Антинеопластична комбінація ссі-779 і екв-569

1. Спосіб лікування новоутворення у ссавця, потребуючого вказаного лікування, який включає введення вказаному ссавцеві ефективної кількості комбінації, що включає ССІ-779 і ЕКВ-569. 2. Спосіб за п.1, в якому новоутворення являє собою рак нирки. 3. Спосіб за п.1, в якому новоутворення являє собою саркому м'яких тканин. 4. Спосіб за п.1, в якому новоутворення являє собою рак молочної залози. 5. Спосіб за п.1, в якому новоутворення являє собою нейроендокринну пухлину легені. 6. Спосіб за п.1, в якому новоутворення являє собою рак шийки матки. 7. Спосіб за п.1, в якому новоутворення являє собою рак матки. 8. Спосіб за п.1, в якому новоутворення являє собою рак голови і шиї. 9. Спосіб за п.1, в якому новоутворення являє собою гліому. 10. Спосіб за п.1, в якому новоутворення являє собою недрібноклітинний рак легені. 11. Спосіб за п.1, в якому новоутворення являє собою рак передміхурової залози. 12. Спосіб за п.1, в якому новоутворення являє собою рак підшлункової залози. 13. Спосіб за п.1, в якому новоутворення являє собою лімфому. 14. Спосіб за п.1, в якому новоутворення являє 2 (19) 1 3 77200 4 рак матки, рак голови і шиї, гліому, недрібноклізалози, рак підшлункової залози, лімфому, мелатинний рак легені, рак передміхурової залози, рак ному, дрібноклітинний рак легені, рак яєчника, рак підшлункової залози, лімфому, меланому, дрібнотовстого кишечнику, рак стравоходу, рак шлунка, клітинний рак легені, рак яєчника, рак товстого лейкоз, колоректальний рак або невідомий перкишечнику, рак стравоходу, рак шлунка, лейкоз, винний рак. колоректальний рак або невідомий первинний рак. 35. Застосування за п.33 або 34, при якому ССІ33. Застосування ССІ-779 і ЕКВ-569 для виготов779 вводять в субтерапевтично ефективній кільколення лікарського засобу для лікування новоутвості. рення у ссавця. 36. Застосування за п.33 або 34, при якому ЕКВ34. Застосування за п.33, при якому новоутворен569 вводять в субтерапевтично ефективній кільконя являє собою одне з наступних захворювань: сті. рак нирки, саркому м'яких тканин, рак молочної 37. Застосування за п.33 або 34, при якому ССІзалози, нейроендокринну пухлину легені, рак ший779 і ЕКВ-569 вводять в субтерапевтично ефектики матки, рак матки, рак голови і шиї, гліому, невних кількостях. дрібноклітинний рак легені, рак передміхурової Даний винахід відноситься до застосування комбінацій ефіру-42 рапаміцину і 3-гідрокси-2(гідроксиметил)-2-метилпропіонової кислоти (ССІ779) і [4-(3-хлор-4-фторфеніламін)-3-ціан-7етоксихінолін-6-іл]амідом 4-диметиламінобут-2енової кислоти (ЕКВ-569). Рапаміцин являє собою макроциклічний триєновий антибіотик, продукований Streptomyces hygroscopicus, який, як було встановлено, володіє протигрибковою активністю, особливо, проти Candida albicans, як in vitro, так і in vivo [С. Vezina et al., J. Antibiot. 28, 721 (1975); S.N. Sehgal et.al., J. Antibiot. 28, 727 (1975); H.A. Baker et al, J. Antibiot. 31, 539 (1978); патент США №3 929 992 і патент США №3 993 749]. Крім того, як було показано, рапаміцин окремо [патент США №4 885 171] або в комбінації з піцибанілом [патент США №4 401 653] володіє пропипухлинною активністю. Імуносупресивні ефекти рапаміцину описані [в FASEB 3, 3411 (1989)]. Циклоспорин А і FK-506, інші макроцикличні молекули, також, як було показано, є ефективними як імуносупресивні агенти, придатними, таким чином, для запобігання відторгненню трансплантата [FASEB 3, 3411 (1989); FASEB 3, 5256 (1989); R.Y. Calne et al. Lancet 1183 (1978) і патент США №5 100 899]. R. Martel et al. [Can. J. Physiol. Pharmacol. 55, 48 (1977)] повідомили, що рапаміцин є ефективним на експериментальній моделі алергічного енцефаломієліту, моделі розсіяного склерозу, на допоміжній моделі артриту, моделі ревматоїдного артриту, і ефективно інгібує утворення IgE-подібних антитіл. Рапаміцин також є придатним для профілактики або лікування системного червоного вовчака [патент США №5 078 999], запалення легень [патент США №5 080 899], інсулінзалежного цукрового діабету [патент США №5 321 009], шкірних хвороб, таких як псоріаз [патент США №5 286 730], хвороб кишечнику [патент США №5 286 731], проліферації гладком'язевих клітин і потовщення інтими після пошкодження судини [патенти США №№5 288 711 і 5 516 781], Т-клітинного лейкозу/лімфоми дорослих [Європейська патентна заявка 525 960 А1], запалення очей [патент США №5 387 589], злоякісних карцином [патент США №5 206 018], запального захворювання серця [патент США №5 496 832] і анемії [патент США №5 561 138]. Ефір-42 рапаміцину з 3-гідрокси-2(гідроксиметил)-2-метилпропіоновою кислотою (ССІ-779) являє собою складний ефір рапаміцину, який продемонстрував значну інгібуючу дію на ріст пухлин як на in vitro, так і на in vivo моделях. Отримання і застосування гідроксіефірів рапаміцину, включаючи ССІ-779, описано [в патенті США №5 362 718]. ССІ-779 виявляє цитостатичні, протиставлені цитотоксичним, властивості, і може затримувати час, який проходить до початку прогресування пухлин, або час, який проходить до появи рецидиву пухлин. ССІ-779, як вважають, володіє механізмом дії, який схожий на механізм дії sirolimus. ССІ779 зв'язується з білком цитоплазми FKBP і утворює з ним комплекс, який інгібує фермент, mTOR (ціль рапаміцину у ссавців, також відомий як FKBP 12-рапаміцинзв'язувальний білок [FRAP]). Інгібування кіназної активності mTOR інгібує ряд шляхів перетворення сигналів, включаючи клітинну проліферацію, яка стимулюється цитокінами, трансляцію мРНК для декількох ключових білків, які регулюють G1 фазу клітинного циклу, і IL-2індуковану транскрипцію, що приводить до інгібування ходу клітинного циклу від G1 до S. Механізм дії ССІ-779, який блокує фазу від G1 до S, є новим для пропипухлинного лікарського засобу. In vitro було встановлено, що ССІ-779 інгібує ріст ряду гістологічно відмінних пухлинних клітин. Рак центральної нервової системи (ЦНС), лейкоз (Т-клітинний), рак молочної залози, рак міхурової залози і меланомні лінії були серед найбільш чутливих до ССІ-779. Дана сполука зупиняла клітини в фазі G1 клітинного циклу. In vivo експерименти на безтимусних мишах показали, що ССІ-779 володіє активністю проти ксенотрансплантатів пухлин людини різних гістологічних типів. Гліоми були особливо чутливими до ССІ-779, і сполука була активною відносно моделі ортотопічної гліоми у безтимусних мишей. Стимуляція клітинної лінії людської гліобластоми, індукована фактором росту (отриманим з тромбоцитів), in vitro виражено придушувалася ССІ-779. Ріст декількох пухлин підшлункової залози людини у безтимусних мишей, а також однієї з двох ліній раку молочної залози, вивчених in vivo, також придушувався ССІ-779. Протеїн-тирозин-кінази являють собою клас 5 77200 6 ферментів, які каналізують перенесення фосфатраметрів, що варіюють від 50 до 65%. ної групи з АТВ або ГТФ на залишок тирозину, Фіг.4 показує тривимірний просторовий аналіз розташований на білкових субстрат. Протеїнсинергічної взаємодії комбінації ЕКВ-569+ССІ-779. тирозин-кінази грають роль в нормальному рості Фіг.5 показує контурну діаграму просторового клітин. Багато які з рецепторних білків фактора графіка синергізму комбінації ЕКВ-569+ССІ-779. росту діють як тирозин-кінази, і саме за допомогою Даний винахід відноситься до застосування даного процесу вони впливають на сигнальні прокомбінацій ССІ-779 і ЕКВ-569 як антинеопластичцеси. Взаємодія факторів росту з даними рецепної комбінованої хіміотерапії. Зокрема, дані комбіторами є необхідною для нормальної регуляції нації є відповідними для лікування раку нирок, росту клітин. Однак, в певних умовах, внаслідок раку м'яких тканин, раку молочної залози, нейромутації або надмірній експресії, дані рецептори ендокринної пухлини легені, раку шийки матки, можуть ставати розрегульованими, що приводить раку матки, раку голови і шиї, гліоми, недрібноклідо неконтрольованої проліферації клітин, яка мотинного раку легені, раку передміхурової залози, же виразитися в пухлинному рості і, в кінцевому раку підшлункової залози, лімфоми, меланоми, результаті, в захворюванні, відомому як рак [Wilks дрібноклітинного раку легені, раку яєчника, раку A.F., Adv. Cancer Res., 60, 43 (1993) і Parsons, J.T.; товстого кишечнику, раку стравоходу, раку шлунParsons, S.J., Important Advances in Oncology, ка, лейкозу, колоректального раку і невідомого DeVita V.T. Ed., J.B. Lippincott Co., Phila., 3 (1993)]. первинного раку. Даний винахід відноситься до Серед рецептор-кіназ фактора росту і їх протоонкомбінацій ССІ-779 і ЕКВ-569 для застосування як когенів, які були ідентифіковані і які є мішенями антинеопластичної комбінованої хіміотерапії, в для сполук за даним винаходом, знаходяться реяких дозування ССІ-779 або ЕКВ-569 або обох цептор-кіназа епідермального фактора росту застосовується в субтерапевтичному ефективному (EGF-R-кіназа, білковий продукт онкогена erbB) і дозуванні. продукт, що виробляється еrbВ-2 (також званим Термін "лікування", що використовується в даneu або HER2) онкогеном. Оскільки фосфорилюному винаході, означає лікування ссавця, що має вання є необхідним для початку розподілу клітин неопластичне захворювання, за допомогою забезсигналом, і оскільки понадміру експресовані або печення вказаного ссавця ефективною кількістю мутовані кінази пов'язані зі злоякісною пухлиною, комбінації ССІ-779 і ЕКВ-569 з метою інгібування інгібітор даного процесу, інгібітор протеїн-тирозинросту неоплазми у вказаного ссавця, ліквідації кінази, буде мати терапевтичну цінність для лікунеоплазми або полегшення стану ссавця. вання злоякісної пухлини і інших захворювань, які Термін "забезпечення", що використовується в характеризуються неконтрольованим або патолоданому винаході, в тому, що стосується забезпегічним ростом клітин. Наприклад, надмірна ексчення комбінацією, означає пряме введення компресія продукту рецептор-кінази онкогена егЬВ-2 бінації або введення проліків, похідного або анапов'язана з раком молочної залози і яєчника у люлога одного або обох компонентів комбінації, які дини [Slamon, D.J., et al., Science, 244, 707 (1989) і будуть утворювати ефективну кількість комбінації Science, 235, 1146 (1987)]. Розрегулювання EGF-R в організмі. кінази пов'язане з епідермоїдними пухлинами Отримання ССІ-779 описано [в патенті США [Reiss, Μ., et al., Cancer Res., 51, 6254 (1991)], пух№5 362 718], який включений в цей документ як линами молочної залози [Macias Α., et al., посилання. Знайдене отримання ССІ-779 описано Anticancer Res., 7, 459 (1987)] і пухлинами, що [в патентній заявці США №SN 09/670 358], яка вражають інші основні органи [Gullick, W.J., Brit. включена в цей документ як посилання. У випадку, Med. Bull., 47, 87 (1991)]. Внаслідок важливості коли ССІ-779 застосовують як антинеопластичний ролі, яку грають розрегульовані рецептор-кінази в агент, передбачають, що дози первинної в/в інфупатогенезі злоякісній пухлині, багато які недавні зії складуть приблизно від 0,1 до 100мг/м2 при дослідження торкаються розробки специфічних схемі введення один раз на день (щодня, протягом інгібіторів РТК як потенційних протиракових тера5 днів, кожні 2-3 тижні) і приблизно від 0,1 до певтичних агентів [деякі огляди, що недавно ви1000мг/м2 при схемі введення один раз на тижйшли: Burke, T.R., Drugs Future, 17, 119 (1992) і день. Пероральний шлях або внутрішньовенна Chang, C.J.; Geahlen, R.L., J. Nat. Prod., 55, 1529 інфузія є переважними шляхами введення, більш (1992)]. переважним є внутрішньовенний шлях. [4-(3-хлор-4-фторфеніламін)-3-ціан-7ЕКВ-569 можна отримати відповідно до метоетоксихінолін-6-іл]амід 4-диметиламінобут-2дів, описаних [в патенті США №6 002 008], який енової кислоти (ЕКВ-569) являє собою інгібітор включений в цей документ як посилання. ПереваEGFR-кінази, який володіє значною інгібуючою жні методи отримання ЕКВ-569 представлені в дією на ріст пухлин, як на моделях in vitro, так і in цьому документі. У випадку, коли ЕКВ-569 застоvivo. Отримання і застосування інгібіторів EGFRсовують як антинеопластичний агент, передбачакінази, таких як ЕКВ-569, описано [в патенті США ють, що первинна пероральна доза складе приб№6 002 008. лизно від 1 до 100мг на день. У залежності від Фіг.1 показує криві цитотоксичності ЕКВ-569, толерантності пацієнта, ЕКВ-569 можна вводити ССІ-779 і комбінацій ЕКВ-569+ССІ-779 відносно щодня протягом періоду лікування, такого як 14 клітин НСТ116. днів, з подальшим періодом відпочинку (коли ліФіг.2 показує ізоболограми (при 50% рівні карський засіб не вводять), або можна вводити на ефекту) комбінації ЕКВ-569+ССІ-779. постійній основі протягом більш тривалого періоду Фіг.3 показує ізоболограми для комбінацій лікування (наприклад, 6 місяців або більше). ЕКВ-569+ССІ-779, отримані з різних кінцевих паАнтинеопластична активність комбінації ССІ 7 77200 8 779 плюс ЕКВ-569 була підтверджена в стандартДругу модель вивчення лікарських взаємодій ному фармакологічному дослідженні in vitro, далі запропонували Prichard і Shipman [Antiviral стисло описана використана методика і отримані Research, 14: 181-206 (1990)]. Це тривимірна морезультати. дель: по одній для кожного лікарського засобу і Методика з використанням клітинної проліфетретя - для біологічного ефекту. Теоретичні сумарації - клітини аденокарциноми товстого кишечнирні взаємодії розраховують по окремих кривих ку НСТ 116 вирощували на середовищі RPMI 1640 доза-відповідь, на основі моделі сумарної дії з (Life Technologies, Inc., Gaithersburg, MD) доповневикористанням несхожих ділянок (незалежність ного 10% фетальною бичачою сироваткою (FBS, Bliss). Розраховану сумарну поверхню, що являє Life Technologies) і 50мкг/мл гентаміцину (Life собою прогнозовану цитотоксичність, віднімають Technologies), в атмосфері 7% СО2 при 37°С. Клівід експериментальної поверхні, для виявлення тини вміщували в 96-ямкові мікротитраційні планплощ посиленої токсичності (синергізм) або зменшети (6000 клітин на ямку) в 200мкл середовища шеної токсичності (антагонізм). Отримана поверхRPMI 1640, що містить 5% FBS і 50мкг/мл гентаміня виглядає як горизонтальна площина при 0% цину, і інкубували протягом ночі при 37°С. Виготоінгібування над розрахованою сумарною поверхвляли розведення сполуки в тому ж середовищі, з нею, якщо взаємодія є сумарною. Піки і заглибкінцевою концентрацією 5Х, і 50мкл розведених лення, що відхиляються від даної площини, вкалікарських засобів додавали в ямки, що містили зують на синергізм і антагонізм, відповідно. Для клітини. Для вивчення комбінацій двох лікарських автоматизації всіх розрахунків використали комзасобів серійне розведення однієї сполуки виготоп'ютерну програму MacSynergyll на основі Microsoft вляли в присутності фіксованої дози другої сполуExcel. Дана програма розраховує теоретичні сумаки. Альтернативно, використали контрольні серії рні взаємодії і локалізує і кількісно визначає синеррозведення. Клітини культивували протягом трьох гічні або антагоністичні взаємодії, які є достовірднів в присутності лікарських засобів. Клітини, на ними при 95% довірчих рівнях. Результати які не впливали лікарськими засобами, включали в наносили на тривимірний графік або контурний експеримент як контроль. Процентну частку клітин, графік. що вижили, визначали з використанням сульфоРезультати - Були вибрані клітини НСТ 116, родаміну В (SRB, Sigma-Aldrich, St. Louis, МО), оскільки вони експресують низькі, але рівні EGFR, фарби, зв'язуючої білки. Клітинний білок осаджущо піддаються виявленню, і є чутливими до інгібували в кожній ямці доданням 50мкл 50% холодновання інгібіторами EGFR. Дані клітини володіють го розчину трихлороцтової кислоти. Через 1 годидеякою резистентністю до ССІ-779, але високими ну планшети рясно промивали водою і дозами даного лікарського засобу (5-10мкг/мл) висушували. Додавали як реагент фарбу SRB інгібуються. Клітини НСТ-116 культивували в при(0,4% SRB в 1% оцтовій кислоті, 80мкл на ямку), і сутності ЕКВ-569 окремо, ССІ-779 окремо або серії планшети тримали при кімнатній температурі пророзведень ЕКВ-569 з фіксованими дозами ССІтягом десяти хвилин. Потім планшети ретельно 779. Після росту протягом 3 днів виживання клітин промивали 1% оцтовою кислотою і висушували. визначали за допомогою тест-процедури SRB. Фарбу, пов'язану з клітинами, розчиняли в 10мМ Криві цитотоксичності показані на Фіг.1. На клітиTris (150мкл) і прочитували поглинання на 540нм нах НСТ116 ЕКВ-569 давав величину ІС50 на микротитраційному планшеті-рідері. Концент0,31мкг/мл. Коли дану сполуку комбінували з рацію сполуки, яка викликала фіксовану процентну 2,08мкг/мл ССІ-779 (який викликав 41% інгібування частку інгібування росту визначали побудовою росту при окремому використанні), величина ІС50 графіка залежності виживання клітин (відносно зменшилась до 0,03мкг/мл, тобто була в 10 раз клітин, що не зазнавали впливу) від дози сполуки. менше. При комбінуванні з 0,026мкг/мл ССІ-779 Оцінка синергізму - Для вивчення взаємодії (який інгібує проліферацію клітин при окремому двох фармакологічних агентів використали ізобовикористанні на 36%), величина ІС5о падала до лограми. У цьому випадку, концентрацію кожного 0,051мкг/мл, тобто була в 6 раз меншою. Схожі лікарського засобу окремо, яка викликала певний результати спостерігалися, коли криві дозакінцевий параметр (наприклад, 50% інгібування відповідь отримували з використанням ССІ-779 в росту клітин, ІС50), наносили на дві графічні осі. присутності фіксованих доз ЕКВ-569. Для того, Пряма лінія, що з'єднує дві точки, являє собою щоб ідентифікувати природу даної лікарської взарівно ефективні концентрації всіх комбінацій двох ємодії, отримували ізоболограми (при рівні ефекту лікарських засобів, якщо взаємодія є чисто сумар50%) комбінації ЕКВ-569 і ССІ-779 (Фіг.2). Ізоболоною. Зсув ізоболограми ліворуч від прогнозованої грама мала глибоку звивину угнутою стороною цитотоксичності (крива угнутою стороною вгору) вгору, що вказує на значну синергічну взаємодію являє собою синергічну взаємодію. Навпаки, зсув двох лікарських засобів. У найбільш синергічній праворуч (крива опуклою стороною вгору) являє точці 0,03мкг/мл ЕКВ-569, об'єднаний з собою антагоністичну взаємодію. У випадку, коли 0,077мкг/мл ССІ-779, мав ізо-ефективність з ізоболограми для різних кінцевих точок вміщували 0,31мкг/мл ЕКВ-569 окремо або 4,3мкг/мл ССІ-779 на один і той же графік, концентрацію кожного ліокремо (ІС50 для кожного лікарського засобу окрекарського засобу виражали як частину концентрамо). Таким чином, 10-кратне зменшення дози ЕКВції кожного лікарського засобу окремо, яка давала 569 і 50-кратне зменшення дози ССІ-779 було поттой же ефект. Це дає симетричну ізоболограму із рібно для інгібування проліферації клітин на 50%, заходами, що не мають одиниць, на кожній осі, і коли лікарські засоби були об'єднані, в порівнянні з дозволяє провести пряме порівняння різних кінцекожним з лікарських засобів окремо. Також вивчавих точок. ли ізоболограми, отримані з різних кінцевих точок, 9 77200 10 що варіюють від 50 до 65%. Як показано на Фіг.З, тепа, іфофамід або циклофосфамід); гормональні отримані ізоболограми майже повністю накладаагенти(тобто, тамоксифен, ролоксифен, торемілися одна на одну, що вказує на синергізм на всіх фен, анастрозол або летрозол); антибіотики (тобвипробуваних рівнях ефекту. то, пликаміцин, блеоміцин, мітоксантрон, ідарубіВзаємодію між ЕКВ-569 і ССІ-779 оцінювали цин, дактиноміцин, мітоміцин, доксорубіцин або також з використанням просторового аналізу. У даунорубіцин); імуномодулятори (тобто, інтерфецьому випадку фармакологічні взаємодії предстарони, IL-2 або BCG); антимітотичні агенти (тобто, влені на просторовій діаграмі з площиною на 0%, естрамустин, паклітаксел, доцетаксел, вінбластин, що являє собою сумарну взаємодію, з піками і завінкристин або вінорелбін); інгібітори топоізомераглибленнями, що являють собою площі синергізму зи (тобто, топотекан, іринотекан, етопозид або або антагонізму, відповідно, між двома лікарськитеніпозид) і інші агенти (тобто, гідроксисечовина, ми засобами. На Фіг.4 комбінація ЕКВ-569 і ССІтрастузумаб, алтретамін, ретуксимаб, L779 дала обширну площу синергічної взаємодії, аспарагіназа або гемтузумаб озогаміцин). узгоджувану з результатами, показаними при виПри використанні за даним винаходом режим вченні ізоболограм. Контурний графік просторової введення комбінації може бути одночасним або синергічної діаграми полегшує ідентифікацію конступінчастим; при цьому ССІ-779 вводять в різний центрацій лікарських засобів, при яких спостерігаз ЕКВ-569 час протягом курсу хіміотерапії. Ця різється найбільша синергічна токсичність (Фіг.5). ниця у часі між введеннями двох агентів може ваОбширна площа синергізму спостерігалася при ріювати від декількох хвилин, годин, днів, тижнів концентрації від 0,0005 до 3мкг/мл ССІ-779 і від або більше. Отже, термін «комбінація» не обов'яз0,16 до 0,4мкг/мл ЕКВ-569. У межах вказаної площі ково означає введення в один і той же час або у спостерігалося два піки максимального синергізму вигляді єдиної дози, але що кожний з компонентів при концентрації від 0,0005 до 0,003мкг/мл і від вводять протягом бажаного періоду лікування. 0,05 до 0,3мкг/мл ССІ-779 і від 0,25 до 0,37мкг/мл Агенти також можна вводити різними шляхами. ЕКВ-569. Наприклад, у випадку комбінації ССІ-779 плюс На основі результатів описаних стандартних ЕКВ-569 можна очікувати, що ССІ-779 будуть ввометодик фармакологічних випробувань, комбінації дити перорально або парентерально, переважно, ССІ-779 плюс ЕКВ-569 діяли синергічно, і є придапарентерально, в той час як ЕКВ-569 можна ввотними як антинеопластична терапія. Більш конкредити парентерально, перорально або іншими притно, дані комбінації є придатними для лікування йнятними способами. Дану комбінацію можна ввораку нирки, раку м'яких тканин, раку молочної задити один раз на день, один раз на тиждень і лози, нейроендокринної пухлини легені, раку шийнавіть один раз на місяць. Звичайним для схем ки матки, раку матки, раку голови і шиї, гліоми, хіміотерапії є те, що курс хіміотерапії можуть понедрібноклітинного раку легені, раку передміхуровторювати декількома тижнями пізніше, і можуть вої залози, раку підшлункової залози, лімфоми, дотримуватися тих же тимчасових рамок для ввемеланоми, дрібноклітинного раку легеня, раку яєдення двох агентів, або можуть виробляти модичника, раку товстого кишечнику, раку стравоходу, фікації, основуючись на реакції пацієнта на лікураку шлунка, лейкозу, колоректального раку і невівання. домого первинного раку. Оскільки дані комбінації Звичайним для хіміотерапії є те, що схеми містять щонайменше два активних антинеопласвведення лікарських засобів ретельно контролює тичних агенти, застосування даних комбінацій талікуючий лікар, основуючись на численних фактокож забезпечує застосування комбінацій кожного з рах, включаючи тяжкість захворювання, реакцію агентів, в яких один або обидва агенти застосовуна захворювання, будь-яку пов'язану з лікуванням ють в субтерапевтично ефективному дозуванні, токсичність, вік, стан здоров'я пацієнта і інші супузменшуючи, таким чином, токсичність, пов'язану з тні захворювання або види лікування. окремим хіміотерапевтичним агентом. На основі результатів, отриманих при викориПри проведенні хіміотерапії множина агентів, станні комбінацій ССІ-779 плюс ЕКВ-569, можна що мають різні механізми дії, звичайно використопрогнозувати, що первинна доза при в/в інфузії вують як частину хіміотерапевтичного «коктейлю». ССІ-779 буде складати приблизно від 0,1 до Можна передбачувати, що комбінації за даним 100мг/м2, переважно, приблизно від 2,5 до винаходом будуть використовуватися як частина 70мг/м2. Також переважно вводити ССІ-779 в/в, хіміотерапевтичного «коктейлю», який може містизвичайно протягом періоду часу більш 30 хвилин, і ти один або більше додаткових антинеопластичприблизно один раз на тиждень. Первинні добові них агентів, в залежності від природи новоутводози ЕКВ-569 будуть складати приблизно від 1 до рення, з приводу якого буде проводитися 100мг, переважно, від 5 до 75мг. Після одного або лікування. Наприклад, даний винахід також віднобільше курсу лікування дозування можуть бути ситься до застосування комбінації ССІ-779/ЕКВзмінені в сторони збільшення або зменшення, в 569, що застосовується в поєднанні з іншими хімізалежності від отриманих результатів і побічних отерапевтичними агентами, такими як антиметаефектів, що спостерігаються. боліти (тобто, 5-фторурацил, флоксурадин, тіогуаПрепарати для перорального введення, що нін, цитарабін, флударабін, 6-меркаптопурин, містять активні сполуки за даним винаходом, мометотрексат, гемцитабін, капецитабін, пентостажуть включати будь-які звичайні пероральні фортин, триметрексат або кладрибін), агенти зшиття ми, включаючи таблетки, капсули, букальні форДНК і алкілуючі агенти (тобто, цисплатин, карбопми, облатки, пастилки і рідини, суспензії або латин, стрептазоїн, мелфалан, хлорамбуцил, каррозчини для перорального введення. Капсули момустин, метклоретамін, ломустин, бісульфан, тіожуть містити суміші активної сполуки (сполук) з 11 77200 12 інертними наповнювачами і/або розріджувачами, воду, етанол, поліол (наприклад, гліцерин, пропітакими як фармацевтично прийнятний крохмаль ленгліколь і рідкий поліетиленгліколь), відповідні (наприклад, кукурудзяний, картопляний крохмаль суміші даних агентів і рослинні олії. або крохмаль з тапіоки), цукор, штучні підсолоджуДля цілей даного опису під черезшкірним ввевачі, порошкоподібна целюлоза, така як кристалічденням розуміють всі способи введення через на і мікрокристалічна целюлози, коригенти, желаповерхню тіла і внутрішні вистілки шляхів організтин, камеді і т.п.Відповідні таблетовані препаратні му, включаючи епітеліальні тканини і тканини слиформи можна виготовляти звичайними способами зових оболонок. Вказане введення можна здійспресування, вологого гранулювання або сухого нювати з використанням даних сполук або їх гранулювання і використати фармацевтично прифармацевтично прийнятних солей, в лосьйонах, йнятні розріджувачі, зв'язувальні агенти, змащувакремах, пінках, пластирах, суспензіях, розчинах і льні агенти, розпушувачі, агенти, що модифікують супозиторіях (ректальних і вагінальних). властивості поверхонь (включаючи сурфактанти), Черезшкірне введення можна здійснювати з суспендуючі або стабілізуючі агенти, включаючи, використанням черезшкірного пластиру, що місбез обмеження, стеарат магнію, стеаринову кистить активну сполуку і носій, який є інертним по лоту, тальк, лаурилсульфат натрію, мікрокристалівідношенню до активної сполуки, нетоксичним по чну целюлозу, кальцій-карбоксиметилцелюлозу, відношенню до шкіри і дозволяє доставляти агент полівінілпіролідон, желатин, альгінову кислоту, для системного всмоктування в кровотік через аравійську камедь, ксантанову камедь, цитрат нашкіру. Носій може приймати будь-яку кількість трію, складні силікати, карбонат кальцію, гліцин, форм, таких як креми і мазі, пасти, гелі і закриті декстрин, сахарозу, сорбіт, двокальцієвий фосфат, пристрої. Креми і мазі можуть являти собою в'язкі сульфат кальцію, лактозу, каолін, маніт, хлорид рідкі або напівтверді емульсії типу «масло у воді» натрію, тальк, сухий крохмаль і порошкоподібний або «вода в маслі». Пасти, складені з абсорбуюцукор. Переважні агенти, що модифікують властичих порошків, диспергованих в нафті або гідрофівості поверхонь, включають неіоногенні і аніонольній нафті, що містять активний інгредієнт, також генні агенти, що модифікують властивості поверможуть бути відповідними. Ряд закритих пристроїв хонь. Приклади агентів, що змінюють властивості можна використати для вивільнення активного поверхонь, включають, без обмеження, полоксаінгредієнта в кровотік, таких як напівпроникна мер 188, хлорид бензалконію, стеарат кальцію, мембрана, яка покриває резервуар, що містить цетостеариловий спирт, емульгуючий віск цетомаактивний інгредієнт з носієм або без носія, або крогол, складний ефір сорбітану, колоїдний діокматрикс, який містить активний інгредієнт. Інші сид кремнію, фосфати, додецилсульфат натрію, закриті пристрої відомі фахівцям. Препарати в алюмосилікат магнію і триетаноламін. Препарати формі супозиторіїв можна виготовляти з традиційдля перорального введення за даним винаходом них матеріалів, включаючи масло какао з доданможуть використати звичайні препарати з уповільням або без додання воску для зміни температури неним або відстроченим вивільненням для зміни плавлення супозиторію, і гліцерин. Також можна всмоктування активної сполуки (сполук). Препарат використовувати водорозчинні основи для супозидля перорального введення може також перебуваторіїв, такі як поліетиленгліколі з різною молекуляти з активного інгредієнта у воді або фруктовому рною масою. соку, що містить відповідні солюбілізуючі або емуНаступна інформація забезпечує отримання льгуючі агенти, якщо це необхідно. ЕКВ-569 з комерційно доступних початкових матеУ деяких випадках може бути бажаним вверіалів або початкових матеріалів, які можна отридення сполуки безпосередньо в дихальний шлях в мати, спираючись на описані в науковій літературі формі аерозолю. процедури. Сполуку можна також вводити парентерально Отримання 4-диметиламінокротонової кислоти або інтраперитонеально. Розчини або суспензії з TMS-4-бромкротонату даних активних сполук у вигляді вільної основи або фармакологічно прийнятної солі можна виготовляти у воді, належно змішаної з сурфактантом, таким як гідроксипропілцелюлоза. Дисперсії також можна виготовляти в гліцерині, рідких поліетиленгліколях і їх сумішах в маслах. У звичайних умовах зберігання і використання даний препарат містить 211мл диметиламіну (2M в ТГФ, 0,422моль) по консервант для запобігання росту мікроорганізмів. краплях додавали до розчину 50г TMS-4Фармацевтичні форми, відповідні для ін'єкцій, бромкротонату (0,211моль, 75,9% по ГХ-МС) в включають стерильні водні розчини або стерильні 250мл ТГФ при 0-50°С в атмосфері N2. Реакційну порошки для виготовлення безпосередньо перед суміш перемішували при кімнатній температурі вживанням стерильних розчинів або дисперсій для протягом 30 хвилин. Білий твердий побічний проін'єкцій. У всіх випадках лікарська форма повинна дукт відфільтровували. До фільтрату додавали бути стерильною і повинна бути досить рідкою, 2мл води з подальшим внесенням затравки. Утвощоб її можна було вводити за допомогою шприца. рені кристали відфільтровувати і промивали, з Вона повинна бути стабільною при умовах вироботриманням 18,3г (з двох зборів) твердого продукництва і зберігання і повинна бути захищена від ту не зовсім білого кольору. Вихід становив 67,2% контамінуючої дії мікроорганізмів, таких як бактерії (98% чистота по ГХ-МС, ЯМР відповідав структуі гриби. Носій може являти собою розчинник або рі). диспергуюче середовище, що містить, наприклад, Отримання метил 4-диметиламінокротонату з 13 метил-4-бромкротонату 120мл диметиламіну (2M в ТГФ, 0,24моль) по краплях додавали до розчину 20г метил 4бромкротонату (85% чистоти, 0,095моль) в 150мл ТГФ при 0-50°С в атмосфері N2. Реакційну суміш перемішували при кімнатній температурі протягом 15 хвилин. ТШХ (9:1 СН2СІ2: МеОН з декількома краплями Et3N) показала залишковий метил 4бромкротонат. Реакційну суміш перемішували при 40-45°С протягом 15 хвилин. Білий твердий побічний продукт відфільтровували. Фільтрат випаровували з отриманням жовтого масла (14г). Жовте мало розчиняли в 100мл СН2СІ2 і промивали два рази Н2О. Водний шар знову екстрагували 100мл СН2СІ2. Шари СН2СІ2 об'єднували, висушували над MgSO4 і фільтрували. Фільтрат випаровували з отриманням масла (12г). Вихід становив 88%. ЯМР показав бажаний продукт із залишковими кількостями метил 4-бромкротонату. Отримання гідрохлориду метил 4-N,Nдиметиламінокротонату у великій кількості: У 3л колбу вміщували тетрагідрофуран (0,71кг, 0,80л). Додавали метил 4-бромкротонат (0,20кг, 0,13л, пл.=1,522г/мл) і промивали тетрагідрофураном (0,18кг, 0,20л). Розчин перемішували і охолоджували до 0-10°С. Додаткову воронку завантажували розчином диметиламіну в тетрагудрофурані і додавали зверху (1год. 15хв.), зберігаючи температуру 0-10°С. Суміш перемішували мінімум протягом 30хв. і перевіряли на завершення реакції за допомогою ТШХ. Реакція була завершена, коли залишалося < 2% початкового матеріалу, що виявляється (метил 4-бромкротонату). Суміш в холодному стані фільтрували через воронку Бюхнера в 3л колбу з декількома горлами, промивали заздалегідь охолодженим (0-10°С) тетрагідрофураном (2 0,18кг, 2 0,20л) і зберігали розрідження до припинення подачі розчину по краплях. Колба була забезпечена мішалкою, термометром і пристроєм для вакуумної дистиляції. Розчин концентрували дистиляцією при зниженому тиску (125-200мм рт.ст.) і при максимальній температурі резервуара (40°С) до об'єму (200мл). Додавали ізопропанол (0,22кг, 0,28л) і суміш охолоджували до 0-10°С. Головку перегінного пристрою замінювали додатковою воронкою, завантаженою розчином НСІ в ізопропанолі, який додавали більше 45хв. до досягнення рН2,0-3,0, при підтримці температури 0-10°С. Суміш залишали в спокої мінімуму на 30хв. і вміщували її в холодному стані на воронку Бюхнера, промивали ізопропанолом (2 0,12кг, 2 0,15л). Осад на фільтрі заливали і зберігали розрідження до припинення подачі розчину по краплях. Продукт висушували у вакуумній печі при 50°С і 10мм рт.ст. протягом 18-20 години. Отримання гідрохлориду 4диметиламінокротонової кислоти з метил 4диметиламінокротонату 77200 14 Розчин NaOH (3,35г в 25мл Н2О, 0,084моль) по краплях додавали до розчину 12 г метил 4диметиламінокротонату (0,084моль) в 100мл МеОН при кімнатній температурі. Реакційну суміш нагрівали до 40-45°С протягом 1 години, потім охолоджували до кімнатної температури. рН доводили до 1-2 за допомогою 5Н НСІ. Суміш концентрували до стану густого масла, який розтирали в зневодненому спирті до утворення твердої речовини. Твердий побічний продукт відфільтровувати. Фільтрат випаровували до стану масла, який розтирали в ІРА. Отримували сім (7,0)г білого твердого продукту. Вихід становив 50%, чистота по ГХМС 86,3%. Отримання гідрохлориду 4-N,Nдиметиламінокротонової кислоти у великій кількості: 2л колба з декількома горлами була забезпечена мішалкою, термометром, додатковою воронкою і азотним захистом. У колбу завантажували етанол (0,39кг, 0,50л). Додавали гідрохлорид метил 4-N,N-диметиламінокротонату (0,125кг) і промивали етанолом (0,10кг, 0,125л). Суспензію перемішували і охолоджували до 0-10°С. Додаткову воронку завантажували гідроксидом натрію (50%) (0,11кг, 0,072л, пл. =1,53г/мл) і додавали протягом більше 20 хвилин, підтримуючи температуру 010°С. Спостерігалося виділення невеликої кількості тепла, і суміш набувала жовтого кольору. Суміш перемішували протягом мінімум 15хв., а потім підігрівали до 18-22°С і залишали в спокої мінімуму на 4 години. Реакцію перевіряли на завершення за допомогою ТШХ. Реакція була завершена, коли залишалося 2% початкового матеріалу, що виявляється (гідрохлориду метил 4-Ν,Νдиметиламінокротонату). Суміш охолоджували до 0-10°С. Додаткову воронку завантажували розчином НСІ в ізопропанолі і додавали більше 40хв. до досягнення рН2,0-3,0, при підтримці температури резервуара 0-10°С. Суміш перемішували протягом мінімум 30хв. і в холодному стані фільтрували через воронку Бюхнера в 2л колбу з декількома горлами, промивали холодним етанолом (0-10°С) (2 0,05кг, 2 0,063л), зберігаючи розрідження до припинення подачі розчину по краплях. Колба була забезпечена мішалкою, термометром і пристроєм для вакуумної дистиляції. Розчинник видаляли при зниженому тиску 50-100мм рт.ст. і при максимальній температурі резервуара (40°С) до об'єму 160-180мл. Додавали ізопропанол (0,049кг, 0,063л) і суміш підігрівали до 35-40°С протягом більше 10хв. Додавали ацетон (0,10кг, 0,13л) протягом більше 20хв., підтримуючи температуру 35 15 77200 16 40°С. У суміш вміщували затравку і охолоджували промивали холодним (0°С) ТГФ (3 5мл). Продукт до кімнатної температури 20-25°С і залишали у висушували в умовах вакууму (~1торр) при 40вказаному стані мінімум на 12-18 годину. Суміш 50°С протягом 3 годин, з отриманням 4,0г гідрохохолоджували до 0-10°С і залишали у вказаному лориду 4-диметиламінокротоноїлхлориду. Даний стані мінімум на 1 годину. Готували суміш ізопроматеріал характеризується як його метиловий панолу (0,049кг, 0,063л) і ацетону (0,10кг, 0,13л), ефір при обробці твердої речовини метанолом. перемішували до однорідності і охолоджували до Альтернативно, вказану в заголовку сполуку 0-10°С. Суміш фільтрували в холодному стані на можна отримувати в CH3CN і використати безповоронку Бюхнера, промивали сумішшю ізопропасередньо на стадії скріплення: нол/ацетон (2 0,074кг, 2 0,096л), а осад на фільтОтримання ЕКВ-569 рі заливали, зберігаючи розрідження до припинен3л колба з декількома горлами була забезпеня подачі розчину по краплях. Продукт чена мішалкою, термометром, зануреною трубкою висушували у вакуумній печі при 50°С і 10мм рт.ст. і азотним захистом. У колбу завантажували Nпротягом 18-20 годин. метилпіролідинон (0,77кг, 0,75л, пл.=1,033г/мл). Отримання 4-диметиламінокротоніланіліду з При кімнатній температурі додавали 4-[3-хлор-4гідрохлориду 4-диметиламінокротонової кислоти фторфеніл]амін-6-аміно-3-ціан-7-етоксихінолін (0,0748кг) [див. патент США №6 002 008] і суміш перемішували при нагріванні до 40-45°С і залишали у вказаному стані на 15 хв. Колбу охолоджували до 0-10°С. Суміш, що містила гідрохлориду 4N,N-диметиламінокротоноїлхлориду, переносили за допомогою зануреної трубки і при позитивному тиску азоту в 3л колбу протягом більше 30-45хв., підтримуючи температуру 0-10°С. Суміш залишаТіонілхлорид (0,36мл, 0,005моль) по краплях ли в спокої при 0-10°С мінімум на 2 години. Реакдодавали до розчину 0,33г гідрохлориду 4цію перевіряли на завершення за допомогою диметиламінокротонової кислоти (0,002моль) в ВЕРХ. Реакція була завершена, коли залишалося 15мл СН2СІ2, що містить 2 краплі ДМФА при 0°С в 2% початкового матеріалу (4-[3-хлор-4атмосфері N2. Реакційну суміш кип'ятили зі зворофторфеніл]амін-6-аміно-3-ціан-7-етоксихіноліну). тним холодильником протягом 30хв. Потім до реа12л колбу з декількома горлами, забезпечену мікційної суміші по краплях додавали 0,72мл аніліну шалкою, термометром, зануреною трубкою і азот(0,008моль) при 0°С і перемішували протягом 1 ним захистом, завантажували водою (2,61кг, години при кімнатній температурі. Твердий побіч2,61л). Додавали бікарбонат натрію (0,209кг) і пений продукт відфільтровували. Фільтрат випароремішували до отримання розчину. Розчин охоловували, з отриманням масла (0,6г). Дані ГХ-МС джували до 20-24°С. Суміш NMP-CH3CN перенопоказали, що масло містило 11,7% гідрохлориду 4сили за допомогою зануреної трубки і при диметиламінокротонової кислоти і 85% бажаних позитивному тиску азоту в 12л колбу протягом продуктів. більше 45-60хв., підтримуючи температуру 20Отримання і виділення гідрохлориду 4-Ν,Ν24°С. Суміш підтримували при 20-24°С протягом диметиламінокротоноилхлориду мінімум 1 години і фільтрували на воронку БюхнеДобре перемішену суспензію гідрохлориду 4диметиламінокротонової кислоти (5,0г, 30ммоль) в ра, промивали водою (3 0,40кг, 3 0,40л), зберігахолодному (0°С) ТГФ (40мл) і ДМФА (2 краплі з ючи розрідження до припинення подачі розчину по піпетки) обробляли оксалілхлоридом (3,15мл, краплях. Продукт висушували у вакуумній печі при 36ммоль). Суміш перемішували при 20-25°С про50°С і 10мм рт.ст. протягом 28-30 годин, з отритягом 3 години, потім охолоджували до 0°Сі залиманням 78,5г (вихід 86%) продукту. шали у вказаному стані на 30хв. Тверді речовини збирали на воронку Бюхнера (під шаром азоту) і 17 Комп’ютерна верстка Т. Чепелева 77200 Підписне 18 Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601