Застосування хондроїтину сульфату для корекції індукованих цитостатиком порушень сперматогенезу в експерименті

Реферат: Застосування хондроїтину сульфату для корекції індукованих цитостатиком порушень сперматогенезу в експерименті у статевозрілих щурів. Щурам, на фоні дії цитостатику, вводять хондроїтину сульфат внутрішньошлунково один раз на добу у дозі 60 мг/кг протягом 33 діб. UA 103300 U (12) UA 103300 U UA 103300 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до експериментальної медицини і може бути використана при розробці засобів для лікування неплідності і активації функціонального стану сперматогенезу після застосування цитостатиків. Стимуляція та відновлення сперматогенної функції неплідних чоловіків має велике значення, оскільки це пов'язано зі збереженням репродуктивного здоров'я населення [1]. Для лікування запальних процесів статевих органів (орхіт, орхіепідидиміт, простатит, туберкульоз статевих органів тощо), часто застосовують цитостатичні препарати, але вплив таких препаратів призводить до токсичної дії на процеси сперматогенезу [2]. Тому проводиться пошук препаратів, які стримують негативний та токсичний вплив антибіотиків з цитостатичною дією та активують процес сперматогенезу. На сьогодні існує досить багатий перелік засобів, переважно синтетичних, для лікування статевих розладів та покращення стану репродуктивної системи: гормони, вітаміни, фітопрепарати тощо. Але така терапія досить часто неефективна, має побічну дію і не завжди сприяє нормалізації сперматогенезу у чоловіків. Отже, на сьогодні важливим є пошук нових терапевтичних підходів до лікування репродуктивних порушень [1, 3]. На сьогодні відомий спосіб корекції порушень сперматогенезу щурів за допомогою препарату "Біоглобін-У", який вводять статевозрілим самцям щурів на фоні дії цитостатику внутрішньом'язово один раз на добу у дозі 200 мкл/кг протягом 33 діб. При застосуванні "Біоглобіну-У" знижується токсична дія цитостатику на статеві клітини і в першу чергу на стовбурові клітини, внаслідок чого, певною мірою відновлюється початкова стадія сперматогенезу - популяція сперматогоній та сперматоцитів I-го порядку, підвищується мейотична активність. Зменшується токсичний вплив і на статеві клітини на більш пізніх етапах розвитку, що під час дії токсину знаходилися у канальцях: попереджується їх деструкція та елімінація [4]. Подальше розширення переліку негормональних засобів для корекції порушень сперматогенезу буде сприяти більш цільовому їх призначенню, з урахуванням індивідуальних особливостей хворих. Задача корисної моделі - пошук нових біологічно активних сполук для корекції порушень сперматогенної функції, що індуковані застосуванням цитостатику. Поставлена задача вирішується тим, що статевозрілим самцям щурів на фоні дії цитостатику вводять хондроїтину сульфат внутрішньошлунково один раз на добу у дозі 60 мг/кг протягом 33 діб. Технічний результат - зменшення токсичного ефекту цитостатичного впливу на сперматогенну функцію, що призводить до активації сперматогенезу та повної репаративної регенерації сперматозоїдів. Хондроїтину сульфат має велику терапевтичну широту дії та високий індекс безпеки [5]. Він застосовується для лікування і профілактики остеохондрозу хребта та остеоартрозу периферичних суглобів, виказує протизапальну і знеболювальну дію, зменшує болі в суглобах і хребті в стані спокою і при ходьбі, сприяє активній регенерації хряща [6]. Існують дані про те, що значна кількість протеогліканів, зокрема хондроїтину сульфат та гепарану сульфат, розташована у тканинах яєчка. Їх біологічна роль в даний час не встановлена, проте, молекулярна характеристика деяких з них свідчить, що вони можуть брати участь у різних регуляторних процесах сперматогенезу [7, 8]. Хондроїтину сульфат позитивно впливає на якісний стан тестикулярної тканини щурів, відновлює порушену трофіку статевих клітин, знижує дистрофічні процеси у яєчках щурів, що призводить до активації процесу сперматогенезу та підвищує рівень андрогенної насиченості організму Тому, хондроїтина сульфат може розглядатися як потенційний коректор при репродуктопатіях і сперматопатіях та порушеннях сексуального здоров'я [9]. Спосіб апробовано на білих статевозрілих самцях щурів з початковою масою 340-380 г. Тварини були розподілені на 3 групи: 1 група - негативний контроль (інтактні щури), 2 група позитивний контроль (контрольна патологія), 3 група - тварини, які на фоні дії цитостатику отримували хондроїтину сульфат. Для моделювання цитостатичного ураження яєчок, тваринам внутрішньоочеревинно вводили доксорубіцин у дозі 2 мг/кг один раз на тиждень (3 введення). Хондроїтину сульфат починали вводити за три дні до введення цитостатику, потім три тижні на його тлі та протягом 9 днів поспіль (всього 33 дні). Введення проводили внутрішньошлунково один раз на добу у дозі 60 мг/кг. Введення цитостатику доксорубіцину гідрохлориду здійснювалося з розширенням терміну експозиції [10]. Евтаназію щурів проводили методом декапітації на 34-ту добу експерименту. Дослідження проводилися відповідно до національних "Загальних етичних принципів експериментів на 1 UA 103300 U 5 10 15 20 25 30 тваринах", які узгоджуються з положеннями "Європейської конвенції про захист хребетних тварин, які використовуються для експериментальних та інших наукових цілей" [11]. Виділяли та зважували гіпофіз, сім'яники (СМ) та їх придатки, вентральну передміхурову залозу (ВПЗ) та сім'яні пухирці (СП). У суспензії придатків сім'яників оцінювали показники морфофункціонального стану сперматозоїдів (кількість, рухливість, патологічні форми та час збереження рухливості сперміїв) [12]. У СП визначали вміст фруктози за методом Бокуняєвої [13]. Активність кислої фосфатази (простатичної) в сироватці крові визначали кінетичним методом (з нафтилфосфатом) за допомогою стандартного набору DAC-SpectroMed s.r.l. (Молдова). Сім'яники щурів всіх груп фіксували у 10 % розчині формаліну, проводили по спиртах зростаючої міцності, заливали у целоїдин-парафін [14-16]. На зрізах, які фарбували гематоксиліном та еозином, окрім оглядової мікроскопії, проводили морфометричну оцінку процесу сперматогенезу. Статистичну обробку цифрових даних проводили параметричними та непараметричними методами з використанням критеріїв Ст'юдента та Вілкоксона-Манна-Уітні за допомогою програми Statistica 5,0 [17, 18]. Отримані дані наведені в таблиці. Як видно з наведених даних, під дією цитостатичного впливу доксорубіцину гідрохлориду спостерігалися зміни маси органів-мішеней для андрогенів, у групі тварин позитивного контролю (2 група) маса сім'яників зменшувалася майже на 60 %, маси ВПЗ та СП на 50 %. Це свідчить про стійкий негативний цитостатичний ефект доксорубіцину. Введення хондроїтину сульфату на фоні цитостатичного ураження призводило до нормалізації таких важливих показників стану чоловічої репродуктивної системи, як маса сім'яників та СП, секрет яких є енергетичним субстратом для активації сперматозоїдів, що в свою чергу покращує фертильність статевих клітин. При дослідженні морфофункціонального стану сперматозоїдів відмічено покращення рухливості та часу збереження рухливості сперматозоонів та зниження відсотку патологічних форм статевих клітин. Цей факт свідчить про майже повне нівелювання токсичного ефекту цитостатику на статеві клітини. Таблиця Вплив хондроїтину сульфату на морфофункціональні показники сперматозоїдів та масу органів  щурів, з гонадопатією, що викликали цитостатиком доксорубіцину гідрохлоридом, X  Sx Показник 1 Кількість сперматозоїдів, млн/мл Патологічні форми, % 1 Рухомість сперміїв, % Час збереження рухливості сперміїв, хв Сім'яники, мг Вентральна частина передміхурової залози, мг Сім'яні пухирці, мг Епідидиміси яєчок, мг Гіпофіз, мг  Група тварин 1. Негативний 3. Цитостатичне ураження 2 Позивний контроль контроль яєчок+хондроїтину сульфат 2 3 4 Морфо-функціональні показники (n=8) 52,00±2,81 38,38±3,34* 39,00±3,67* 19,00±1,52 2 71,88±3,26 29,38±1,52* 3 48,13±3,26* 18,25±1,58** 4 61,25±3,50** 288,75±15,97 198,75±10,21* 250,00±20,33*/** Маса органів (n=8) 2893,75±60,83 1631,25±71,34* 2493,75±84,22** 827,50±39,82 489,25±26,97* 611,88±32,70*/** 1118,75±66,80 1129,38±52,41 7,13±0,35 668,75±56,65* 931,25±74,96 7,75±0,45 1062,55±75,18** 1106,25±58,58 8,25±0,45 2 UA 103300 U Продовження Таблиці 1 Фруктоза в СП, ммоль/л Кисла фосфатаза, Ед/л 2 3 Біохімічні показники 4 2,92±0,36 1,20±0,17* 2,72±0,41** 17,82±1,03 9,76±0,84* 16,06±2,49** * відхилення показника, достовірне відносно показника тварин груп негативного контролю, р