Спосіб виявлення та вилучення клітин популяції, що тестується, не сумісних з клітинами білої крові та плазми крові організму

Спосіб виявлення та вилучення клітин популяції, що тестується, не сумісних з клітинами білої крові та плазми крові організму, при якому виконують забір аліквоти крові з організму, виділяють із 3 39506 4 не передбачає вилучення (елімінації) з досліджуНа фото 1 - показано факт руйнування під діваної популяції клітин, несумісних з організмом. єю білих клітин та плазми крові організму клітин Під час підготовки заявки і проведення патенпопуляції, що тестується, на прикладі клітин фібтно-інформаційних досліджень авторами не було робластів 3-го пасажу (дослідний варіант - з додавиявлено способів виявлення та вилучення клітин ванням клітин білої крові; ультрафіолетовий популяції, що тестується, несумісних з клітинами фільтр). білої крові та плазми крові організму. На фото 2 - показано факт руйнування під діУ основу пропонованої корисної моделі постаєю білих клітин та плазми крові організму клітин влено задачу створення такого способу виявлення популяції, що тестується, на прикладі клітин фібта вилучення клітин популяції, що тестується, неробластів 3-го пасажу (дослідний варіант - з додасумісних з клітинами білої крові та плазми крові ванням клітин білої крові; прохідне світло). організму, який би дозволив виявляти та вилучати На фото 3 - показано факт руйнування під діз цієї популяції клітини, в яких відбулися будь-які єю білих клітин та плазми крові організму клітин зміни, що можуть викликати небажані наслідки в популяції, що тестується, на прикладі клітин фіборганізмі. Поставлена задача вирішується за раробластів 3-го пасажу (дослідний варіант - з додахунок створення умов, при яких виявлені в попуванням клітин білої крові; сумісне освітлення ляції, що тестується, змінені клітини розпізнають, а ультрафіолетовий фільтр одночасно з прохідним потім і знищують (піддають елімінації) клітинами світлом). імунної системи цього ж організму одночасно На фото 4 - показано контрольний варіант кліпротягом одного процесу. тин фібробластів 3-го пасажу - без додавання кліПоставлена задача вирішується пропоноватин білої крові - ультрафіолетовий фільтр. ним способом виявлення та вилучення клітин поНа фото 5 - показано контрольний варіант кліпуляції, що тестується, несумісних з клітинами тин фібробластів 3-го пасажу - без додавання клібілої крові та плазми крові організму, при якому тин білої крові - прохідне світло. виконують забір аліквоти крові з організму, видіНа фото 6 - показано контрольний варіант кліляють із одержаної аліквоти крові фракцію білих тин фібробластів 3-го пасажу - без додавання кліклітин та плазму, які додають до популяції клітин, тин білої крові - сумісне освітленні: ультрафіолепризначених для введення в організм, витримують товий фільтр з прохідним світлом одночасно. одержану суміш до встановлення факту взаємодії, На фото 7 - показано факт руйнування під дікінцевим етапом якої є руйнування під дією білих єю білих клітин та плазми крові організму клітин клітин та плазми крові організму клітин популяції, популяції, що тестується, на прикладі клітин фібякі є не сумісними з організмом, а клітини, які не робластів 4-го пасажу (дослідний варіант - з додабули зруйновані, визнають сумісними з цим органіванням клітин білої крові; ультрафіолетовий змом та придатними і безпечними для введення в фільтр). На фото 8 - показано факт руйнування під організм, при цьому, визначення сумісних та несудією білих клітин та плазми крові організму клітин місних з організмом клітин популяції та вилучення популяції, що тестується, на прикладі клітин фібостанніх виконують одночасно. робластів 4-го пасажу (дослідний варіант - з додаЗапропонований спосіб дозволяє досить просванням клітин білої крові; прохідне світло). то і з високою індивідуальною специфічністю виНа фото 9 - показано факт руйнування під дізначити та вилучати змінені клітини з популяції, єю білих клітин та плазми крові організму клітин що тестується. Він заснований на розпізнаванні популяції, що тестується, на прикладі клітин фібзмінених, небезпечних та несумісних з організмом робластів 4-го пасажу (дослідний варіант - з додаклітин імунною системою. Оскільки ж імунна сисванням клітин білої крові; сумісне освітлення тема кожного організму індивідуальна, то за рахуультрафіолетовий фільтр одночасно з прохідним нок її використання отримується суворо індивідуасвітлом). льна реакція. На фото 10 - показано контрольний варіант Принципово така процедура виконується шляклітин фібробластів 4-го пасажу – без додавання хом додавання до популяції клітин, призначених клітин білої крові - ультрафіолетовий фільтр. для конкретного організму, його ж клітин білої кроНа фото 11 - показано контрольний варіант ві та плазми. Як відомо, присутні в плазмі крові клітин фібробластів 4-го пасажу – без додавання імуноглобуліни - антитіла розпізнають та зв'язують клітин білої крові - прохідне світло. антигени, в результаті чого вони можуть миттєво На фото 12 - показано контрольний варіант нейтралізувати токсини, сприяти поглинанню мікклітин фібробластів 4-го пасажу – без додавання робних та інших чужорідних клітин та агрегатів клітин білої крові - сумісне освітлення - ультрафіофагоцитами. Одночасно, зміни в молекулах імунолетовий фільтр одночасно з прохідним світлом). глобулінів призводять до запуску паралельних На фото 13 - показано факт відсутності руйн умеханізмів захисту, таких як активація комплеменвання під дією білих клітин та плазми крові органіту та ін. Ті клітини, які несумісні з організмом, знизму клітин популяції, що тестується на прикладі щуються клітинами його білої крові в присутності клітин фібробластів 0-го пасажу (дослідний варійого ж плазми. А ті, що залишаються і не розпіант - з додаванням клітин білої крові; ультрафіознаються імунною системою як чужі, небезпечні, летовий фільтр). тобто, на які немає захисної реакції організму, за На фото 14 - показано факт відсутності руйн увизначенням, є сумісними. вання під дією білих клітин та плазми крові органіСуть корисної моделі пояснюється фотографізму клітин популяції, що тестується на прикладі ями (фарбування флуоресцентним барвником клітин фібробластів 0-го пасажу (дослідний варіДНК Hoechst): 5 39506 6 ант - з додаванням клітин білої крові; прохідне довищі з 10% плазми мишей. Клітини експонували світло). 1 годину при температурі 37 °С, потім поживним На фото 15 - показано факт відсутності руйн усередовищем відмивали надлишок клітин білої вання під дією білих клітин та плазми крові органікрові. Клітини фіксували 5 хвилин в парах формазму клітин популяції, що тестується на прикладі ліну і після фарбування (наприклад, флуоресцентклітин фібробластів 0-го пасажу (дослідний варіним барвником Hoechst, який фарбує ДНК [Boris ант - з додаванням клітин білої крові; сумісне освіZhivotovsky, Afshin Samali and Sten Orrenius. Curтлення - ультрафіолетовий фільтр одночасно з rent Protocols in Toxicology, 1998, Unit 3.2. Determiпрохідним світлом). nation of Apoptosis and Necrosis, p.8; Institute of На фото 16 - показано контрольний варіант Environmental Medicine, Division of Toxicology, Karoклітин фібробластів 0-го пасажу – без додавання linska Institutet S-171 77 Stockholm, Sweden] або по клітин білої крові - ультрафіолетовий фільтр. Романовського-Гімза) мікроскопували препарати На фото 17 - показано контрольний варіант для контролю за процесом взаємодії клітин білої клітин фібробластів 0-го пасажу – без додавання крові та фібробластів. клітин білої крові - прохідне світло. Авторами показано, що при використанні вихіНа фото 18 - показано контрольний варіант дного (нульового) пасажу не спостерігаються зміни клітин фібробластів 0-го пасажу – без додавання в культурі клітин фібробластів при додаванні кліклітин білої крові - сумісне освітлення - ультрафіотин білої крові (фото 13-18 ) На фото 13, 14 та 15 летовий фільтр одночасно з прохідним світлом). видно, що клітини та ядра фібробластів (більші за Приклад: Асептично виділенні ембріони мирозміром) не змінені та не ушкоджені клітинами шей на 13,5 днів вагітності (м'які тканини нижніх білої крові (на фото 13 ядра меншого розміру та кінцівок) переносили в флакони та 3 рази промибільш яскраві) в порівнянні з контролем (фото 16, вали поживним середовищем ДМЕМ (Sigma), яке 17 та 18). Нанесення клітин периферичної крові на містить 10% пеніциліну та стрептоміцину, та заликлітини культури фібробластів першого та другого шали на 20 хвилин при 4 °С. Потім середовище пасажів призводить до появи змін в морфології зливали та додавали 0,25% розчин трипсину з частини клітин фібробластів. Подальше збільшенВерсеном (1:1). Ресуспендували тканини та доня числа пасажів клітин фібробластів до четвертозволяли великим часточкам осісти. Концентровану го призводило до руйнування цих клітин внесениклітинну суспензію розбавляли середовищем ми клітинами білої крові. На фото 1, 2 та 3 видно, ДМЕМ, підраховували клітини в камері Горєва та що під дією клітин білої крові відбувається частковисівали 15 тисяч клітин в зручний для подальшове руйнування клітин та ядер фібробластів 3-го го мікроскопіювання посуд - пластикову або скляну пасажу та на фото 7, 8 і 9 повне руйнування клітин невелику чашку Петрі, або в лунку планшета (Nynфібробластів 4-го пасажу на відміну від контрольclon). Клітини вирощували при 37 °С. Клітини, які них варіантів, де руйнування клітин немає( відповиросли, були нульовим пасажем. Подальший відно фото 4, 5, 6 та 10, 11 і 12). Це говорить про пересів давав перший пасаж і т.д. те, що в процесі пасирування культури фібробласІз крові дорослих мишей тієї ж лінії (1-2 мл) тів, клітини змінюються до такого ступеня, що влаотримували фракцію клітин білої крові шляхом сні клітини білої крови, серед яких є клітини, які центрифугування в капілярах. Клітини білої крові виконують захисні функції, сприймають їх як чужопереносили в поживне середовище RPMI, яке місрідні та знищують. тить 10% плазми крові мишей тієї ж лінії. 1-5 х 10 5 На цьому явищі і базується спосіб виявлення клітин білої крові додавали до 1,5 х 104 клітин фібта елімінації змінених клітин, чужорідних для оргаробластів мишей (від нульового до четвертого нізму, несумісних з ним та шкідливих для нього, із пасажів), які прикріплені до поверхні скляної або загальної популяції клітин, які призначені для ввепластикової чашки Петрі (діаметр 2,5-5 см), або до дення в організм. лунки планшета, і знаходилися в поживному сере 7 39506 8 9 39506 10 11 Комп’ютерна в ерстка Г. Паяльніков 39506 Підписне 12 Тираж 28 прим. Міністерство осв іт и і науки України Держав ний департамент інтелектуальної в ласності, вул. Урицького, 45, м. Київ , МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислов ої в ласності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601