Медикамент, що містить бета2-агоніст у комбінації з будезонідом, для лікування запальних або обструктивних хвороб дихальних шляхів

1. Фармацевтична композиція, яка містить, скомбіновані разом, ефективну кількість 8-гідрокси-5-[(1R)-1-гідрокси-2-[[(1R)-2-(4метоксифеніл)-1-метилетил]аміно]етил-2(1Н)хінолінону (сполука А) та будезоніду або його епімеру, для одночасного застосування у лікуванні запальних або обструктивних хвороб дихальних шляхів, де ефективна кількість сполуки (А) складає 1 мкг на одноразову дозу, а співвідношення за масою сполуки (А) та будезоніду або його епімеру знаходиться в межах C2 2 (19) 1 3 82217 пацієнтів з COPD набули хвороб легенів через паління сигарет. Залежно від схильності до паління тютюну, це викликає п'яту найпревалюючу причину втрати працездатності в усьому світі до 2020 [Leckie Μ et al Exp Opin Invest Drugs 2000, 9, 3-23]. Хронічна обструктивна хвороба легенів (COPD) визначена як хвороба, що характеризується наявністю обмеження потоку повітря внаслідок хронічного бронхіту або емфіземи. Хронічний бронхіт характеризується надлишковою секрецією бронхіального слизу, а емфізема означає анормальне, довготривале розширення повітряного простору, периферичного стосовно кінцевої бронхіоли, з руйнуванням їх стінок та без явного фіброзу (American Thoracic Society). Кожний стан є лікованим як специфічні хвороби. Хронічний обструктивний бронхіоліт виникає внаслідок обмеження периферійних дихальних шляхів як результат запалення у бронхіолах. Ліки, призначені для лікування хвороб легенів, як-то астма та COPD є зараз застосовуваними доставкою у легені, котра базується на інгаляції аерозолю через рот та горло, щоб ліки могли досягти легенів. Вони можуть застосовуватися як водні або водно-спиртові композиції через розпилювач, як сухі порошки інгаляторами сухого порошку або у галогенованих вуглеводневих пропелентах. Системи на базі пропелентів потребують придатних дозувальних інгаляторів під тиском, котрі вивільняють виміряну доз ліків при кожному спрацьовуванні. Ускладнена терапія з різними лікуваннями та пристроями може призводити до поганого дотримання пацієнтами режиму, а відтак і лікування, а у свою чергу, негативного впливу на їх якість життя. Це особливо явно у випадку довготермінового лікування хронічної астми, зокрема профілактичного лікування, як-то інгаляційними стероїдами, котрі не дають негайного полегшення симптомів. Сучасна терапевтична стратегія призначена при контролюванні симптомів та зменшенні запалення фіксованими комбінаціями довгодіючого р 2агоністу та кортикостероїду. Комбінації, що містять са-лметерол та флутиказон пропіонат, як у формі сухого порошку, так і композиції HFA, є зараз на ринку під торговою маркою Seretide®. Кожна доза комбінованої композиції є застосовуваною двічі на добу. Кожна інгаляція композиції порошку може доставляти номінальну дозу 50 мікрограм рацсалметерол ксинафоату та одну з трьох доз флутиказону пропіонату 100, 250 та 500 мікрограм. Застосуванням композиції HFA, кожний викид інгалятору може доставляти номінальну дозу 25 мікрограм салметеролу та 50, 125 або 250 мікрограм флутиказону. Комбінація, що містить формотерол та будезонід у формі сухого порошку є зараз на ринку під торговою маркою Symbicort® та кожна одинична доза є застосовуваною двічі на добу. Кожна інгаляція може доставляти номінальну дозу 4 6 мікрограм рац-формотерол фумарату та 100 або 200 мікрограм будезоніду. Кілька статей у науковій літератур стосуються застосування р2-агоністів у комбінації з іншими класами ліків, зокрема, кортикостероїдами та антихолінергіками. Більш того, у патентній літературі запропоновано різні типи комбінацій. Однак, ніде у попередньому рівні техніки не продемонстровано, що застосуванням довгодіючого b 2-агоністу (L ABA) у комбінаційній терапії, підвищення як бронходилатаційної, так і анти-запальної ефективності, можна досягти, наскільки це можливо, для зменшення дози без впливу на терапевтичний ефект. З огляду на це, наприклад, могло б бути значно кращим забезпечити комбінацію b 2-агоністу та стероїду, котра: і) при збереженні швидкого початку дії, має довшу тривалість дії таким чином, щоб композицію застосовувати раз на добу, затримуючи цим можливу появу толерантності стосовно Рг-агоністу та з сильним поліпшенням дотримання пацієнтами режиму, зокрема, пацієнтами з хронічною та нічною астмою; іі) дозволяє зменшити дозу кортикостероїду. Похідні 2(1Н)-хінолону розкриті у минулому, наприклад, у [ЕР 147719 та WO 00/75114], та характеризуються як потужні довгодіючі бронходилатаційні засоби, корисні для лікування або профілактики різних хронічних обструктивних хвороб легенів. Медикамент, що містить певне довгодіюче похідне 2(1Н)-хінолінону та кортикостероїд для лікування запальних або обструктивних хвороб дихальних шляхів, нещодавно розкрито у [WO 02/45703]. В описі встановлено у загальних термінах, що для зменшення дози кортикостероїду можливе застосування вказаної комбінації, потрібної для даного терапевтичного ефекту, порівняно з потрібною при лікуванні кортикостероїдом поодинці, але не наведено підтверджуючих даних. 8-гідрокси-5-[(1R)-1гідрокси-2-[[(1 В)-2-(4-метоксифеніл)-1метилетил]аміно]етил-2(1 Н)-хінолінон хлорид, відомий під експериментальним кодом ТА 2005, що є високо потужним довгодіючим р 2-агоністом, також характеризується швидким початком дії, розкрито спершу у [ЕР 147719]. В описі встановлено, що сполука може бути застосовуваною перорально або парентерально. Оскільки розглянуто добову дозу, повідомлено тільки про дуже широкі загальні межі доз, тобто 0,01-30мкг, головним чином 0,01 - 3мкг на кг маси тіла (відповідно приблизно 0,7 -2100мкг, головним чином 0,7-210мкг). JP 09-309830 стосується його застосування як анти-запального агенту інгаляціями але навіть у цьому випадку повідомлено про широкі загальні межі доз, тобто від 1 до 20мкг, наприклад, приблизно 3-10мкг. У [Eur Resp J 8 (Suppl 19), 1995, 258s], результати двох клінічних досліджень показано. В останньому (Р1300), помірним астматикам інгалювали одиничні дози 6 та 9 мкг ТА 2005 та плацебо з дозувального розпилювачу з 5 82217 інтервалами один тиждень. При цих двох рівнях доз ТА 2005 продукується швидка та довгодіюча бронходила-тація. У попередньому (Р1301) розглянуто рандомізоване, подвійне, з контролем плацебо, дослідження безпечності зі збільшенням доз. Одиничны дози 0,8, 1,6, 3,2, 6,4, 9,6, 12,8мкг інгальовано здоровим чоловікам-волонтерам з дозувального розпилювачу. ТА 2005 викликає залежне від дози збільшення серцевого ритму, тремор та функцію легенів та зменшення у плазмі калію. Згідно з авторами, максимальна нешкідлива доза ТА 2005 є 9,6мкг. Припущене дуже велике терапевтичне вікно між 0,8 та 9,6мкг, але ефективну та безпечну доз не ідентифіковано. У [ЕР 1157689] заявник описав аерозольні фармацевтичні композиції, що містять р 2-агоніст класу фенілалкіламінопохідних у розчині у HFAпропеленту та співрозчинни-ку, рН якого доводять до 2,5-5,0 для гарантії адекватного строку збереження медикаменту. В описі встановлено, що композиції ТА 2005 повинні бути переважно придатними для доставки 2-10мкг/дозу, переважно 3-5мкг/дозу. 3,5нг/дозу HFA композиції 134а, що містить 12мас.% етанолу та 1,0% ІРМ, розкрито у прикладі 7. Кілька інших патентів або патентних заявок, тобто [US 6221398, US 5874063, US 6030604, WO 98/41193, WO 98/31352, WO 01/78693, WO 01/89480 та WO 03/080939] згадують ТА 2005 у переліку можливих р 2-агоністів у композиціях, що містять інші класи ліків, як-то кортикостероїди, антихолінергіки або інгібітори фосфоді-естерази-4. У жодному з документів попереднього рівня техніки не розкрито конкретних комбінованих продуктів ТА 2005 з іншими активними інгредієнтами, що забезпечують такий корисний фармакологічний профіль як комбіновані продукти винаходу. Представлений винахід стосується медикаменту, що містить, окремо або разом: 8гідрокси-5-[(1R)-1-гідрокси-2-[[(1В)-2-(4метоксифеніл)-1-метилетил]аміно]етил-2(1Н)хінолінон та/або його фізіологічно прийнятну сіль та/або сольват (сполука А), та один або більше наступних активних інгредієнтів, де вказаний наступний активний інгредієнт переважно вибирають з кортикостероїду, антихолінергічного/антимускаринового агенту або інгібітору фосфодіестерази-4. Кортикостероїд, корисний для лікування запальних або обструктивних хвороб дихальних шляхів, можна переважно вибрати з групи: будезонід та його епімери, бек-лометазон 6 дипропіонат, флунізолід, флутиказон пропіонат, циклезонід, триамцино-лон ацетонід, рофлепонід палмітат та мометазон фуроат, для одночасного, послідовного або роздільного застосування у профілактиці або лікуванні запальних або обструктивних хвороб дихальних шляхів, як-то астма або COPD. Анти холінергічний/антимускариновий агент можна вибрати зі сполук, доступних на ринку, як-то іпратропіум бромід, окситропіум бромід або тіотропіум бромід або інших селективних антимускаринових МЗ засобів. Придатні антимускаринові ліки - це також глікопіролат або його 3R-2'R епімер. Кращими інгібіторами фосфодіестерази-4 є цикломіласт та рофлуміласт. У наступному аспекті представлений винахід стосується фармацевтичної композиції, що містить разом ефективну кількість (А), що визначено тут раніше та одну або більше наступних активних речовин, що визначено тут раніше, як варіант, разом з принаймні одним фармацевтично прийнятним носієм. Винахід стосується крім того застосування (А), що визначено тут раніше, у комбінації з одною або більше наступними активними речовинами, що визначено тут раніше, у отриманні фармацевтичної композиції або комплекту для профілактики або лікування, одночасним, послідовним або роздільним застосуванням (А) та іншої активної речовини будь-якої запальної або обструктивної хвороби дихальних шляхів. Один з кращих комбінованих продуктів містить сполуку А як хлорид (ТА 2005, також відомий під експериментальним кодом CHF 4226) та кортикостероїд. Дійсно виявлено, що, у комбінації таких р2-агоністу та кортикостероїду, збільшується дія, як бронходилатору, так і анти-запальна. Сучасні фармакологічні терапії для COPD призначають при послабленні симптомів та зменшенні загострення . Бронходилатори викликають тільки невелике поліпшення спірометричних вимірів, але можуть поліпшува ти симптоми та толерантність до фізичних вправ та зменшувати інфекційні загострення . У пацієнтів з COPD сприяння антихолінергічних/антимускаринових ліків є важливим, оскільки вони зменшують скорочення дихальних шляхі в внаслідок вагусного холінергічного тонусу. Комбінований продукт, що містить довгодіючий агоніст b 2-адреноцепторів, як-то. ТА 2005, та антимускаринові ліки, є потенціально дуже інтересним для терапії COPD. У комбінованому продукті винаходу синергічний ефект між ТА 2005 та тіотропіум бромідом продемонстровано при контролі бронхоспазму на тваринних моделях in vitro та in vivo. Ефективність комбінації може бути посиленою додаванням кортикостероїду, що може, діяти синергічно з ТА 2005 на запальні медіатори. Як продемонстровано у наступних прикладах, ТА 2005 дає приріст синергічної взаємодії у контролі ексудації плазми у ди хальні шляхи. 7 82217 З огляду на це, ще одна корисна комбінація містить інгібітор фосфодіестерази-4, здатної релаксувати гладенькі м'язи дихальних шляхів, пригнічувати активацію специфічних запальних клітин та модулювати активність нервів легенів. Відповідно, могло б бути можливо зменшувати у комбінованих продуктах винаходу дозу будьякого активного інгредієнту, рекомендовану для кожного компоненту, без погіршання терапевтичної дії, тим зменшуючи ризик появи побічної дії, асоційованої з їх застосуванням. У ще одному аспекті представлений винахід стосується медикаменту, де сполуку (А) представлено у комбінації як хлорид (ТА 2005) у придатній кількості для забезпечення добової дози між 15 0,5 та 8мкг, переважно між 1 та 6мкг, переважно між 1 та 4мкг, для одночасного, послідовного або роздільного застосування раз або двічі на добу, переважно раз на добу, у лікуванні запальних або обструктивних хвороб дихальних шляхі в, як-то астма або COPD. Корисні комбіновані продукти містять ТА 2005 та кортикостероїд та/або антихолінергічний/антимускариновий агент та/або інгібітор фосфодіестерази-4. Кращі приклади комбінованих продуктів охоплюють: ТА 2005 та ацетальний кортикостероїд, вибраний від будезоніду та цикпезоніду; ТА 2005 та тіотропіум бромід як селективний М1- та МЗ-мускаринові агоністи рецепторів; ТА 2005 + кортикостероїд + антимускаринік; ТА 2005 + антимускаринік + інгібітор фосфодіестерази-4. Ефективні дози ТА 2005 у комбінованому продукті можуть бути 0,5, 1, 1,5, 2, 2,5, З, 3,5, 4 нг. Дійсно виявлено, що при цих дозуваннях ТА 2005 є терапевтично ефективним при інгаляції. Бронходилаторна ефективність ТА 2005, визначена як збільшення стосовно вихідного рівня форсованого експіраторного об'єму зверх одної другої (FEV1), що вимірюють спірометрією, оцінено у підготовчих клінічних випробуваннях у невеликій групі астматичних пацієнтів. Результати показали, що вже після застосування одиничної дози 1 мкг значення та стійке збільшення FEV1 приблизно на 30% більше, ніж можна отримати від вихідного рівня. Як вказано раніше, сполука (А) є переважно застосовуваною у формі її хлориду (ТА 2005). Інші фізіологічно придатні солі сполуки (А) охоплюють бромід, сульфат, фосфат, малеат, фумарат, тартрат, цитрат, бензоат, мезилат, аскорбат, саліцилат, ацетат, сукцинат, лактат, глутаратабо глюконат. Сольвати солей, як-то гідрати, емігідрати або інші з фармацевтично прийнятними органічними розчинниками є також залучено у винахід. Серед кортикостероїдів, ацетальні кортикостероїди, як-то будезонід та його 22ReniMep, рофлепонід та циклезонід є особливо переважними. Медикамент винаходу може містити антихолінергічні атропіно-подібні похідні, як-то іпратропіум бромід, окситропіум бромід, тіотропіум бромід або глікопіролат або його 3R,2'R 8 енантіомер, для забезпечення медикаменту особливо ефективного для лікування COPD. Переважним антихолінергічним, антимускариновим агентом є тіотропіум бромід. Співвідношення, у котрих можна вживати сполуку (А) та кортикостероїд у комбінації винаходу є змінними. Залежно від вибору стероїду, співвідношення за масою, котре можна застосовувати у рамках представленого винаходу варіює залежно від різних молекулярних мас різних стероїдів та їх різної потенції. Фармацевтичні комбінації згідно з винаходом можуть містити сполуку (А) та кортикостероїд у співвідношенні за масою від 1:3200 до 1: 10. Зокрема, для будезоніду та циклезоніду межі співвідношення за масою від 1:1600 до 1:50, переважно від 1:1000 до 1:50. Ще одним кортикостероїдом, що може бути переважно застосовуваним у комбінації, є мометазон фуроат, та у цьому випадку співвідношення за масою буде від 1:800 до 1:50, переважно 1:400 - 1:100, краще 1:200 -1:100. Для тіотропіум броміду межі співвідношення за масою від 1:100, переважно від 1:50, більш переважно від 1:20. призначений режим дозування - двічі або раз на добу, переважно раз на добу, де придатна добова доза сполуки (А) є переважно у межах 0,5 8 мкг, переважно 1 - 4 мкг, більш переважно 1-2 мкг або 2 - 4 мкг, залежно від пацієнта (вік, маса тощо) та від природи та суворості хвороби. Комбінація винаходу є переважно застосовуваною інгаляціями. Придатні для інгаляції препарати охоплюють придатні для інгаляції порошки, пропелентовмісні дозувальні аерозолі або безпропелентні придатні для інгаляції композиції. Для застосування як сухого порошку можна застосовувати одинично- або багато-дозові інгалятори, відомі з попереднього рівня техніки, де порошком можуть бути заповнені желатинові, пластикові або інші капсули, патрони або блістерні упаковки або резервуар. Розріджувач або носій, звичайно нетоксичні та хімічно інертні до медикаментів, наприклад, лактозу або будь-який інший адитив, придатний для поліпшення придатної для вдихання фракції, можна додавати до порошкового медикаменту. Інгаляційні аерозолі, що містять пропелент, якто гідрофлуоралкани можуть містити комбінації активних інгредієнтів винаходу у розчині або у диспергованій формі. Пропелентовмісні композиції можуть також містити інші інгредієнти, як-то співро-зчинники, стабілізатори та, як варіант, інші ексципієнти. Безпропелентні придатні для інгаляції композиції, що містять комбінацію винаходу можуть бути у формі розчинів або суспензій у водних, спиртових або гідроспиртових середовищах та їх можна доставляти форсуночними або ультразвуковими розпилювачами, відомими з попереднього рівня техніки або розпилювачами до стану туману, як-то Respimat®. Лікування запальних або обструктивних хвороб дихальних шляхів згідно з винаходом може 9 82217 бути симптоматичним або профілактичним. Запальні або обструктивні хвороби дихальних шляхів, до котрих заявлені комбінації є підхожими, охоплюють · астму будь-якого типу або генезису, охоплюючи ендогенну (неалергічну) астму та набуту (алергічну) астму, слабку астму, помірну астму, сувору астму, бронхітну астму, індуковану фізичними навантаженнями астму, професійну астму та астму, індуковану бактеріальною інфекцією. Лікування астми слід також розуміти як лікування суб'єктів, наприклад, віком менше 4 або 5 років, що виявляють симптоми свистячого дихання та діагностовані як "страждаючі задишкою діти", які визнані категорією пацієнтів головного медичного інтересу. Профілактична ефективність у лікуванні астми полягає у доказах зменшення частоти або суворості симптоматичного нападу, наприклад, гострого астматичного або бронхоконстрикційного нападу, поліпшення функції легенів або поліпшеною гіперреактивністю дихальних шля хів. Це може крім того доказано зменшеною потребою в іншій симптоматичній терапії. Профілактична корисність при астмі може, зокрема, бути видною у суб'єктів схильних до "ранкового зниження". "Ранкове зниження" - це визнаний астматичний синдром, звичайний для високого процента астматиків, що характеризується нападом астми, наприклад, між приблизно 4-6 годин ранку, тобто у час, нормально по суті віддалений від будь-якої раніше застосовуваної симптоматичної терапії астми. Інші запальні або обструктивні хвороби дихальних шляхів та стани, котрих стосується представлений винахід, охоплюють гостре поранення легенів (ALI), респіраторний бистрею синдром дорослих (ARDS), хронічну обструктивну легеневу хворобу, хворобу дихальних шля хів або легенів (COPD, COAD або COLD), охоплюючи хронічний бронхіт та емфізему, бронхіоліт, бронхоектаз та загострення гіперреактивнос-ті дихальних шляхів після терапії іншими ліками, зокрема, іншими інгаляційними ліками. Подальші запальні або обструктивні хвороби дихальних шляхів, котрих стосується представлений винахід, охоплюють пневмоконіоз (запальні, звичайно професійна хвороба легенів, часто супроводжувана обмеженням дихальних шляхів, хронічним або гострим, та викликаним повторною інгаляцією пилу) будь-якого типу або генезису, охоплюючи, наприклад, алюміноз, антракоз, асбестоз, халікоз, пти-лоз, сидероз, силікоз, тютюнозоз та бісиноз. Винахід крім того стосується фармацевтичного комплекту, що містить сполуку (А) та принаймні подальшу сполук у (комбінацію сполук), що описано тут раніше, у роздільних формах одиниць дозування, вказані форми придатні для застосування (А) та комбінації сполук у ефективній кількості. Такий комплект відповідно подалі містить один або більше інгаляційних пристроїв для застосування (А) та комбінації сполук. Наприклад, комплект може містити один або більше інгаляційних пристроїв для сухого порошку, адаптованих для доставки сухого порошку з капсул, разом з капсулами, що містять сухий 10 порошок, що містить одиницю дозування (А) та капсулами, що містять сухий порошок, що містить одиницю дозування комбінації сполук. У ще одному прикладі комплект може містити багатодозовий інгаляційний пристрій для сухого порошку, що містить у своєму резервуарі сухий порошок, що містить (А) та багатодозовий інгаляційний пристрій для сухого порошку, що містить у своєму резервуарі сухий порошок, що містить комбінацію сполук. У подальшому прикладі комплект може містити дозувальний інгалятор, що містить аерозоль, що містить (А) у пропеленті та дозувальний інгалятор, що містить аерозоль, що містить комбінацію сполук у пропеленті. Винахід ілюстровано наступними прикладами. Неочікувані особливості комбінованих продуктів ТА 2005 з кортикостероїдом згідно з представленим винаходом продемонстровано у моделі in vivo індукованого Sephadex запалення легенів способом Kublin R et al Int Arch Allergy Immunol 1992; 98: 266-272; у дослідженні in vitro на лінії похідних від макрофагів клітин людини U-937, як описано у [Naunyn-Schmiedeberg's Arch. Pharmacol., 362:184-189, 2000; а також у моделі індукованої ацетальдегідом бронхоконстрикції (Berti et al., Arzneim-15 Forsch/Drugs Res 1994; 44:323-326]. Більш того фармакологічну взаємодію між ТА 2005 та мускариновим агоністом МЗ-рецепторів, тіотропіум бромідом, продемонстровано у моделях in vitro та in vi vo. Приклад 1-6 Дослідження in vitro на лінії похідних від макрофагів клітин людини U-937 антизапальної ефективності комбінації винаходу U-937-клітини культивують та макрофагдиференціюють 10 нг/мл форбол-міристатацетатом протягом 48 годин. Клітини тоді інкубують з 1 мкг/мл ліпополісахаридом (LPS) або LPS разом з різними концентраціями р2-агоністу, кортикостероїду або комбінації. Після різного часу інкубації вимірюють TNFa та IL-10. Тоді середовище збирають та клітини лізують для виміру циклічного аденозин 3',5'-монофосфату (сАМР). TNFa та IL-10 у культиваційному середовищі визначають комерційно доступним дослідженням ELISA, а сАМР визначають комерційною тестсистемою 3Н-сАМР. Криву доза-відгук кортикостероїду визначають у відсутності та у присутності ТА 2005 при концентраціях 10-10 та 10-8 М. Будезонід поодинці інгібує вивільнення як TNFa, так і IL-10 без впливу на вміст сАМР. Додавання ТА 2005 потенціює дію на TNFa та протидіє негативній дії будезоніду на вивільнення IL-10. Цікаво, що додавання ТА 2005 призводить до сильної стимуляції сАМР будезоні-дом. Приклад 2 - In vi vo дослідження антизапальної ефективності комбінації винаходу у індукованій Sephadex моделі набряку легенів Набряк легенів у щурів, індукований Sephadex, є моделлю, котра призводить до інфільтрування запальних клітин та довгодіючого інтерстиціального набряку. Оцінюють антизапальну активність ТА 2005 поодинці та у 11 82217 комбінації з будезонідом у порівнянні з ще одним довгодіючим агоністом b 2-адреноцепторів, формотеролом. Анестезованих щурів (200-250 г) дозують інтратрахеально кульками Sephadex (5 мг/мл) при об'ємі дози 1 мл/кг. Контрольна група отримує 1 мл/кг сольового розчину. Тест-речовини суспендують у сольовому розчині та застосовують інтратрахеально відповідно розбавленими у суспензії Sephadex. Через 24 години після застосування тварин вбивають та легені видаляють і зважують. Тоді визначають процент інгібування індукованого Sephadex набряку. Інтратрахеальна інсталяція кульок Sephadex індукує статистично значуще збільшення маси легенів порівняно з контрольними тваринами (33±3%). Лікування ТА 2005 (0,001, 0,01, 0,05 та 0,1нмоль/кг), формотеролом (0,01, 0,1, 1 та 2нмоль/кг) та будезонідом (15, 30, 60, 120, 240 та 480нмоль/кг) дає залежну від дози ремісію індукованого Sephadex набряку легенів. На базі кривих доза-відгук, неефективні дози ТА 2005 (0,01 нмоль/кг) та формотеролу (0,1нмоль/кг) вибрані для комбінації з низькими, неефективними дозами будезоніду (15, 30, 60 та 120нмоль/кг).У присутності ТА 2005, будезонід здатний значно інгібувати індукований Sephadex набряк легенів вже при низькій дозі 15нмоль/кг, а у його відсутності необхідні 240нмоль/кг. У присутності формотеролу потенціація є набагато менше помітною, оскільки значне зменшення індукованого Sephadex збільшення маси легенів спостерігають тільки з дозою кортикостероїду 120нмоль/кг. Приклад 3 - Вплив комбінації ТА 2005 та будезоніду на бронхоконстрикцію, індуковану ацетальдегідом у морських свинок Здатність ТА 2005 до контролю бронхоконстрикції та неврогенного запалення, викликаних ацетальдегідом (АсСНО), досліджено на анестезованих штучно вентильованих морських свинках, за експериментальною моделлю, описаною Berti et al., Arzneim-Forsch/Drugs Res 1994; 44:323-326. Внутрішньовенна ін'єкція АсСНО індукує залежну від дози бронхоконстрикцію, супроводжувану збільшенням гістаміну крові та крововилив еванс-блакитного у тра-хеальну тканину, вказуючи на зміну проникності судин. Захисна активність ТА 2005 (0,1 - 10 пмоль), формотеролу (0,3 до 30пмоль) або будезоніду (31,25 - 500 нмоль ) визначають після інтратрахеального спостереження поодинці або у комбінації. Усі ефекти АсСНО потенціально антагонізуються ТА 2005 та формотеролом. Однак, ТА 2005 є майже у два рази потужнішим, ніж формотерол у попередженні бронхоконстрикції, вивільненні гістаміну та крововиливу плазм. ТА 2005 виявляє також значно довшу тривалість дії при усі х вибраних дозах. Наприклад, коли два агоністи β2-адреноцепторів порівнюють при майже еквіефективних дозах як пік (10 та 30пмоль), анти-бронхоконстрикційна дія ТА 12 2005 все ще повністю наявна через 240 хвилин, а ефект формотеролу зменшується приблизно на 50%. Кортикостероїд будезонід також здатний зменшувати дію АсСНО у ди хальних шляхах морських свинок, але, як очікують, його ефективність є у наномолярних межах та є нижче спостереженої з ТА 2005 та формотеролом. Трахеальне спостереження ТА 2005 у комбінації з будезонідом дає приріст синергічної взаємодії у домінуванні трьох головних ефектів АсСНО, як-то бронхоконстрикціє, вивільнення гістаміну та крововиливу плазми у дихальних шляха х морських свинок. Приймаючи до уваги параметр бронхоконстрикції, величина ЕД50 будезоніду поодинці (396 нмоль) зменшується у 5,3 та 14,3 рази, коли це комбінують з 0,1 та 0,3пмоль ТА 2005, відповідно. Синергічної взаємодії досягають також додаванням формотеролу до кортикостероїду. Однак, ця комбінація є . менш ефективною, ніж, отримана з ТА 2005. Фактично величина ЕД50 будезоніду зменшується у 3,0 та 5,9 рази, коли це комбінують з 0,3 та 1 пмоль формотеролу, Приклад 4 - Дія будезоніду на індуковану ТА 2005 десенсибілізацію у ізольованих трахеальних смужках від сенсибілізованих яєчним альбуміном морських свинок Пролонговане застосування 32-агоністів призводить до даун-регуляції β2-адреноцепторів легенів. Цьому феномену можна протидіяти суп утнім лікуванням кортикостероїдом. У представленому дослідженні трахеальні смужки отримано від сенсибілізованих яєчним альбуміном морських свинок (100 мг/кг інтраперитонально та 100мг/кг підшкірно, за 20 діб перед умертвленням) піддають b 2-десенсибілізації контактом протягом двох 20-хвилинних періодів з вищезазначеної максимальної концентрації салбута-молу (5*10-6 М). У деяких експериментах морські свинки за 24 та 1,5 годин перед умертвленням отримали по 50мг/кг будезоніду інтраперитонально. Після р 2-десенсибілізації, ТА 2005 дає приблизно тричі меншу потужність у релаксації індукованого карбахолом звуження. Попереднє лікування будезонідом реверсує правосторонній зсув кривих доза-відгук ТА 2005 та навіть потенціює у приблизно 6 разів його ефекти релаксації. Приклад 5 - Дія комбінації ТА 2005/гіотропіум бромід на індуковане карбахолом звуження у ізольованих трахеальних смужках від морських свинок Фармакологічна взаємодія між агоністом b 2адреноцептор1в ТА 2005 та агоністом МЗрецепторів тіотропіум бромідом досліджують у ізольованих трахеальних смужках від морських свинок, скорочених карбахолом. ТА 2005 (10~12 М) та тіотропіум бромід (3*10-10 Μ) інгібують індуковане карбахо-лом звуження на 29,3 ± 6,1% та 17,1 ± 2,2%, відповідно. Коли два лікування є комбінованими релаксація є набагато більшою (59,1 ±7,7%). 13 82217 Результати показано у фіг.1 (Зауваження: CHF 4226 є синонімом ТА 2005). Приклад 6 - Дія комбінації ТА 2005 та тіотропіум броміду у контролі індукованої ацетилхоліном бронхоконстрикції у морських свинок Морських свинок готують як спочатку описано Konzett та Rossler, Naunyn-Schmiedeberg's Arch Pharmacol, 1940; 195: 556-557. Бронхоконстрикцію індукують внутрішньовенним застосуванням ацетилхоліну (20 мкг/кг). Досліджують антибронхоспазматичну активність різних концентрацій тіо- . тропіуму (0,1 30 пмоль) або ТА 2005 (0,3 - 100 пмоль), поодинці або у комбінації. Як ТА 2005, так і тіотропіум здатні залежно від дози антагонізувати індуковану ацетилхоліном бронхоконстрикцію. Тіотропіум дає 5,2-кратно (Р