Протипухлинний засіб

Реферат: Винахід належить до медицини, а саме до галузі онкології, та може бути використаний для лікування доброякісних та злоякісних пухлин людини. Запропонований протипухлинний засіб є змішанолігандним комплексом кальцію з етилендіамінтетраацетатом та глюконатом. Новим є те, що компоненти взяті в співвідношенні: кальцієва сіль глюконової кислоти 1 гр/моль та динатрієва сіль етилендіамінтетраоцтової кислоти 1 г/моль. Засіб не містить надлишків вихідних речовин. Засіб, що заявляється, не є токсичним (ЛД 50 при внутрішньочеревному 2 введенні білим нелінійним щурам становить 8000,0 мг/0,1м ). Головною особливістю його є здатність гальмувати ріст доброякісних та злоякісних пухлин із їх метастазами та активувати апоптоз ракових клітин. Все це дозволяє віднести його до сучасних протипухлинних засобів нової генерації, які можуть мати велике майбутнє у фармакології. OOC O CH2 CH2 COONa N HO CH2 OH OH Ca CH2 N HO COO OOC CH2 CH2 COONa UA 103694 C2 (12) UA 103694 C2 UA 103694 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Винахід належить до медицини, а саме до галузі онкології, та може бути використаний для лікування хворих із доброякісними та злоякісними пухлинами з їх метастазами у внутрішні органи. Відомий засіб для лікування злоякісних пухлин, що містить суміш компонентів: кальцію глюконату 120,0-150,0 (г/л); динатрієвої солі етилендіамінтетраоцтової кислоти 13,3-16,7 (г/л); гідроокису натрію 7,1-8,9 та дистильованої води до 1 л, причому кальцію глюконат і динатрієва сіль етилендіамінтетраоцтової кислоти взяті у співвідношенні (8,8-9,2):1 (див. Патенти України №№ 76671, МПК7, А61K31/185, А61K33/06, А61Р35/00, Опубл. 15.08.2006). Недоліком цього протипухлинного засобу є: - співвідношення двох основних інгредієнтів у водній суміші - динатрієвої солі етилендіамінтетраоцтової кислоти 13,3-16,7 (г/л) та глюконату кальцію 120,0-150, (г/л), що пропорційно відповідає співвідношенню 1:(8,8-9,2) (ваг %), хімічно незбалансоване і неприв'язане до їх грам/молів (1:1 гр/моль), при якому тільки й можлива повна хімічна їх взаємодія в розчині; - через вкрай слабку розчинність суміші з-за надлишку у ній солі глюконату кальцію неможливо створювати інфузійні форми препарату; - пігулкові форми препарату проявлятимуть низьку протипухлинну дію; - надлишки глюконату кальцію перевантажують кров, що не виключає можливі побічні (негативні) соматичні симптоми у вигляді гіперкальціємії, прискорення серцевих скорочень, підвищення артеріального тиску, підвищення згортання крові, розвитку сечокам'яного діатезу. Найбільш близьким аналогом до засобу, що заявляється, є засіб для лікування злоякісних пухлин, який містить кальцієву сіль глюконової кислоти (кальцію глюконат) та динатрієву сіль етилендіамінтетраоцтової кислоти (натрію ЕДТОК) в пропорції 1:1 (або - 50:50 (ваг. %,), див. Патенти України № 42244, МПК 7 А61K31/191, А61K31/185, А61Р35/00, Опубл. 15.10.2001). Недоліком найближчого аналога є: - незбалансоване співвідношення основних інгредієнтів. Це пояснюється наступним: якщо робити суміш за вказаною пропорцією, то в 1 л розчину може міститися, наприклад: 1 варіант - 100,0 г одного + 100,0 г другого компонентів, або 2 варіант - 400,0 г одного + 400,0 г другого компонента (всього 800,0). Беручи до уваги те, що молекулярна маса динатрієвої солі етилендіамінтетраоцтової кислоти дорівнює - 372,0 г, а глюконату кальцію - 223,0 г, то тільки у водному розчині 2-го варіанта (за певних умов) може утворитися одна хелатна сполука змішанолігандний комплекс кальцію з етилендіамінтетраацетатом та глюконатом (в пропорції 1:1 (г/моль) або 372,0 г + 223,0 г). Отже, у 1 л такого розчину залишається баласт непрореагованих між собою як динатрієвої солі етилендіамінтетраоцтової кислоти, так і глюконату кальцію, (28,0 г та 177,0 г відповідно), які будуть знаходиться у дисоційованому стані. Розчинність сполуки масою 800,0 г речовини в 1 л води дуже невелика, тобто погана (слабка), що потребуватиме додавання в розчин інших хімічних сполук або високотермічної обробки, або ризикованого автоклавування під високим тиском, або ще інших заходів; - всі надлишки непрореагованих між собою в розчині суміші речовин, потрапляючи у кров при внутрішньовенному лікуванні, стають токсичними через їхню високу концентрацію, створюють комплекси-деривати, поєднуючись з біомолекулами тканин злоякісних пухлин, які розпадаються, є тромбонебезпечними, цитотоксичними шлаками; - не виключається також можливість розвитку побічних негативних соматичних симптомів у вигляді гіперкальціємії, прискорення серцевих скорочень, підвищення артеріального тиску, підвищення згортання крові, розвитку сечокам'яного діатезу, імунодепресивних станів, склерозу судин та інтоксикації печінки. В основу винаходу поставлена задача створити такий засіб, у якому шляхом зміни технологічних умови та співвідношення вказаних інгредієнтів, усуваються баластні надлишки непрореагованих між собою в інфузійній формі речовин, чим унеможливлюється інтоксикація організму та досягається високий протипухлинний ефект при лікуванні хворих. В ході вирішення цієї задачі при розробці винаходу було науково обґрунтоване створення нової ефективної, нетоксичної, хімічно коректної комплексної (хелатної) сполуки, змінивши технологічні умови та відпрацювавши єдино вірне співвідношення вказаних інгредієнтів у їхній пропорції, а саме: 1:1 (тр./моль) (372,0:223,0 відповідно). Таким чином, був винайдений новий протипухлинний засіб змішанолігандний комплекс кальцію з етилендіамінтетраацетатом та глюконатом, що має високоефективну дію. Після проведення доклінічних експериментальних досліджень на трьох моделях раку у тварин та визначення АНД для створення інфузійної форми засобу, що заявляється, змішанолігандний комплекс кальцію з етилендіамінтетраацетатом та глюконатом, з відсутністю 1 UA 103694 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 у інфузійному розчині надлишку основних компонентів, чим анулюється можливість розвитку побічних (токсичних) ефектів на організм хворих від їх впливу, була доведена його ефективність активувати апоптоз ракових клітин. Відомо, що апоптоз чужорідних біоагентів, паразитарних та ракових клітин, - є природним, генетично детермінованим процесом, який протікає при фізіологічній температурі тіла. Головна дія протипухлинного засобу, що заявляється, - активація апоптозу ракових клітин на генетичному рівні з паралельним підвищенням показника природної кілерної активності лімфоцитів Т-клітинної системи імунітету (клітин-кілерів). Прототипами за протипухлинною дією засобу, що заявляється, можуть бути препарати Мебіфон та Цисплатин. Але вони з-за відсутністю в них кальцію не можуть доносити його 2+ іонізовану форму (Са ) у ядра ракових клітин, де він бере участь у процесі активації ферменту 2+ апоптозу - Са -АТФ-ази (кальцієзалежної аденозинтрифосфатази). Мебіфон та Цисплатин належать до цитотоксичних хіміотерапевтичних засобів протипухлинної дії (так ЛД 50 Мебіфону в 2 мишей дорівнює 160,0 мг/1 м ). В доклінічних випробуваннях протипухлинного засобу, який заявляється, на декількох моделях раку була встановлена його нетоксичність (показник ЛД 50 змішанолігандного комплексу кальцію з етилендіамінтетраацетатом та глюконатом при внутрішньочеревному введенні білим 2 нелінійним мишам складав 8000,0 мг/0,1 м ). Головною онкофармакологічною дією змішанолігандного комплексу кальцію з етилендіамінтетраацетатом та глюконатом, є гальмування росту пухлини та зменшення кількості метастазів і відсотка об'єму метастазів злоякісних пухлин > 70 % після лікування. Все це дозволяє віднести його до сучасних нетоксичних протипухлинних засобів нової генерації, які належать до класу антиметаболітів і матимуть велике майбутнє в галузі онкофармакології. В експериментах на білих нелінійних мишах та на чорних мишах лінії С57 В16 на моделях раку легень (див. Табл. 1, 2) засіб вводився у попередньо встановленій середньотерапевтичній дозі - 400,0 мг/кг маси тіла. Гістологічно досліджені тканини легень. Було встановлено, що під впливом змішанолігандного комплексу кальцію з етилендіамінтетраацетатом та глюконатом протипухлинна та антиметастатична дія в легенях йде шляхом активного апоптозу ракових клітин, тому що туди надходить іонізований Са, що вкрай необхідний для активації Са-АТФ-ази, яка "запускає" апоптоз. Дослідження Z-потенціалу (mV) клітин пухлин в експерименті методом електрофорезу культури клітин пухлин в поліакриламідному гелі до і після лікування тварин вказаним засобом встановило достовірно негативний Z потенціал (mV) культури клітин пухлин у нелікованих тварин та достовірне збільшення Z потенціалу в культурі клітин пухлин в групі пролікованих тварин змішанолігандним комплексом кальцію з етилендіамінтетраацетатом та глюконатом: 16,74±1,06 (mV) проти 27,42±1,41 (mV) відповідно (р