Спосіб оцінки пошкоджуючої дії хірургічних ниток на клітини

Предлагаемое изобретение относится к области медицины, а именно к токсикологии. Известен способ определения гистотоксического действия полимерных материалов, в том числе хирургических нитей, путем оценки характера миграции культуры фибропластов in vitro после внесения в последнюю вытяжек из полимерных материалов с последующим расчетом индекса гистотоксичности (Руководящие методические материалы по токсиколого-гигиеническим исследованиям полимерных материалов и изделий медицинского назначения. МЗ СССР, 1987). Недостатками способа определения гистологического действия полимерных материалов является большая продолжительность и трудоемкость исследования, возможное несоответствие повреждающего действия получаемой вытяжки in vitro и in vivo. Наиболее близким к заявляемому является способ определения повреждающего воздействия химических веществ на клетки in vitro путем инкубации лимфоцитов с исследуемым веществом и регистрации концентрации аденозинтрифосфорной кислоты с последующей оценкой биологической активности по сравнению с контролем (Авт. св. СССР №1483368, опубл. 30.05.89, Бюл. №10). Однако применение данного способа для оценки повреждающего воздействия хирургических нитей невозможно вследствие твердой структуры последних, затрудняющих их воздействие на лимфоциты при совместной инкубации, что не позволяет достоверно оценить изменения аденозинтрифосфорной кислоты, отражающей состояние энергетического обмена в клетках. В основу изобретения поставлена задача создания такого способа оценки повреждающего действия хирургических нитей на клетки, в котором вследствие применения для инкубации с лимфоцитами in vitro и регистрации динамики изменения концентрации в последних аденозинтрифосфорной кислоты вытяжек из хирургических нитей обеспечивается точная оценка возможного повреждающего действия последних на ткани, которое выявляют при достоверном снижении концентрации АТФ в лимфоцитах по сравнению с контролем. Поставленная задача решается тем, что в способ оценки повреждающего действия хирургических нитей на клетки, включающий инкубацию лимфоцитов с исследуемым материалом и регистрацию концентрации аденозинтрифосфорной кислоты с последующей оценкой биологической активности по сравнению с контролем, согласно изобретению вводится применение в качестве материала для инкубации с лимфоцитами вытяжки из исследуемой хирургической нити. Способ осуществляется следующим образом. Для оценки повреждающего действия хирургических нитей на клетки на первом этапе готовят и х гомогенат. Для этой цели в стерильных условиях открывают ампулу или полимерный пакет с исследуемой хирургической нитью и с помощью стерильных ножниц отсекают необходимое ее количество. После этого образец взвешивают на предварительно простерилизованной платформе лабораторных весов. Навеску материала прополаскивают в стерильной воде и высушивают с помощью стерильной марлевой салфетки. Навеску переносят в стерильную фарфоровую ступку и растирают в соответствующем количестве стерильного физиологического раствора (1мл на 100г материала). Одновременно с гомогенатом готовят контрольную пробу - физиологический раствор. Пробы инкубируют в термостате при температуре 37°C в течение 3 суток, центрифугир уют при 3000об/мин в течение 15 минут. После чего супернатант опытной и контрольной проб добавляют в культуру лимфоцитов (на 400000 лимфоцитов 100мкл супернатанта) и инкубируют в течение 3 суток при температуре 37°C. После этого определяют концентрацию аденозинтрифосфорной кислоты (АТФ) со гласно общепринятым методикам. При выявлении снижения концентрации АТФ в присутствии вытяжки хирургической нити последнюю относят к потенциально опасным материалам, способным вызвать изменения в энергетическом обмене и нарушения жизнедеятельности клеток сшитых тканей. Пример 1. Для исследования брали образцы рассасывающейся хирургической нити - кетгута трех видов: нестерильного, стерилизованного раствором Люголя (йодированного) и стерилизованного гамма лучами. Для оценки повреждающего действия использовали ранее известный способ определения повреждающего воздействия химических веществ на клетки in vitro. При инкубации негомогенизированных образцов кетгута с лимфоцитами достоверных различий в концентрации в клетках АТФ не выявлено. В то же время при имплантации последних в почки белых крыс (15 штук) концентрация АТФ в ткани почек заметно различалась (на 14 сутки после имплантации): при имплантации кетгута нестерильного - 1,24 ± 0,38мкмоль/г; кетгута йодированного - 2,26 ± 0,22мкмоль/г; кетгута, стерилизованного гамма-лучами - 2,87 ± 0,27мкмоль/г. Таким образом, данные in vitro, полученные при использовании известного способа для оценки повреждающего действия нитей расходятся с данными in vivo. Пример 2. Для исследования брали образцы кетгута как и в примере 1. После инкубации вытяжек из кетгута с культурами лимфоцитов, в последних выявлены существенные различия в концентрации АТФ (при норме - 1,80 ± 0,09нмоль/мл); при использовании вытяжки кетгута нестерильного - 0,18 ± 0,05нмоль/мл; кетгута йодированно-го - 0,86 ± 0,11нмоль/мл; кетгута, стерилизованного гамма-лучами - 1,67 ± 0,18нмоль/мл. Динамика полученных изменений концентрации АТФ in vitro полностью коррелирует с данными о концентрации данного макроэрга in vi vo. Снижение концентрации АТФ при использовании нестерильного и йодированного кетгута свидетельствуют об их повреждающем действии на жизненно важные структуры клетки.