Спосіб виявлення і оцінки ступеня негативного впливу нітратів і нітритів на організм молодняку великої рогатої худоби

Спосіб виявлення і оцінки ступеня негативного впливу нітратного навантаження на організм молодняку великої рогатої худоби, який базується на аналізі системи антиоксидантного захисту за активністю ферментів крові, який відрізняється тим, що додатково визначають ферментну активність глутатіонпероксидази, глутатіонредуктази та глюкозо-6-фосфатдегідрогенази і за комплексною картиною активності ферментів судять про ступінь негативного впливу нітратного навантаження, при цьому: - тварин, у яких активність каталази знаходиться в межах 6,28-6,75 одиниць, глутатіонпероксидази - в межах 34,6-38,4 нмоль NADPH/хв. на 1 мг білка, активність глутатіонредуктази - в межах 1,49-1,64 нмоль NADPH/хв. на 1 мг білка, активність глюкозо-6-фосфатдегідрогенази - в межах 0,705-0,775 нмоль NADPH/хв. на 1 мг білка, вважають клінічно здоровими; - тварини, у яких активність каталази знаходиться в межах 5,8-6,26 одиниць, глутатіонпероксидази в межах 20,5-33,0 нмоль NADPH/хв. на 1 мг білка, активність глутатіонредуктази - в межах 0,65-1,46 нмоль NADPH/хв. на 1 мг білка, активність глюкозо-6-фосфатдегідрогенази - в межах 0,52-0,699 нмоль NADPH/хв. на 1 мг білка, вважають частково ураженими впливом нітратів та нітритів та такими, які потребують корекції системи антиоксидантного захисту організму застосуванням природних або синтетичних антиоксидантів, вітамінів; - тварин, у яких активність каталази є меншою 5,78 одиниць, глутатіонпероксидази є меншою 20,0 нмоль NADPH/хв. на 1 мг білка, активність глутатіонредуктази - меншою 0,60 нмоль NADPH/хв. на 1 мг білка, активність глюкозо-6фосфатдегідрогенази - меншою 0,50 нмоль NADPH/хв. на 1 мг білка, вважають ураженими впливом високого рівня вмісту нітратів і нітритів у кормах і з явищами незворотного порушення обміну речовин. Корисна модель належить до галузі ветеринарної медицини, зокрема ветеринарної токсикології, а саме до способів оцінки ступеню негативного впливу нітратно-нітритного навантаження на організм молодняку великої' рогатої худоби. Заявлений спосіб може бути використаний у господарствах із різними формами власності, що вирощують молодняк великої рогатої худоби в умовах нітратно-нітритного навантаження, тобто при підвищенні рівня нітратів і нітритів у кормах. Відомий спосіб виявлення та оцінки негативного впливу різних доз нітратів і нітритів на окремі органи і системи організму тварин, який базується на оцінці змін у функціонуванні процесів травлення І сечовиділення [Гуфрій Д.Ф. Зміни функції шлунково-кишкового тракту у бугайців під впливом нітратів і нітритів // Матер, доп. Міжнарод. конф. присв, 110 роковинам заснування Львівського зоовет. Ін-ту, Львів, 1991. - С. 13-14]. Недоліком його є те, що даним способом можна діагностувати негативний вплив нітратів на організм і тільки при важкому ступені гострого перебігу нітратно-нітритного токсикозу. Відомі також гематологічні способи виявлення негативного впливу нітратів на тваринний організм [Клюсова Т., Башкова Л., Левченко О. Влияние на организм нитратов и нитритов при использовании их в пищевой промышленности и применение удобрений. //В кн.: Вопросы гигиены и охраны окружающей среды, М., 1979. - С. 45. Полоз Д.Д., Сидоров Нитраты и их отрицательное действие на организм животных // Тез. докл. науч конф. «Экологические проблемы фармакологии и токсикологии», Казань, 1990. - С. 77-78 Мазуркевич А.И. Обмен нитратов и нитритов в организме животных. // Ветеринария. - 1992. - №1. - С. 54-55. Влияние нитратов питьевой воды на содержание метгемоглобина в крови телят. / Н.М. Ливчак, Д.Ф. Гуфрий, см 7729 Л.Т. Кметь, Л.В. Богославская // Молодые учёные продовольственной программе (Львов 1985): Тез. докл науч. произ. конф. Львовского зоовет. ин-та, Львов, 1985. - С. 24. Дмитров С, Джуров А., Антонов С. Диагностика отравлений животных. - М.: Агропромиздат, 1986. - 282 с. В.Б. Духнрицький, Г.А. Хмельницкий, Д.М. Вовк, Н.Ф. Панько // Проблема азотистого метаболизма: Тез. докл. Межреспубликанской науч.-практич. Конф. Волгоград. 1990.-с. 20-21]. Способи включають оцінку реактивності організму при нітритно-нітратному навантаженні шляхом визначення деяких гематологічних та імунологічних показників у крові тварин (кількість гемоглобіну, метгемоглобіну, еритроцитів, лейкоцитів, аналіз лейкограм, концентрацію в крові нітратів і нітритів, загальний білок, сечовину, цукор, інсулін). Ці способи включають комплексний підхід до оцінки патологи' різних ступенів важкості, але оскільки нітрити проявляють подвійну дію, а, саме, метгемоглобіноутворюючу дію та утворення вільних радикалів, зазначенні показники гематологічних досліджень не дозволяють оцінити ступінь впливу нітратів і нітритів на організм молодняку великої рогатої худоби. Найбільш близьким по суті до способу, що заявляється, є спосіб визначення стану антиоксидантної системи при нітратному навантаженні [Гуфрій Д.Ф. // Роль шлунково-кишкового тракту молодняка великої рогатої худоби у патогенезі нітратно-нітритного токсикозу: Автореферат дис. док. вет наук: 16.00.10, 16.00.04 / Львівська національна академія ветеринарної медицини ім.. С.З. Гжицького - Львів 1997. - 39 с ] . Спосіб полягає у визначенні в крові молодняка великої рогатої худоби при нітратно-нітритному навантаженні активності фермента каталази. За каталазою оцінюють стан системи антиоксидантного захисту організму молодняка великої рогатої худоби за нітратно-нітритного токсикозу. При цьому: - тварин, у яких активність каталази знаходиться в межах 6,28-6,71 одиниць, вважають клінічне здоровими; - тварин, у яких активність каталази знаходиться в межах 5,8-6,26, вважають частково пораженими впливом нітратів та нітритів, які потребують корекції системи антиоксидантної антиоксидантного захисту організму; - тварин, у яких активність каталази є меншою 5,78 одиниць, вважають пораженими впливом високого рівня нітратів та нітритів у кормах і з явищами незворотного порушення обміну речовин. Недоліком даного способу є недостатня його точність, оскільки він не повністю відображає стан антиоксидантної системи крові молодняка великої рогатої худоби тому, що за одним показником важко судити про стан антиоксидантної системи організму при нітратно-нітритному токсикозі. Заявлений нами спосіб усуває недоліки і повністю відображає стан антиоксидантної системи крові молодняка і забезпечує об'єктивну оцінку негативного впливу нітратів і нітритів на організм молодняку великої рогатої худоби. В основу корисної моделі поставлено завдання розробити точний і об'єктивний спосіб виявлен ня і оцінки ступеня негативного впливу нітратів і нітритів на організм молодняку великої рогатої худоби, зручний і доступний у застосуванні, економічно вигідний для господарств, у яких він застосовується. Технічний результат досягають шляхом оцінки стану системи антиоксидантного захисту за активністю ферментів крові додатково визначають ферментну активність глутатіонредуктази, глутатіонпероксидази та глюкозо-6-фосфатде гідроген аз и і за комплексною картиною активності ферментів судять про ступінь негативного впливу нітратного навантаження, при цьому: - тварин, у яких активність каталази знаходиться в межах 6,28-6,75 одиниць, глутатюнпероксидази в межах 34,6-38,4нмоль NADPH/хв. на 1мг білка, активність глутатіонредуктази - в межах 1,49-1,64нмоль NADPH/хв. на 1мг білка, активність глюкозо-6-фосфатдегідрогенази - в межах 0,7050,775нмоль NADPH/хв. на 1мг білка, вважають клінічно здоровими; - тварин, у яких активність каталази знаходиться в межах 5,8-6,26 одиниць, глутатіонпероксидази - в межах 20,5-33,0нмоль NADPH/хв. на 1мг білка, активність глутатіонредуктази - в межах 0,65-1,46нмоль NADPH/хв. на 1мг білка, активність глюкозо-6-фосфатдегідрогенази - в межах 0,520,699нмоль NADPH/хв. на 1мг білка, вважають частково пораженими впливом нітратів та нітритів, такими, які потребують корекції1 системи антиоксидантного захисту організму застосуванням природних або синтетичних антиоксидантів, вітамінів; - тварин, у яких активність каталази є меншою 5,78 одиниць, глутатіонперокеидази є меншою 20,0нмоль NADPH/хв. на 1мг білка, активність глутатіонредуктази - меншою 0,60нмоль NADPH/хв. на 1 мг білка, активність глкжозо-6фосфатдегідроге нази меншою 0,50нмоль NADPH/хв. на 1мг білка, вважають пораженими впливом високого рівню нітратів і нітритів у кормах і з явищами незворотного порушення обміну речовин. Каталаза відновлює Н2О2 до води. До активного центру ферменту входить трьохвалентне залізо, протопорфірін, який взаємодіє з перекисом водню за каталазним, або по пероксидазним механізмом, в залежності від концентрації субстрату. Глутатіонредуктаза входить до складу глутатіонової системи антиоксидантного захисту. Даний фермент не каталізує знешкодження радикалів кисню та продуктів лероксидацґі ліпідів, проте активність глутатіонової системи антиоксидантного захисту у значній мірі залежить від інтенсивності відновлення глутатіону. Глутатіонредуктаза забезпечує відновлення глутатіону за допомогою NADPH-H, NADPH, що виступають донорами водню. Глутатіонпероксидаза - каталізує розклад гідроперекисів ліпідів нерадикальним шляхом за допомогою глутатіону відновленого, а саме каталізує розпад перекису водню і окислює глутатіон. Ґлутатіонпероксидаза разом з іншими антиоксидантами сприяє видаленню первинних продуктів частково редукованого кисню. Глюкозо-6-фосфатдегідрогеназа - пусковий ензим пентозофосфатного циклу окислення вугле S 7729 водів як джерела відновленої форми NADPH та 0,775нмоль NADPH/хв. на 1мг білка, вважають пентозних основ для синтезу нуклеїнових кислот. клінічно здоровими; Дія нітритів на організм тварин супроводжу- тварин, у яких активність каталази знахоється утворенням в крові метгемоглобіну, де двохдиться в межах 5,8-6,26 одиниць, глутатюнпероквалентне залізо гемоглобіну окислюється до сидази - в межах 20,5-33,Онмоль NADPH/хв. на 1мг трьохвалентного. Процес окислення гемоглобіну білка, активність глутатіонредуктази - в межах реалізується через взаємодію його оксиформи з 0,65-1,46нмоль NADPH/хв. на 1мг білка, активність нітрит-Іоном по ланцюговому шляху. При окисленглюкозо-6-фосфатдегідрогенази - в межах 0,52ні гемоглобіну утворюється цілий ряд радикальних 0,699нмоль NADPH/хв. на 1мг білка, вважають метаболітів, які є активними окисниками біологіччастково пораженими впливом нітратів та нітритів, них субстратів, надають виражену цитотоксичну які потребують корекції системи антиоксидантного дію, ІНІЦІЮЮТЬ процеси перекисного окислення лізахисту організму, застосуванням природних або підів. В процесі окислення оксигемоглобіну активні синтетичних антиоксидантів, вітамінів; форми кисню включаються як безпосередні учас- тварин, у яких активність каталази є меншою ники елементарних стадій, продуценти токсичного 5,78 одиниць, глутатюнпероксидази є меншою для організму перекису водню, також які прийма20,0нмоль NADPH/хв. на 1мг білка, активність глують участь в реакціях окиснення оксигемоглобіну. татіонредуктази - меншою О.бОнмоль NADPH/хв. Даному патологічному процесу запобігає багатона 1 мг білка, активність глюкозо-6компонентна система антиоксидантного захисту фосфатдегідрогенази - меншою 0,50 нмоль організму. Велику роль відіграє каталаза, глутатіоNADPH/хв. на 1 мг білка, вважають пораженими нова система (Глутатіонредуктаза, Глутатіонперовпливом високого рівню нітратів і нітритів у кормах ксидаза, глкжозо-6-фосфатдепдрогеназа). ї з явищами незворотного порушення обміну речовин. Отже, зазначений нами спосіб забезпечує більш точну оцінку ступеню негативного впливу Отже, заявлене технічне рішення не випливає нітратів і нітритів на організм молодняку великої явним чином з рівня техніки, що дозволяє зробити рогатої худоби. висновок про його ВІДПОВІДНІСТЬ критерію корисної моделі - "винахідницький рівень". При проведені патентно-інформаційного пошуку авторами і заявником виявлено технічне ріКорисна модель належить до галузі ветеринашення [Гуфрій Д.Ф. // Роль шлунково-кишкового рної медицини, зокрема ветеринарної токсикології, тракту молодняка великої рогатої худоби у патогеа саме до способів оцінки ступеню негативного незі нітратно-нітритного токсикозу: Автореферат впливу нітратно-нітритного навантаження на оргадис. док. вет. наук: 16.00.10, 16.00.04 / Львівська нізм молодняку великої рогатої худоби. Заявлений національна академія ветеринарної медицини ім. спосіб може бути використаний у господарствах із С.З. Гжицького - Львів 1997. - 39 с], що містить різними формами власності, що вирощують молонайбільшу кількість суттєвих ознак, спільних із дняк великої' рогатої худоби в умовах нітратнозаявленим способом: спосіб базується на аналізі нітритного навантаження, тобто при підвищенні стану системи антиоксидантного захисту за активрівня нітратів і нітритів у кормах, а тому заявлений ністю ферментів крові, зокрема каталази. спосіб відповідає критерію корисної моделі "промислова придатність". Але наявність зазначених спільних із прототипом ознак недостатня для одержання технічного Отже, заявлене технічне рішення є новим, має результату, який забезпечує заявлений спосіб. винахідницький рівень, промислове придатне, тобто відповідає всім умовам патентоспроможності Технічних рішень, які б за сукупністю ознак покорисної' моделі відповідно до статті 7 розділу II вністю б співпадали із заявленим, не виявлено. "Закону України про охорону прав на винаходи І Це дозволяє зробити висновок про ВІДПОВІДкорисні моделі" №1771 - III, 2000. НІСТЬ заявленого технічного рішення критерію корисної моделі "новизна". Заявлений спосіб здійснюють наступним чиВ патентнШ і науково-технічній літературі не ном: знайдено технічних рішень, в яких були б описані У тваринницьких господарствах молодняк вевідомості про ознаки, що відрізняють заявлений ликої рогатої худоби, яких знаходився в умовах спосіб від прототипу і забезпечують досягнення нітратно-нітритного навантаження, одержуючи технічного результату: виявлення оцінки ступеню тривалий час корми з підвищеною КІЛЬКІСТЮ нітранегативного впливу нітратів і нітритів на організм тів для виявлення і оцінки ступеню негативного молодняку великої рогатої худоби здійснюють, впливу нітратів і нітритів на організм молодняку аналізуючи ферментну активність системи антиоквеликої рогатої худоби відбирають кров у тварин сидантного захисту крові організму, додатково різних вікових груп. У крові визначають: каталазу визначаючи активність глутатіонредуктази, глута(за методом Баха і Зубкової), глутатіонпероксидатіонпероксидази та глюкозо-6зу та глутатюнредуктазу [за методом В.В. Лемешко і ін., Н. Siens], глюкозо-6-фосфатдегідрогеназу фосфатдегідрогенази і за комплексною картиною [по методу N.Z. Baquezetal]. активності ферментів судять про ступінь негативного впливу нітратного навантаження, при цьому: Аналіз одержаних результатів здійснюють наступним чином1- тварин, у яких активність катала- тварин, у яких активність каталази знахози знаходиться в межах 6,28-6,75 одиниць, глутадиться в межах 6,28-6,75 одиниць, глутатіонпероктюнпероксидази в межах 34,6-38,4нмоль сидази в межах 34,6-38,4нмоль NADPH/хв. на 1мг NADPH/хв. на 1мг білка, активність глутатіонредубілка, активність глутатіонредуктази - в межах ктази - в межах 1,49-1,64нмоль NADPH/хв. на 1мг 1,49-1,64нмоль NADPH/хв. на 1мг білка, активність біпка, активність глюкозо-6-фосфатдегідрогенази глюкозо-6-фосфатдепдрогенази - в межах 0,705 7729 в межах 0,705-0,775нмоль NADPH/хв. на 1мг білка, вважають клінічно здоровими; - тварин, у яких активність каталази знаходиться в межах 5,8-6,26 одиниць, глутатіонпероксидази - в межах 20,5-33,0нмоль NADPH/хв. на 1мг білка, активність глутатюнредуктази - в межах 0,65-1,46нмоль NADPH/хв. на 1мг білка, активність глюкозо-6-фосфатдегідрогенази - в межах 0,520,699нмоль NADPH/хв. на 1 мг білка, вважають частково пораженими впливом нітратів та нітритів, які потребують корекції системи антиоксидантного захисту організму, застосуванням природних або синтетичних антиоксидантів, вітамінів; - тварин, у яких активність каталази є меншою 5,78 одиниць, глутатіонпероксидази є меншою 20,0нмоль NADPH/хв. на 1мг білка, активність глутатіонредуктази - меншою 0,60нмоль NADPH/хв. на 1 мг білка, активність глюкозо-6фосфатдепдрогенази меншою 0,50нмоль NADPH/хв. на 1мг білка, вважають пораженими впливом високого рівню нітратів і нітритів у юрмах ї з явищами незворотного порушення обміну речовин. Ефективність заявленого способу та його переваги перед прототипом підтверджені прикладом конкретного виконання. У господарстві СТзОВ "Дружба" Буського району. Львівської області було відібрано ЗО телят 8 шестимісячного віку. Було створено 6 груп по 5 тварин у кожній. Тварини контрольної групи знаходились на звичайному раціоні, згідно норм ВІТА. Тваринам дослідних груп створювали штучно нітратне навантаження, а саме: Дослідна 1 - тваринам згодовували з комбікормом нітрат натрію у дозі 0,1гМОз7кг маси тіла один раз на добу протягом місяця; Дослідна 2 - тваринам згодовували з комбікормом нітрат натрію у дозі 0,2г№Оз7кг маси тіла один раз на добу протягом місяця; Дослідна 3 - тваринам згодовували з комбікормом нітрат натрію у дозі 0,3rNO37Kr маси тіла; Дослідна 4 - тваринам згодовували з комбікормом нітрат натрію у дозі 0,4гГ\ІОз7кг маси тіла; Дослідна 5 - тваринам згодовували з комбікормом нітрат натрію у дозі 0,5гІЧОз /кг маси тіла. Кров для аналізу брали з яремної вени на 1, З, 6, 9 годину після згодовування нітрату натрію. Активність глутатіонпероксидази і глутатіонредуктази визначали за методикою В.В. Лемешко і ін., активність глюкозо-6-фосфатдегідрогенази визначали за методикою N.Z. Baquezetal, активність каталази - за методикою Баха і Зубкової. Основні показники активності ферментів як дослідних так і контрольної груп подані у таблицях 1 і 2. Таблиця 1 Активність ферментів контрольної групи Доза гІМОз/кг 0,1 Активність ферментів Ґлутатюнпероксидаза Глутатіонредуктаза Глюкозо-6-фосфатдегідрогенназа Каталаза Одиниці виміру 37,0±1,4 1,58±0,6 0,73+0,025 6,50+0,16 нмоль NADPH/хв. на 1 мг білка нмоль NADPH/хв. на 1 мг білка нмоль NADPH/хв. на 1 мг білка одиниці (прототип) Примітка: у цій і наступних таблицях ступінь вірогідності порівняно з даними контрольної групи Рі