Рекомбінантний, очищений, модифікований генно-інженерно білок, продуктований бактеріями e.coli, імітуючий білок оболонки trepanema pallidum

Завантажити PDF файл.

Формула / Реферат

Рекомбінантний, очищений, модифікований генно-інженерно білок, продукований бактеріями Е.соlі, імітуючий білок оболонки Trepanema pallidum, який має основні імунодомінантні епітопи, притаманні нативному білку, має молеку­лярну масу 106 кД, містить в собі 883 амінокислотних залишків і відповідає загальній формулі N-бетa-Gal-pTr-COOH.

Текст

Винахід відноситься до розділу молекулярної біології, генної Інженерії і може бути використаним в біотехнології і медицині для конструювання діагностичних тест-систем і наукової праці. Аналогом рекомбінантного білка є структурний білок оболонки Trepanema pallidum. В основу винаходу покладено завдання створити генно-інженерними методами білок, який би мав основні імунодомінантні епітопи притаманні нативному білку і був придатним для використання в ІФА тест-системах, які виявляють антитіла до Trepanema pallidum. Суть винаходу полягає в одержанні під контролем плазмідного експресуючого вектора pKS-103 рекомбінантного білка, який має основні імунодомінантні епітопи притаманні нативному білку Trepanema pallidum. Плазмідний вектор pKS-103 розміром 5,2т.п.н., має маркер ампіцилінрезістентності і, після трансформування в E. coli (штам Y1090), під контролем промотора фага лямбда Pr, забезпечує конститутивний синтез несекретуємого білка, який нагромаджується в цитоплазмі клітин бактерій в пізній логарифмічній, або ранній стаціонарній фазі росту к ультури. Культивування бактерій проводять при 32 - 39 градусах на середовищі LB з добавкою ампіциліне (50мкг/мл) на протязі 6 - 8 годин. Після закінчення культивування клітини осаджують центрифугуванням при 8000об/хв на протязі 10хв при 4 градусах, над-осадову рідину відкидають, а осад суспендують в TE розчині (0,01M Tpic-HCl, pH 8,0 ЕДТА 0,001M). Суспензію клітин руйнують лізоцимом, ультразвуком, обробляють ДНКазою до зникнення в'язкості розчину, перемішують в емульгаторі 5хв і центрифугують при 12000об/хв на протязі 30 хвилин. Останні дві операції проводять ще 5 раз, кожен раз ресуспендуючи осад в розчині TE. Осад, який являє собою "тільця включення", розчиняють в воді, додають Tpic-HCl до 20мМ, pH8,0 і сечовину до 8M і інкубують ніч при 4 градусах для руйн ування "тілець включення". Кінцевий цільовий продукт являє собою злитний рекомбінантний білок молекулярною масою 106кД, який виявляється мажорною смугою при електрофорезі в поліакриламідному гелі і в імуноблоці з анти-сироваткою до Trepanema pallidum, містить й собі 883 амінокислотних залишка, має ізоелектричну точку 6,62 і відповідає загальній формулі N-бета-Gal-pTr-COOH (див. додаток 1).

Дивитися

Додаткова інформація

Автори англійською

Cherepanov Piotr Alekseiovych, Chieriepanov Piotr Alieksieievich, Cherepanov Piotr Alekseevich, Mikhailova Tatiana Havrilovna, Martynenko Dmytro Leonidovych, Martinenko Dmitro Leonidovych, Chumak Rostyslav Maksymovych

Автори російською

Черепанов Петр Алексеевич, Михайлова Татьяна Гавриловна, Мартиненко Дмитрий Леонидович, Мартыненко Дмитрий Леонидович, Чумак Ростислав Максимович

МПК / Мітки

МПК: C07K 14/20, C12N 15/31

Мітки: білок, продуктований, імітуючий, pallidum, e.coli, рекомбінантний, генно-інженерно, модифікований, очищений, бактеріями, оболонки, trepanema

Код посилання

<a href="https://ua.patents.su/1-14746-rekombinantnijj-ochishhenijj-modifikovanijj-genno-inzhenerno-bilok-produktovanijj-bakteriyami-ecoli-imituyuchijj-bilok-obolonki-trepanema-pallidum.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Рекомбінантний, очищений, модифікований генно-інженерно білок, продуктований бактеріями e.coli, імітуючий білок оболонки trepanema pallidum</a>

Подібні патенти