Спосіб штучного вирощування зимових зооспорангіїв збудника раку картоплі

Винахід відноситься до області фітопатології, зокрема до вирощування зимових зооспорангіїв збудника раку картоплі в штучни х умовах і може бути використаний при вивченні циклу розвитку цього патогена. До цих пip цикл розвитку збудника раку картоплі вивчали тільки в процесі патогенезу. При цьому патологічні процеси викликали на картоплі методом зараження рослин від свіжих ракових наростів (прототип). Цей метод характеризується тим, що процес зараження рослин проходить без контакту з ґрунтом i тому в ракові пухлини попадає менша кількість пoбiчних мікроорганізмів, чим при зараженні рослин у ґр унті [3]. Недоліком цього методу є те, що ракові пухлини є хорошим середовищем для різних мікроорганізмів, які в досить великих кількостях попадають в нарости, що надзвичайно перешкоджає проведенню точних біологічних досліджень [4]. Задача: розробити спосіб штучного вирощування зимових зооспорангiїв збудника раку картоплі без участі рослини-господаря. Задача досягається за рахунок підбору необхідних для розвитку гриба поживних речовин i створення для цього процесу сприятливих умов протягом повного циклу розвитку патогена. Необхідний для розвитку патогена поживний розчин готують безпосередньо перед його використанням з 0,5г MgSО4 , 1,5г Са(NО3)2, 0,4г КН2РO4, 0,15г K2SO4, 0,1г Н3ВО3 , 1г арабінози, 0,2 лактози, 0,2г рамнози, 0,1г ксилози, 0,1 дульциту на 1 літр прокип'яченої протягом 20 хвилин і профільтрованої на паперовому фільтрі річкової води. До цих речовин додають ще екстраговані з молодих бульб картоплі речовини. З цією метою молоді бульби миють і розрізають на кубики об'ємом 1-1,5см 3. Кубики поміщають в стакан, промивають проточною водою 1-2 рази, і заливають їх приготованим із мінеральних речовин та вуглеводів розчином таким чином, щоб кубики бульб були покриті рідиною. Екстракцію проводять протягом 2-х годин. Приготований таким чином розчин зливають і використовують в свіжому стакані в якості поживного для зооспор патогенна розчину. Зимові зооспорангії гриба вирощують із його зооспор, які є кінцевою стадією розвитку патогена і слугують безпосереднім збудником хвороби Зооспори одержують попередньо із ракових наростів. При цьому, із наростів спочатку виділяють зимові зооспорангії [1], а потім із останніх в період їх фізіологічної зрілості виділяють зооспори [2]. Для аналізу використовують 10-15мл. Суспензії зооспор, виділених із 15-20мг фізіологічно зрілих зооспорангіїв. Підготовку зооспор до їх подальшого розвитку на штучному середовищі починають із їх очистки від низькомолекулярних речовин. Для цього суспензію зооспор переносять в мішечок виготовлений із напівпроникної целофанової плівки і очищують їх шля хом діалізу протягом 2 годин в 1 літрі дистильованої води. Після очищення зооспор, їх середовище заповнюють необхідними для розвитку патогена розчинами. Для цього мішечок з зооспорами ставлять на діаліз в 1 літр поживного розчину і діалізують протягом 3 годин. Після цього суспензію зооспор переносять із мішечка в скляну пробірку, яку щільно закривають корком і зберігають в темноті при температурі 9-18°С. Процедуру очистки зооспор і введення в суспензію поживних для патогена речовин повторюють через кожні 3 дні протягом 2-х тижнів. В період третього тижня суспензію патогена залишають без змін. В кінці третього тижня суспензію розводять дистильованою водою в кілька разів і фільтрують на паперовому фільтрі, на якому вирощені в штучни х умовах зимові зооспорангії залишаються разом з органічними домішками. Репродуковану штучно інфекцію висушують на фільтрі при кімнатній температурі. За допомогою скальпеля утворений на фільтрі інфекційний порошок переносять в скляну пробірку, визначають в ній вміст зооспорангіїв методом мікроскопічного аналізу і зберігають при температурі 2-5°С до початку досліджень. Запропонований нами спосіб показує, що облігатний збудник раку картоплі здатний до репродукції на штучному середовищі, що розкриває надзвичайно великі перспективи для детального вивчення циклу розвитку гриба і розробки на цій основі ефективних засобів боротьби з ним. Література: 1. Голик И.В Состав для выделения зооспорангиев Synchytrium enelobioricum (Schilb.) Реrс. из раковых наростов картофеля. Описание к авторскому свидетельству СССР, №254944, 1969. 2. Голик И.В. Способ выделения живых зооспор из зимних зооспорангиев Synchytrium enelobioticum (Schilb.) Perc. Описание к авторскому свидетельству СССР, №370854, 1972. 3. Салтыкова Л.П., Тарасова В.П. Заражение ростков от свежих раковых наростов, которые содержат быстропроростающие летние зооспорангии. Методические указания по испытанию картофеля на ракоустойчивость, М., 1982. -С.24-30. 4. Esmarch F. Untersuchugen zur Biologie des Kartoffelkrebses I-III Angewandze Botanik, VIII, 1926.