Спосіб корекції активності ферментів крові індиків за протозойних інвазій

Реферат: Спосіб корекції активності ферментів крові індиків при лікуванні протозойних інвазій включає пероральне використання хворим індикам антигельмінтика бровітакокциду у дозі 2,0 г/кг корму один раз на добу протягом п'яти діб. Одночасно із бровітакокцидом додатково застосовують премікс кальфостонік у дозі 20,0 г/кг корму 1 раз на добу протягом п'яти діб. UA 89069 U (54) СПОСІБ КОРЕКЦІЇ АКТИВНОСТІ ФЕРМЕНТІВ КРОВІ ІНДИКІВ ЗА ПРОТОЗОЙНИХ ІНВАЗІЙ UA 89069 U UA 89069 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до галузі ветеринарної медицини, зокрема ветеринарної фармакології та паразитології, а саме до способів лікування протозойних інвазій птиці. Заявлений спосіб може бути використаний у господарствах із різними формами власності, що вирощують і утримують птицю в умовах протозойних інвазій, для нормалізації обміну речовин у птиці при застосуванні антигельмінтних препаратів з метою інтенсифікації галузі. Відомі способи лікування птиці при асоціативній еймеріозо-гістомонозній інвазії (Скакун Н.П., Степанова Н.Ю. Сравнительная оценка гепатопротекторной, антиоксидантной и желчегонной активности флавоноидных препаратов. //Врачебное дело. - 1988. - № 12. - С. 52-54; Лялін П.В. Розповсюдження, видовий склад збудників та удосконалення заходів боротьби з еймеріозом індиків в спеціалізованих господарствах і фермах України: Автореф. дис. … канд. вет. наук. Харків, 1994. – 24 с; Лялин П.В. К вопросу эпизоотологии эймериоза и кишечных гельминтозов индеек в условиях Лесостепи Украины. //Тр.: Всесоюз. конф. молодых ученых и аспирантов по птицеводству. - Загорск, 1989. - С. 96-97; Громашевская Л.Л. Некоторые замечания к исследованию активности аминотрансфераз и трактовки его результатов у больных с патологией печени. //Лаб. диагн. - 1997. - № 2. - С. 7-10; Методические указания к физикохимическим, морфологическим, биохимическим и иммунологическим исследованиям крови сельскохозяйственных животных. /В.Е. Чумаченко, Н.А. Судаков, В.И. Береза и др. - Киев, 1991. - 180 с; Германюк Я.Л., Мартынюк М.М. Аминотрансферазы у сельскохозяйственных животных. //Исслед. в животноводстве: Науч. тр. Львовского зооветеринарного института - Киев, 1964. - С. 56-58; Данченко О.О. Рівень узгодженості показників проантиоксидантної рівноваги печінки гусей як критерій оцінки пошкоджуючого впливу технологічних чинників. //Наук. вісн. Львівського нац. ун-ту вет. мед. - Львів, 2009. Т.П. - № 3 (42). ч.3. - С. 26-34; Румянцева Ж.Н. Фармакодинамика гепатопротекторов из расторопши пятнистой. //Врачебное дело. - 1991. № 5. - С. 15-19; Тараненко И.Л. К изучению гельминтофауны индеек юга Украины //Мат. науч. конф. по ветеринарии. Одесский с.-х. ин-т. 1970. - С. 67-71; Коваленко И.И., Кальченко А.А., Тронин Г.В. Гельминты и гельминтозы домашней птицы в хозяйствах Херсонской области. //Ветеринария: Киев, Урожай, 1966. - Вып. 6. - С. 32-34; Лялин П.В. Кишечные инвазии в условиях птицеферм и фермерских хозяйств Украины //Проблеми зооінженерії та ветеринарної медицини: /Зб. наук, праць ХЗВІ - Харків, 2001, Вип. 7 (31). - С. 245-246; Лялин П.В. Деякі питання епізоотології еймеріозо-нематодозних інвазій шлунково-кишкового тракту курей та індиків. //Вет. медицина: Міжвід. темат. наук. зб. - Харків, 2003. - № 81. - С. 202-204), у яких використовуються різні лікувально-профілактичні засоби при асоціативній еймеріозогістомонозній інвазії птиці, що пригнічують ріст та розвиток еймерій і гістомонад у кишечнику птиці, сприяють нормалізації морфологічних показників крові, нейтралізують продукти порушеного обміну речовин і забезпечують видужання птиці. Недоліком відомих способів є мала ефективність знешкодження продуктів метаболізму еймерій і гістомонад, які діють токсично на гепатоцити, що призводить до зниження білоксинтезувальної функції печінки. Поряд з цим підвищується проникність біологічних мембран клітинних оболонок, що спричиняє гіперферментемію у сироватці крові, зокрема амінотрансфераз (АсАТ і АлАТ) і дегідрогеназ (ЛДГ і ГГТ). Деструкція ентероцитів слизової оболонки кишечнику призводить до зниження активності лужної фосфатази і каталази у сироватці крові індиків, уражених еймеріозо-гістомонозною інвазією. Найбільш близьким по суті до способу, що заявляється, є спосіб лікування птиці при асоціативній еймеріозо-гістомонозній інвазії (Богач М.В., Березовський А.В., Тараненко І.Л. Інвазійні хвороби свійської птиці. - К.: Ветінформ, 2007. - 224 с.) Відомий спосіб включає пероральне застосування препарату бровітакокциду птиці у дозі 2,0 г/кг корму. Спосіб базується на здатності бровітакокциду спричиняти загибель еймерій та гістомонад у кишечнику птиці. Заявлений спосіб і найближчий аналог мають суттєві спільні ознаки: обидва способи включають пероральне використання антигельмінтного препарату бровітакокциду у дозі 2,0 г/кг корму протягом п'яти діб. Недоліком відомого способу є недостатня корекція ферментів крові птиці, які відіграють важливе значення у патогенезі протозойних інвазій та ефективності лікування. Заявлений нами спосіб усуває вказані недоліки найближчого аналогу і забезпечує високу ефективність видужання птиці. Заявлений спосіб прискорює корекцію активності ферментів у сироватці крові індиків за умов протозойної інвазії. Таким чином, запропонований спосіб сприяє корекції активності ферментів у сироватці крові індиків, а це, у свою чергу, прискорює видужання хворих і потребує менших економічних затрат на їх лікування.3. Суть винаходу (корисної моделі) 1 UA 89069 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 В основу корисної моделі поставлена задача розробити ефективний спосіб корекції активності ферментів крові при лікуванні протозойних інвазій, зручний в застосуванні, економічно вигідний для використання в господарствах з різними формами власності, що вирощують птицю. Поставлена задача вирішується тим, спосіб включає пероральне застосування препарату бровітакокциду птиці у дозі 2,0 г/кг корму, згідно з корисною моделлю, одночасно з бровітакокцидом додатково згодовують кальфостонік у дозі 20,0 г/кг корму. При протозойних інвазіях паразити знаходяться у кишечнику птиці не як моноінвазія, а як асоціативні поліінвазії різні за якісним і кількісним складом. Зокрема, у Західних областях України, найбільш поширений є сукупний паразитоценоз еймерій і гістомонад. Еймерії уражають епітеліальні клітини слизової оболонки товстого відділу кишечнику. В процесі життєвого циклу еймерії проходять три стадії біологічного розвитку - шизогонію, мерозоітогонію і спорогонію. Перші дві стадії внутрішньоклітинні - розвиток паразита проходить в епітеліальних клітинах кишечнику птиці, тварин (ендогенний розвиток). Третя стадія відбувається у зовнішньому середовищі (екзогенний розвиток). Збудником еймеріозу індиків є Eimeria adenoides, ендогенний розвиток якої проходить у ворсинках і криптах нижнього відділу тонкого кишечнику, у сліпих відростках і в прямій кишці. Шизонти другої генерації локалізуються по всій поверхні слизової оболонки сліпих кишок. Травмування і руйнування тканин слизової оболонки сприяє розвитку інших паразитарних та інфекційних уражень кишечнику. Внутрішньоклітинне паразитування еймерій характеризується впливом на фізіологобіохімічні та імунологічні реакції організму хазяїна. Проникнення еймерій у клітини слизової оболонки кишечнику відбувається на стадії шизогонії (мерозоїти). Розмножуючись у слизовій оболонці паразити спричиняють масову загибель епітеліальних клітин внаслідок чого порушується цілісність слизової оболонки. В уражені ділянки проникає мікрофлора, яка ускладнює перебіг хвороби, спричиняє локальні некрози слизової оболонки, що призводить до погіршення засвоєння поживних речовин корму. Гістомоноз - інвазивне захворювання індичат, рідше курчат, що характеризується гнійним запаленням однієї або обох сліпих кишок і ураженням печінки. Викликається гістомонадами (Hystomonas meleagridis). Гістомоноз характеризується переважним ураженням печінки, у якій розвиваються своєрідні некротичні фокуси, оточені геморагічною зоною. Встановлено, що еймерії і гістомонади у процесі життєдіяльності виділяють метаболіти, що діють токсично на організм хазяїна та пригнічують активність його ферментів у сироватці крові індиків. Якщо врахувати, що еймеріостатичні препарати, що застосовують для профілактики еймеріозу, також діють імунодепресивно, то це стає об'єктивною підставою для необхідності корекції активності ферментів у сироватці крові у випадках лікування індиків уражених паразитами. В процесі розвитку інвазії паразити виділяють в кров продукти метаболізму, які діють токсично на гепатоцити, що призводить до зниження білоксинтезувальної функції печінки. Поряд з цим підвищується проникність біологічних мембран клітинних оболонок, що спричиняє гіперферментемію у сироватці крові, зокрема амінотрансфераз (АсАТ і АлАТ) і дегідрогеназ (ЛДГ і ГГТ). Деструкція ентероцитів слизової оболонки кишечнику призводить до зниження активності лужної фосфатази і каталази у сироватці крові індиків, уражених еймеріозогістомонозною інвазією. Технічний результат заявленого способу обумовлений одночасним застосування протипаразитарного препарату бровітакокциду та преміксу кальфостоніку механізмом впливу цих препаратів на організм птиці за асоціативної еймеріозо-гістомонозної інвазії та роллю цих препаратів у процесах обміну речовин і, зокрема, впливом їх на активність ферментів у сироватці крові індиків. Так, бровітакокцид - це є комплексна сполука, що містить ампроліум гідрохлорид (125 мг), вікасол (2 мг), вітамін А (10 000 ОД) та наповнювач (до 1 г). Компоненти препарату за фізикохімічними властивостями є сумісні та діють як синергісти. Ампроліум - конкурентний інгібітор тіаміну. Імітуючи його структуру, пригнічує використання вітаміну паразитами, що викликає виражену кокцидіостатичну дію. Вікасол і вітамін А підвищують функціональну здатність епітелію і зменшують крововиливи на слизовій оболонці кишечнику. Кальфостонік - вітамінно-мінеральний премікс, який містить вітаміни А, Д, Е, К, В, амінокислоти, макро- і мікроелементи. Сумарна дія вказаних біологічно важливих елементів проявляє високу гепатопротекторну та імуностимулювальну дії. Вони також активізують 2 UA 89069 U 5 10 15 20 25 30 35 еритропоез, стимулюють утворення антитіл та підвищують імунний стан організму. Поєднаний вплив препаратів бровітакокциду і кальфостоніку на обмін речовин у птиці за протозойних інвазій обумовлює нормалізацію функціонування систем і органів, що проявляється у корекції активності ферментів крові. Таким чином наведені інформативні відомості пояснюють технічний результат заявленого способу, підтверджуючи його ефективність і об'єктивність. При проведені патентно-інформаційного пошуку авторами і заявником виявлено технічне рішення (Богач М.В., Березовський А.В., Тараненко І.Л. Інвазійні хвороби свійської птиці. - К.: Ветінформ, 2007. - 224 с.), що містить найбільшу кількість суттєвих ознак, спільних із заявленим способом. Спосіб включає згодовування птиці з кормом бровітакокциду у дозі 2,0 г/кг комбікорму протягом п'яти діб. Але наявність зазначених, спільних із найближчим аналогом ознак недостатня для одержання технічного результату, який забезпечує заявлений спосіб. У патентній і науково-технічній літературі не знайдено технічних рішень, в яких були б описані відомості про ознаки, що відрізняють заявлений спосіб від найближчого аналогу і забезпечують досягнення технічного результату тим, що одночасно з бровітакокцидом додатково застосовують кальфостонік у дозі 20,0 г/кг корму. Реалізацію заявленого способу здійснюють у такий спосіб. У господарствах, в яких птиця хворіє на асоціативну еймеріозо-гістомонозну інвазію, лікування проводять шляхом поєднаного застосування антигельмінтика бровітакокциду та преміксу кальфостоніку.У день постановки діагнозу на еймеріозо-гістомонозну інвазію птиці застосовують згодовуючи з кормами бровітакокцид у дозі 2,0 г/кг корму сукупно з кальфостоніком у дозі 20,0 г/кг корму один раз на добу протягом п'яти діб. Ефективність заявленого способу та його переваги перед найближчим аналогом підтверджені прикладом конкретного виконання.4.2. Приклад конкретного виконання способу У індивідуальному господарстві СФГ "Гамалія" с. Дмитровичі, Пустомитівського району, Львівської області було відібрано 60 індичат, 40 добового віку. За принципом аналогів індики були поділені на 3 групи по 20 індиків у кожній (контрольну і дві дослідні). Індики контрольної групи були клінічно здоровими. Індики двох дослідних груп були уражені асоціативною еймеріозо-гістомонозною інвазією. Індичатам дослідної групи Д1 для лікування задавали бровітакокцид у дозі 2 г/кг корму. Індичатам дослідної групи Д 2 задавали бровітакокцид у дозі 2 г/кг корму сукупно з кальфостоніком у дозі 20 г/кг корму. Матеріалом для дослідження слугувала кров. З підкрильцевої вени венозну кров відбирали на 1, 3, 5 та 10 доби після згодовування вищезгаданих препаратів. В крові визначали: активність аспартатамінотрансферази, аланін-амінотрансферази, лактатдегідрогенази, гаммаглутамілтрансферази, лужну фосфатазу та каталазу. Одержані показники ферментів крові індиків уражених асоціативною еймеріозогістомонозною інвазією та лікованих бровітакокцидом і кальфостоніком як дослідних так і контрольної груп подані у таблиці 1. Таблиця 1 Активність ферментів у сироватці крові індиків, уражених еймеріозо-гістомонозною інвазією і лікованих бровітакокцидом і кальфостоніком (М±m; n=20) Групи 1 доба К Д1 Д2 54,5±2,5 91,6±2,4 94,6±2,4 К Д1 Д2 19,7±1,4 42,7±2,8 42,7±2,8 К Д1 Д2 575,4±26,3 846,5±13,5 846,5±23,5 Період досліджень (доби) 3 доба 5 доба АсАТ, ммоль/л 52,4±3,6 56,8±3,2 90,8±3,4 87,8±2,1 83,8±2,4 73,2±3,6 АлАТ, ммоль/л 19,5±2,8 19,6±3,2 40,4±2,5 38,2±2,8 30,7±2,6 26,5±2,3 ЛДГ, ммоль/л 587,6±24,2 564,8±22,4 732,8±18,6 684,3±16,3 712,4±16,2 674,8±14,3 40 3 10 доба 56,5±3,4 62,7±2,7 60,8±3,2 19,7±3,6 23,6±3,2 21,±2,9 578,6±18,5 592,4±14,2 564,2±14,6 UA 89069 U Продовження таблиці 1 Групи 1 доба К Д1 Д2 К Д1 Д2 10 15 20 25 30 35 40 230,8±18,2 124,6±14,3 124,6±14,3 К Д1 Д2 5 74,6±2,3 96,7±2,8 96,7±2,8 348,7±24,6 254,2±26,8 254,2±26,8 Період досліджень (доби) 3 доба 5 доба ГГТ, ммоль/л 75,8±2,5 75,8±2,5 90,2±2,3 87,4±3,6 89,6±1,4 80,4±2,6 ЛФ, ммоль/л 238,6±16,4 246,6±12,8 160,4±12,2 188,4±16,4 195,6±12,б 202,4±14,6 Каталаза, ммоль/л 342,8±23,3 354,3±18,7 285,7±22,4 306,2±16,3 247,6±14,2 302,7±16,2 10 доба 74,8±2,7 72,4±3,4 78,6±2,4 234,7±14,2 190,8±16,2 223,4±12,5 342,4±23,5 304,5±18,5 354,8±14,3 Результати досліджень, що наведені в таблиці, свідчать, що застосування препаратів індикам, уражених асоціативною еймеріозо-гістомонозною інвазією, сприяли підвищенню показників активності ферментів крові, крім того, сукупне застосування бровітакокциду з кальфостоніком проявляло кращу дію на ферментну систему крові індиків ніж застосування лише бровітакокциду. За наявності в організмі патологічного процесу, в крові тварин і птиці змінюється якісний і кількісний склад ферментів, що відображають інтенсивність і спрямованість розвитку патології. В наших дослідах (табл. 1) встановлено, що у індиків, уражених еймеріозо-гістомонозною інвазією (групи Д1 і Д2) у крові наявна підвищена активність ферментів. Вона зумовлена підвищенням проникності клітинних мембран і надходженням внутрішньоклітинних ферментів у кров'яне русло. При застосуванні бровітакокциду для лікування індиків, що уражені еймеріозо-гістомонозною інвазією встановлено поступову нормалізацію активності амінотрансфераз і фосфатаз у сироватці крові. При дослідженні активності амінотрансфераз у сироватці крові індиків, що уражені еймеріозо-гістомонозною інвазією (групи Д1 і Д2), активність АлАТ була в 2,2 рази вищою, порівняно з клінічно здоровою птицею. При застосуванні для лікування бровітакокциду активність ферменту на 3-у добу залишалася в 2 рази вищою від контрольної. Вона дещо знизилася на 5-у добу, проте, навіть на 10-у добу була на 20 % вищою за нормальних величин. Активність АсАТ в сироватці крові, хворих індиків була на 68 % вищою ніж у клінічно здорових. Вона незначно знизилась на 3-у добу, хоча і була на 65,6 %, а на 5-у добу на 54,6 % вище, ніж в нормі. На 10-у добу активність Ac AT у індиків, яких лікували бровітакокцидом, була на 11 % вище, ніж у клінічно здорових індиків. Мала величина коефіцієнта АсАТ/АлАТ протягом досліду, вказує на вищу активність АлАТ у сироватці крові і дещо нижчу активність АсАТ. Навіть на період клінічного одужання індиченят, яких лікували бровітакокцидом, величина коефіцієнта АсАТ/АлАТ складала 2,66±0,05 од. проти 2,86±0,03 од., що вказує на те, що активність АлАТ нормалізується повільніше, ніж активність АсАТ. Це вказує на наявність глибокої деструкції клітинних оболонок гепатоцитів та мітохондріальних мембран, спричиненої токсинами еймерій і гістомонад. Внаслідок підвищення проникності клітинних оболонок у сироватці крові хворих індиків, активність ЛДГ була на 12,3 %, а ГГТ - на 29,6 % вище від клінічно здорової птиці. Це внутрішньоклітинні ферменти, що локалізуються в клітинах жовчних протоків. Зниження активності вказаних ферментів у сироватці крові індиків відбувалося поступово на 3-у і 5-у доби лікування. Нормалізація активності ферментів на 5-у добу після клінічного одужання вказує на відновлення функціонального і морфологічного станів печінки. У крові хворих індиків встановлено низьку активність каталази - на 38 % нижче ніж у клінічно здорової птиці. Цей фермент у великих кількостях знаходиться в еритроцитах і його активність у крові, в основному, залежить від їх кількості. Отже, зменшення кількості еритроцитів у хворих індиків призвело до зниження активності каталази крові. Враховуючи те, що на період клінічного одужання індиків (5-а доба), та за 5 діб після одужання (10-а доба) кількість еритроцитів була вірогідно низькою, це призвело до зниження активності каталази крові індиків після лікування бровітакокцидом, відповідно на 16 % і 9 %. 4 UA 89069 U 5 10 15 20 25 30 Лужна фосфатаза локалізується в ентероцитах слизової оболонки кишечнику. Внаслідок ураження їх еймеріями і гістомонадами активність ферменту у сироватці крові індиків була на 23 % нижче нормальних величин навіть на 5-у добу після клінічного одужання. Швидшу нормалізацію активності ферментів у сироватці крові встановлено при лікуванні індиків бровітакокцидом сукупно із кальфостоніком. Встановлено, що у сироватці крові індиків активність амінотрансфераз на 3-у добу лікування залишалася на високому рівні АсАТ була на 60 %, а АлАТ на 57 % вищою, від клінічно здорової птиці. Активність ферментівзначно знизилась на 5-у добу і нормалізувалася на 10-у добу досліду. Тобто, за 5 діб після клінічного одужання птиці. Величина коефіцієнта АсАТ/АлАТ поступово вирівнювалася і на 10-у добу співвідношення між амінотрансферазами у сироватці крові індиків було в межах нормальної величини. Отже, при застосуванні для лікування індиків бровітакокциду сукупно з кальфостоніком (група Д2) на 5-у добу загальна активність амінотрансфераз була дещо вищою від нормальної. Проте, коефіцієнт АсАТ/АлАТ був у межах нормальних величин. Це вказує на те, що відбувається стабілізація проникності як зовнішньої клітинної оболонки гепатоцитів, так і внутрішніх мітохондріальних мембран. У індиків, лікованих бровітакокцидом сукупно із кальфостоніком (група Д2), у сироватці крові нормалізувалася активність ферментів фосфорилювання - ГГТ на 5-у добу, ЛДГ на 10-у добу досліду. Це внутрішньоклітинні ферменти активність яких у сироватці крові залежить від проникності клітинних мембран. Активність каталази в сироватці крові лікованих індиків нормалізувалася на 5-у добу, тобто на період клінічного одужання, а активність лужної фосфатази нормалізувалася за 5 діб після клінічного одужання індиків. Каталаза захищає клітини гепатоцитів від агресивних форм кисню, що утворюються при розщепленні фосфоліпідів. Активність лужної фосфатази у сироватці крові індиків відображає морфологічний стан слизової оболонки кишечнику. Отже, показники активності ферментів крові лікованих індиків, наведені в таблиці свідчать, що за умов асоціативної еймеріозо-гістомонозної інвазії, сукупне застосування бровітакокциду з кальфостоніком проявляє кращу лікувальну ефективність, нормалізуючи ферментну систему крові індиків. Таким чином, дані одержані в прикладі конкретного виконання способу підтверджують ефективність заявленого способу щодо корекції активності ферментів крові та лікувального ефекту заявленого способу. ФОРМУЛА КОРИСНОЇ МОДЕЛІ 35 Спосіб корекції активності ферментів крові індиків при лікуванні протозойних інвазій, що включає пероральне використання хворим індикам антигельмінтика бровітакокциду у дозі 2,0 г/кг корму один раз на добу протягом п'яти діб, який відрізняється тим, що одночасно із бровітакокцидом додатково застосовують премікс кальфостонік у дозі 20,0 г/кг корму 1 раз на добу протягом п'яти діб. 40 Комп’ютерна верстка А. Крижанівський Державна служба інтелектуальної власності України, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601 5