Спосіб визначення компонентного складу та кількісного аналізу бета-оксиетильованих похідних рутину в субстанції типу троксевазин, венорутон та венорутинол і в лікарських засобах на їх основі

УКРАЇНА (10) UA (ID 34630 (із) А (51) б G01 N30/28, 21/00 МІНІСТЕРСТВО ОСВІТИ І НАУКИ УКРАЇНИ ДЕРЖАВНИЙ ДЕПАРТАМЕНТ ІНТЕЛЕКТУАЛЬНОЇ ВЛАСНОСТІ (54) СПОСІБ ВИЗНАЧЕННЯ ОКСИЕТИЛЬОВАНИХ похідних ОПИС ДО ДЕКЛАРАЦІЙНОГО ПАТЕНТУ НА ВИНАХІД КОМПОНЕНТНОГО СКЛАДУ ТА КІЛЬКІСНОГО видається під відповідальність власника патенту АНАЛІЗУ Р РУТИНУ В СУБСТАНЦІЇ ТИПУ ТРОКСЕВАЗИН, ВЕНОРУТОН ТА BE НОРУТИНОЛ І В ЛІКАРСЬКИХ ЗАСОБАХ НА ЇХ ОСНОВІ (21)98095044 (22)28.09.1998 (24) 15.03.2001 (46) 15.03 2001, Бюл. № 2, 2001 р. (72) Безпалько Людмила Василівна, Шаламай Анатолій Севостянович, Макітру* Василь Лукич, Кітам Олег Ейндріфович, Сидоренко Віталіна Марківна, Кобилінська Валентина Іванівна (73) НАУКОВО-ВИРОБНИЧИЙ ЦЕНТР "БОРЩАПВСЬКИЙ ХІМІКО-ФАРМАЦЕВТИЧНИЙ ЗАВОД" (57) 1. Спосіб визначення компонентного складу та кількісного аналізу |3-оксиетильованих похідних рутину в субстанції типу Троксевазин, Венорутон та Венорутинол і в лікарських засобах на їх основі, що включає спектрофотометричний кількісний аналіз та застосування хроматографії, який відрізняється тим. що для виявлення компонентного складу застосовують високоефективну рідинну хроматографію (ВЕРХ), а кількісний аналіз включає використання рутину, як стандартного робочого зразка та меркуриметричне визначення вмісту можливої домішки натрію хлориду в препараті 2. Спосіб визначення компонентного складу та кількісного аналізу (3-оксиетильованих похідних рутину в субстанції типу Троксевазин, Венорутон та Венорутинол і в лікарських засобах на їх основі по п.1, який відрізняється тим, що проведення спектрофотометричного аналізу проводять в інтервалі хвиль вбирання від \ 300 нм до 310 нм, де оптична щільність розчинів Венорутинолу та Рутину прямо пропорційна їх концентрації в досліджуваних розчинах. 3. Спосіб визначення компонентного складу та кількісного аналізу Э-оксиетильованих похідних рутину в субстанції типу Троксевазин, Венорутон та Венорутинол і в лікарських засобах на їх основі по п.1, який відрізняється тим, що обчислення вміс Винахід відноситься до фармацевтичної хімії і стосується вдосконалення способу визначення компонентного складу та кількісного аналізу Венорутинолу в субстанції і в лікарських засобах на його основі ту Венорутинолу, в відсотках, проводять за фор« мугюю: У_ D ) X t n o x 10000 де: Do - оптична щільність розчину робочого стандартного зразка рутину; D^ • оптична щільність розчину досліджуваного препарату; т о - маса наважки робочого стандартного зразка рутину, в грамах, т « - маса наважки препарату, в грамах, W - втрата в масі при висушуванні, в відсотках 4. Спосіб визначення компонентного складу та кількісного аналізу р*-оксиетильованих похідних рутину в субстанції типу Троксевазин, Венорутон та Венорутинол і в лікарських засобах на їх основі по п.1, який відрізняється тим, що знайдення вмісту можливої домішки натрію хлориду, в відсотках, проводять меркуриметрично і обчислюють за формулою. v ( V , - V 2 ) x K x 0,0005844x100 ** m ' де- Vi - об'єм 0,01 N розчину ртуті окисної нітрату, витрачений на титрування розчину досліджуваного зразка, в мілілітрах, V 2 - об'єм 0,01 N розчину ртуті окисної нітрату, витрачений на титрування розчину в контрольному досліді, в мілілітрах; К • уточнюючий коефіцієнт до молярності 0.01 N розчину ртуті окисної нітрату, 0,0005844 - кількість натрію хлористого, що відповідає 1 мл 0,01 N розчину ртуті окисної нітрату, в грамах, m - маса наважки препарату, в грамах Субстанція Венорутинол являє собою стандартну суміш із моно-, ди-, три- та тетра-О-р-гідроксиетилрутозидів і є аналогом відомих лікарських засобів, таких як Троксевазин та Венорутон. Він змен о со 4 3,16-3,30 На хроматограмі досліджуваного розчину допускається присутність додаткового піку домішки рутину з відносним часом утримування біля 3,20, що має однаковий час утримування з піком РСЗ рутину, (час утримування три-О-3',4',7 -гідроксиетилрутозиду приймають за 1) Площа додаткового піку рутину не повинна бути більшою за площу піку на хроматограмі розчину РСЗ рутину (не більше 4,0 %). Результати аналізу вважаються достовірними, якщо виконуються вимоги тесту "Перевірка придатності хроматографічної системи". Примітки. 1. Приготування розчину РСЗ рутину Біля 0,04 г (точна наважка) рутину виробництва фірми "Helm AG" (DAB 10) чи стандартного зразка рутину, атестованого Фармакопейним комітетом, попередньо висушеного при температурі від 130 до 135Х до постійної маси, поміщають в мірну колбу місткістю 100 мл, розчиняють в 50 мл 96 % спирту, доводять обсяг розчину 96 % спиртом до мітки і перемішують (розчин А). 2 мл розчину А поміщають в мірну колбу місткістю 50 мл, доводять обсяг розчину рухливою фазою до мітки і перемішують Розчин використовується свіжоприготовленим. 2. Приготування розчинів РСЗ венорутинолу і рутину, які використовуються для перевірки придатності хроматографічної системи. По 5 мл роз чину препарату і розчину А РСЗ рутину поміщають в колбу місткістю 10 мл і перемішують. Розчин використовують свіжоприсотовленим 3. Перевірка придатності хроматографічної системи Для перевірки придатності хроматографічної системи перед хроматографуванням досліджуваного розчину і розчину РСЗ рутину 20 мкл розчину РСЗ венорутинолу і рутину хроматографують, отримуючи не менше ніж 5 хроматограм, при умовах, описаних вище. Хроматографічна система вважається придатною, якщо виконуються наступні умови: - ефективність хроматографічної колонки, розрахована за піком три-О-3',4',7 - гідроксиетилрутозиду на хроматограмах розчину РСЗ венорутинолу і рутину повинна бути не менше 1500 теоретичних тарілок (ДФ XI, вип. 1, с 10SV - ступінь розділення піків, розрахований для піків три-О-3',4 ',7-гідроксиетилрутозиду, ди-О-4 ',7гідроксиетилрутозиду і рутину на хроматограмах розчину РСЗ венорутинолу і рутину повинна бути не меншою 2,0 (ДФ XI, вип. 1, с 105); - відносне стандартне відхилення, розраховане для площі піків три-О-3',4',7-гідроксиетилрутозиду. ди-О-4', 7-гідроксиетилрутозиду і рутину на хроматограмах розчину РСЗ венорутинолу і рутину повинне бути не більше ± 2 %. (ДФ XI, вип. 1, с 199); 34630 - коефіцієнт асиметрії піків, розрахований за піками три-0~3',4',7-гідроксиеіилрутозиду. ди-О4 .7-гілроксиетилрутозиду та рутину на хроматограмах розчину РСЗ венорутинолу та рутину, повинен бути не меншим 0,95 і не більшим за 1,3 Коефіцієнт асиметрії піку (Т) розраховують за формулою: Т= Вимірюють оптичну щільність одержаного розчину на спектрофотометрі при довжині хвилі 305 нм в кюветі з шаром завтовшки 10 мм, використовуючи в якості розчину порівняння 96 % спирт Паралельно вимірюють оптичну щільність розчину робочого стандартного зразка (РСЗ) рутину Вміст венорутинолу (X) в препараті в перерахунку на висушену речовину, в відсотках, обраховують за формулою: 1*0,05 2f де. Moos - ширина піку на висоті 5 % від базової лінії, в міліметрах; f - віддаль від початку піку на висоті 5 % від базової лінії до перпендикуляру, проведеного з його вершини, в міліметрах. Приклад 2. Кількісне визначення венорутинолу в субстанції! венорутинопу. Біля 0.04 г (точна наважка) препарату поміщають в мірну колбу місткістю 100 мл, розчиняють в 70 мл води, доводять обсяг розчину водою до мітки і перемішують 5 мл отриманого розчину поміщають в мірну колбу місткістю 50 мл, додають 0,1 мл кислоти хлористоводневої розведеної, доводять обсяг розчину 96 % спиртом до мітки і перемішують X - °іхтох100х5х50хі00х100 ~ D0~x~rn7* 100 х 5 х 50 х (100 ~ W j = D ^ n ^ x 10000 0охт,х(100-УУ)' де: Di- оптична щільність досліджуваного розчину; Do- оптична щільність розчину РСЗ рутину, т і - маса наважки препарату, в грамах; n v маса наважки РСЗ рутину, в граммах: W - втрата в масі при висушуванні, в відсотках Конкретні приклади кількісного визначення венорутинолу в субстанції Венорутинолу приведені в таблиці 1 Таблиця 1 Кількісне визначення венорутинолу в субстанції № п/п Маса наважки Оптична щільність (0) W (%) Знайдено И 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. РСЗ рутину 0,0421 0,0419 0,0410 0,0412 0,0420 0,0405 0,0408 0,0403 0,542 0,539 0,524 0,531 0,541 0,515 0,526 0.586 4,43 4,43 4,43 4,43 4,43 4,43 4,43 — 92,64 92,57 91,46 92,74 92,69 91,5 92,77 99,85 Приклад 3. Кількісне визначення венорутинолу в ВенорутиНол-гєлі. Біля 2,0 г (точна наважка) препарату поміщають в конічну колбу місткістю 100 мл, додають 60 мл води, перемішують на магнітній мішалці до повного розчинення гелю, кількісно переносять за допомогою ЗО мл води в мірну колбу місткістю 100 мл, доводять обсяг розчину водою до мітки і перемішують. 5 мл отриманого розчину поміщають в мірну колбу місткістю 50 мл, додають 0,1 мл кислоти хлористоводневої розведеної, доводять обсяг розчину 96 % спиртом до мітки і перемішують. Вимірюють оптичну щільність отриманого розчину на спектрофотометрі при довжині хвилі 305 нм в кюветі з шаром завтовшки 10 мм, використовуючи в якості розчину порівняння 96 % спирт. - (%) Паралельно вимірюють оптичну щільність розчину РСЗ рутину. Вміст венорутинолу (X) в 1 г препарату, в грамах, обраховують за формулою: X р * х т о х 100x50x5 _ D o x m t x 100x50x5 де: Di- оптична щільність досліджуваного розчину; Do- оптична щільність розчину РСЗ рутину; т і - маса наважки препарату, в грамах; n v маса наважки РСЗ рутину, в грамах. Вміст венорутинолу в 1 г препарату повинен бути від 0.019 до 0,021 г. Конкретні приклади кількісного визначення венорутинолу в Венорутиноп-гелі приведені в таблиці 2. 34630 Таблиця 2 Кількісне визначення венорутинолу в гелі ш Маса наважки Оптична щільність п/п И (D) г (%) 1. 2,0384 0,616 0.02005 100,25 2. 2,0411 0,612 0,01989 99,45 3. 2,0614 0,619 0.01992 99,6 4. 2,0167 0,606 0,01993 99.65 5. 2,0785 0,624 0,01992 99.6 6. 2,0916 0,634 0,02011 100,5 РСЗ рутину 0.0400 0.603 Приклад 4. Кількісне визначення венорутинолу в Венорутинол 0,3 в капсулах. Біля 0.04 г (точна наважка) розтертої маси вмісту капсул поміщають в мірну колбу місткістю 100 мл, розчиняють в 70 мл води, доводять обсяг розчину водою до мітки і перемішують 5 мл отриманого розчину поміщають в мірну колбу місткістю 60 мл, додають 0.1 мл кислоти хлористоводневої розведеної, доводять обсяг розчину 96 % спиртом до мітки і перемішують Вимірюють оптичну щільність отриманого розчину на спектрофотометрі при довжині хвилі 305 нм в кюветі з шаром завтовшки 10 мм, використовуючи в якості розчину порівняння 96 % спирт. Паралельно вимірюють оптичну щільність розчину робочого стандартного зразка (РСЗ) рутину. Знайдено Вміст венорутинолу (X) в капсулі, в грамах, обраховують за формулою: X — x m o x 100x5 х 50 xb , xmjx 1 0 0 x 5 x 5 0 D1 x m 0 x b де D r оптична щільність досліджуваного розчину; Do- оптична щільність розчину РСЗ рутину; т і - маса наважки препарату, в грамах, то- маса наважки РСЗ рутину, в грамах, b - середня маса вмісту капсули, в грамах Конкретні приклади кількісного визначення венорутинолу в Венорутинол-гелі приведені в таблиці 3. Таблиця З Кількісне визначення венорутинолу в Венорутинол 0,3 в капсулах Маса наважки Оптична щільність Знайдено п/п М 1. 0.0399 (D) 0,462 0.3029 2. 3. 4. , 0,0418 0,0417 0,0412 0,483 0,481 0.476 0,3024 0,3018 0,3029 5. Ь\ 0,0405 0,3805 0,468 0,3024 РСЗ рутину 0.0403 0.586 'Середню масу капсули визначають зважуванням 20 капсул з точністю до 0,001 г. Відхилення в масі окремих капсул допускається в межах і 10 % від середньої маси капсули. Примітки. Приготування розчину РСЗ рутину. Біля 0,04 г (точна наважка) рутину виробництва фірми "Helm AG" (DAB 10) або стандартного зразка рутину, атестованого Фармакопейним комітетом, попередньо висушеного при температурі від 130 до 135 "С до постійної маси, поміщають в мірну колбу місткістю 100 мл. розчиняють в 70 мл 96 % спирту при нагріванні на водяній'бані при 5055°С, охолоджують до кімнатної температури, доводять обсяг розчину 96 % спиртом до мітки і перемішують. 5 мл отриманого розчину поміщають в мірну колбу місткістю 50 мл, додають 0,1 мл кислоти хлористоводневої розведеної, доводять обсяг розчину 96 % спиртом до мітки і перемішують. Розчин використовують свіжоприготовленим. Визначення натрію хлористого. Біля 0,15 г (точна наважка) препарату, попередньо висушеного в вакуум-сушильній шафі при температурі від 100 до 105°С і залишковому тиску не вищому чим 30 мм рт ст до постійної маси, поміщають в колбу місткістю 250 мл, розчиняють в 50 мл води, додають 4 мл 0,2 М розчину кислоти азотної. 0.75 мл розчину дифенилкарбазону і титрують 0.01 N розчином ртуті окисної нітрату до зміни жовтого забарвлення розчину на синьо-фіалкове 34630 Паралельно проводять контрольний дослід Вміст натрію хлористого (X) в препараті, в відсотках, обраховують за формулою1 (у, - У 2 ) х К х 0,0005844 х 100 гп де W об'єм 0,01 N розчину ртуті окисної нітрату, витрачений на титрування досліджуваного розчину, в мілілітрах, V 2 - об'єм 0,01 N розчину ртуті окисної нітрату, витрачений на титрування в контрольному ДОСЛІДІ, в мілілітрах, К - уточнюючий коефіцієнт до молярности 0,01 N розчину ртуті окисної нітрату, 0,0005844 - кількість натрію хлористого, що відповідає 1 мл 0,01 N розчину ртуті окисної нітрату, в грамах, m - маса наважки препарату, в грамах. Вміст NaC! (натрію хлористого) в препараті повинно бути не більше 5 % Конкретні приклади кількісного визначення натрію хлористого в субстанції Венорутинолу приведені в таблиці 4. Кількісне визначення натрію хлористого в субстанції" Венорутинолу Таблиця 4 № піп Маса наважки препарату; ггЦг) Об'єм, витрачений на титрування; V,(wn) Об'єм, витрачений на титрування; Va(Mn) Уточнюючий коефіцієнт; К Знайдено, % 1 0,101 7,8 0,03 1,01 4,541 2 0,1237 9,5 0,03 1,01 4,519 3 0,1366 10,5 0,03 1,01 4,524 4 0,1256 0,1124 9,7 0,03 , 1,01 4,544 8,65 0,03 1,01 4,527 5 Примітки 1 Приготування 0,01 N розчину ртуп окисно! нітрату 0,17 г ртуті окисно»' нітрату поміщають в мірну колбу місткістю 100 мл, розчиняють в 0,5 мл 1 М розчину кислоти азотно*, доводять обсяг розчину водою до м«тки і перемішують Розчин використовують свіжо приготовленим ф Визначення титру Біля 0,15 г (точна наважка) натрію хлориду, двічі перекристалізованого з води » прожареного в тиглі при температурі вад 250 до 3 0 0 Х , поміщають в мірну колбу місткістю 500 мл, розчиняють в 300 мл води, доводять обсяг розчину водою до мітки і перемішують 50 мл отриманого розчину поміщають в плоскодонну копбу місткістю 250 мл, додають 0,3 мл розчину дифенилкарбазону і титрують приготовленим розчином ртуп окисно* нітрату до зміни рожево-жовтого забарвлення розчину на світло-бузковий Уточнюючий коефіцієнт обчислюють за першим способом 2 Приготування 1 М розчину кислоти азотної 69,0 мл концентрованої кислоти азотної (густина 1.40) поміщають в мірну колбу МІСТКІСТЮ 1 л, доводять обсяг розчину водою до мітки і старанно перемішують 3 Приготування 0 2 М розчину кислоти азотної 200 мл 1 М розчину кислоти азотної поміщають в мірну колбу МІСТКІСТЮ 1 л, доводять обсяг розчину водою до мітки і старанно перемішують Запропоноване технічне рішення приводить до підвищення точності визначення якісного та КІЛЬКІСНОГО складу фармацевтичної продукції Література. 1 Троксевазин (Troxevasinum) Инструктивно-методическое письмо МЗ УССР. Главное аптечное управление К , 1985, w 3, с 2 7 - 2 8 2 Троксевазин (Troxevasinum) Методические рекомендации по приготовлению, анализу и использованию лекарственных препаратов М. 1982, вып 5,с 57 3 Kuhnz, W., Zech. К., Lupp, R., Jung.G., Voelter.W , and Matzkies, F. Quantitative determination of O-(P-hydroxylethy!)-rutinosides in serum by hidh-performance liquid chromatography. Journal of Chromatography. Biomedical Application. 272, (1983), 333-340 4. Kuhnz, W , Jung, G., Voelter.W., Quantitative determination of O-((J-hydroxyethyl)-rutinosides in urine by hidh-performance liquid chromatography Proceedings of the International Bioflavonoid Symposium, Munich FRG. 1981. 5 Luc P Balant, Maurice Wermeille and Leslie A Griffiths Metabolism and pharmacokinetics of hydroxyethytated rutosides in animals and man Q. Rev. Drug Metab. Drug Interact. (1984), v. 5, №1,1- 24. 6 Болгарський Державний Стандарт на субстанцію Troxevasin 7 Министерство здравоохранения СССР Управление по внедрению новых лекарственных средств и медицинской техники Разрешение от 26 04 1977 г за № 215-1/69 о.проверке качества при импорте препарата "Венорутон, капсулы" ГХО "Фармахим", НРБ в соответствии с решением Фармакопейного комитета от 29 марта 1977 года по НТД за №42-110-77. 34630 M i l l e n n i u m Project Wane: Sample Name: Vial: Injection: Channel: Date Acquired: Saiepletfeight: kcq Meth Set: processinq Method: i n p l i Troxevasin txon^Jtjoa 1 2 РСЛ_35Э.0пв 0вЛ2/97 10:06:13 1.00000 troKe*as_353tg troxev«9 353 nth I n f o r m a t i o n Senple Type: Volume: Run Time: Date Processed: Dilution; Unfcnovn 20.00 15.0 etln 0в/12/97 10:21:40 1.00000 1-Ю 1.401.J0 1.00 9o.§o O.C0 0.40 0.20 0.00—I Min^tea • Ret Time (mln) 1 1.742 1675268 2 3 4 2.058 2.575 3.058 3.708 289613 558608 17652967 256742 5875707 Peak Results Height (uV) Area (uV*sec) 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 Name 4.058 4.642 4.825 5.458 5.792 6.208 6.658 7.342 8.792 10.175 10.592 1799810 1671870 70519 94916 1697526 51168 11609 512484 97096 489573 309618 25022 54407 . 1658701 20498 501894 140769 135489 4003 5980 113719 3843 794 25479 5448 19618 Int Type %Area % Height BV 5.11 10 23 W VV W W 0.88 1.70 0 83 1.80 54.83 0.68 16.59 4 65 VV VV 53.81 0.78 17.91 5.49 VV VV VV VV 5.10 0.21 0.29 5.17 VB BB 0.16 Q.04 1.56 0.30 BB BV VB 1.49 Рис. 1. Високоефективна рідинна хроматофафія зразку Венорутинолу. Тираж 50 екз. Відкрите акціонерне товариство «Патент» Україна, 88000, м. Ужгород, вул. Гагаріна, 101 (03122) 3 - 7 2 - 8 9 (03122) 2 - 5 7 - 0 3 4 48 0.13 0.20 3.76 0.13 0.03 0.84 0.18 0.65