Спосіб оцінки токсичності водного середовища

1 Спосіб діагностики якості водного середовища, що включає введення у середовище тест-організмів і визначення токсичності середовища, який відрізняється тим, що використовують одночасно тест-організми трьох різних систематичних груп, витримують тесторганізми у середовищі протягом 1-5 діб, беруть клітини організмів і здійснюють цитогенетичний аналіз за якісними характеристиками ядерець, мікроядер та подвійних ядер, і на підставі аналізу сублетальних і летальних ефектів тест-організмів і цитогенетичних ефектів клітин тих самих тесторганізмів отримують комплексну оцінку токсичності, генотоксичності та цитотоксичності водного середовища 2 Спосіб за п 1, який відрізняється тим, що як тест-організми використовують тест-організми, вибрані із групи рослин, групи безхребетних і групи хребетних тварин 3 Спосіб за п 1, який відрізняється тим, що як цитогенетичні функціональні показники клітин тест-організмів використовують КІЛЬКІСНІ характеристики ядерець, а як структурні показники - частоту клітин із мікроядрами та подвійними ядрами Винахід відноситься до області екології навколишнього середовища, зокрема, до методів бютестування водних середовищ і може бути використаний для визначення різних типів токсичності водних зразків на рівні організму та клітини Метод бютестування оснований на ОЦІНЦІ впливу фактора середовища на організм, його окрему функцію або систему організмів [Филенко ОФ // Водные ресурсы -1986 - №3 - с 130-134] [1] Тепер оцінка якості водного середовища (наприклад, питної води, природних і стічних вод) із використанням бютестів, як на рівні організмів, так і на клітинному рівнях набули особливу актуальність, так як методи бютестування об'єктивно та комплексно оцінюють вплив багатьох речовин на організм, його життєві процеси Відомий спосіб діагностики (бютестування) природних вод із використанням набору тваринних і рослинних бютестів, який складається із тесторганізмів трьох трофічних рівнів [Forget G , Cagnon P , Sanchez WA Dutka B J 2000 Overview of methods and results of the eight country International Development Research Centre (IDRC) Water Tox project Environ Toxicol 15 264-276] [2] Спосіб полягає в окремому використанні різних тест-організмів Як тест-організми використовують такі тест-організми - звичайну цибулю Alhum сера, представника однодольних рослин Цибулини пророщують (зазвичай протягом 72год) на контрольних та дослідних зразках, тоді порівнюють середню довжину корінців Ріст корінців уповільнюється в результаті дії токсичних речовин, - тест стосовно розвитку насіння рослин, сала г посівний Lactuca sativa представник дводольних рослин По 25 насінин для кожної проби культивують на зволожених досліджуваною водою фільтрах протягом 5 діб із наступним вимірюванням довжини корінців у контрольних і дослідних зразках - тест із гідрою Hydra attenuata, представник безхребетних тварин Оцінюють морфологічні зміни (сублетальні ефекти) в ТІЛІ прісноводної , гідри, а також її виживання (летальні ефекти) внаслідок впливу токсичних речовин, - тест із нематодою Panagrellus redivirus, представник безхребетних тварин При культивуванні в дослідних зразках протягом 96 год оцінювали здатність нематод до повноцінного розвитку, їх виживання, 00 ю ю 55842 - тест із дафнією Daphma magna, представник безхребетних тварин Реєструють виживання дафній через 48 годин в дослідних зразках, - флуктуаційний тест із бактерією Salmonella, представник мікроорганізмів, Інкубують 5 діб при 35-37°С на ростовому середовищі, який містить ДОСЛІДНІ зразки, та фіксують розвиток мутантних клітин ВІДОМІ способи оцінки (діагностики) якості водних зразків із використанням клітинних бюмаркерів - мікроядерного тесту для визначення генотоксичності [Ильинских Н Н , Новицкий В й , Варгунова Н И, Ильинских И Н Микроядерный анализ и цито генетическая нестабильность Томск Изд-во Томск Ун-та, 1991 ~ 272с] [3] та ядерцевого бюмаркера для визначення цитотоксичності [Архипчук В В Цитология и генетика -1995-29 -с 6-12] [4] Мікроядернии тест [3] об'єктивно характеризує частоту хромосомних порушень у ході мітотичного процесу (розриви хромосом, відставання окремих хромосом при ПОДІЛІ клітин), тобто мікроядернии тест фіксує структурні порушення геному клітини Головний показник тесту - частота виникнення клітин із мікроядрами (мЯ) Іншим показником слугує частота виникнення клітин із подвійними ядрами (2Я), що вказує на порушення утворення дочірніх клітин із материнської Ядерцевий бюмаркер [4] оснований на дослідженні ядерцевої активності клітин і характеризує функціональну зміну геномної активності, ядерця являють собою комплекс функціонуючих рибосомних генів та їх продуктів, що зумовлює їх високу сприйнятливість до ЗОВНІШНІХ дій Найбільш інформативними показниками, які застосовуються для оцінки вплив різних факторів на геном клітин рослин і тварин, є розмір одиночних ядерець і відсоток гетероморфних парних ядерець (ГПЯ) - для клітин із малою КІЛЬКІСТЮ ядерець, і число ядерець - для багатоядерцевих клітин 1 Найбільш близьким аналогом до винаходу за технічною суттю і досягнутим ефектом є спосіб діагностики якості водного середовища [2] Суть способу полягає у слідуючому Для оцінки якості водних зразків використовували величину токсичного ефекта, отриманого через дію речовин органічної та неорганічної природи на тест-організми, набір котрих представлений в описі способу [2] Досліджували вплив токсичності на кожен тест-організм зокрема Залежно від виду тест-організму час витримування у водному середовищі склав 2-5 діб Після експозиції у водному зразку визначали токсичний ефект за КІЛЬКІСТЮ організмів, які вижили (дафнія, нематода, гідра) і за шпбіруванням росту корінців рослин (цибуля, салат) Токсичний ефект вважається дійсним при статично достовірній різниці із контролем [Лакин ГФ Биометрия -Москва Изд-во "Высшая школа", 1968 -285с] [5] Для КІЛЬКІСНОГО визначення токсичного ефекту, при використанні відомого набору тест-організмів (за виключенням мікроорганізмів), нами були здійснені досліди, аналогічні дослідам у способі [2] У якості токсичних речовин було використано ряд речовин органічної природи (пентахлорфенол, ліндан, ДДТ, анілін, нітроквшолін, метолахлор) та неорганічної природи (іони МІДІ, ртуті, мишьяку і кадмію) Як контрольний зразок використовували воду, яка відповідала ГОСТ 2874-82 "Вода питьевая" На цій же воді готували водні зразки, котрі містили вказані рбчовини в концентраціях, початкові величини яких представлені у таблиці 1 (колонка 2), де також відображений і отриманий токсичний ефект (колонки 3 і 4) Відхилення від контролю визначених показників токсичності до 5% позначене /+/, при цьому вважається, що ефект практично відерній, відхилення на 5-15% позначене /++/, на 15-40% - /+++/ і більше 40% /++++/ Тваринні бютести об'єднані в одну групу, а рослинні - в іншу, поскільки тварини та рослини проявили специфічні ефекти в реагуванні на органічні та неорганічні речовини Як слідує із представлених даних, найбільш токсичними були іони МІДІ, ДДТ, іони ртуті, пентахлорфенол, а найменш токсичними - іони мишьяку, ліндан, метолахлор, анілін Як недолік відомого способу [2] можна ВІДМІТИТИ, що реалізація способу не дає повного токсикологічного аналіз, тобто не оцінює різні типи токсичності, а тільки гостру токсичність і, як наслідок, не забезпечує об'єктивну діагностику якості водного середовища Нами була досліджена ефективність використання клітинних бюмаркерів для бютестування якості водних зразків, котрі містять згадані токсичні речовини Для цього у кожного тест-організму в процесі витримування у водних зразках брали проби на цитотоксичність (ядерцевий бюмаркер), а після витримування у кожного тест-організму були взяті проби для визначення генотоксичності (мікроядернии тест), ВІДПОВІДНО зі способами [4 і 3, ВІДПОВІДНО] Отримані дані по гено- і цитотоксичності досліджених органічних і неорганічних речовин представлені також у таблиці 1 (колонки 5-6 і 7-12, ВІДПОВІДНО) Як слідує із представлених даних, найбільш гснотоксичними виявились ліндан (>40%) и метолахлор (30-40%), так як вони суттєво впливали на частоту клітин із мЯ та 2Я у рослин Також ці речовини були цитотоксичними, поскільки змінювали, наприклад, число і розмір ядерець у клітинах рослин (30-40%) Речовини, такі як пентахлорфенол і неорганічна ртуть, котрі виявляють гостру токсичність на рівні організму, практично не змінювали частоту клітин рослин із мЯ і 2Я, а також відсоток ГПЯ і число ядерець у клітинах рослин і гідр, тобто не проявляли гено- та цитотоксичність (ефект практично відсутній) Співставлюючий аналіз результатів, отриманих на рівні організму [за способом 2] і на клітитнному рівні [за способами 3,4] показ) є, що є розходження у показниках токсичності, з одного боку, та гено- і цитотоксичності, - з другого Наприклад, ліндан за проявлених! ефектом є найбільш слабо токсичним і в той же час він є найбільш сильно генотоксичним серед досліджених речовин Таким чином, із рівня техніки в області 55842 визначення якості водного середовища з використанням бютесив слідує, що ВІДОМІ способи діагностики (оцінки) на рівні організму чи клітинному рівні, кожний зокрема, не дозволяє комплексно вирішити задачу діагностики якості води, так як дані способи не забезпечують отримання об'єктивних достовірних показників різних видів токсичності водних зразків, поскільки токсичні на рівні організм) речовини можуть бути безпечними на клітинному рівні, а не токсичні на рівні організму речовини можуть серйозно пошкодити клітини організму В основу винаходу поставлена задача, розробити комплексний спосіб діагностики якості водного середовища за допомогою бютестування, у котрому використання водночас набору високочутливих з різною специфічністю тесторганізмів, який складається із представників рослин, безхребетних і хребетних тварин, а також клітинних бюмаркерів, визначаючих структурні та функціональні зміни клітин цих же тест-організмів, Дозволило б суттєво покращити діагностику якості водних зразків за рахунок досягнень всесторонньої та об'єктивної оцінки токсичность ЦИТО-І ГЄНОТОКСИЧНОСТІ Для вирішення поставленої задачі запропонований спосіб діагностики якості водного середовища, який включає введення у середовище тест-організмів і визначення токсичності середовища, в котрому, згідно винаходу, використовують одночасно тесторганізми трьох різних систематичних груп, витримують тест-організми протягом 1-5 діб у водному середовищі беруть клітини організмів і здійснюють цитогенетичний аналіз за КІЛЬКІСНИМИ характеристиками ядерець, мікроядер і подвійних ядер, та на підставі аналізу сублетальних і летальних ефектів тест-організмів і цитогенетичних ефектів клітин тих же організмів отримують комплексну оцінку токсичності, цито- і генотоксичності водного середовища Як тесторганізми використовують організми, вибрані із групи рослин, групи безхребетних та групи хребетних тварин При цьому як цитогенетичні функціональні показники клітин тест-організмів використовують КІЛЬКІСНІ характеристики ядерець, а як структурні показники - частоту клітин із мікроядрами та подвійними ядрами Запропонований спосіб діагностики якості водного середовища оснований на комплексному ПІДХОДІ, тобто на застосуванні набору тесторганізмів із визначеними властивостями для проведення досліджень як на рівні організму, так і на клітинному рівнях Визначення токсичності водних зразків за допомогою запропонованого оптимального набору тест-організмів, який включає представників рослин, безхребетних і хребетних тварин, та із врахуванням ефектів клітинного рівня (цитотоксичність і генотоксичність) дозволяють отримати всесторонню об'єктивну оцінку різних видів токсичності водних зразків Досягається високий результат діагностики за рахунок поєднання у тест-організмах слідуючих властивостей - вибрані тест-організми є високочутливими та мають різну специфічність, тобто, диференційовану реакцію на речовини різної природи, - вибрані тест-організми мають еукарютичне ядро, що забезпечує повноцінне вивчення ядерних структур клітин В організмах із прокарютичним ядром, наприклад, у мікроорганізмах, вивчення цитогенетичних змін за мікроядерним тестом і ядерцевим бюмаркером неможливе, - у набір тест-організмів не включені організми, цитогспетичні дослідження котрих представляють значні технічні труднощі, наприклад, дафнії, нематоди, що негативно відображається на достовірності та надійності отриманих результатів Таким чином, сукупність суттєвих признаків запропонованого способу діагностики якості водного середовища, а саме визначення токсичних ефектів за допомогою тест-організмів у поєднанні із змінами клітинних параметрів, є необхідною і достатньою для досягнення забезпечуваного винаходом технічного результату - значного покращання результатів бютестування якості водного середовища за рахунок отримання об'єктивної повної та достовірної оцінки різних видів токсичності загальної токсичності, цитотоксичності та генотоксичності водних зразків Приклади реалізації за винаходом Приклад 1 Як тест-організми використовували набір організмів, котрі складаються із риби - карась сріблястий Carassius auratus gibeho (представника хребетних тварин), із гідри Hydra attenuate (представника безхребетних тварин) та звичайної цибулі Alhum сера (представника рослин) Об'єктом водного середовища була взята вода бутильована столового типу, позначена як "Оп1" ФІЗИКО-ХІМІЧНІ показники води (вміст кисню, рН, жорсткість) відповідали нормам для питної води ВІДПОВІДНО ДО стандартної методики бютестування водних проб [Методы биоиндикации и биотестирования природных вод Выпуск 2 // Под ред, В А Брызгало, Т А Хорунжей - Л Гидрометеоиздат, 1989 - 276с] [5], зразки столової води, які підлягали аналізу, попередньо зберігали протягом 1-3 діб у холодильнику (при температурі 5-8°С) Як контрольний зразок використовували артезіанську воду Для кожного бютесту використовували ємності ВІДПОВІДНО з нормами для бютестування Цибулю звичайну розміщали зверху пробірок (7шт), заповнених водним зразком, причому із водним зразком контактує тільки зона росту корінців У планшетку із 12 комірками поміщали 36 гідр, по 3 гідри у комірку, а у 5 акваріумів (Зл) розміщали по два карасі Для визначення загальної токсичності водного зразка цибулю витримували 3 доби, гідру - 2 доби і рибу - 4 доби У перші 3 години витримування вказаних тесторганізмів фіксували клітини цибулі, гідри та риби на цитотоксичність (ядерцевий бюмаркер), а після витримування у кожного тест-організму були взяті зразки для визначення генотоксичності (мікроядерний тест) 55842 Дані по загальній токсичності та цитотоксичності наведені у таблицях 2, 3 Загальну токсичність водного зразка визначали наступним чином - Бютест із цибулею Сенс тесту полягає у гальмування росту коріння у випадку впливу токсичних речовин Ступінь токсичності визначали вимірюванням довжини корінців 7-ми цибулин / на зразок та порівнювали середню довжину корінців у контрольному та дослідному зразках Середня довжина корінців у пробі води "Оп1" не відрізнялась від контрольних - Бютест із гідрою Проби води "Оп1" не виявила будь-якого впливу на життєздатність гідр, протягом двох діб спостережень всі тварини зберігали нормальну морфологію тіла, їх виживання склало 100% - Бютест із рибою (карась сріблястий) Водний зразок "Оп1" не вплинув на життєздатність риби після 96 годин інкубації, 10 риб у водному зразку залишалися живими, тобто виживання склало 100% Отримані токсичні ефекти, зафіксовані у тварин і рослинних бютестів у результаті дії водного зразка "Оп1", представлені у табл 2 На клітинному рівні були отримані найбільш важливі ЦИТОЛОГІЧНІ та генетичні показники 1 -ядерцевий бюмаркер (цитотоксичність), Аналізували повітряно-сухі ЦИТОЛОГІЧНІ препарати тваринних клітин і чавлені ЦИТОЛОГІЧНІ препарати рослинних клітин, забарвлених 50% розчином азотнокислого срібла Під світловим мікроскопом (окуляри 10х, об'єктив 100х, загальне збільшення 1000х) визначали такі показники число ядерець у КЛІТИНІ (пЯ), розмір одиночного ядерця (\/ІЯ), а також відсоток гетероморфних парних ядерець (ГПЯ) Для каждної проби підраховують число ядерець у 1500-1800 клітинах і визначають їх розмір у 200 клітинах при максимальному збільшенні свмлового мікроскопу Показники ядерцевого бюмаркера для контролю та кожної проби фіксували через ЗО, 90 і 180хв після початку дії аналізованого водного зразка "Оп1" Середнє значення ГПЯ, пЯ та \/ІЯ, отримані із клітинного матеріалу цибулі, гідри та карася сріблястого представлені у табл З, 2 - мікроядерний тест (генотоксичність) Мікроядерний тест фіксує структурні порушення геному клітини Частоту структурних порушень визначали із розрахунку на 1000 досліджених клітин, тобто у промілле Показниками генотоксичності слугували частота виникнення клітин із мікроядрами (мЯ) і частота клітин із подвійними ядрами (2Я), котрі визначали у 3-4 тисячах клітин у пробі із наступним и перерахунком на 1000 клітин, тобто величина індексу виражалась у промілле Отримані результати за генотоксичиїстю водного зразка "On" показали, що частота виникнення клітин із мікроядрами (мЯ) і частота клітин із подвійними ядрами (2Я) залишались на контрольному нульовому рівні, тобто вода не генотоксична Як слідує із даних, представлених у табл 2 водний зразок "Оп1" був нетоксичним для хребетних і безхребетних тварин (виживання гідри 8 та риби склало 100%), а також для рослин (цибуля) - ріст корінців відмічений у всіх досліджених цибулинах та їх середня довжина не відрізнялась від контрольних величин На клітинному рівні водний зразок "Оп1" не виявив генотоксичність, але проявив цитотоксичність для рослинних клітин (зміна показників ГПЯ, пЯ та \/ІЯ) для клітин безхребетних (зміна показників ГПЯ, \/ІЯ), а також для клітин хребетних, (зміна показника \/ІЯ), так як відхилення вказаних показників від контрольних величин склало 5% і більше (див табл 3) Приклад 2 Об'єктом водного середовища була взята вода бутильована, столового типу, позначена як "Оп2" ФІЗИКО-ХІМІЧНІ показники води "Оп2" знаходились на рівні показників води "Оп1" Якість ВОДНОГО зразка "Оп2" визначали аналогічно технологи, описаній у прикладі 1, та оцінювали за отриманими показниками загальної токсичності, гено- і цитотоксичності Результати представлені у таблицях 2, 3 Дані таблиці 2 показують, що водний зразок "Оп2", не токсичний, про що свідчать результати бютестування на одному рослинному (цибуля звичайна) та двох тваринних (гідра і карась сріблястий) організмах середня довжина корінців у всіх досліджених цибулин не змінювалась по відношенню до контрольних величин, виживання гідр і карася склало 100% Водний зразок "Оп2" не був генотоксичним, так як частота виникнення клітин із мікроядрами (мЯ) і частота виникнення клітин із подвійними ядрами (2Я) не перевищувала контрольного рівня (одна клітина із мЯ та одна клітина із 2Я - на 1000 клітин) При цьому, вода "Оп2" проявила цитотоксичні властивості вона змінювала такі показники як ГПЯ, пЯ та \/ІЯ у клітинах цибулі, і \/ІЯ у клітинах гідри та карася сріблястого, і відхилення вказаних показників від контрольних величин складало від 5,5% до 31,2% (див таблицю 3), Приклад З Об'єктом водного середовища слугувала вода бутильована, столового типу, позначена як "ОпЗ" ФІЗИКО-ХІМІЧНІ показники води "ОпЗ" відповідали показникам води "Оп1" Якість ВОДНОГО зразка "ОпЗ" оцінювали за показниками загальної токсичності, гено- і цитотоксичності, отриманими по технології у прикладі 1 Дані представлені у таблицях 2,3 Із даних таблиці 2 слідує, що водний зразок "ОпЗ" має чітко виражену токсичність як для рослинного, так і для тваринного бютестів, що підтверджується наступними результатами Із семи цибулин проросло лиш чотири і середня довжина корінців пророслих цибулин складала всього 49% відносно до контрольних величин Вода "ОпЗ" виявилась токсичною для гідр вже у першу добу дм у всіх осіб зафіксовані сублетальні ефекти, а через дві доби 55% осіб загинули Для сріблястого карася вода "ОпЗ" виявилась менш токсичною із 10 досліджених осіб протягом 96 годин загинуло 2 особи Па клітинному рівні вода "ОпЗ" не проявила генотоксичність, оскільки частота виникнення клітин із мЯ і частота виникнення клітин Із 2Я знаходилась на рівні контрольних величин одна клітина із мЯ на 1000 клітин і одна клітина із 2Я на 1000 клітин Слід ВІДМІТИТИ, ЩО вода "ОпЗ" проявила цитотоксичність для всіх бютестів за такими показниками ГПЯ у клітинах цибулі, \/ІЯ в клітинах гідри і карася сріблястого (відхилення вказаних показників від контрольного рівня склало 12,5-ь23,8%) (Таблиця 3) На основі отриманих результатів аналізу якості трьох різних зразків питних (столових) вод ("Оп1", "Оп2" та "ОпЗ") отримана комплексна оцінка їх якості за токсичністю, цито- і генотоксичністю Зразки води "Оп1" і "Оп2" не проявили загальну токсичність як для рослинних, так і для тваринних бютестів, на відміну від котрих зразок води , "ОпЗ" має чітко виражену токсичність для всіх бютестів Всі три зразки води не генотоксичні, але проявляють цитотоксичність для клітин цибулі, гідри і сріблястого карася (для кожного бютесту у різній мірі) Таким чином отримані результати показують ефективність і високу інформативність комплексного підходу в бютестуванні, який заявляється Переваги запропонованого способу 10 55842 діагностики (оцінки) якості водного середовища полягають у наступному Запропонований спосіб діагностики якості водного середовища, оснований на комплексному ПІДХОДІ, котрий об'єднує аналіз токсичності на рівні організм}' із аналізом гено- і цитотоксичності на клітинному рівні, забезпеч) є об'єктивну всесторонню оцінку різних видів токсичності водних зразків, що не досягається жодним із відомих способів Достоїнством запропонованого способу є також можливість комплексної оцінки різних токсичних ефектів водних зразків, починаючи із порогових концентрацій токсичних речовин, присутніх, наприклад, у столових водах, а також виявляючи їх більш високі концентрації наприклад, у природних поверхневих водах Таким чином, бютестування (комплексне використання оптимальних наборів як тесторганізмів, так і клітинних параметрів) об'єктивно характеризує біологічну складову якості води А за біологічними критеріями можливе визначення оптимального (найбільш підходящого для функціонування людського організму та його клітин) складу води, наприклад, сольового, для даного регіону, популяції та ш Таблиця 1 Речовина 1 Пентахлор фенол нд" 4-нітрокво налінN-оксид РР*ДЦТ Почат кова концен трація мг/дм Токсичність Тва Рос рин лин бю бю тест тест Генотоксігомсть росшенні Росл, бютести тест * пЯ пЯ vm vm ГПЯ ГПЯ 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 0,8 +++ +++ + + + + ++ ++ + + 2,0 4,0 ++++ ++++ ++ ++ + + + + + + + + ++ ++ ++ не визн + ++ + ++ 1,2 ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ 0,4 ++++ +++ ++ ++ ++ + ++ + ++ + не визн ++ не визн ++ не визн ++ не визн + ++ ++ ++ ++ ++ ++ ++ + не визн 5,0 ++ ++ D+ 20,0* 20,0 20,0 + + + + + + + + ++++ ++++ +++ +++ 4,0 + + ++ не визн АНІЛІН Гідра 2Я не визн As Ліндан Метолахлор Росл, тест мЯ 2+ Cd Гідра Цитотоксичність Росл Гідра тест ++ +++ +++ ++ + 4-44-4не визн ++ +++ +++ + не внзн не визн Таблиця 2 Зразки води КН Оп1 Оп2 ОпЗ Цибуля звичайна Довжина Відхилення від корінців, % контролю, % 100 100 100 49* 0 0 51 Токсичн ефекти Гідра Карась сріблястий Виживання, Відхилення від Відхилення від Виживання, % % контролю, % контролю, % 100 100 100 45 ^довжина корінців у 4 цибулин, які проросли із 7 вихідних 0 0 55 100 100 100 80 0 0 20 11 12 55842 Таблиця З Зразки води КН Оп1 Оп2 ОпЗ Цибуля звичайна Відхилення Відхи лення від ВІД ГПЯ пЯ vm контролю контролю 77 69 67 68 7 2 2 0 11 0 135 125 2 1 1 1 06 87 77 96 92 14 1 49 102 0 95 9 96 4 98 5 Відхи лення від ГПЯ контролю 60 55 34 77 72 78 73 2 5 2 6 Цитотоксичність Гідра Відхилення Відхилення ВІД контролю 60 1 4 47 пЯ 1 1 1 1 20 15 17 20 ВІД контролю 42 25 0 Відхилення vm 52 63 69 61 Підписано до друку 05 05 2003 р 8 9 3 3 Відхилення ВІД ВІД контролю 21 0 31 2 16 1 80 76 78 78 7 8 7 0 контролю 49 25 33 Тираж 39 прим ТОВ "Міжнародний науковий комітет" вул Артема, 77, м Київ, 04050, Україна (044)236-47-24 ГПЯ Карась срібний Відхи Відхилення лення від ВІД пЯ vm контролю контролю 1 1 1 1 92 88 83 69 20 45 122 37 35 ЗО 28 65 179 23 8