Застосування імуностимулятора “аміксин” як профілактично-лікувального засобу при аеромонозі коропових риб

Реферат: Застосування імуностимулятора аеромонозі коропових риб. "Аміксин" як профілактично-лікувального засобу при UA 76595 U (12) UA 76595 U UA 76595 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Корисна модель належить до галузі ветеринарної медицини, зокрема до іхтіопатології, а саме до профілактично-лікувальних засобів пролонгованої дії для ставових риб, і може бути застосована для лікування та профілактики аеромонозу в умовах ставового рибництва в рибгосподарствах з різними формами власності. Успішний розвиток рибництва як галузі, залежить від фізіологічного стану організму риб та механізмів їх природного захисту. Природна резистентність риб - це вроджена здатність їх організму протистояти агресивному впливу патогенних факторів біотичної та абіотичної природи, в тому числі, збудників інфекційних та інвазійних захворювань та продуктів їх життєдіяльності (екзо- та ендотоксинів). На даний час все більшого значення у регуляції роботи імунної системи риб набувають техногенні впливи на середовище їх проживання, що викликають пригнічення вродженого і набутого імунітету, розвитку інфекційних захворювань. Це є найбільшою проблемою промислового рибництва. Дослідження останніх років показали, що у риб наявні ті ж самі механізми імунітету, що і в ссавців, тільки їх прояв залежить від температури тіла риби, яка, у свою чергу, коливається відповідно до температури води. Саме цим імунобіологічні реакції у риб принципово відрізняються від таких у вищих хребетних тварин. Водне середовище проживання визначає характерні особливості імунної системи риб: вона більш лабільна і вплив факторів зовнішнього середовища сприяє активації механізмів вродженого імунітету. Температура води є сильним зовнішнім подразником, вона не тільки регулює фізіологічний стан, але і впливає на прояв імунної відповіді. Мікроорганізми, які знаходяться у воді, крім здійснення процесів мінералізації органічних речовин і перетворень неорганічних сполук часто є причиною виникнення інфекційних хвороб водних організмів і зокрема риби. Актуальним і перспективним для стабілізації і підвищення продуктивності рибництва є пошук препаратів, які коригують механізми імунного захисту та пом'якшують вплив несприятливих факторів на організм риб. Регулювання механізмів імунобіологічного нагляду набуває важливого значення особливо при вирощуванні риби в сучасних напружених екологічних умовах при постійно зростаючому антигенному навантаженні на її організм. Крім цього, у світовій ветеринарній практиці в останні десять років чітко простежується тенденція до зменшення використання антибіотиків. Інтенсивна антибіотикотерапія стала однією з причин порушення нормального бактеріоценозу та зниження імунобіологічної реактивності вирощуваних тварин, у тому числі риб, виникнення резистентних штамів збудників, що нівелює терапевтичний ефект. Тому метод неспецифічної імунопрофілактики знаходить все більшу підтримку у вітчизняній та зарубіжній іхтіопатології. Серед інфекційних хвороб риб більшість мають бактеріальну етіологію. Найбільш поширеними і небезпечними є аеромоноз та псевдомоноз. Аеромоноз (краснуха, геморагічна септицемія, інфекційна водянка), викликається умовно патогенними бактеріями з родини Vibrionaceae, роду Aeromonas. Захворювання коропових, у більшості випадків, викликається патогенними штамами Aeromonas hydrophila (грамнегативна, оксидазопозитивна, рухлива паличка), що виділяється з води, мулу, від здорових і хворих риб. Як постійні представники мікрофлори водойм, аеромонади входять до складу мікробіоти риб, а у коропа та рослиноїдних риб складають домінуючий фон. В умовах помірного клімату аеромонадна септицемія найчастіше зустрічається весною та на початку літа, але рецидиви можуть спостерігатися у будь-яку пору року. Дана епізоотія виникає у ослаблених риб. Клінічні прояви аеромонозу різноманітні. У риб певної популяції можливий розвиток резистентності до аеромонад з якими вони асоціюють. Контамінація внутрішніх органів коропа і товстолобика, ДНК-азо позитивними аеромонадами залежала від щільності посадки риб при вирощуванні. Відмічена чітка взаємозалежна сезонна динаміка вказаних бактерій як у воді, так і у внутрішніх органах коропа. Ранньою весною у ставових господарствах аеромоноз та змішана бактеріальна інфекція переважно реєструються у вигляді геморагічної септицемії. На фоні зниження після зимівлі резистентності риб, захворюванню сприяють стресові навантаження при пересадці. Для профілактики і лікування аеромонозу риб найчастіше використовують такі відомі препарати з різних груп: антибіотики (левоміцетин, біоміцин, дибіоміцин, тощо), нітрофуранові (фуразолідон, фурагін) препарати. Товарну рибу, яка отримувала антибіотики і нітрофуранові препарати, допускають в їжу через 30-45 днів [Давыдов О.Н., Темниханов Ю.Д. Болезни пресноводных рыб. - К.: "Ветинформ", 2004.-544 с.] Недоліком відомих препаратів є їх недостатня ефективність, токсичність, застарілість, висока собівартість способів використання. Відомий препарат "Дон-1" (http://nvpo.narod.ru/4.htm) 1 UA 76595 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Малотоксичний, нешкідливий для тварин, риб, бджіл, не накопичується в живих організмах, рослинах, ґрунті; не має ембріотоксичну, тератогенну, мутагенну, гонадотоксичну властивості; ГДК для рибогосподарських водойм 0,065 мг / л. Високий ефект дії препарату обумовлений: підвищенням резистентності організму риб до дії фосфорорганічних пестицидів, бактеріальних і вірусних інфекцій; прискоренням метаболізму фосфорорганічних пестицидів в організмі риб; стимулюванням активності холінестерази, що призводить до збільшення виживання і середньодобовим приростом маси риби; збільшенням чисельності і біомаси зоо- та фітопланктону. Застосування: препарат вносять безпосередньо в воду рибоводних ставів шляхом рівномірного розбризкування робочого розчину по акваторії ставу. Витрата препарату 10-200 г / га при одноразової обробці. Препарат "Дон-1" можна застосовувати в поєднанні з препаратом "Універсальний", що представляє собою синтетичну композицію аналогів природних біохімічно активних речовин. Недоліком відомого препарату є його недостатня ефективність, застарілість, висока собівартість. Найбільш близьким по суті до препарату, що заявляється, є препарат "Антибак-100". Антибак-100 (порошок) (http://www.webvet.ru/equipment.asp?e_id=1831) Виробник. ТОВ НВЦ "Агроветзащіта", Росія. Інструкції з використання препарату Антибак при бактеріальних хворобах риб: Антибак - антибактеріальний препарат для риб, діюча речовина - ципрофлоксацин, а також допоміжні компоненти. Антибак 100 - порошок світло-коричневого кольору, містить в 1 г 100 мг ципрофлоксацину. Біологічні властивості ципрофлоксацину: володіє бактерицидною дією до збудників бактеріальних хвороб риб, в том числі і аеромонад, псевдомонад, мікобактерій, стрептококів, вібріонів, міксобактерій, коринебактерій, цітобактерій, ієрсиній і ентеробактерій. За токсичною дія на організм належить до малонебезпечних речовин для теплокровних (4 клас небезпеки по ГОСТ 12.1.007-76) і риб. Препарат Антибак застосовують рибам з лікувально-профілактичною метою при аеромонозі, псевдомонозі, бактеріальному бранхіонекрозі, корінобактеріозі, плавниковій гнилі, цитробактеріозі, фурункульозі, вібріозі, мікобактеріозі, стрептококозі, а також при хворобах, ускладненій бактеріальній інфекції. Антибак 100 застосовують рибам внутрішньо (www.webvet.ru Велика ветеринарна енциклопедія). Антибак 100 призначають рибам з кормом в дозі 0,5-1,0 г на 1 кг маси риби один раз в день протягом 3-5 днів. Препарат в дозі, розрахованій на загальну масу риб, що мають піддаватися обробці, змішують з денною порцією корму і згодовують при температурі води вище 12 °C. Відлов і використання товарної риби з харчовою метою дозволяється не раніше, ніж через 7 діб після закінчення застосування препарату (Временное наставление разработано ООО "НВЦ Агроветзащита" г. Москва). Недоліком відомого препарату є те, що його діюча речовина діє лише на збудник хвороби, проте немає жодної дії на показники імунітету риб. Відомий препарат "Аміксин", реєстраційне посвідчення № 1396-04-0201-05, представляє собою низькомолекулярну синтетичну сполуку ароматичного ряду з класу флуоренонів (2,7-біс2(диетиламіно)етокси-флуоренону-9-дигідрохлорид). За механізмом дії препарат "Аміксин" є імуностимулятором, має виражену противовірусну та антибактеріальну дію, підвищує місцевий і загальний імунітет. Призначений для профілактики та лікування інфекційних захворювань, підвищення резистентності та стимуляції імунної відповіді при вакцинації домашніх тварин, птиці, для профілактики та лікування аеромонозу коропових риб. Застосування відомого препарату "Аміксин" для профілактики та лікування аеромонозів коропових риб забезпечує терапевтичну ефективність 93,5 %. В основу корисної моделі поставлено завдання розробити новий ефективний, економічно вигідний, зручний у застосуванні препарат для профілактики та лікування інфекційних захворювань, підвищення резистентності та стимуляції імунної відповіді (при аеромонозі) коропових риб. Технічний результат досягається шляхом застосування відомого препарату "Аміксин", призначеного для профілактики та лікування інфекційних захворювань, підвищення резистентності та стимуляція імунної відповіді при вакцинації домашніх тварин, птиці, для профілактики та лікування аеромонозу коропових риб. 2 UA 76595 U 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Фармацевтична форма: порошок помаранчевого кольору. Таблетки помаранчевого кольору по 0,06 г та 0,125 г. Фармакологічні властивості: імуностимулюючий засіб. За механізмом дії препарат Аміксин є імуностимулятором, має виражену противірусну та антибактеріальну дію, підвищує місцевий і загальний імунітет. Показання до застосування: З метою підвищення рівня резистентності тварин, профілактики інфекційних захворювань шлунково-кишкового і респіраторного трактів у тварин. Спосіб доцільно застосовувати разом з антибіотиками та іншими засобами в схемах комплексної терапії інфекційних захворювань. Термін придатності: термін придатності препарату - 3 роки з дати виготовлення. Умови зберігання: препарат зберігають на підприємствах у коробках заводської упаковки або в транспортній тарі в закритому сухому й темному приміщенні при температурі від 15 °C до 25 °C. Застосування відомого препарату "Аміксин" для профілактики та лікування аеромонозу коропових риб забезпечує терапевтичну ефективність 93,5 %. Для лікування аеромонозу коропових риб "Аміксин" задають з кормом із розрахунку по 1015мг / кг двократно чи трикратно з інтервалом між введеннями 5 діб. Терапевтична здатність "Аміксину" забезпечується системною та контактною дією безпосередньо на збудник аеромонозу Aeromonas hydrophila. Відомості, що розкривають суть корисної моделі. При проведенні патентно-інформаційного пошуку заявником і автором встановлено, що технічний результат заявленого технічного рішення досягається шляхом застосування відомого препарату "Аміксин", призначеного для профілактики та лікування інфекційних захворювань, підвищення резистентності та стимуляція імунної відповіді при вакцинації домашніх тварин, птиці, як засіб для лікування та профілактики аеромонозу коропових риб та підвищення їх резистентності [ВАТ "ШТЕРХІМ", Україна]. Відомий лікувальний засіб "Аміксин" вперше застосовується для профілактики та лікування аеромонозу коропових риб та стимуляції імунної відповіді, що відповідає критерію корисної моделі - "новизна". Заявлене технічне рішення належить до галузі ветеринарної медицини, зокрема до іхтіопатології, а саме до профілактично-лікувальних засобів пролонгованої дії для коропових риб при аеромонозі і може бути застосовано для профілактики та лікування інфекційних захворювань риб в умовах ставового рибництва в рибгосподарствах з різною формою власності, а тому відповідає критерію корисної моделі - "промислова придатність". Отже, заявлене технічне рішення є новим, промислово придатним, тобто відповідає усім умовам патентоспроможності корисної моделі відповідно до статті 7 розділу II "Закону України про охорону прав на винаходи і корисні моделі", № 1771-III, 2000. Препарат "Аміксин" застосовують з профілактично-лікувальною метою при захворюванні коропових риб аеромонозом. Для лікування аеромонозу коропових риб "Аміксин" задають з кормом з розрахунку по 10-15 мг / кг двократно або трикратно з інтервалом між введеннями 5 діб. Терапевтична здатність "Аміксину" забезпечується системною та контактною дією безпосередньо на збудник аеромонозу Aeromonas hydrophila. Облік ефективності препарату проводять шляхом огляду не менше як 25 риб з кожного ставу перед проведенням обробки "Аміксином" на 15-20 день після останньої обробки риби. В господарствах, небезпечних за аеромонозом поряд із застосуванням "Аміксину", проводять комплекс рибоводно-меліоративних заходів. Реалізацію риби у торгову мережу потрібно проводити не раніше як через 10 діб після останньої обробки риб "Аміксином". Приклади конкретного виконання заявленого технічного рішення. Ефективність заявленого технічного рішення, його переваги перед прототипом підтверджені прикладами конкретного виконання корисної моделі. Приклад №1 З метою визначення терапевтичної ефективності "Аміксину" в акваріальних умовах кафедри водних біоресурсів було проведено дослід, в якому використовували спонтанно інфікованих збудником аеромонозу коропів однорічного віку. Перед проведенням досліду було проведено бактеріологічні дослідження риб та визначено показники їх інфікування. Після цього було сформовано дві дослідні групи риб та одну контрольну, по десять особин у кожній. Піддослідних риб акліматизовували протягом одного 3 UA 76595 U 5 10 15 20 тижня. Для досліджень відбирали здорових та уражених аеромонадами коропів. Екстенсивність зараження коропів до внесення "Аміксину" складала 71 % при середній інтенсивності. У кожен акваріум було посаджено по десять риб, масою тіла 32,0±3,1 г, із клінічними ознаками аеромонозу та проведення бактеріологічних досліджень, завдяки яким діагноз було підтверджено. Рибу утримували у 40-літрових акваріумах із штучною аерацією за температури 19-20 °C. Утримання, догляд за рибою та її годівлю проводили згідно з відповідними нормами та раціонами. Протягом усього періоду досліджень спостерігали за поведінкою та клінічним станом риб. Дослідний препарат "Аміксин" вводили перорально за допомогою зонду в передній відділ кишечнику на 1 % крохмальному клейстері: першій дослідній групі риб задавали двічі по 15 мг/кг маси тіла, другій дослідній групі тричі по 10 мг/кг маси тіла, третя група була контрольною групою. В досліді визначали: активність Т- і В-лімфоцитів крові, рівень загального білка, альбумінів та глобулінів крові коропових риб. Бактеріологічне дослідження проводили після останнього внесення "Аміксину". Екстенсивність лікування оцінювалась за кількістю уражених риб. Результати проведеного досліду щодо визначення терапевтичної ефективності препарату "Аміксин" при аеромонозі коропових риб, що знаходилися в акваріумних умовах, наведено у таблиці № 1. Таблиця № 1 Показники терапевтичної ефективності препарату "Аміксин" при аеромонозі коропових риб в акваріумних умовах (М±m, n=30) Група риб контроль І II 25 30 35 Доза мг/кг маси тіла 10,00 15,00 Кратність застосування тричі двічі Показник ефективності препарату через 72 год., % 39,8-42,4 90,0-93,5 З'ясовано, що через 72 годин після введення експериментального препарату у дозі 10 мг/кг маси риб, при спонтанному аеромонозі - ефективність дози, що застосовувалася була низькою. Проте застосування препарату в дозі 15 мг/кг маси риб забезпечило високі показники екстенсефективності 90,0 % та інтенсефективності 93,5 %. Отже, заявлений засіб забезпечує лікувальний ефект до 93,5 %. Приклад 2 В умовах рибгосподарства на ставах с. Березовиця, с. Острів та с. Петриків Тернопільського району Тернопільської області проведено науково-господарське дослідження з метою визначення ефективності заявленого профілактично-лікувального засобу "Аміксин" для профілактики та лікування аеромонозу коропових риб. Матеріалом для досліджень була кров, яку відбирали безпосередньо з серця риб. В крові риб досліджували активність Т- і В-лімфоцитів, а також рівень загального білка, альбумінів та глобулінів крові коропових риб. Одержані результати досліджень подані у таблиці № 2, 3. 4 UA 76595 U Таблиця № 2 Результати дослідження Т- і В-лімфоцитів коропа при застосуванні імуномодулятора "Аміксин", % (М±m, n=10) Т- хелпери, % Т- супресори, % В-лімфоцити, % 5 15 43,66±1,29 42,22±1,24 *** 0 5 10 15 20 0 5 10 44,56±1,14 45,26±1,28 48,37±1,56 46,45±1,29 46,47±1,33 33,46±1,29 31,69±1,48 31,20±1,39 15 34,39±1,37 34,06±1,38 0 5 активні Тлімфоцити, % 47,20±1,19 48,03±1,56 46,53±1,36 20 загальні Тлімфоцити, % день дослідження 0 5 10 20 показники 12,13±0,68 13,41±0,72 14,89±0,68 ** 14,19±0,72 13,70±0,85 23,56±1,44 23,46±1,43 23,45±1,12 24,91±1,37 23,33±1,12 10 15 20 0 5 10 15 20 Контроль препарат "Аміксин" доза 2 доза 3 43,32±1,28° 44,21,25 43,84±1,29 43,36±1,17° 41,О6±1,24°°° 41,24±1,16°°° 38,24±1,19 38,30±1,18 42,24±1,25 *** ***°°° ***°°° 39,13±1,23 38,17±1,20 42,37±1,24 *** *** ***° 44,74±1,14 41,43±1,23 41,48±1,46 46,32±1,35 41,36±1,24° 42,37±1,26 46,30±1,37 42,14±1,25°°° 43,25±1,25°° 45,65±1,29 40,22±1,24°°° 42,47±1,23 46,66±1,33 40,53±1,24°°° 41,53±0,99°°° 32,03±1,37 34,18±1,13 36,23±1,14°°° 32,50±1,47 34,41±1,24 34,73±1,25 30,42±1,46 36,20±1,13°° 35,44±1,14° 40,17±1,07 39,24±1,24 35,32±1,11 ***°°° °° 39,08±1,05 38,21±1,20 34,16±1,12 ооо *** ° 12,23±0,83 10,29±0,58 10,49±0,58 ооо 12,22±0,66 10,27±0,49 10,16±0,58°°° 8,26±0,40 9,74±0,85 14,51±0,70 ооо *** °°° 14,27±0,75 10,91±0,75°°° 11,54±0,70°° 13,67±0,90 11,27±0,40°° 11,55±0,44° 23,51±1,15 19,93±1,07 20Д0±1,08 24,36±1,36 20,59±1,08 21,36±1,07 ооо 23,13±1,11 18,05±1,06 18,23±1,10°°° оо 24,53±1,36 19,71±1,33 20,21±0,74°°° 23,33±1,12 20,13±1,07 21,58±1,06 доза 1 47,62±1,19 48,90±1,26 45,45±1,29 Дані, наведені у таблиці № 2, свідчать, що зміни показників крові були неоднозначними. Так, кількість загальні Т-лімфоцити знижується на п'ятнадцятий день застосування досліджуваного препарату вже при мінімальній його дозі 5 мг/кг маси риб (42,24±1,25 %), а максимальний ефект досягається на п'ятнадцятий день у дозі 10 мг/кг маси риб (38,24±1,19 %). Щодо вірогідних змін активних Т-лімфоцитів та В-лімфоцитів у різних дозах застосування, то таких не було, але відмічалися вірогідні зміни у порівнянні із днем застосування препарату. 5 UA 76595 U Таблиця № 3 Результати досліджень рівня загального білку, альбумінів і глобулінів крові коропа при застосуванні імуномодулятора "Аміксин", % (M±m, n=10) препарат "Аміксин" доза 2 30,5±1,3 29,0±1,2 30,2±1,232,1±1,3 32,2±1,2 35,2±1,0 37,0±1,0 15 29,2±1,4 °°° *** 36,5±1,1 20 28,9±1,4 34,2±1,2 °°° *** 0 47,3±1,2 48,4±1,3 49,1±1,2 5 46,3±1,2 47,5±1,3 46,3±1,2 10 48,5±1,3 46,9±1,1 43,8±1,1°° * 40,8±1,1 15 48,3±1,3 45,2±1,3 °°° *** 42,1±1,3 20 47,7±1,3 45,1±1,3 °°° *** 0 55,7±1,2 52,2±1,3 51,6±1,1 5 54,1±1,4 53,0±1,3 54,4±1,1 55,9±1,1 10 52,1±1,3 54,5±1,3 °°° *** 59,1±1,2 15 51,9±1,3 55,4±1,2 °°° *** 58,0±1,2 20 53,0±1,3 55,8±1,3 °°° *** * - р