зс формулою: р= А * 10 * 2,8 * 1,56 * 10 * 0,2 А - різ ниця по казникі в спектрофот ометру при дов жині хви ль 532 і 580 нм; 10 - переведення в моль; 2,8 - об"єм проби; 56*10 - коефіцієнт молярної екстинкції; 0,2 - кількість си роватки у пробі. Тривалість проведення дослідження складам 60 хв. і Недоліком способу є те, що він дозволяє оцінити концентрацію тільки кінцевих продуктів ПОЛ без урахування стан; антиоксидантної системи крові (АОС),що не дозволяє всебічні охарактеризувати окислювальний гомеостаз та наявність патологічних процесів в організмі. діагностуваті з Найбільш близьким до технічної сутності щодо заявляемого способу, є спосіб діагностики передпатологічних та патологічних станів організму за активністю антиоксидантної системи крові (АОС) з врахуванням активності ферменту катала зи [Королюк М. А. , Иванова Л.И., Майорова И.Г. Определение активности катал азы //Лаборат орное дело.- 1988. - № 1. С. 16 - 19.], який полягає в тому, що беруть 1 мл венозної крові, центрифугують при 2000 об/хв 10 хвилин, відбирають 0,1 мл сироватки крові в першу пробірку. Додають до пробірки суб ст ра т ре ак ції 2 мл 0 ,0 3% ро зч ин у пе рек ис у во дн ю (дослідна проба), додають 0,1 мл дистильованої води та 2 мл 0,03% розчину перекису водню в другу пробірку (холоста проба). Додають через 10 хвилин в обидві пробірки 1 мл 4% розчину молібдату амонію, який є індикатором реакції окислення. Виміряють оптичну щільність забарвлення розчину в спектрофотометрі при довжині хвилі 410 нм, а потім розраховують активність каталази по формулі: Е = (А хол - Адос) * VtK (мкат/л), де Е - активність каталази, А хол и А дос - екстинкція холостої і дослідної проб, V - об'єм вносимої проби ( 0,1 мл) t - час інкубації (600 сек) К - коефіцієнт мілімолярної екстинкції перекису водню, якиї дорівнює 22,2*103 ммоль -1 * см ~г Недоліком відомого способу є складність забору венозної крові, (необхідністз багатоетапність проміжних операцій висококваліфікований медперсонал, коштовні реактиви), трива^ лість дослідження (біля 25-30 хв.), а також необхідність до даткового визначення ПОЛ (малоновий диальдегід), що не до зволяє достовірно діагностувати наявність передпатологічни або патологічних станів у організмі. Технічною за дачею є ств орення до стовірн ого, прос тог та доступного у виконанні способу діагностики передпатологі чних і патологічних станів в організмі на основі комплексно го визначення АОС та ПОЛ 4 Поставлена технічна задача вирішується за рахунок того, що в из на ча ют ь а кт ивн іс ть ан ти ок си да нт ної си ст ем и к ро ві (АОС), причому беруть 1-2 краплі капілярної крові, роблять мазок на склі, просушують, наносять 2-3 краплі 0,5% розчину сульфату міді, наносять на 2-3 хвилини 3-4 краплі суміші, з 0,1% розчину бензідіну і 3% розчину перекису водню, промивають мазок дистильованою водою і наносять на 2-4 хв. барвнив - 1% розчин сафраніну, промивають мазок дистильованою водою, висушують і підраховують мікроскопічним способом кількість нейтрофілів з пероксидазою і по формулі G. AstaIdі і L.Verge розраховують активність пероксидази нейтрофілів (АОС): За + 26 + їв + 0г І 100 І де а, б, в, г - кількість нейтрофілів з певним ступенем інтенсивності забарвлення гранул пероксидази; 3, 2, 1 - інтенсивність забарвлення гранул пероксидази нейтрофілів і 0 відсутність забарвлення; 100 - кількість підрахованих нейт рофілів, а при значенні активності пероксидази нейтрофілі > 2,2, судять про посилення перекисного окислення ліпідів т визначають наявність передпатологічних або патологічних ста нів у організмі. Авторами заявляемого винаходу вперше було встановлен прямий зв'язок між активністю пероксидази нейтрофілів (АОС та рівнем (ПОЛ), що дозволило одночасно і комплексно оцінит стан перекисного окислення ліпідів та антиоксидантної систе ми крові і на підставі отриманих даних діагностувати наяє ність патологічних процесів в організмі. Висока активніст пероксидази нейтрофілів (АОС) відповідає високому рівню мз лойового діальдегіду (ПОЛ), що спостерігається при наявносі у організмі вогнищ хронічної інфекції. При відсутності пате логічних процесів в організмі активність пероксидази нейтре філів (АОС) і показники вмісту малонового діальдегіду (nOJ знаходяться на рівні фізіологічних (нормальних) f Приклад 1. При обстеженні дитини виявлені високій р" вень малонового діальдегіду (ПОЛ) у сироватці крої 5 (4f 68нмоль/мл) і активність пероксидази нейтрофілів крові (АОС) - 2,37. Отримані дані вказують на наявність передпатологічного стану або патологічного процесу в організмі, що потребує подальшого клініко-лабораторного обстеження з метою уточнювання захворювання та необхідності проведення коригучої терапії. Даний приклад підтверджує наявність залежності стану ПОЛ від активності АОС. Приклад 2. Активність пероксидази нейтрофілів (АОС) дорівнює І,96г що відповідає нормі. Залежність активності пероксидази нейтрофілів (АОС) та маркеру перекисного окислення ліпідів - малонового діальдегіду вказує, що вміст малонового діальдегіду (ПОЛ) в плазмі крові також знаходиться в межах фізіологічного. Отже, в організмі відсутня активація патологічного процесу та зберігається прооксидантно-антиоксидантна рівновага. Приклад 3. Рівень малонового діальдегіду (ПОЛ) у сироватці крові дитини складає 6,58 нмоль/мл. Високий рівень даного показника та його прямий зв'язок з активністю пероксидази нейтрофілів (АОС) вказує, що у даному випадку також є активація пероксидази в нейтрофілах крові та наявність в організмі передпатологічного чи патологічного стану, який потребує подальшого клініко-лабораторного обстеження та проведення коригуючого лікування. Встановлення залежності між активністю пероксидази т< рівнем малонового діальдегіду дає можливість одночасно ви значити стан АОС нейтрофілів стан ПОЛ і уникнути проведенн складного, трудомісткого та коштовного засобу визначенн вмісту малонового діальдегіду, що значно спрощує діагностик патологічних станів, знижує травматичність засобу і дає мож ливість використовувати його при диспансеризації населенн без залучення висококваліфікованого медперсоналу. Запропонований спосіб діагностики передпатологічних т патологічних проведенні станів організму диспансеризації та може бути використаним гематологічним пр скринінгови обстеженні населення, а також у лікувальних закладах широке го профілю для своєчасного докл^нічного виявлення передпатологічних та патологічних станів в організмі, діагностики захворювань та контролю за ефективністю антиоксидантної терап . ії