Імунотерапевтичні комбінації для лікування пухлин, які надекспресують гангліозиди

1. Імунотерапевтична комбінація для імунотерапії пухлин, що надекспресують гангліозиди, яка містить гангліозидну вакцину (С), а також ідіотипову вакцину (А), що містить мишаче антигангліозидне моноклональне антитіло (Ab1), або ідіотипову вакцину (В), що містить специфічне мишаче антиідіотипове моноклональне антитіло (Аb2) проти антигангліозидного моноклонального антитіла. 2. Імунотерапевтична комбінація за п. 1, яка відрізняється тим, що вакцина А містить мишаче анти C2 2 (19) 1 3 76745 4 привабливими мішенями для імунотерапії унасліякий індукує утворення у організмі антиідіотипових док змін, що відбуваються у характері експресії під антитіл (Аb2). Ці антиідіотипові антитіла імітують час злоякісного переродження клітин [Хакоморі С псевдоантиген і, у свою чергу, продукують антиан(Hakomori S.), Ann. Rev. Biochem. 50; 1981:733тиідіотипові антитіла (Аb3) проти пухлинного анти764; Хакоморі (Hakomori), Cancer Res. 45; гену [Шмоллінг Дж. (Schmolling J.) та інші, 1985:2405-2414; Ірі Р.Ф. (Irie R.F.), У: Therapeutic Hybridoma 14; 1995:183-186]. З іншого боку, існує monoclonal antibodies. Боррбек К.А.К. (Borrebaeck багато повідомлень із прикладами вакцин, що місС.А.К.), Ларрік Дж.В. (Larrick J.W.) (Редактори). М. тять антиідіотипові антитіла (анти-Id або (Аb2)), Stockton Press, 1990, pp.75-94]. здатними до індукування імунних реакцій проти Гангліозиди є молекулами з дуже низькою імупухлинних антигенів [Рейчогурі С (Raychauhuri S.) ногенністю унаслідок сахаридної природи та зата інші, J. Immunol. 137; 1986:1743-1749; Рейчогурі вдяки тому, що вони є автоантигенами. З метою С. (Raychauhuri S.) та інші, J. Immunol. 139; підвищення імуногенності цих антигенів вдались 1987:3902-3910; Бхаттачарайа-Чаттерджі Μ. до певних стратегій. Основу цих стратегій стано(Bhattacharya-Chatterjee Μ.) та інші, J. Immunol. вить презентація гангліозидів імунній системі у 139; 1987:1354-1360; Бхаттачарайа-Чаттерджі М. різному молекулярному середовищі. Одна із цих (Bhattacharya-Chatterjee Μ.) та інші, J. Immunol. стратегій полягала у застосуванні кон'югованих 141; 1988:1398-1403; Герлін Д. (HerlynD.) та інші, вакцин, де сахаридний антиген є ковалентно зв'яIntern. Rev. Immunol. 4; 1989:347-357; Чен З.-Дж. заним із білком-носієм, причому згаданий носій є (Chen Z.-J.) та інші, Cell. Imm. Immunother. Cancer; дуже імуногенним для Т-клітин. Це забезпечує 1990:351-359; Герлін Д. (Herlyn D.) та інші, In Vivo одержання сильної та тривалої гуморальної імун5; 1991:615-624; Фуруйа A. (Furuya А.) та інші, ної відповіді. Завдяки цій процедурі можна одерAnticancer Res. 12; 1992:27-32; Міттелмен A. жати антитіла IgG проти таких гангліозидів, хоча (Mittelman А.) та інші, Ргос. Natl. Acad. Sci. USA 89; титри після ревакцинацій були меншими, порівня1992:466-470; Дюрран Л.Г. (Durrant L.G.) та інші, но з титрами, що одержують у разі класичної імунCancer Res. 54; 1994:4837-4840; Міттелмен A. ної відповіді проти тимус-незалежних антигенів (Mittelman А.) та інші, Cancer Res. 54; 1994:415[ХеллінгФ. (Helling F.), Cancer Res. 54; 1994:197421; Шмітт Г. (Schmitt Η.) та інші, Hybridoma 13; 203; Хеллінг Φ. (Helling F.), Cancer Res. 55; 1994:389-396; Чакробарті Μ. (Chakrobarty M.) та 1995:2783-2788; Лівінгстон П.О. (Livingston P.O.) інші, J. Immunother. 18; 1995:95-103; Чакробарті Μ. Cancer Immunol Immunother. 45; 1997:10-19]. (Chakrobarty M.) та інші, Cancer Res. 55; Повідомлялось про те, що нові вакцинні ком1995:1525-1530; Фун КА. (Foon K.A.) та інші, Clin. позиції індукують імунну відповідь проти NCancer Res. 1; 1995:1285-1294; ГерлінД. (Herlyn D.) ацетильованих та N-гліколільованих гангліозидів. та інші, Hybridoma 14; 1995: 159-166; Склебуш Г. Основу цих вакцин становить гідрофобна кон'юга(Sclebusch Η.) та інші, Hybridoma 14; 1995:167-174; ція між гангліозидами та протеоліпосомами дуже Берлін Д. (Herlyn D.) та інші, Cancer Immunol. малого розміру (VSSP), які являють собою комImmunother. 43; 1996:65-76]. плекс зовнішніх білків мембрани (ОМРС) грамнеІнший варіант використання антитіл Аb2 та пігативної бактерії Neisseria meningitidis (гангліозидвищення імуногенності сахаридних залишків ди/VSSP) [Естевес Φ. (Estévez F.), Vaccine 18; включає можливість того, що така сахаридна анти1999:190-197; патенти США №5,778,985 та генна детермінанта може бути представленою №6,149,921]. Вакцини, що включають гангліозид білковою антигенною детермінантою на молекулі GM3/VSSP або гангліозид (NeuGcGM3)/VSSP, антитіла. Фактично одержали багато таких анти-Id продукують високі титри специфічних антитіл IgM антитіл; вони імітують гангліозиди, які інтенсивно та IgG проти GM3 та NeuGcGM3. експресуються у пухлинних клітинах, наприклад, Іншими словами, імунізація вакциною GM3, GD3 та GD2 [Ямамото С. (Yamamoto S.) та GM3/VSSP значно збільшувала час виживаності інші, J. Natl. Cancer Inst. 82; 1990:1757-1760; Чепмишей із меланомою В16, а також зменшувала мен П.Б. (Chapman P.B.) та інші, J. Clin. Invest 88; об'єми пухлин та підсилювала інтенсивність реак1991:186-192; Чеюнг Н-К.В. (Cheung N-K.V.) та ції "трансплантат проти хазяїна" у разі підшкірного інші, Int. J. Cancer 54; 1993:499-505; Салех M.H. трансплантування цієї пухлини [Алонсо (Alonso) та (Saleh M.N.) та інші, J. Immunol 151; 1993:3390інші, Int. J. Oncology 15; 1999:59-66; Кар А. (Саr А.) 3398; Сен Г. (Sen G.) та інші, J. Immunotherapy 21; та інші, Melanoma Research, друкується]. 1998: 75-83]. За теорією ідіотипової сітки, що була запропоПерспективні результати були одержані у клінована Ерне у 1974 році [Ерне Н.К. (Jerne N.K.), нічних випробуваннях, під час проведення яких Ann. Immunol. 125C; 1974:373-389], імунна система деякі із згаданих моноклональних антитіл (МАb зображається як сітка антитіл із комплексним хаАb2) використовували разом із БЦЖ або QS21 як рактером взаємодії між цими антитілами та багаад'ювантами для лікування хворих на рак [Маккатьма природними антигенами. Ці взаємодії відбуффері М. (МсСапегу М.) та інші, Clin Cancer Res 2; ваються за посередництвом варіабельних ділянок 1996: 679-686; Фун К.А. (Foon K.A.) та інші, Clin. або набору ідіотипових детермінант (Id), і імунна Cancer Res 4; 1998:1117-1124]. система регулюється цією взаємодією ідіотипуЗ попереднього рівня техніки є відомим моноантиідіотипу. Теорія Ерне надала можливість розклональне антитіло (МАb) Р3 (номер депонування робки нових стратегій для активної імунотерапії у Європейській колекції культивованих клітин тва(АІ) раку, побудованої на застосуванні антиідіотирин (ЕСАСС) 94113026), яке специфічно розпізнає пових вакцин. Для вакцинації використовується сіалову кислоту у моносіало- та дисіалогангліозиантитіло (Ab1), що розпізнає пухлинний антиген, дах, що включають N-гліколіл. Це МАb (монокло 5 76745 6 нальне антитіло) Ab1 розпізнає антигени на людком та пухлин нейроектодермічного походження. ських пухлинах молочної залози та меланомах У цьому винаході надається також опис схеми [Патент США №5,788,985; Васкес А.М. (Vazquez введення фармацевтичної композиції або комбіA.M.) та інші, Hybridoma 14; 1995: 551-556; Морено нації фармацевтичних композицій для лікування Е. (Moreno Ε.) та інші, Glycobiology 8; 1998: 695ссавців. 705; Маркіна Г. (Marquina G.) та інші, Cancer Res У цьому винаході надається також опис спосо56; 1996: 5165-5171; Кар A. (Carr Α.) та інші, бу, що включає введення ссавцям фармацевтичHybridoma 19 (3); 2000:241-247]. ної композиції або комбінації фармацевтичних Антиідіотипове антитіло 1Е10 (Аb2 МАb 1Е10) композицій, опис яких було наведено раніше, для (номер депонування ЕСАСС 97112901), яке одерзапобігання або лікування пухлин молочної заложують шляхом імунізації МАb Р3, являє собою зи, легень, шлунково-кишкової системи, сечовоантитіло типу гамма ("внутрішнього образу" нестатевої системи, меланом, сарком та пухлин неймає). Аb2 МАb 1Е10 продемонструвало протипухроектодермічного походження. линний ефект проти мишачих пухлин молочної 1. Одержання вакцин, що включають гангліозалози та меланом [патент США №6,063,379; Васзиди: кес (Vazquez) та інші, Hybridoma 14; 1995: 183-186; Вакцини, що включають гангліозиди, одержуВаскес (Vazquez) та інші, Oncology Reports 7; 2000: ють за технічними умовами, які були опубліковані 751-756]. [Естевес (Estevez) та співробітниками у Vaccine 18, Попередній рівень техніки не має свідчень про 1999: 190-197 та у патентах США №5,788,985 та застосування комбінації вакцин, що містять ганглі№6,149,921], де природні або синтетичні гангліоозиди, та фармацевтичних композицій, що містять зиди використовуються як складові протеоліпосом антигангліозидні антитіла (АЫ) або антиідіотипові дуже малого розміру (VSSP), що представляють антитіла (Аb2), або рекомбінантні варіанти (химесобою комплекс зовнішніх білків мембрани рні або гуманізовані антитіла) згаданих антитіл (які (ОМРС) штаму грамнегативних бактерій Neisseria називають ідіотиповими вакцинами); немає також meningitidis із синтетичними або природними гангсвідчень про застосування комбінацій ідіотипових ліозидами (VSSP-G). Згаданими гангліозидами вакцин Ab1 з ідіотиповими вакцинами Аb2. можуть бути (NeuGcGM3), GD3 або (NeuAcGM3). Цей винахід має відношення до використання 2. Одержання ідіотипових вакцин усіх можливих комбінацій вакцин, опис яких навеФармацевтичні композиції одержують за технідено, з метою потенціювання ефекту, який вони чними умовами патентів США №5,817,513 та викликають у разі окремого застосування кожної з №6,063,379. Вакцини включають мишачі антигангних. ліозидні моноклональні антитіла, наприклад, MAb Цей винахід має відношення до фармацевтичP3 або мишачі антиідіотипові моноклональні антиної композиції або комбінації фармацевтичних тіла, наприклад, MAb 1E10, які розпізнають антикомпозицій, придатних для імунотерапії раку, зокгангліозидні моноклональні антитіла. рема, для імунотерапії пухлин, що надекспресують 3. Імунотерапевтичні комбінації, які потенціюгангліозиди, яка містить щонайменш дві з наведеють імунну відповідь та протипухлинний ефект них далі складових: гангліозидних вакцин та ідіотипових вакцин на (A) Ідіотипову вакцину, що містить антиганглітваринних моделях: озидне антитіло (Ab1); Згадані процедури можуть використовуватись (B) Ідіотипову вакцину, що містить антиідіотина мишах або будь-яких інших видах ссавців. пове антитіло (Аb2) проти антигангліозидного анСкладовими згаданої комбінації є гангліозидна титіла; та вакцина та ідіотипова вакцина; вони можуть комбі(C) Вакцину, що містить гангліозид. нуватись різними шляхами. Фармацевтична композиція або комбінація За однією з комбінацій, тварини можуть імуніфармацевтичних композицій може містити А плюс зуватись 3-10 дозами у межах від 25мкг до 1мг В або А плюс С чи В плюс С. мишачого антигангліозидного моноклонального За варіантом, якому віддається перевага, цей антитіла; проміжок часу між дозами може становивинахід має відношення до фармацевтичної комти 7 днів та 14 днів. Впродовж цього періоду часу позиції або комбінації фармацевтичних композитварини одержують 3-10 доз у межах від 60мкг до цій, де А може бути ідіотиповою вакциною, що мі1000мкг гангліозидної вакцини; проміжок часу між тить мишаче МАb Р3 (номер депонування ЕСАСС дозами може становити 7-14 днів. 94113026), де В може бути ідіотиповою вакциною, За іншою комбінацією, тварини можуть імуніщо містить мишаче антиідіотипове антитіло 1Е10 зуватись 3-10 дозами у межах від 25мкг до 1мг (номер депонування ЕСАСС 97112901) та де С мишачого антиідіотипового антитіла, специфічного може бути вакциною, що містить гангліозиди Nпроти антигангліозидного антитіла; проміжок часу гліколіл GM3 (NeuGcGM3) або N-ацетил GM3 між дозами може становити 7-14 днів. Впродовж (NeuAcGM3). цього періоду часу тварини одержують 3-10 доз у За цим винаходом, А плюс В або А плюс С чи межах від 60мкг до 1000мкг гангліозидної вакцини; В плюс С може вводитись одночасно або почерпроміжок часу між дозами може становити 7-14 гово. днів. Композиції за цим винаходом можуть бути Введення вакцин обох типів може бути однопридатними для лікування раку, зокрема, ракових часним або почерговим. Вакцини можуть одержупухлин, що надекспресують гангліозиди, а також вати у формі окремих продуктів або у вигляді вакраку легень, молочної залози, шлунково-кишкової цинної композиції, коли вони вводяться одночасно. системи, сечово-статевої системи, меланом, сарУ разі, коли вакцини вводяться почергово, проміж 7 76745 8 ки часу між введенням вакцини кожного типу мовати у формі окремих продуктів або у вигляді вакжуть становити 3-7 днів. Вакцини вводяться у цинної композиції, коли вони вводяться одночасно. ад'юванті, яким може бути гідроксид алюмінію У разі, коли вакцини вводяться почергово, проміж(62,5мкг-2,5мг), Монтанід ISA 51 (Montanide ISA 51) ки часу між введенням вакцини кожного типу мо(0,1-1,2мл на дозу) або будь-який інший відповіджуть становити 3-7 днів. Вакцини вводяться у ний ад'ювант. Загальний об'єм кожної дози може ад'юванті, яким може бути гідроксид алюмінію (1дорівнювати 10мкл-2мл. Вакцини, що включають 5мг на дозу), Монтанід ISA 51 (0,6-1,2мл на дозу) гангліозиди, можуть вводитись внутрішньошкірно, або будь-який інший придатний ад'ювант. Загальпідшкірно, внутрішньом'язово, внутрішньоочерений об'єм кожної дози може дорівнювати 10мклвинно, внутрішньослизово або комбінованим шля2мл. хом. Ті саме шляхи введення можуть використовуВакцини, що включають гангліозиди, можуть ватись для вакцин, що містять антитіла. вводитись внутрішньошкірно, підшкірно, внутрішІмунотерапевтичні комбінації підвищують як ньом'язово, внутрішньоочеревинно, внутрішньосгуморальну, так і клітинну імунну відповідь у твализово або комбінованим шляхом. Той саме шлях рин, що були піддані обробці. введення можуть використовуватись для вакцин, Час появи локальних пухлин, об'єм пухлин та що містять антитіла. виживаність суб'єктів, які були піддані обробці, Під час вакцинації деякі біохімічні параметри порівнюють з такими саме параметрами контрольта титри антитіл контролюються шляхом визнаної групи з метою визначення ефективності імуночення за пробами крові. Частота може становити терапевтичних комбінацій. Після обробки згаданивід 1 тижня до 3 місяців. Клітинний імунітет досліми імунотерапевтичними комбінаціями у тварин джують шляхом відбирання проб лімфоцитів від спостерігається зменшення частоти виникнення пацієнтів. Проби відбирають із частотою, що колипухлин, зменшення об'єму пухлин та збільшення вається у межах від одного тижня до трьох місяців. виживаності не тільки порівняно із групою, що підI, нарешті, пацієнтів ревакцинують обома вакдавалась обробці лише ад'ювантами, але і порівцинами у концентраціях, які згадувались вище; няно із групами, яким вводили лише одну вакцину, проміжки часу між дозами можуть становити 1а не їхні комбінації. 6міс. Вони можуть вводитись одночасно або іншим 4. Імунотерапевтичні комбінації, що викликачином впродовж 1-2 років. ють потенціювання імунної відповіді та протипухСхема вакцинації за цим винаходом індукує у линного ефекту гангліозидних та ідіотипових вакпацієнтів підвищення титру антитіл та посилення цин у пацієнтів-людей: клітинної імунної відповіді і, таким чином, зменшує Попередньо згадана процедура може застосотяжкість пухлини. вуватись до пацієнтів, що мають ракове захворенПриклади ня, на різних клінічних стадіях із пухлинами, які Приклад 1: Активація антиідіотипових Т2 та надекспресують гангліозиди. До їхнього числа наантиантиідіотипових Т3 клітин у сингенній моделі, лежать пухлини легень, молочної залози, шлункоіндукована імунізацією мишачим МАb Р3 во-кишкового системи, сечово-статевої системи, Миші-самиці лінії Babl/c та "голі" миші того самеланоми, саркоми та пухлини нейроектодермічме генетичного фону віком 6-8 тижнів імунізуваного походження. лись підшкірно 100мкг мишачого МАb Р3 [анти-NЗа однією з комбінацій, пацієнти можуть вакгліколільований гангліозид, номер депонування цинуватись 3-10 дозами у межах від 0,1мг до 5мг ЕСАСС 94113026; Васкес (Vazquez) та інші, мишачого антигангліозидного моноклонального Hybridoma 14; 1995: 551-558; Морено (Moreno) та антитіла; проміжок часу між дозами може становиінші, Glycobiology 8; 1998: 695-705] та повним ти 7 днів та 14 днів. Впродовж цього періоду часу ад'ювантом Фрейнда (CFA). Через сім днів мишей пацієнти одержують 3-10 доз у межах від 60мкг до реімунізували 50мкг згаданого антитіла у непов1000мкг гангліозидної вакцини; проміжок часу між ному ад'юванті Фрейнда (IFA). На 10 день були дозами може становити 7-14 днів. зібрані зразки з лімфовузлів і лімфоцити одержуЗа іншою комбінацією, пацієнти можуть вакцивали шляхом протискання через шприц. Клітинну нуватись 3-10 дозами у межах від 0,1мг до 5мг суспензію використовували у експериментах із мишачого антиідіотипового антитіла, специфічного клітинною проліферацією, рівень якої визначали проти антигангліозидного антитіла; проміжок часу шляхом включення 3Н-тимідину. Проліферацію між дозами може становити 7-14 днів. Впродовж лімфоцитів in vitro визначали шляхом культивуцього періоду часу пацієнти одержують 4-6 доз у вання суспензії лімфоцитів у присутності підвищемежах від 60мкг до 1000 мкг гангліозидної вакциних концентрацій (від 25мкг/мл до 150мкг/мл) мини; проміжок часу між дозами може становити 7-14 шачих МАb Р3 та Аb2 МАb 1E10 (номер днів. депонування ЕСАСС 97112901). Мишачі моноклоЗа третьою комбінацією, пацієнти можуть імунальні антитіла того саме ізотипу були використані нізуватись мишачим антигангліозидним моноклояк контроль. До позитивних відносили індекси стинальним антитілом; дози, частота та проміжки чамулювання, що дорівнювали або були більшими су можуть відповідати опису, який було наведено за 3. Проліферація лімфоцитів, які одержали після вище. Впродовж цього періоду часу пацієнти одеімунізації мишей лінії Balb/c Р3 МАb, спостерігаржують 3-10 доз у межах від 0,1мг до 2мг мишачолась, зокрема, у присутності цього моноклональго антиідіотипового антитіла, специфічного проти ного антитіла, і така проліферація не спостерігаантигангліозидного антитіла. лась у разі культивування клітин у присутності Введення вакцин обох типів може бути одноконтрольного мишачого моноклонального антитіла часним або почерговим. Вакцини можуть одержуA3 (IgM) [Альфонсо М. (Alfonso Μ.) та співробітни 9 76745 10 ки: Hybridoma 14; 1995: 209-216]. Ця проліферація ною моделлю. Імунізація лише 1Е10 МАb не зазалежала від присутності Т-клітин, які не одержубезпечувала захисту мишей проти експериментавали із клітинами лімфовузлів від імунізованих Р3 льного введення 10000 клітин меланоми В16. Вакбезтимусних мишей лінії nu/nu. Імунізація мишацина VSSP-GM3 уповільнювала ріст пухлини чим МАb Р3 не лише індукувала проліферацію Т(р