Застосування едта і її солей для профілактики і лікування бактеріальних кишкових захворювань свиней і посилення ефектів антибіотиків, що виявляються при подібних захворюваннях

1. Застосування етилендіамінтетраоцтової кислоти або її солі, прийнятної для охорони здоров'я тварин, для профілактики і/або лікування дизентерії свиней, викликаної Brachyspira hyodysenteriae. 2. Застосування етилендіамінтетраоцтової кислоти або її солі, прийнятної в цілях охорони здоров'я тварин, для підвищення активності антибіотиків, що застосовуються при лікуванні дизентерії свиней, викликаної Brachyspira hyodysenteriae. 3. Композиція для тваринницьких господарств для профілактики і/або лікування дизентерії свиней, що викликана Brachyspira hyodysenteriae, що містить етилендіамінтетраоцтову кислоту або її сіль, прийнятну для охорони здоров'я тварин, в комбінації із загальноприйнятими компонентами подібних композицій, такими як носії, інші допоміжні і/або підсилюючі активність агенти. 4. Композиція за п. 3, яка відрізняється тим, що містить антибіотик, що застосовується для лікування дизентерії свиней. 5. Композиція за п. 3 або п. 4, яка відрізняється тим, що є ветеринарною композицією. 6. Композиція за п. 3 або п. 4, яка відрізняється тим, що є фуражем, їжею, кормом, заздалегідь приготованою сумішшю або суспензією. 2 (19) 1 3 95734 4 ндіамінтетраоцтової кислоти, що має добру розчинність у воді. 15. Композиція за будь-яким з пп. 5-7 або 12, яка відрізняється тим, що містить як антибіотик лінкоміцин або тіамулін. Винахід відноситься до застосування етилендіамінтетраоцетової кислоти (далі - ЕДТА) і її похідних, а саме її солей і комплексів для профілактики і лікування бактерійних кишкових захворювань свиней, викликаних Brachyspira hyodysenteriae, і посилення ефектів антибіотиків, що виявляються при подібних захворюваннях. Винахід також відноситься до композицій для тваринницьких господарств, що містять ЕДТА або її похідні. Термін "композиція для тваринницьких господарств" включає як композиції для застосування у ветеринарії, так і корми і пиття, які можуть споживатися свинями, такі як кормові культури, кормові суміші, поживні речовини, заздалегідь приготовані кормові суміші, а також добавки в питну воду. Свиняча дизентерія входить до числа бактерійних захворювань свиней, що викликають найбільш серйозні проблеми. Свиняча дизентерія є епізоотичним захворюванням поросят і свинячого молодняка, що включає слизисто-криваву діарею і лускатий некроз слизистої мембрани кишечника. Свиняча дизентерія належить до захворювань, що виникають з високим ступенем вірогідності по всьому світу. Унаслідок прямих збитків і високої вартості лікування дане захворювання приводить до істотних економічних втрат. Збудником захворювання є Brahyspira hyodysenteriae, раніше іменована Treponema hyodysenterae або Serpulina hyodysenteriae. Стійкість збудника низька, він повністю гине протягом декількох хвилин при температурах вище 60 °C, а також під впливом звичайних дезинфікуючих речовин, або протягом декількох днів при висушуванні. Проте літом бактерії в слизово-кров'янистих фекаліях залишаються життєздатними впродовж мінімум тижня, а взимку впродовж більше ніж двох місяців. У тонкому шарі гною, присутньому у великій кількості на свинофермах, збудник захворювання може залишатися життєздатним протягом декількох місяців. Свині дуже сприйнятливі до збудника захворювання, крім того, він може також накопичуватися в кишковому тракті щурів, мишей і собак, що живуть на інфікованій фермі. Збудник захворювання виділяється щурами протягом декількох днів, собаками протягом декількох тижнів, а мишами навіть протягом декількох місяців. Захворювання, як правило, спостерігають у свиней старше 6-8 тижнів, оскільки молочні поросята, як правило, мають материнський імунітет. Імунітет, що розвивається у дорослішаючих свиней, є слабким і неповним. Унаслідок масового повторного зараження, або в результаті аномалій сільськогосподарської діяльності захворювання повторно розвивається у одного і того ж поголів'я худоби. Не дивлячись на здобутий неповний імунітет, більшість свиней, що одного разу видужали, залишаються носіями збудника захворювання, і виділяють його впродовж всього життя. Збудник захворювання зв'язується з поверхнею кліток ендотелію кишечника, але не проникає в них. Токсини, що виділяються бактеріями, ушкоджують клітки ендотелію слизистої оболонки, внаслідок чого клітки ендотелію гинуть, і починається запалення. Дане запалення викликає підвищене виділення слизу, кровотечу, в порожнині кишечника виділяється рідина, розвивається гостра діарея, всмоктуюча здатність кишечника сильно ослабляється, далі слідує некроз поверхневого шару слизистої оболонки кишечника. Область поразки обмежується товстою кишкою. Латентний період складає 10-14 днів. Першим симптомом є водянисте випорожнення, що поєднується з гарячковим станом і втратою апетиту. Через декілька днів у фекаліях також виявляються кров і фрагменти фібрину. До цього часу фекалії набувають шоколадно-коричневого кольору. Тварина стає слабкою, не їсть і лише п'є, і швидко втрачає у вазі. Багато тварин вмирають; відсоток тих, що гинуть може складати більше 30 %. Хоча більшість хворих тварин видужують, їх розвиток стає сповільненим, і вони продовжують залишатися носіями збудника захворювання. Окрім характерних симптомів, некропсія зазвичай показує переповнений шлунок, а також набряклу гіперемічну мембрану слизової оболонки, покриту слизом. Слизиста оболонка товстої кишки є роздутою, яскраво червоною, головним чином на краях складок, і має шорстку поверхню. На останній стадії виникають лускаті відкладення унаслідок некрозу поверхні слизистої мембрани. Для лікування бактерійних кишкових захворювань свиней, зокрема дизентерія свиней, вже використовують безліч речовин і композицій, що застосовуються у ветеринарії. Приклади таких включають різні сульфонамінди, бензолацетонітрили, бензойну кислоту, піридин, хінолін, похідні піримідину і гуанідину, а також іонофорні антибіотики, найчастіше використовувані в останні десять років. Використання деяких відомих активних інгредієнтів, ефективність яких була доведена, таких як карбадокс і диметрідазол, зараз є неприйнятним унаслідок тривалого періоду вистоювання, відповідно до вимог харчової гігієни, і/або унаслідок спостережуваної при цьому шкоди для здоров'я людини. По відношенню до деяких активних інгредієнтів, особливо до похідних гуанідину і антибіотиків, у збудника захворювання досить швидко розвивається стійкість. Окремою проблемою є той факт, що відомі активні інгредієнти часто можуть застосовуватися тільки для лікування вже виявленого захворювання, а не для профілактики або, в іншому випадку, тривале використання даних активних інгредієнтів приводить до надмір 5 ного навантаження на організм тварини і іноді спричиняє за собою небажані ефекти. Вакцинація проти даного захворювання виявилася неефективною. Таким чином, існує потреба в композиції, що задовольняє одночасно наступним вимогам: - окрім швидкої і ефективної терапії захворювання її також можна використовувати для профілактики; - при введенні тваринам, призначеним для забою, період вибудовування, визначений харчовою гігієною, або не потрібний, або може бути коротким; - у збудника захворювання не повинна розвиватися стійкість по відношенню до композиції; - її використання не повинне викликати сумнівів з огляду безпеки для здоров'я людини; - вона повинна бути нешкідлива для організму тварини навіть при тривалому введенні і не повинна викликати небажаних побічних ефектів або проблем з переносимістю. Автори даного винаходу несподівано виявили, що ЕДТА і солі ЕДТА, прийнятні для охорони здоров'я тварин повністю задовольняють вищепереліченим критеріям. Також автори даного винаходу виявили, що ЕДТА і вказані вище похідні ЕДТА істотно підвищують активність антибіотиків (наприклад, лінцоміцину, тіамуліну), які раніше застосовували при лікуванні дизентерії свиней, і при комбінованому лікуванні у збудника захворювання не розвивається стійкість або виникнення будь-якого виду стійкості сповільнюється. ЕДТА і її солі є широко відомими аналітичними хімічними речовинами, також відомі деякі медичні ефекти цих речовин відносно людини. ЕДТА і її солі з лужними металами при парентеральному введенні можуть застосовуватися у разі гострих і хронічних отруєнь металами [Issekutz: Gyogyszerrendeles p. 480 (Medicina Konyvkiado, Budapest, Hungary, 1978); Am.J. Ind. Med. 33 (1985)] і, завдяки властивості інгібування Спротеїнкінази, ЕДТА і її солі також можна застосовувати при лікуванні серцевих захворювань і порушень кровообігу, розладів центральної нервової системи, запальних процесів, раку і вірусних інфекцій (Патент Угорщини № 204 195). Солі ЕДТА з лужними металами в комбінації з ментолом і камфорою можна застосовувати для місцевого лікування ревматичних болей (Патент Угорщини № 207 446). У ветеринарії солі ЕДТА з лужними металами застосовують в композиціях для місцевого нанесення, призначених для лікування ран, для розчинення оксиду цинку - добре відомого ранозагоювального агента. ЕДТА також застосовують в низьких концентраціях як стабілізатор в деяких фармацевтичних продуктах, головним чином для захисту компонентів, чутливих до металів. Проте авторами даного винаходу не було знайдено жодного посилання, про те, що ЕДТА може проявляти який-небудь ефект відносно збудників кишкових захворювань свиней або мати який-небудь вплив на дію антибіотиків, що застосовуються при лікуванні цього захворювання. 95734 6 З урахуванням вищевикладеного, винахід відноситься до застосування ЕДТА і до солей і комплексів ЕДТА, прийнятних для цілей охорони здоров'я тварин, для профілактики і/або лікування бактеріальних кишкових захворювань свиней, викликаних Brachyspira hyodysenteriae, і/або для посилення дії антибіотиків, що застосовуються при лікуванні цього захворювання. У цих цілях ЕДТА і її солі вводять тварині всередину, особливо переважно пероральним шляхом. Крім того, винахід відноситься до композиції для тваринницьких господарств, включаючи також ветеринарні композиції, призначені для введення свиням, яка містить як активний інгредієнт ЕДТА або її сіль, прийнятну для цілей охорони здоров'я тварин, разом із загальноприйнятими компонентами (наприклад, носіями, іншими допоміжними агентами і/або агентами, доповнюючими їх активність) даної композиції і, можливо, разом з антибіотиками, які можуть застосовуватися при лікуванні дизентерії свиней. Термін "композиція для тваринницьких господарств", як використовується в даному описі і формулі винаходу, включає повний спектр ветеринарних композицій для внутрішнього введення, а також корма і пиття, які можуть вживатися свинями. Так, окрім класичних ветеринарних лікарських форм для внутрішнього введення (особливо переважними прикладами яких є лікарські форми для перорального введення, такі як пасти, розчини, пігулки і так далі), композиції для тваринницьких господарств також можуть бути лікарським фуражем, їжею, кормом, заздалегідь приготованою сумішшю, питною водою і добавкою в питну воду. Оскільки ЕДТА і її похідні в основному використовуються на крупних тваринницьких господарствах для профілактики дизентерії свиней, або для лікування вже виявленого захворювання, найбільш переважними формами композицій для тваринницьких господарств є корми, кормові суміші, поживні суміші і добавки, включаючі ЕДТА або похідні ЕДТА, а також питна вода, що містить водорозчинні похідні ЕДТА. Концентрація ЕДТА або солі ЕДТА в композиції для тваринницьких господарств залежить від великого числа чинників, серед яких переслідувана мета (профілактика або лікування), тяжкість вже виявленого захворювання і тип даної композиції для тваринницьких господарств. Корма і фураж для безпосереднього споживання можуть містити зазвичай 30-720 г, переважно 100-500 г, переважніше 250-350 г ЕДТА або еквівалентна кількість солі ЕДТА на 1 тонну корму або кормової суміші. Вміст активного інгредієнта в кормі або фуражі, використовуваних для профілактики, як правило нижчий за його вміст в композиції, призначеній для лікування вже виявленого захворювання. Вміст в кормі активного інгредієнта, який зазвичай згодовують тваринам у вигляді добавки до фуражу, може перевершувати величини, вказані вище в 2-20 разів. Вміст активного інгредієнта в заздалегідь приготованій суміші слід збільшувати відповідно до коефіцієнта змішування з фуражем 7 або кормом; вміст активного інгредієнта в заздалегідь приготованій суміші може, наприклад, в 10-100 разів перевищувати величини, вказані вище. У ветеринарних композиціях для безпосереднього перорального введення, а також в їжі, кормі і заздалегідь приготованих сумішах переважно використовувати сіль ЕДТА з обмеженою розчинністю у воді або водорозчинну сіль ЕДТА разом з добавками, що знижують розчинність. Прикладами таких композицій є композиції, що включають натрієві солі ЕДТА разом з кислотою, головним чином з органічною кислотою. Переваги таких композицій в порівнянні з композиціями, що включають тільки водорозчинний активний інгредієнт, полягають в тому, що компонент, що є органічною кислотою, підсилює поверхню слизистої оболонки, роблячи її непридатною для осідання шкідливих бактерій. Корма або суспензії (рідкі лікарські композиції), які включають малорозчинні солі ЕДТА або добавки, що знижують розчинність, виділяються в шлунково-кишковому тракті тварини з меншою швидкістю, завдяки чому вони проявляють свій антибактеріальний ефект триваліший період часу. Іншими словами, шляхом змішування солей ЕДТА з доброю розчинністю у воді з агентом, прийнятним для цілей охорони здоров'я тварин, що утворює у воді осад з ЕДТА, можна збільшити і продовжити активність композиції. Галова кислота і дигалова кислота є особливо відповідними представниками таких добавок. Для цих цілей можна додавати в суміш, наприклад, рослинні екстракти, що містять дигалову кислоту (такі як екстракт каштана, що продається під назвою Farmantan®), і синтетичні препарати. Композиції, що вводяться перорально призначені для тваринницьких господарств також можуть бути добавками в питну воду, які можуть містити, окрім активного інгредієнта, можливо, один або декілька розчинників, допоміжні добавки і/або агенти, що підсилюють активність, придатну для цілей охорону здоров'я тварин. Очевидно, такі композиції можуть містити тільки такий активний інгредієнт, який можна розчиняти в питній воді з отриманням кінцевої концентрації (для профілактики або лікування дизентерії свиней концентрація може складати, наприклад, 10-250 г. ЕДТА або еквівалентна кількість солі ЕДТА, з розрахунку на 1000 л води). Для збільшення точності введення активного інгредієнта переважно використовувати активний інгредієнт в добавках до питної води у вигляді суміші з розчинником, придатним для цілей охорони здоров'я тварин. Термін "агент(и), що підсилює активність", який можна використовувати разом з ЕДТА або сіллю ЕДТА, відноситься до речовин, які вже використовуються на тваринницьких господарствах в цілях досягнення різних сприятливих ефектів, але які не є ефективними або мають низьку ефективність при лікуванні бактерійних кишкових захворювань свиней, за винятком антибіотиків, згаданих вище. Серед таких агентів, що підсилюють активність, особливо переважними є агенти, що використовувалися раніше як засоби, збуджуючі апетит, засоби підвищення засвоюваності корму, імуностимулятори і/або засоби для захисту кишкового 95734 8 тракту. Такі агенти додатково можуть мати деякий антибактеріальний ефект. Особливо переважними представниками агентів, що підсилюють активність, є наступні речовини: - Ефірні масла: Унаслідок їх властивості підвищувати апетит, вони збільшують як споживання корму, так і виділення шлункового соку. Вони також мають позитивний бактиростатичний (тобто, що уповільнює розповсюдження) ефект по відношенню до анаеробних бактерій, проте практично не надають ефект відносно бактерій, що викликають кишкові захворювання свиней. Вони також можуть використовуватися для годування без яких-небудь обмежень, і їх можна змішувати з ветеринарними пероральними композиціями, кормами для безпосереднього споживання, і, залежно від їх розчинності у воді, з питною водою. - Дигалова кислота: укріплює слизисту оболонку кишечника, викликає утворення захисного шару на оболонці і тим самим сприяє зниженню абсорбції шкідливих речовин. Коли діарея вже виявлена, дія дигалової кислоти на слизисту оболонку призводить до зниження кількості слизу, що виділяється в кишкових порожнинах. Унаслідок слабкої бактерицидної дії кислота має сприятливий вплив на склад кишкової флори. її можна використовувати для годування без яких-небудь обмежень. Оскільки дигалова кислота утворює осад з ЕДТА і її водорозчинними солями, її можна додавати тільки до твердих композицій або суспензій, але не в питну воду. - Фермент лізоцим (мурамідаза): він є бактеріолітичним ферментом, що утворюється в організмі як людини, так і тварини, який підвищує опір живого організму, стимулює імунну систему, а також впливає на розкладання слизу, підсилює відновлення тканин, має кровоспинну дію, уповільнює розвиток вірусів і пухлин. Є звичайним інгредієнтом деяких ветеринарних композицій. Може використовуватися для годування без яких-небудь обмежень, а також його можна змішувати з питною водою. Активні інгредієнти можна вводити в композиції для тваринницьких господарств будь-яким відповідним способом. Оскільки необхідний вміст активного інгредієнта в кормах і живильних сумішах для безпосереднього споживання має порядок ppm(мг/кг), переважно спочатку готувати попередні суміші з високим вмістом активного інгредієнта, що далі розбавляють, отримуючи кінцеву кормову або харчову суміш. Згідно альтернативного способу, водний розчин, що містить активний інгредієнт у відповідній концентрації, розпилюють на гранульований або волокнистий корм. Як наголошувалося раніше, ЕДТА і її солі, визначені вище, також підсилюють дію антибіотиків, що застосовуються при лікуванні дизентерії свиней. Тому, окрім профілактики або лікування дизентерії свиней, введення композиції для тваринницьких господарств, ЕДТА, що містить, або похідні ЕДТА також украй корисно в тому випадку, якщо свині паралельно отримують вже призначене лікування антибіотиками. 9 95734 При паралельному введенні ЕДТА або солі ЕДТА як вказано вище, може бути понижена доза антибіотика, потрібного для лікування захворювання, і/або може бути скорочена тривалість лікування. Необхідну кількість антибіотика також можна ввести в композицію для тваринницьких господарств, що містить для ЕДТА або сіль ЕДТА, але антибіотики також можна вводити тварині у вигляді окремої композиції. В останньому випадку ЕДТА і антибіотик можна вводити різними шляхами, наприклад, ЕДТА вводити перорально, а антибіотик парентерального. Якщо лікування свиней антибіотиками поєднують з введенням ЕДТА або солі ЕДТА, необхідна доза антибіотика може складати 25-100 % від потрібної в іншому випадку (коли вводять повну кількість потрібної в іншому випадку дози, тривалість лікування можна скоротити). Грунтуючись на цьому можна розрахувати необхідну концентрацію антибіотика в композиції, що містить як антибіотик, так і ЕДТА або сіль ЕДТА. Подальші деталі винаходу ілюструють приведені нижче Приклад 1 Заздалегідь приготована суміш для змішування з фуражем для свиней Склад заздалегідь приготованої суміші: пшенична мука BFF 5 (клас "штрудель») Farmantan 70 % (композиція, що містить дигалллову кислоту Dakovit Kft, що поставляється, Gyor, Угорщина) Чебрецеве масло Emulson (емульгатор, WMD Kft, що поставляється, Будапешт, Угорщина) Масло орегано Сіль ЕДТАNa2 61,6 кг 10 кг 1,4 кг 2,2 кг 0,8 кг 24 кг Пшеничну муку BFF 5, Farmantan 70 % і сіль ЕДТАNA2 навішували у вказаному порядку в змішувачі TUK 400 л/200 кг, далі компоненти гомогенізували, перемішуючи протягом 2 хв. Ефірні масла заздалегідь окремо змішували з Emulson, рідку суміш додавали через воронку до порошкової суміші, одержаної на попередній стадії, і масу гомогенізували, перемішуючи протягом 2 хвилин. Приклад 2 Фураж для безпосереднього годування свиней 2 кг заздалегідь приготованої суміші складу, приведеного в Прикладі 1, гомогенізували з 18 кг фуражу з таким же розміром частинок, далі ці 20 кг суміші додали до 1980 кг фуражу. Приготували фураж наступного складу: Компонент Кукурудза Рисовий білок Жирний порошок 40 % Висівки Ячмінь Кількість % Поросята Молоді свині 43,61 47,73 2,10 2,60 2,60 5,00 15,00 4,30 15,00 10 Пшениця Соя Мелений соняшник Кормове вапно Монокальцію фосфат Кормова сіль Лізин Попередня суміш для поросят/свиней* Ультрацид Попередня суміш згідно Прикладу 1 8,60 16-60 5,00 17,10 3,00 5,00 1,20 1,27 0,82 0,80 0,40 0,27 0,40 0,27 0,50 0,40 0,20 0,20 0,10 0,10 *Продукт Fioracs Kft (Acs, Угорщина) **Продукт, що містить фосфорну кислоту Syngenta Ltd. ; Приклад 3 Заздалегідь приготована суміш для змішування з питною водою для свиней Склад заздалегідь приготованої суміші: Декстроза Лізоцим НСl Чебрецеве масло Emulson Масло орегано Сіль ЕДТАNa2 75,0 кг 10,0 кг 0,7 кг 2,0 кг 0,3 кг 12,0 кг Декстрозу, лізоцим НСl і сіль ЕДТАNa2 навішували у вказаному порядку в змішувач TUK 400л/200 кг, далі компоненти гомогенізували, перемішуючи протягом 2 хвилин. Ефірні масла заздалегідь змішали окремо з Emulson, рідку суміш додали через воронку до порошкової суміші, одержаної на попередній стадії, і масу гомогенізували, перемішуючи протягом 2 хвилин. Приклад 4 Суспензія для перорального введення (лікарська рідина) Суспензію наступного складу приготували, змішав окремі компоненти: Сіль ЕДТАNa2 25,00 кг Ментол 0,01 кг Mucilago hydroxyacettylcellulosum (гі74,00 кг дроксиацетилцеллюлоза камедь) Emulson 1,00 кг Приклад 5 Тестування композиції, ЕДТА, що містить, на свинях, страждаючим від кривавої діареї (інфекція Brachyspira) Приклад 5.1.: На свинофермі, інфікованій збудником захворювання, сформували 3 тестових групи і одну контрольну, кожне з 20-ти 90-денних поросят. У корм тварин, що належать до тестових груп, додавали протягом всього періоду дослідження (який тривав до забою) 240 ppm солі ЕДТАNa2, використовуючи заздалегідь приготовану суміш, описану в Прикладі 1. У тварин в тестових групах кривава діарея не відмічена. На відміну від 11 інших тварин на фермі, твариною з тестових груп лікування антибіотиками не було потрібне. Приклад 5.2.: Свиням, страждаючим від кривавої діареї, що були на фермі згідно Прикладу 5.1, давали ЕДТАNa2, розчинивши 200 ppm ЕДТАNa2 в питній воді для тварин. Кривава діарея припинилася на третій день і далі не повторювалася, поки в питній воді підтримували концентрацію ЕДТАNa2 на рівні 200 ppm. У контрольній групі, де в день припинення кривавої діареї тваринам давали чисту питну воду, кривава діарея знов повторилася через 4 дні. Приклад 5.3.: На свинофермі, інфікованій збудником захворювання, худобі, страждаючій від кривавої діареї, давали корм, що містить 110 ppm лінкоміцину. Деяка частина поголів'я виявилася стійкою до дії антибіотика. Худобу розділили пропорційно, і в тестовій групі корм змішували з 240 ppm ЕДТАNa2, використовуючи заздалегідь приготовану суміш згідно Прикладу 1. У даній групі кривава діарея повністю припинилася на третій день. Під час годування кормом, що містить сіль ЕДТАNa2, повторне виникнення кривавої діареї у тварин більше не зазначалось. У контрольній групі кривава діарея як і раніше спостерігалася, і припинилася тільки при використанні терапії лінкоміцином спільно з іншими ефективними антибіотиками. Приклад 5.4.: У частини несприйнятливих до линкомицину тварин, що входять до числа худоби згідно Прикладу 5.3, не проводили лікування іншими антибіотиками, проте продовжували застосовувати лінкоміцин і одночасно тваринам давали Комп’ютерна верстка А. Крижанівський 95734 12 питну воду, що містить 60 ppm ЕДТАNa2. Діарея повністю припинилася через декілька днів і повторно не виникала після припинення лікування лінкоміцином, поки в питну воду додавали сіль ЕДТАNa2. У фекаліях патогенні бактерії далі не виявлялися. Приклад 5.5.: На свинофермі з частими випадками виникнення кривавої діареї сформували випадковим чином три групи, що складаються з молочних поросят, переведених на тверде годування. У першій групі (досліджуваній групі) тварин безперервно годували кормом, що містить 240 ppm ЕДТАNa2, 22 ppm ефірних масел (1:1 суміш масел орегано і чебреця), і 100 ppm дигалової кислоти. У другій групі (контрольній групі 1) тваринам безперервно давали корм, що містить ефірні масла і дигалову кислоту в кількостях, вказаній вище, але, що не містить ЕДТАМаг. У третій групі (контрольна група 2) ЕДТАМа2 був відсутній, в корм додавали або ефірні масла, або дигалову кислоту. Після закінчення певного періоду часу у тварин контрольної групи 2 з'являлася кривава діарея і рідке випорожнення (корм без добавок). У фекаліях виявлена бактерія Brachyspira. У тварин контрольної групи 1 (яким давали корм з добавкою ефірних масел і дигалової кислоти) з деякою затримкою спостерігали криваву діарею і рідке випорожнення. Навпаки, в тестовій групі (якій давали корм, що містить також ЕДТАNa2г), протягом всього періоду годування кормом з такими добавками не спостерігалися які-небудь аномальні біологічні симптоми. Підписне Тираж 23 прим. Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601