Спосіб спектрофотометричного визначення рутину

Реферат: Спосіб спектрофотометричного визначення рутину включає приготування р озчину об'ємом 25 мл жовто-зеленої сполуки аналіту з реагентом - осмієм(ІV) та натрію хлоридом, доводять його pH розведеними розчинами хлоридної кислоти та натрію гідроксиду і вимірюють світлопоглинання. Як аналіт використовують рутин у межах -5 концентрацій 0,24-2,44 мкг/мл, а концентрація іонів Os(IV) становить 4,0×10 М, при цьому рН доводять до значення 3,5 чи 5,0 та вимірюють світлопоглинання через 15 -20 хв. на фотоколориметрі (λ=400 нм) чи спектрофотометрі (λ=420 нм) з l=1 -3 см. UA 90458 U (12) UA 90458 U UA 90458 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до галузі аналітичної хімії і може використовуватися при визначенні одного із численних представників групи флавоноїдів - рутину (3-рамноглікозид3,5,7,3',4'-пентаоксифлавону) в модельних розчинах різного складу, а також у реальних складних об'єктах - лікарських формах. Відомий спосіб фотометричного визначення рутину з алюмінію хлоридом [Саламаха В.В. Розробка методів виділення рутину і кверцетину із квіток софори японської / В.В. Саламаха, О.О. Протункевич, К.О. Присяжнюк // Праці Одес. нац. політехп. ун-ту. - 2012. - Вип. 1(38). - С. 286-290], суть якого полягає в отриманні забарвленої сполуки рутину з алюмінію хлоридом у середовищі хлоридної кислоти через 20 хв. після змішування реагентів, максимальне світлопоглинання якої спостерігається у діапазоні 365…400 нм. Проте, цей спосіб не є селективний відносно інших флавоноїдів, які також утворюють комплекси із алюмінію хлоридом. Відомий спосіб визначення рутину із використанням хроматографії [Алексеева Μ.А., Эллер К.И., Арзамасцев А.П. Определение полифенольмых компонентов хмеля с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ // Химко-фармацевтический журн. - 2004. - № 12. - С. 39-41], що грунтується на хроматографуванні отриманних водно-спиртових екстрактів рослинної сировини з використанням попередньо підібраних розчинників. Недоліком способу є складність і тривалість процедури аналізу, а також використання дорогої апаратури. Найближчим аналогом є спосіб визначення кверцетину, який також відноситься до групи флавоноїдів за допомогою іонів осмію(ІV) [Михалина Г.М. Спектрофотометричне визначення кверцетину у гранулах кверцетину / Г.М. Михалина, Т.Я. Врублевська, О.Я. Коркуна // Фармаком. - 2009. - № 4. - С. 50-54], за яким після змішування розчинів нагрію хлориду, Os(IV) і кверцетину, встановлюють кислотність середовища одержаного розчину рН=10,0 на рН-метрі та доводять до мітки вибраного об'єму дистильованою водою, 3 хв. нагрівають розчини на киплячій водяній бані (98±1 °C), охолоджують їх до кімнатної температури, після чого вимірюють світлопоглинання одержаної забарвленої сполуки осмію (IV) з кверцетином при довжині хвилі 440 нм навпроти розчину порівняння на фотоколориметрі чи спектрофотометрі, використовуючи кювети l=1-5 cм. Такий спосіб є достатньо простим і не вимагає складної пробопідготовки та дорогої апаратури, проте ним визначається лише кверцетин у лужному середовищі. В основу корисної моделі поставлено задачу розробки способу спектрофотометричного визначення рутину, шляхом використання іонів осмію (IV) у кислому середовищі, що дасть змогу спростити такий процес у складних об'єктах. Поставлена задача вирішується тим, що у способі спектрофотометричного визначення рутину, за яким готують розчин об'ємом 25 мл жовто-зеленої сполуки аналіту з реагентом осмієм(ІV) та натрію хлоридом, доводять його pH розведеними розчинами хлоридної кислоти та натрію гідроксиду і вимірюють світлопоглинання, який відрізняється тим, що як аналіт використовують рутин у межах концентрацій 0,24-2,44 мкг/мл, а концентрація іонів Os(IV) -5 становить 4,0×10 М, при цьому рН доводять до значення 3,5 чи 5,0 та вимірюють світлопоглинання через 15-20 хв. на фотоколориметрі (λ=400 нм) чи спектрофотометрі (λ=420 нм) з l=1-3 см. Флавоноїдами називається група природних сполук, похідних 2-фeнілбензопірона. Особливо багаті флавоноїдами вищі рослини, що відносяться до різноманітних родин (бобові, губоцвіті, розцвіті та інші) та багато також зустрічаються у нижчих рослинах (водоростях, мохах), у деяких комахах та мікроорганізмах. Лікарська сировина і чисті флавоноїди знаходять різноманітне застосування. Вони беруть участь в окисно-відновних процесах, виконують антиоксидантні функції, проявляють Р-вітамінну активність, зменшують крихкість кровоносних капілярів, посилюють дію аскорбінової кислоти. Флавоноїди мають жовчогінну, спазмолітичну, діуретичну, кардіопротекторну, радіопротекторну, гіпоазотемічну, гіпоглікемічну, седативну, естрогенну,гіпотензивну та протизапальну дію, що дозволяє використовувати їх для створення ефективних лікарських препаратів. Із літературних джерел відомо про використання іонів осмію(ІV) як спектрофотометричного реагента для визначення морину та кверцетину [Михалина Г.М. Спектрофотометрія флавоноїдів морину, кверцетину та лютеоліну з деякими платиноїдами: дис. на здобуття к.х.н:/ Михалина Галина Мирославівна. - Львів, 2012. - 207 с.]. Автори вперше використали іони осмію(ІV) для спектрофотометричного визначення рутину, що дозволяє проводити аналіз об'єктів, які містять співмірні кількості інших флавоноїдів, зокрема морину та кверцетину, а використання запропонованих операцій дасть змогу спростити процес аналізу та підвищити селективність визначення рутину. 1 UA 90458 U 5 10 15 20 25 Фіг. 1. Електронні спектри світлопоглипапня рутину (крива 1) та його сполуки з іонами осмію(ІV) (крива 2) при рH=5,0 у присутності різних кількостей кверцетину (крива 3 -5 Срут:Скв=1:0,5, крива 4 - Срут:Скв=1:1, крива 5 - Срут:Скв=1:2, крива 6 - Срут:Скв=1:5), COs(iv)=4,0×10 -5 Μ, Срут=4,0×10 Μ. Фіг. 2. Електронні спектри світлопоглинання рутину (крива 1) та його сполуки з іонами осмію(ІV) (крива 2) при рH=5,0 у присутності різних кількостей морину (крива 3 - Срут:Смор=1:0,5, -5 крива 4 Срут:Смор=1:1, крива 5 - Срут:Смор=1:2, крива 6 Срут:Смор=1:5), CОs(ІV)=4,0×10 Μ, -5 Срут=4,0×10 Μ. Спосіб можна проілюструвати наступними прикладами після таких послідовних операцій: для сталої іонної сили додають розчин натрію хлориду, розчин Os(IV), вносять аліквотну частину спиртового досліджуваного розчину що містить рутин, доводять рН розчинів до 5,0 чи 3,5 (в залежності від досліджуваного об'єкта). Вимірювання проводять на фотоколориметрі КФК2 при довжині хвилі λ=400 нм чи на спектрофотометрі SPECORD Μ 40 при λ=420 нм. Спосіб спектрофотометричного визначення рутину у присутності іонів осмію(ІV): у мірну колбу місткістю 25 мл послідовно вносять 1,0 мл 1М розчину натрію хлориду, додають 1,0 мл -3 1,0×10 Μ розчину осмію(ІV) і вносять аліквотну частину досліджуваного розчину рутину в межах концентрацій 0,24-2,44 мкг/мл у кінцевому об'ємі. Доводять кислотність середовища отриманого розчину на рН-метрі за допомогою розведених розчинів хлоридної кислоти і натрію гідроксиду до рН=5,0 чи 3,5. Доливають у колбу до мітки дистильовану воду і розчин перемішують. Вимірюють інтенсивність світлопоглинання досліджуваного розчину відносно розчину порівняння - "холостої проби" на фотоколориметрі (λ=400 нм) чи спектрофотометрі (λ=420 нм), використовуючи кювети l=1-3 см. Концентрацію рутину знаходять за попередньо збудованим градуйованим графіком або способом порівняння. Отримані результати досліджень, наведені у таблицях 1, 2, підтверджують переваги запропонованого способу. Метрологічні характеристики способу спектрофотометричного визначення рутину наведено в таблиці 1. Таблиця 1 Метрологічні характеристики спектрофотометричного визначення рутину, n=3, Ρ=0,95 Межі лінійності, мкг/мл 0,24-2,44 30 35 40 Рівняння графіка, Срут, мкг/мл А400=0,061+0,089×Срут Сн, мкг/мл 0,5 R 0,996 Як видно із таблиці 1, лінійність для спектрофотометричного визначення рутину у -5 присутності 4,0×10 Μ осмію(ІV) зберігається в межах одного порядку. Встановлено, що, у порівнянні з іншими флавоноїдами, осмій(IV) вступає у взаємодію лише з рутином у кислому середовищі (pH 2,5-8,5), що є перспективним для селективного визначення рутину. На фіг. 1 і фіг. 2 наведені електронні спектри світлологлинання системи Os(IV)-pyтин у присутності кверцетину і морину. Одержані дані вказують, що визначенню рутину заважає кверцетин у співвідношенні 1:2 та морин у співвідношенні 1:1 (λ=420 нм). При вищих концентраціях флавоноїдів селективність немає місця. Якщо визначення проводити у більш кислій області (pН=3,5), то селективність можна дещо покращити. Достовірність способу спектрофотометричного визначення рутину перевіряли способом "введено-знайдено" (табл. 2). Таблиця 2 Перевірка правильності методики визначення рутину способом "введено - знайдено", n=3, Ρ=0,95 № п/п Введено, мг/мл 1 0,61 3 1,22 Знайдено, мг/мл 0,63 0,62 0,63 1,20 1,21 1,18 X X S  t n , мг/мл Sr, % 0,627 0,92 1,197 2 0,627±0,01 1,197±0,03 1,28 UA 90458 U Наведені результати підтверджують отримання передбачуваного технічного результату. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 5 10 Спосіб спектрофотометричного визначення рутину, за яким готують р озчин об'ємом 25 мл жовто-зеленої сполуки аналіту з реагентом - осмієм(ІV) та натрію хлоридом, доводять його pH розведеними розчинами хлоридної кислоти та натрію гідроксиду і вимірюють світлопоглинання, який відрізняється тим, що як аналіт використовують рутин у межах концентрацій 0,24-2,44 мкг/мл, а концентрація іонів Os(IV) становить -5 4,0×10 М, при цьому рН доводять до значення 3,5 чи 5,0 та вимірюють світлопоглинання через 15-20 хв. на фотоколориметрі (λ=400 нм) чи спектрофотометрі (λ=420 нм) з l=1-3 см. 3 UA 90458 U Комп’ютерна верстка І. Скворцова Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 4