Гуманізоване антитіло проти фактора d та його застосування
Номер патенту: 100888
Опубліковано: 11.02.2013
Автори: Хуан Артур Дж., Лоумен Генрі, Келлі Роберт Ф., ван Локерен Кампагне Менно, Вінтер Чарльз М.
Формула / Реферат
1. Антитіло проти фактора D або його антигензв'язувальний фрагмент, яке містить варіабельний домен легкого ланцюга, який включає гіперваріабельну ділянку (HVR) 1 легкого ланцюга, що містить ITSTDIDDDMN (SEQ ID NO: 30), HVR-2 легкого ланцюга, що містить GGNTLRP (SEQ ID NO: 35), і HVR-3 легкого ланцюга, що містить LQSDSLPYT (SEQ ID NO: 38), і варіабельний домен важкого ланцюга, який містить HVR-1 важкого ланцюга, що містить GYTFTNYGMN (SEQ ID NO: 39), HVR-2 важкого ланцюга, що містить WINTYTGETTYADDFKG (SEQ ID NO: 40), і HVR-3 важкого ланцюга, що містить EGGVNN (SEQ ID NO: 41), і де амінокислота в позиції 1 важкого ланцюга являє собою E.
2. Антитіло проти фактора D або його антигензв'язувальний фрагмент за п. 1, де варіабельний домен легкого ланцюга включає каркасну ділянку (FR) 4, яка містить FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 51).
3. Антитіло проти фактора D або його антигензв'язувальний фрагмент за п. 1, де варіабельний домен важкого ланцюга включає амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 19.
4. Антитіло проти фактора D або його антигензв'язувальний фрагмент за п. 1, де варіабельний домен легкого ланцюга включає амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 7.
5. Антитіло проти фактора D або його антигензв'язувальний фрагмент за п. 1, де варіабельний домен важкого ланцюга включає амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 19 і варіабельний домен легкого ланцюга включає амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 7.
6. Антитіло проти фактора D або його антигензв'язувальний фрагмент за п. 1, яке містить важкий ланцюг, що включає амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 63.
7. Антитіло проти фактора D або його антигензв'язувальний фрагмент за п. 1, яке містить легкий ланцюг, що включає амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 61.
8. Антитіло проти фактора D або його антигензв'язувальний фрагмент за п. 1, яке містить важкий ланцюг, що включає амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 63, і легкий ланцюг, що включає амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 61.
9. Антитіло проти фактора D або його антигензв'язувальний фрагмент за будь-яким з пп. 1-7, де антитіло або фрагмент є моноклональним.
10. Антитіло проти фактора D або його антигензв'язувальний фрагмент за будь-яким з пп. 1-7, де фрагмент вибраний з фрагментів Fab, Fab'-SH, Fv, scFv або (Fab')2.
11. Антитіло проти фактора D або його антигензв'язувальний фрагмент за будь-яким з пп. 1-7, де антитіло або фрагмент є гуманізованим.
12. Антитіло проти фактора D або його антигензв'язувальний фрагмент за будь-яким з пп. 1-8, де фактор D являє собою фактор D ссавця.
13. Антитіло проти фактора D або його антигензв'язувальний фрагмент за п. 12, де фактор D являє собою людський фактор D.
14. Антитіло проти фактора D або його антигензв'язувальний фрагмент, що містить поліпептид, який містить наступну амінокислотну послідовність:
X1VQLVQSGPELKKPGASVKVSCKASGYTFTNYGMNWVRQAPGQGLEWMGWINTYTGETTYADDFKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCEREGGVX2X3WGQGTLVTVSS (SEQ ID NO: 74), де X1 являє собою E; X2 являє собою N; і X3 являє собою N, і поліпептид, який містить наступну амінокислотну послідовність:
DIQVTQSPSSLSASVGDRVTITCITSTDIDDDX4X5WYQQKPGKVPKLLISGGX6TLRPGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYCLQSDSLPYTFGQGTKX7EIK (SEQ ID NO: 73), де X4 являє собою M; X5 являє собою N; X6 являє собою N; і X7 являє собою L або V.
15. Антитіло проти фактора D або його антигензв'язувальний фрагмент за п. 14, де X7 у послідовності SEQ ID NO: 73 являє собою V.
16. Антитіло проти фактора D або його антигензв'язувальний фрагмент за п. 14 або 15, де антитіло або фрагмент є моноклональним.
17. Антитіло проти фактора D або його антигензв'язувальний фрагмент за п. 14 або 15, де фрагмент вибраний з фрагментів Fab, Fab'-SH, Fv, scFv або (Fab')2.
18. Антитіло проти фактора D або його антигензв'язувальний фрагмент за п. 14 або 15, де антитіло або його фрагмент є гуманізованим.
19. Антитіло проти фактора D або його антигензв'язувальний фрагмент за п. 14 або 15, де фактор D являє собою фактор D ссавця.
20. Антитіло проти фактора D або його антигензв'язувальний фрагмент за п. 19, де фактор D являє собою людський фактор D.
21. Полінуклеотид, що кодує антитіло проти фактора D або його антигензв'язувальний фрагмент за будь-яким з пп. 1-20.
22. Вектор експресії, що містить полінуклеотид за п. 21.
23. Клітина-хазяїн, що містить вектор експресії за п. 22, яка продукує антитіло проти фактора D або його антигензв'язувальний фрагмент.
24. Клітина-хазяїн за п. 23, що є еукаріотичною.
25. Клітина-хазяїн за п. 24, що є клітиною CHO.
26. Клітина-хазяїн за п. 23, що є прокаріотичною.
27. Клітина-хазяїн за п. 23, що є бактеріальною.
28. Спосіб одержання антитіла проти фактора D або його антигензв'язувального фрагмента, що включає (a) культивування клітини-хазяїна за будь-яким з 23-27 в умовах, прийнятних для експресії поліонуклеотиду, що кодує антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, і (b) виділення антитіла або його антигензв'язувального фрагмента.
29. Фармацевтична композиція для лікування захворювання, пов'язаного з комплементом, що містить ефективну кількість антитіла проти фактора D або його антигензв'язувального фрагмента за будь-яким з 1-20 і фармацевтично прийнятний розріджувач, носій або ексципієнт.
30. Фармацевтична композиція за п. 29, де захворювання, пов'язане з комплементом, являє собою захворювання очей.
31. Фармацевтична композиція за п. 30, де захворювання очей вибране з групи, яка включає вікову макулярну дегенерацію, діабетичну ретинопатію, хороїдальну неоваскуляризацію (CNV), увеїт, діабетичний макулярний набряк, патологічну короткозорість, хворобу фон Хіппель-Ліндау, гістоплазмоз очей, оклюзію центральної вени сітківки (CRVO), неоваскуляризацію рогівки і неоваскуляризацію сітківки.
32. Фармацевтична композиція за п. 31, де вікова макулярна дегенерація вибрана з групи, яка включає проміжну суху AMD і географічну атрофію.
33. Фармацевтична композиція за п. 29, де захворювання, пов’язане з комплементом, являє собою запальне захворювання.
34. Фармацевтична композиція за п. 33, де запальне захворювання являє собою аутоімунне захворювання.
35. Фармацевтична композиція за п. 34, де аутоімунне захворювання вибране з групи, яка включає системний червоний вовчак, міастенію, ревматоїдний артрит, хворобу Альцгеймера і розсіяний склероз.
36. Промисловий виріб для лікування захворювання, пов'язаного з комплементом, що включає:
(a) фармацевтичну композицію за п. 29 в контейнері або контейнерах;
(b) упаковку, яка містить вказаний в підпункті (a) контейнер або контейнери, і
(c) листок-вкладиш або етикетку, яка вказує на те, що сполуку можна використовувати для лікування захворювання, пов’язаного з комплементом.
37. Промисловий виріб за п. 36, де захворювання, пов'язане з комплементом, являє собою захворювання очей.
38. Промисловий виріб за п. 37, де захворювання очей вибирають із групи, що включає вікову макулярну дегенерацію, діабетичну ретинопатію, хороїдальну неоваскуляризацію (CNV), увеїт, діабетичний макулярний набряк, патологічну короткозорість, хворобу фон Хіппель-Ліндау, гістоплазмоз очей, оклюзію центральної вени сітківки (CRVO), неоваскуляризацію рогівки і неоваскуляризацію сітківки.
39. Промисловий виріб за п. 38, де вікова макулярна дегенерація вибрана з групи, що включає проміжну суху AMD і географічну атрофію.
40. Промисловий виріб за п. 36, де захворювання, пов'язане з комплементом, являє собою запальне захворювання.
41. Промисловий виріб за п. 40, де запальне захворювання являє собою аутоімунне захворювання.
42. Промисловий виріб за п. 41, де аутоімунне захворювання вибране з групи, що включає системний червоний вовчак, міастенію, ревматоїдний артрит, хворобу Альцгеймера і розсіяний склероз.
43. Набір для лікування захворювання, пов'язаного з комплементом, який включає антитіло проти фактора D або його антигензв'язувальний фрагмент за будь-яким з пп. 1-20 в упаковці або упаковках та інструкції по введенню вказаного антитіла або його фрагмента для лікування захворювання, пов'язаного з комплементом.
44. Набір за п. 43, де захворювання, пов’язане з комплементом, являє собою захворювання очей.
45. Набір за п. 44, де захворювання очей вибране з групи, що включає вікову макулярну дегенерацію, діабетичну ретинопатію, хороїдальну неоваскуляризацію (CNV), увеїт, діабетичний макулярний набряк, патологічну короткозорість, хворобу фон Хіппель-Ліндау, гістоплазмоз очей, оклюзію центральної вени сітківки (CRVO), неоваскуляризацію рогівки і неоваскуляризацію сітківки.
46. Набір за п. 45, де вікова макулярна дегенерація вибрана з групи, що включає проміжну суху AMD і географічну атрофію.
47. Набір за п. 43, де захворювання, пов’язане з комплементом, являє собою запальне захворювання.
48. Набір за п. 47, де запальне захворювання являє собою аутоімунне захворювання.
49. Набір за п. 48, де аутоімунне захворювання вибране з групи, яка включає системний червоний вовчак, міастенію, ревматоїдний артрит, хворобу Альцгеймера і розсіяний склероз.
50. Спосіб лікування захворювання, пов'язаного з комплементом, який включає введення пацієнту,що потребує цього лікування, антитіла проти фактора D або його антигензв'язувального фрагмента за будь-яким з пп. 1-20, де захворювання, пов'язане з комплементом, являє собою запальне захворювання.
51. Спосіб за п. 50, де запальне захворювання являє собою аутоімунне захворювання.
52. Спосіб за п. 51, де аутоімунне захворювання вибране з групи, яка включає системний червоний вовчак, міастенію, ревматоїдний артрит, хворобу Альцгеймера і розсіяний склероз.
53. Спосіб лікування захворювання, пов’язаного з комплементом, який включає введення пацієнту, що потребує лікування, антитіла проти фактора D або його антигензв'язувального фрагмента за будь-яким з пп. 1-20, де захворювання, пов’язане з комплементом, являє собою захворювання очей.
54. Спосіб за п. 53, де захворювання очей вибране з групи, що включає вікову макулярну дегенерацію, діабетичну ретинопатію, хороїдальну неоваскуляризацію (CNV), увеїт, діабетичний макулярний набряк, патологічну короткозорість, хворобу фон Хіппель-Ліндау, гістоплазмоз очей, оклюзію центральної вени сітківки (CRVO), неоваскуляризацію рогівки і неоваскуляризацію сітківки.
55. Спосіб за п. 54, де вікова макулярна дегенерація вибрана з групи, що включає проміжну суху AMD і географічну атрофію.
56. Антитіло проти фактора D або його антигензв'язувальний фрагмент, отримане способом за п. 28.
57. Антитіло проти фактора D або його антигензв'язувальний фрагмент, яке містить варіабельний домен легкого ланцюга, який включає гіперваріабельну ділянку (HVR) 1 легкого ланцюга, що містить ITSTDIDDDMN (SEQ ID NO: 30), HVR-2 легкого ланцюга, що містить GGNTLRP (SEQ ID NO: 35), і HVR-3 легкого ланцюга, що містить LQSDSLPYT (SEQ ID NO: 38), і варіабельний домен важкого ланцюга, який містить HVR-1 важкого ланцюга, що містить GYTFTNYGMN (SEQ ID NO: 39), HVR-2 важкого ланцюга, що містить WINTYTGETTYADDFKG (SEQ ID NO: 40), і HVR-3 важкого ланцюга, що містить EGGVNN (SEQ ID NO: 41),
де амінокислота в позиції 1 варіабельного домену важкого ланцюга являє собою E і варіабельний домен легкого ланцюга включає каркасну ділянку (FR) 4, яка містить FGQGTKVEIK (SEQ ID NO: 51).
58. Антитіло проти фактора D або його антигензв'язувальний фрагмент, яке містить варіабельний домен важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 19, і варіабельний домен легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 7.
59. Спосіб лікування захворювання, пов'язаного з комплементом, який включає введення пацієнту, що потребує цього лікування, антитіла проти фактора D або його антигензв'язувального фрагмента за п. 57 або 58, де захворювання, пов'язане з комплементом, являє собою захворювання очей.
60. Спосіб за п. 59, де захворювання очей вибране з групи, що включає вікову макулярну дегенерацію, діабетичну ретинопатію, хороїдальну неоваскуляризацію (CNV), увеїт, діабетичний макулярний набряк, патологічну короткозорість, хворобу фон Хіппель-Ліндау, гістоплазмоз очей, оклюзію центральної вени сітківки (CRVO), неоваскуляризацію рогівки і неоваскуляризацію сітківки.
61. Спосіб за п. 60, де вікова макулярна дегенерація вибрана з групи, що включає проміжну суху AMD і географічну атрофію.
Текст
Реферат: Винахід належить до гуманізованого антитіла, яке специфічно зв'язується з фактором D, полінуклеотиду, що його кодує, вектору, клітини-хазяїна, способу одержання антитіла. Винахід також належить до фармацевтичної композиції для лікування захворювання, пов'язаного з комплементом, промислового виробу, набору для лікування захворювання та способу лікування захворювання, пов'язаного з комплементом, де захворювання являє собою запальне захворювання або захворювання очей. UA 100888 C2 (12) UA 100888 C2 UA 100888 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Перехресні посилання на споріднені заявки За даною заявкою, поданою згідно з 37 CFR §1.53(b), запитується пріоритет згідно з 35 USC §119(e) по попередній патентній заявці США № 61/048431, поданій 28 квітня 2008 р., і попередній патентній заявці США № 61/048689, поданій 28 квітня 2008 р., повний зміст яких включений в даний документ за допомогою посилань. Рівень техніки винаходу Система комплементу відіграє центральну роль у виведенні імунних комплексів і імунній відповіді на збудників інфекції, чужорідні антигени, інфіковані вірусом клітини і пухлинні клітини. Однак комплемент також відіграє роль у патологічному запаленні і аутоімунних захворюваннях. В результаті цього, інгібування надлишкової або неконтрольованої активації каскаду комплементу може забезпечити клінічний ефект у пацієнтів з такими захворюваннями і станами. Система комплементу включає два різних шляхи активації, які називаються класичний і альтернативний шляхи (V. M. Holers, In Clinical Immunology: Principles and Practice, ed. R.R. Rich, Mosby Press; 1996, 363-391). Класичний шлях являє собою кальцій/магній-залежний каскад, що звичайно активується утворенням комплексів антиген-антитіло. Альтернативний шлях являє собою магній-залежний каскад, що активується депонуванням і активацією C3 на деяких сприйнятливих поверхнях (наприклад, полісахаридах клітинної стінки дріжджів і бактерій, а також деяких біополімерних матеріалах). Активація шляху комплементу створює біологічно активні фрагменти білків комплементу, наприклад, анафілотоксини C3a, C4a і C5a, і мембраноатакуючі комплекси C5b-9 (MAC), що опосередковують запальні активності, що включають хемотаксис лейкоцитів, активацію макрофагів, нейтрофілів, тромбоцитів, гладких клітин і ендотеліальних клітин, проникність судин, цитоліз і ушкодження тканин. Фактор D являє собою високоспецифічну серинову протеазу, необхідну для активації альтернативного шляху комплементу. Він розщеплює фактор B, зв'язаний з C3b, утворюючи фермент C3b/Bb, що є активним компонентом C3/C5 конвертаз альтернативного шляху. Фактор D може бути прийнятною мішенню для інгібування, оскільки його концентрація в плазмі людини дуже низька (1,8 мкг/мл) і встановлено, що він є лімітуючим ферментом для активації альтернативного шляху комплементу (P.H. Lesavre and H.J. Müller-Eberhard. J. Exp. Med., 1978; 148: 1498-1510; J.E. Volanakis et al., New Eng. J. Med., 1985; 312: 395-401). Показано, що понижуюча регуляція активації комплементу ефективна для лікування деяких симптомів захворювання в моделях на тваринах і в дослідженнях ex vivo, наприклад, системного червоного вовчака і гломерулонефриту (Y. Wang et al., Proc. Natl. Acad. Sci.; 1996, 93: 8563-8568), ревматоїдного артриту (Y. Wang et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 1995; 92: 89558959), серцево-легеневого шунтування і гемодіалізу (C.S. Rinder, J. Clin. Invest., 1995; 96: 15641572), надгострого відторгнення при трансплантації органів (T.J. Kroshus et al., Transplantation, 1995; 60: 1194-1202), інфаркту міокарда (J.W. Homeister et al., J. Immunol., 1993; 150: 1055-1064; H.F. Weisman et al., Science, 1990; 249: 146-151), реперфузійного ушкодження (E.A. Amsterdam et al., Am. J. Physiol., 1995; 268: H448-H457) і респіраторного дистрес-синдрому дорослих (R. Rabinovici et al., J. Immunol., 1992; 149: 1744-1750). Крім того, інші запальні стани і захворювання, викликані аутоімунними/імунними комплексами, також тісно зв'язані з активацією комплементу (V.M. Holers, там же, B.P. Morgan. Eur. J. Clin. Invest, 1994: 24: 219-228), включаючи термічну травму, тяжку форму астми, анафілактичний шок, запалення кишечнику, кропивницю, набряк Квінке, васкуліт, розсіяний склероз, міастенію, мембранознопроліферативний гломерулонефрит і синдром Шегрена. В галузі лікування опосередкованих комплементом захворювань існує потреба в терапевтичних засобах на основі антитіл, і гуманізовані антитіла проти фактора D, а також варіанти даних антитіл і їхні фрагменти (наприклад, антигензв'язувальні фрагменти) за даним винаходом являють собою високоафінні антитіла, корисні для задоволення цієї потреби. Суть винаходу В одному аспекті даний винахід в основному належить до антитіл, здатних інгібувати біологічні активності, пов'язані з фактором D. В одному аспекті даний винахід належить до гуманізованих антитіл проти фактора D, що має різні терапевтично корисні властивості. Винахід включає амінокислотні послідовності HVRs даних гуманізованих антитіл проти фактора D і відповідні їм послідовності нуклеїнових кислот. Винахід включає амінокислотні послідовності варіабельних доменів важкого і легкого ланцюгів гуманізованих антитіл проти фактора D і відповідні їм послідовності нуклеїнових кислот. Винахід включає амінокислотні послідовності важкого і легкого ланцюгів гуманізованих антитіл проти фактора D і відповідні їм послідовності нуклеїнових кислот. В одному аспекті специфічні антитіла в рамках даного винаходу включають, без обмежень, гуманізовані антитіла проти фактора D, що містять HVRs гуманізованих Fab проти фактора D 1 UA 100888 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 клонів № 238, 238-1, 238-2, 238-3, 238-4, 238-5, 238-6, 238-7, 238-8, 238-9, 238-10 або 238-11. В одному варіанті здійснення гуманізовані антитіла проти фактора D містять варіабельні домени важких і/або легких ланцюгів гуманізованих Fab проти фактора D клонів № 238, 238-1, 238-2, 238-3, 238-4, 238-5, 238-6, 238-7, 238-8, 238-9, 238-10 або 238-11. В одному варіанті здійснення гуманізовані антитіла проти фактора D містять важкі і/або легкі ланцюги гуманізованих Fab проти фактора D клонів № 238, 238-1, 238-2, 238-3, 238-4, 238-5, 238-6, 238-7, 238-8, 238-9, 23810 або 238-11. В одному варіанті здійснення винахід включає гуманізовані Fab проти фактора D клонів № 238, 238-1, 238-2, 238-3, 238-4, 238-5, 238-6, 238-7, 238-8, 238-9, 238-10 або 238-11. В одному варіанті здійснення винахід включає фрагменти антитіл (наприклад, антигензв'язувальні фрагменти) повнорозмірних антитіл з гуманізованими Fab проти фактора D клонів № 238, 238-1, 238-2, 238-3, 238-4, 238-5, 238-6, 238-7, 238-8, 238-9, 238-10 або 238-11. В одному варіанті здійснення винахід включає повнорозмірні антитіла або їхні антигензв'язувальні фрагменти, що містять антигензв'язувальні послідовності важкого ланцюга і/або легкого ланцюга гуманізованих Fab проти фактора D клонів № 238, 238-1, 238-2, 238-3, 238-4, 238-5, 238-6, 238-7, 238-8, 238-9, 238-10 або 238-11. В одному варіанті здійснення такі антигензв'язувальні послідовності містять щонайменше один, два або три HVRs важкі ланцюги. В одному варіанті здійснення такі антигензв'язувальні послідовності містять щонайменше одну, дві або три HVRs легкі ланцюги. В одному варіанті здійснення такі антигензв'язувальні послідовності містять щонайменше частину або весь варіабельний домен важкого ланцюга. В одному варіанті здійснення такі антигензв'язувальні послідовності містять щонайменше частину або весь варіабельний домен легкого ланцюга. В одному аспекті даний винахід належить до фрагментів антитіл (наприклад, антигензв'язувальних фрагментів) або повнорозмірних антитілах з гуманізованими Fab проти фактора D клону № 111, що містить щонайменше одну модифікацію послідовності гуманізованих Fab проти фактора D клону № 111, де такі повнорозмірні антитіла або такі антигензв'язувальні фрагменти включають антигензв'язувальні послідовності важкого ланцюга і/або легкого ланцюга гуманізованих Fab проти фактора D клону № 111. В одному варіанті здійснення фрагменти антитіл (наприклад, антигензв'язувальні фрагменти) або повнорозмірні антитіла з гуманізованими Fab проти фактора D клону № 111, що містять щонайменше одну модифікацію послідовності гуманізованих Fab проти фактора D клону № 111, що містять антигензв'язувальні послідовності важкого ланцюга і/або легкого ланцюга гуманізованих Fab проти фактора D клону № 111, крім того, зв'язуються в основному з тим же епітопом, що і Fab гуманізованого антитіла клону № 111. В одному варіанті здійснення такі антигензв'язувальні послідовності містять щонайменше один, два або три HVRs важкі ланцюги. В одному варіанті здійснення такі антигензв'язувальні послідовності містять щонайменше один, два або три HVRs легкі ланцюги. В одному варіанті здійснення такі антигензв'язувальні послідовності містять щонайменше частину або весь варіабельний домен важкого ланцюга. В одному варіанті здійснення такі антигензв'язувальні послідовності містять щонайменше частину або весь варіабельний домен легкого ланцюга. В одному варіанті здійснення така модифікація в зазначених фрагментах антитіл або зазначених повнорозмірних антитілах знаходиться у важкому ланцюзі. В одному варіанті здійснення така модифікація в зазначених фрагментах антитіл або зазначених повнорозмірних антитілах знаходиться в легкому ланцюзі. В одному варіанті здійснення така модифікація в зазначених фрагментах антитіл або зазначених повнорозмірних антитілах знаходиться у варіабельному домені важкого ланцюга. В одному варіанті здійснення така модифікація в зазначених фрагментах антитіл або зазначених повнорозмірних антитілах знаходиться у варіабельному домені легкого ланцюга. В одному варіанті здійснення така модифікація в зазначених фрагментах антитіл або зазначених повнорозмірних антитілах знаходиться щонайменше в одній, двох або трьох HVRs важкого ланцюга. В одному варіанті здійснення така модифікація в зазначених фрагментах антитіл або зазначених повнорозмірних антитілах знаходиться щонайменше в одній, двох або трьох HVRs легкого ланцюга. В одному аспекті винахід належить до антитіл за даним винаходом або їхніх фрагментах (наприклад, антигензв'язувальних фрагментів), що зв'язуються з фактором D з афінністю -9 -12 зв'язування, що складає щонайменше приблизно 10 -10 M. В одному аспекті винахід належить до антитіл за даним винаходом або їхніх фрагментах (наприклад, антигензв'язувальних фрагментів), у яких Fab-фрагмент таких антитіл інгібує біологічну функцію фактора D при молярному відношенні Fab-фрагмента до фактора D, що складає від приблизно 0,05:1 (0,05) до приблизно 10:1 (10), або від приблизно 0,09:1 (0,09) до приблизно 8:1 (8), або від приблизно 0,1:1 (0,1) до приблизно 6:1 (6), або від приблизно 0,15:1 (0,15) до приблизно 5:1 (5), або від приблизно 0,19:1 (0,19) до приблизно 4:1 (4), або від 2 UA 100888 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 приблизно 0,2:1 (0,2) до приблизно 3:1 (3), або від приблизно 0,3:1 (0,3) до приблизно 2:1 (2), або від приблизно 0,4:1 (0,4) до приблизно 1:1 (1), або від приблизно 0,5:1 (0,5) до приблизно 1:2 (0,5), або від приблизно 0,6:1 (0,6) до приблизно 1:3 (0,33), або від приблизно 0,7:1 (0,7) до приблизно 1:4 (0,25), або від приблизно 0,8:1 (0,8) до приблизно 1:5 (0,2), або від приблизно 0,9:1 (0,9) до приблизно 1:6 (0,17). В одному аспекті антитіла за даним винаходом включають людські, гуманізовані або химерні антитіла. В іншому аспекті даний винахід включає фрагменти антитіл (наприклад, антигензв'язувальні фрагменти) гуманізованих антитіл проти фактора D. Фрагменти антитіл за даним винаходом можуть, наприклад, являти собою фрагменти Fab, Fab', F(ab') 2, scFv, (ScFv)2, dAb, що визначає комплементарність ділянки (CDR), лінійні антитіла, одноланцюжкові молекули антитіл, мінітіла, діатіла або мультиспецифічні антитіла, утворені з фрагментів антитіл. В інших аспектах винаходу даний винахід включає композиції, що містять антитіло за винаходом або його фрагмент (наприклад, антигензв'язувальний фрагмент). В іншому варіанті здійснення винахід належить до клітинних ліній і векторів кодуючі щонайменше частину антитіла за винаходом або його фрагмента (наприклад, антигензв'язувального фрагмента). В одному аспекті винахід включає спосіб одержання, спосіб виробництва і спосіб застосування антитіл або їхніх фрагментів (наприклад, антигензв'язувальних фрагментів) і композицій за винаходом. В одному варіанті здійснення спосіб одержання антитіла за винаходом або його фрагмента (наприклад, антигензв'язувального фрагмента) включає (a) культивування клітинихазяїна, наприклад, еукаріотичної CHO або клітини, що містить вектор, який містить полінуклеотид, кодуючий антитіло за винаходом або його фрагмент (наприклад, антигензв'язувальний фрагмент), в умовах, що підходять для експресії поліонуклеотиду, кодуючого антитіло або його фрагмент (наприклад, антигензв'язувальний фрагмент), і (b) виділення антитіла або його фрагмента (наприклад, антигензв'язувального фрагмента). У ще одному аспекті винахід належить до визначеної композиції, що містить антитіло за винаходом або його фрагмент (наприклад, антигензв'язувальний фрагмент), як описано в даному документі, у сполученні з носієм. Необов'язково, носій є фармацевтично прийнятним носієм. Ще одним аспектом даного винаходу є використання даних гуманізованих антитіл або фрагментів цих антитіл (наприклад, антигензв'язувальних фрагментів) для одержання лікарського засобу або композиції для запобігання і/або лікування захворювань, пов'язаних з надлишковою або неконтрольованою активацією комплементу. Вони включають активацію комплементу в процесі операцій серцево-легеневого шунтування, активацію комплементу в результаті ішемії-реперфузії при гострому інфаркті міокарда, аневризмі, інсульту, геморагічного шоку, ушкодження з роздробленням тканин, поліорганної недостатності, гіповолемічного шоку, кишкової ішемії або інших подій, що є причиною ішемії. Також установлено, що активація комплементу зв'язана з запальними станами, такими як важкі опіки, ендотоксемія, септичний шок, респіраторний дистрес-синдром дорослих, гемодіаліз, анафілактичний шок, тяжка форма астми, набряк Квінке, хвороба Крона, серповидно-клітинна анемія, постстрептококовий гломерулонефрит і панкреатит. Захворювання може бути результатом побічної дії лікарських засобів, лікарської алергії, індукованого IL-2 синдрому судинного випоту або алергії на рентгеноконтрастну речовину. Сюди також належать аутоімунні захворювання, такі як системний червоний вовчак, міастенія, ревматоїдний артрит, хвороба Альцгеймера і розсіяний склероз. В іншому варіанті здійснення активація комплементу також пов'язана з відторгненням трансплантата. В іншому варіанті здійснення активація комплементу також пов'язана з очними хворобами (усіма патологічними станами і захворюваннями ока, патологія яких пов'язана з комплементом, включаючи класичний і альтернативний шлях активації комплементу), такими як, наприклад, без обмеження, макулярне дегенеративне захворювання, таке як усі стадії вікової макулярної дегенерації (AMD), у тому числі суха і мокра (не ексудативна і ексудативна) форми, діабетична ретинопатія й інші пов'язані з ішемією ретинопатії, хороїдальна неоваскуляризація (CNV), увеїт, діабетичний макулярний набряк, патологічна короткозорість, хвороба фон Хіпель-Ліндау, гістоплазмоз очей, оклюзія центральної вени сітківки (CRVO), неоваскуляризація рогівки і неоваскуляризація сітківки. В одному прикладі патологічні стани очей, зв'язані з комплементом, включають вікову макулярну дегенерацію (AMD), у тому числі не ексудативну (наприклад, проміжну суху AMD або географічну атрофію (GA)) і ексудативну (наприклад, мокру AMD (хороїдальну неоваскуляризацію (CNV)) AMD, діабетичну ретинопатію (DR), ендофтальміт і увеїт. У ще одному прикладі не ексудативна AMD може включати наявність твердих друз, м'яких друз, географічну атрофію і/або агрегацію пігменту. В іншому прикладі патологічні стани очей, зв'язані з комплементом, включають вікову макулярну 3 UA 100888 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 дегенерацію (AMD), у тому числі ранню AMD (наприклад, наявність від множини невеликих до однієї або більше не дисемінованих середнього розміру друз), проміжну AMD (наприклад, наявність від дисемінованих середніх друз до однієї або більше великих друз) і прогресуючу AMD (наприклад, включає географічну атрофію або прогресуючу мокру AMD (CNV). У наступному прикладі проміжна суха AMD може включати наявність великих друз, що зливаються. У ще одному прикладі географічна атрофія може включати утрату фоторецепторів і/або пігментованого епітелію сітківки (RPE). У ще одному прикладі ділянки географічної атрофії можуть бути маленькими або великими і/або можуть знаходитися в ділянці макули або в периферичній сітківці. В одному прикладі патологічний стан очей, зв'язаний з комплементом, являє собою проміжну суху AMD. В одному прикладі патологічний стан очей, пов'язаний з комплементом, являє собою географічну атрофію. В одному прикладі патологічний стан очей, пов'язаний з комплементом, являє собою мокру AMD (хороїдальну неоваскуляризацію (CNV)). В іншому аспекті винахід належить до набору, який включає антитіло за винаходом або його фрагмент (наприклад, антигензв'язувальний фрагмент). В одному варіанті здійснення винахід належить до набору, який включає антитіло за винаходом або його фрагмент (наприклад, антигензв'язувальний фрагмент) і інструкції із застосування. В одному варіанті здійснення винахід належить до набору, який включає антитіло за винаходом або його фрагмент (наприклад, антигензв'язувальний фрагмент) і інструкції з введення вказаного антитіла для лікування захворювання, пов'язаного з комплементом. В одному варіанті здійснення винахід належить до набору, який включає перший контейнер, що містить композицію, що містить одне або декілька антитіл за винаходом або фрагментів даних антитіл (наприклад, антигензв'язувальних фрагментів); і другий контейнер, що містить буферний розчин. В одному варіанті здійснення буферний розчин є фармацевтично прийнятним. В одному варіанті здійснення композиція, що містить антитіло за винаходом, або його фрагмент (наприклад, антигензв'язувальний фрагмент), додатково містить носій, що у деяких варіантах здійснення є фармацевтично прийнятним. В одному варіанті здійснення набір додатково містить інструкції по введенню композиції (наприклад, антитіла або фрагмента даного антитіла (наприклад, антигензв'язувального фрагмента)) суб'єкту. В одному варіанті здійснення набір додатково містить інструкції по застосуванню набору. В одному аспекті винахід належить до виробу, що містить матеріали, корисні для лікування, запобігання і/або діагностики захворювань, пов'язаних з комплементом. В одному варіанті здійснення винахід належить до виробу, що включає: (a) контейнер, (b) етикетку на контейнері і (c) композицію, що містить антитіло або його варіант, або його фрагмент (наприклад, антигензв'язувальний фрагмент) за даним винаходом, укладений у контейнері, де етикетка на зазначеному контейнері свідчить, що композицію можна використовувати для лікування, запобігання і/або діагностики захворювань, пов'язаних з комплементом. В одному аспекті винахід належить до використання антитіла проти фактора D за винаходом або фрагмента даного антитіла (наприклад, антигензв'язувального фрагмента), нуклеїнової кислоти за винаходом, експресійного вектора за винаходом або клітини-хазяїна за винаходом для одержання лікарського засобу для терапевтичного і/або профілактичного лікування захворювання, такого як пов'язаний з комплементом патологічний стан очей. В одному варіанті здійснення пов'язаний з комплементом патологічний стан очей вибирають з вікової макулярної дегенерації (AMD), включаючи не ексудативну (наприклад, проміжну суху AMD або географічну атрофію (GA)) і ексудативну (наприклад, мокру AMD (хороїдальну неоваскуляризацію (CNV)) AMD, діабетичну ретинопатію (DR), ендофтальміт і увеїт. В одному прикладі пов'язаний з комплементом патологічний стан очей являє собою проміжну суху AMD. В одному прикладі пов'язаний з комплементом патологічний стан очей являє собою географічну атрофію. В одному прикладі пов'язаний з комплементом патологічний стан очей являє собою мокру AMD (хороїдальну неоваскуляризацію (CNV)). В одному аспекті винахід належить до використання виробу за винаходом для одержання лікарського засобу для терапевтичного і/або профілактичного лікування захворювання, такого як пов'язаний з комплементом патологічний стан очей. В одному варіанті здійснення пов'язаний з комплементом патологічний стан очей вибирають з вікової макулярної дегенерації (AMD), включаючи не ексудативну (наприклад, проміжну суху AMD або географічну атрофію (GA)) і ексудативну (наприклад, мокру AMD (хороїдальну неоваскуляризацію (CNV)) AMD, діабетичну ретинопатію (DR), ендофтальміт і увеїт. В одному прикладі пов'язаний з комплементом патологічний стан очей являє собою проміжну суху AMD. В одному прикладі пов'язаний з комплементом патологічний стан очей являє собою географічну атрофію. В одному прикладі пов'язаний з комплементом патологічний стан очей являє собою мокру AMD (хороїдальну неоваскуляризацію (CNV)). 4 UA 100888 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 В одному аспекті винахід належить до використання набору за винаходом для одержання лікарського засобу для терапевтичного і/або профілактичного лікування захворювання, такого як пов'язаний з комплементом патологічний стан очей. В одному варіанті здійснення пов'язаний з комплементом патологічний стан очей вибирають з вікової макулярної дегенерації (AMD), включаючи не ексудативну (наприклад, проміжну суху AMD або географічну атрофію (GA)) і ексудативну (наприклад, мокру AMD (хороїдальну неоваскуляризацію (CNV)) AMD, діабетичну ретинопатію (DR), ендофтальміт і увеїт. В одному прикладі пов'язаний з комплементом патологічний стан очей являє собою проміжну суху AMD. В одному прикладі пов'язаний з комплементом патологічний стан очей являє собою географічну атрофію. В одному прикладі пов'язаний з комплементом патологічний стан очей являє собою мокру AMD (хороїдальну неоваскуляризацію (CNV)). Короткий опис фігур На фігурах 1A-1C представлене вирівнювання послідовностей варіабельних доменів легень ланцюгів для: гуманізованого Fab проти фактора D клону № 111 (SEQ ID №: 1), гуманізованих Fabs проти фактора D 238, 238-1, 238-2, 238-3, 238-4, 238-5, 238-6, 238-7, 238-8, 238-9, 238-10 і 238-11 (SEQ ID №№: 6-17, відповідно) і консенсусної послідовності VL каппа I (SEQ ID №: 65). Позиції пронумеровані згідно з Kabat і гіперваріабельні ділянки (по Kabat+визначення HVR по Chothia) укладені в рамку (HVRs: (1) HVR-L1 ідентифікована як A1-A11 (ITSTDIDDDMN (SEQ ID №: 30), ITSTDIDDDLN (SEQ ID №: 31), ITSTDIDDDIN (SEQ ID №: 32), ITSTDIDDDMA (SEQ ID №: 33) або ITSTDIDDDMQ (SEQ ID №: 34)), (2) HVR-L2, ідентифікована як B1-B7 (GGNTLRP (SEQ ID №: 35), GGSTLRP (SEQ ID №: 36) або GGATLRP (SEQ ID №: 37)), (3) HVR-L3, ідентифікована як C1-C9 (LQSDSLPYT (SEQ ID №: 38)). Зміни амінокислот у кожному гуманізованому Fab проти фактора D виділені жирним шрифтом і курсивом. На фігурах 2A-C представлене вирівнювання послідовностей варіабельних доменів важких ланцюгів для: гуманізованого Fab проти фактора D клону № 111 (SEQ ID №: 2) і гуманізованих Fabs проти фактора D 238, 238-1, 238-2, 238-3, 238-4, 238-5, 238-6, 238-7, 238-8, 238-9, 238-10 і 238-11 (SEQ ID №№: 18-29, відповідно) і консенсусної послідовності VH підгрупи 7 (SEQ ID №: 66). Позиції пронумеровані згідно з Kabat і гіперваріабельні ділянки (по Kabat+визначення HVR по Chothia) укладені в рамку (HVRs: (1) HVR-H1, ідентифікована як D1-D10 (GYTFTNYGMN (SEQ ID №: 39), (2) HVR-H2, ідентифікована як E1-E19 (WINTYTGETTYADDFKG (SEQ ID №: 40), (3) HVR-H3, ідентифікована як F1-F6 (EGGVNN (SEQ ID NO: 41), EGGVAN (SEQ ID №: 42), EGGVQN (SEQ ID №: 43), EGGVNA (SEQ ID №: 44) або EGGVNQ (SEQ ID №: 45)). Зміни амінокислот у кожному гуманізованому Fab проти фактора D виділені жирним шрифтом і курсивом. На фігурі 3 представлена нуклеотидна послідовність (SEQ ID №: 46) легкого ланцюга гуманізованого Fab проти фактора D 238. Нуклеотидна послідовність кодує легкий ланцюг гуманізованого Fab проти фактора D 238 з ініціюючим і термінуючим кодоном, виділеними жирним шрифтом і підкресленими. Кодон, що відповідає першій амінокислоті на фігурі 4 (SEQ ID №: 47), виділений жирним шрифтом і курсивом. На фігурі 4 представлена амінокислотна послідовність (SEQ ID №: 47) легкого ланцюга гуманізованого Fab проти фактора D 238. В амінокислотній послідовності відсутня N-кінцева сигнальна послідовність поліпептиду, кодованого SEQ ID №: 46, представленої на фігурі 3. Послідовності HVR виділені жирним шрифтом і курсивом. Варіабельні ділянки є непідкресленими ділянками, тоді як перший константний домен CL1 підкреслений. Представлено каркасні (FR) ділянки і HVR ділянки: FR1-LC (SEQ ID №: 48), FR2-LC (SEQ ID №: 49), FR3-LC (SEQ ID №: 50), FR4-LC (SEQ ID №: 51), HVR1-LC (SEQ ID №: 30 (ITSTDIDDDMN)), HVR2-LC (SEQ ID №: 35 (GGNTLRP)), HVR3-LC (SEQ ID №: 38 (LQSDSLPYT)) і CL1 (SEQ ID №: 52). На фігурі 5 представлена нуклеотидна послідовність (SEQ ID №: 53) важкого ланцюга гуманізованого Fab проти фактора D 238. Нуклеотидна послідовність кодує важкий ланцюг гуманізованого Fab проти фактора D 238 з ініціюючим і термінуючим кодоном, виділеними жирним шрифтом і підкресленими. Кодон, що відповідає першій амінокислоті на фігурі 6 (SEQ ID №: 54), виділений жирним шрифтом і курсивом. На фігурі 6 представлена амінокислотна послідовність (SEQ ID №: 54) важкого ланцюга гуманізованого Fab проти фактора D 238. В амінокислотній послідовності відсутня N-кінцева сигнальна послідовність поліпептиду, кодованого SEQ ID №: 53, представленої на фігурі 5. Послідовності HVR виділені жирним шрифтом і курсивом. Варіабельні ділянки є непідкресленими ділянками, тоді як перший константний домен CH1 підкреслений. Представлено каркасні (FR) ділянки і HVR ділянки: FR1-HC (SEQ ID №: 55), FR2-HC (SEQ ID №: 56), FR3-HC (SEQ ID №: 57), FR4-HC (SEQ ID №: 58), HVR1-HC (SEQ ID №: 39 (GYTFTNYGMN)), 5 UA 100888 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 HVR2-HC (SEQ ID №: 40 (WINTYTGETTYADDFKG)), HVR3-HC (SEQ ID №: 41 (EGGVNN)) і CH1 (SEQ ID №: 59). На фігурі 7 представлена нуклеотидна послідовність (SEQ ID №: 60) легкого ланцюга гуманізованого Fab проти фактора D 238-1. Нуклеотидна послідовність кодує легкий ланцюг гуманізованого Fab проти фактора D 238-1 з ініціюючим і термінуючим кодоном, виділеними жирним шрифтом і підкресленими. Кодон, що відповідає першій амінокислоті на фігурі 8 (SEQ ID №: 61), виділений жирним шрифтом і курсивом. На фігурі 8 представлена амінокислотна послідовність (SEQ ID №: 61) легкого ланцюга гуманізованого Fab проти фактора D 238-1. В амінокислотній послідовності відсутня N-кінцева сигнальна послідовність поліпептиду, кодованого SEQ ID №: 60, представленої на фігурі 7. Послідовності HVR виділені жирним шрифтом і курсивом. Варіабельні ділянки є непідкресленими ділянками, тоді як перший константний домен CL1 підкреслений. Представлено каркасні (FR) ділянки і HVR ділянки: FR1-LC (SEQ ID №: 48), FR2-LC (SEQ ID №: 49), FR3-LC (SEQ ID №: 50), FR4-LC (SEQ ID №: 51), HVR1-LC (SEQ ID №: 30 (ITSTDIDDDMN)), HVR2-LC (SEQ ID №: 35 (GGNTLRP)), HVR3-LC (SEQ ID №: 38 (LQSDSLPYT)) і CL1 (SEQ ID №: 52). На фігурі 9 представлена нуклеотидна послідовність (SEQ ID №: 62) важкого ланцюга гуманізованого Fab проти фактора D 238-1. Нуклеотидна послідовність кодує важкий ланцюг гуманізованого Fab проти фактора D 238-1 з ініціюючим і термінуючим кодоном, виділеними жирним шрифтом і підкресленими. Кодон, що відповідає першій амінокислоті на фігурі 10 (SEQ ID №: 63) виділений жирним шрифтом і курсивом. На фігурі 10 представлена амінокислотна послідовність (SEQ ID №: 63) важкого ланцюга гуманізованого Fab проти фактора D 238-1. В амінокислотній послідовності відсутня N-кінцева сигнальна послідовність поліпептиду, кодованого SEQ ID №:62, представленої на фігурі 9. Послідовності HVR виділені жирним шрифтом і курсивом. Варіабельні ділянки є непідкресленими ділянками, тоді як перший константний домен CH1 підкреслений. Представлено каркасні (FR) ділянки і HVR ділянки: FR1-HC (SEQ ID №: 64), FR2-HC (SEQ ID №: 56), FR3-HC (SEQ ID №: 57), FR4-HC (SEQ ID №: 58), HVR1-HC (SEQ ID №: 39 (GYTFTNYGMN)), HVR2-HC (SEQ ID №: 40 (WINTYTGETTYADDFKG)), HVR3-HC (SEQ ID №: 41 (EGGVNN)) і CH1 (SEQ ID №: 59). На фігурі 11 представлені результати гемолітичного аналізу, що демонструють інгібування активності альтернативного шляху комплементу, для гуманізованого Fab проти фактора D клону № 111 і гуманізованих Fabs проти фактора D 238 і 238-1. Приведено значення IC50. На фігурі 12 представлені результати гемолітичного аналізу, що демонструють інгібування активності альтернативного шляху (AP) комплементу, для гуманізованого Fab проти фактора D 238 при трьох концентраціях у сироватці крові (9,7 нМ, 16,2 нМ і 26,5 нМ) фактора D. У таблиці 3 приведені значення IC50 (нМ) і IC90 (нМ) (значення являють собою середнє з трьох повторних експериментів), що відповідають трьом концентраціям у сироватці крові фактора D. Молярні відношення антитіла до цільового фактора D також представлені в таблиці 3. На фігурі 13 представлена змодельована тривалість інгібування альтернативного шляху (AP) активації комплементу в оці людини за допомогою одиничної інтравітреальної (IVT) ін'єкції Fab проти фактора D 238 у дозі 2,5 мг (рахуючи час напівжиття (t 1/2) Fab проти фактора D 238=11,5 днів, на основі міжвидового масштабування від кролика). По оцінці, одинична IVT ін'єкція Fab проти фактора D 238 інгібує AP активацію комплементу в тканині сітківки протягом щонайменше приблизно 74 днів і в склоподібному тілі протягом щонайменше приблизно 97 днів. На фігурі 13 пунктирна лінія показує змодельовану концентрацію Fab проти фактора D 238 у склоподібному тілі після інтравітреального введення. На фігурі 13 суцільна лінія показує змодельовану концентрацію Fab проти фактора D 238 у тканині сітківки після інтравітреального введення. Різниця в концентрації в склоподібному тілі і тканині сітківки основана на оцінці коефіцієнта розподілу тканини сітківки, що дорівнює 20 %, іншими словами, 20 % усього лікарського засобу, введеного в склоподібне тіло, зможе проникнути в тканину сітківки. Докладний опис винаходу I. Визначення Терміни, використовувані в даній заявці, повинні бути витлумачені в звичайному і типовому значенні фахівцями в даній галузі. Однак заявники бажають, щоб наступним термінам було дано конкретне визначення, як це зазначено нижче. Словосполучення "в основному ідентична" застосовно до послідовності поліпептидного ланцюга антитіла може бути витлумачене як ланцюг антитіла, що має щонайменше 70 % або 80 %, або 90 %, або 95 % ідентичності послідовності з контрольною поліпептидною послідовністю. Термін застосовно до послідовності нуклеїнової кислоти може бути 6 UA 100888 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 витлумачений як послідовність нуклеотидів, що має щонайменше приблизно 85 % або 90 %, або 95 %, або 97 % ідентичності послідовності з контрольною послідовністю нуклеїнової кислоти. Термін "ідентичність" або "гомологія" варто тлумачити як процентний вміст амінокислотних залишків у послідовності-кандидаті, що ідентичні залишкам відповідної послідовності, з якою її порівнюють, після вирівнювання послідовностей і внесення розривів при необхідності для досягнення максимальної процентної ідентичності для цілої послідовності, і не розглядаючи будь-які консервативні заміни як частину ідентичності послідовності. Ні N-, ні C-кінцеві або подовження вставки не повинні вважатися такими, що зменшують ідентичність або гомологію. Методи і комп'ютерні програми для вирівнювання добре відомі в даній галузі. Ідентичність послідовності можна кількісно визначати за допомогою програм для аналізу послідовностей. Термін "антитіло" використовується в найширшому змісті і конкретно охоплює моноклональні антитіла (включаючи повнорозмірні моноклональні антитіла), поліклональні антитіла і мультиспецифічні антитіла (наприклад, біспецифічні антитіла). Антитіла (Abs) і імуноглобуліну (Igs) являють собою глікопротеїни, що мають однакові структурні характеристики. У той час як антитіла мають специфічність зв'язування з визначеною мішенню, імуноглобуліни включають як антитіла, так і інші антитілоподібні молекули, у яких відсутня специфічність відносно мішені. Природні антитіла й імуноглобуліни, як правило, являють собою гетеротетрамірні глікопротеїни масою приблизно 150000 дальтон, що складаються з двох ідентичних легких (L) ланцюгів і двох ідентичних важких (H) ланцюгів. Кожен важкий ланцюг має на одному кінці варіабельний домен (VH), за яким йде ряд константних доменів. Кожен легкий ланцюг має варіабельний домен на одному кінці (VL) і константний домен на іншому її кінці. "Виділене" антитіло являє собою антитіло, яке ідентифіковане і виділене і/або вилучене з компонентів його природного оточення. Домішкові компоненти його природного оточення являють собою матеріали, що заважали б діагностичному або терапевтичному застосуванню антитіла, і можуть включати ферменти, гормони й інші білкові або небілкові розчинені речовини. В одному прикладі антитіло буде очищене (1) до більш ніж 95 % по вазі антитіла, що визначають методом Лоурі, і найбільш переважно до більше ніж 99 % по вазі, (2) до ступеня, достатнього для одержання щонайменше15 залишків N-кінцевої або внутрішньої амінокислотної послідовності за допомогою секвенатора з обертовою склянкою, або (3) до гомогенності при SDS-PAGE у відновлюючих або не відновлюючих умовах з використанням Кумаси блакитного або, переважно, фарбування сріблом. Виділене антитіло включає антитіло in situ у рекомбінантних клітинах, оскільки щонайменше один компонент природного оточення антитіла буде відсутній. Однак, як правило, виділене антитіло одержують, використовуючи щонайменше одну стадію очищення. Фраза "антитіло проти фактора D людини", використовувана в даному документі, означає антитіло, що специфічно зв'язується з людським фактором D таким чином, що інгібує або істотно знижує активацію комплементу. Термін "фактор D" використовують у даному документі для позначення поліпептидів фактора D із природною послідовністю і його варіантами. Фактор D "із природною послідовністю" являє собою поліпептид, що має ту ж амінокислотну послідовність, що і природний поліпептид фактора D, незалежно від способу його одержання. Таким чином, фактор D із природною послідовністю можна виділяти з природних джерел або можна одержувати рекомбінантними і/або синтетичними методами. Крім зрілого білка фактора D, такого як зрілий білок людського фактора D (NM_001928), термін "фактор D із природною послідовністю" спеціально включає природні форми попередників фактора D (наприклад, неактивний білок-попередник, що протеолітично розщеплюється до активної форми), природні варіантні форми (наприклад, альтернативно сплайсовані форми) і природні алельні варіанти фактора D, а також структурні конформаційні варіанти молекул фактора D з тією ж амінокислотною послідовністю, що і поліпептид фактора D, отриманий із природних джерел. Поліпептиди фактора D із тварин, відмінних від людини, у тому числі вищих приматів і ссавців, відмінних від людини, спеціально включені в дане визначення. "Варіант фактора D" означає активний поліпептид фактора D, як визначено нижче, що має щонайменше приблизно 80 % ідентичності амінокислотної послідовності з природною послідовністю поліпептиду фактора D, такий як природна послідовність поліпептиду фактора D людини (NM_001928). Як правило, варіант фактора D буде мати щонайменше приблизно 80 % ідентичності амінокислотної послідовності, або щонайменше приблизно 85 % ідентичності амінокислотної послідовності, або щонайменше приблизно 90 % ідентичності амінокислотної послідовності, або щонайменше приблизно 95 % ідентичності амінокислотної послідовності, або щонайменше приблизно 98 % ідентичності амінокислотної послідовності, або щонайменше 7 UA 100888 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 приблизно 99 % ідентичності амінокислотної послідовності зі зрілою амінокислотною послідовністю людини (NM_001928). "Відсоток (%) ідентичності амінокислотної послідовності" визначають як процентний вміст амінокислотних залишків у послідовності-кандидаті, що ідентичні амінокислотним залишкам у контрольній послідовності фактора D після вирівнювання послідовностей і внесення розривів при необхідності для досягнення максимальної процентної ідентичності послідовності, і не розглядаючи будь-які консервативні заміни як частину ідентичності послідовності. Вирівнювання з метою визначення відсотка ідентичності амінокислотної послідовності можна проводити різними способами, відомими в даній галузі, наприклад, за допомогою загальнодоступних комп'ютерних програм, таких як програми BLAST, BLAST-2, ALIGN або Megalign (DNASTAR). Фахівці в даній галузі можуть визначати прийнятні параметри для кількісного визначення вирівнювання, включаючи будь-які алгоритми, необхідні для досягнення максимального вирівнювання по всій довжині порівнюваних послідовностей. Потім розраховують ідентичність послідовності щодо більш довгої послідовності, тобто, навіть, якщо більш коротка послідовність демонструє 100 % ідентичності послідовності з частиною більш довгої послідовності, загальна ідентичність послідовності буде меншою ніж 100 %. "Відсоток (%) ідентичності послідовності нуклеїнової кислоти" визначають як процентний вміст нуклеотидів у послідовності-кандидаті, що ідентичні нуклеотидам у контрольній послідовності, що кодує фактор D, після вирівнювання послідовностей і внесення розривів при необхідності для досягнення максимальної процентної ідентичності послідовності. Вирівнювання з метою визначення відсотка ідентичності послідовності нуклеїнової кислоти можна проводити різними способами, відомими в даній галузі, наприклад, за допомогою загальнодоступних комп'ютерних програм, таких як програми BLAST, BLAST-2, ALIGN або Megalign (DNASTAR). Фахівці в даній галузі можуть визначати прийнятні параметри для кількісного визначення вирівнювання, включаючи будь-які алгоритми, необхідні для досягнення максимального вирівнювання по всій довжині порівнюваних послідовностей. Потім розраховують ідентичність послідовності щодо більш довгої послідовності, тобто, навіть, якщо більш коротка послідовність демонструє 100 % ідентичності послідовності з частиною більш довгої послідовності, загальна ідентичність послідовності буде меншою ніж 100 %. "Виділена" молекула нуклеїнової кислоти являє собою молекулу нуклеїнової кислоти, що ідентифікована і відділена щонайменше від однієї домішкової молекули нуклеїнової кислоти, з якою вона звичайно зв'язана в природному джерелі нуклеїнової кислоти. Виділена молекула нуклеїнової кислоти знаходиться в іншій формі або оточенні, ніж ті, у яких вона зустрічається в природі. В результаті цього, виділені молекули нуклеїнової кислоти відрізняються від молекули нуклеїнової кислоти, що існує в природних клітинах. Однак виділена молекула нуклеїнової кислоти включає молекули нуклеїнової кислоти, що містяться в клітинах, які звичайно експресують кодований поліпептид, якщо, наприклад, молекула нуклеїнової кислоти має хромосомну локалізацію, що відрізняється від такої в природних клітинах. "Виділена" молекула нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид фактора D, являє собою молекулу нуклеїнової кислоти, яка ідентифікована і відділена щонайменше від однієї домішкової молекули нуклеїнової кислоти, з якою вона звичайно зв'язана в природному джерелі нуклеїнової кислоти, що кодує фактор D. Виділена молекула нуклеїнової кислоти, що кодує поліпептид фактора D, знаходиться в іншій формі або оточенні, ніж ті, у яких вона зустрічається в природі. В результаті цього, виділені молекули нуклеїнової кислоти кодуючі поліпептид фактора D, відрізняються від кодуючої молекули(молекул) нуклеїнової кислоти, що існує в природних клітинах. Однак виділена молекула нуклеїнової кислоти кодуючої фактор D, включає молекули нуклеїнової кислоти кодуючі фактор D, що містяться в клітинах, які звичайно експресують фактор D, якщо, наприклад, молекула нуклеїнової кислоти має хромосомну локалізацію, що відрізняється від такої в природних клітинах. Термін "антагоніст" використовується в найширшому змісті і включає будь-яку молекулу, що здатна нейтралізувати, блокувати, частково або повністю інгібувати, скасовувати, зменшувати або перешкоджати біологічній активності фактора D. Антагоністи фактора D включають, без обмежень, антитіла проти фактора D і варіанти даних антитіл, їхні антигензв'язувальні фрагменти, інші зв'язуючі поліпептиди, пептиди і непептидні малі молекули, що зв'язуються з фактором D і здатні нейтралізувати, блокувати, частково або повністю інгібувати, скасовувати, зменшувати або перешкоджати активностям фактора D, таким, як здатність фактора D відігравати роль у патології зв'язаного з комплементом патологічного стану очей. У даному документі "малу молекулу" визначають як ту, яка має молекулярну масу меншу ніж приблизно 600, переважно, меншу ніж приблизно 1000 дальтон. 8 UA 100888 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 "Активний" або "активність" або "біологічна активність" у контексті антагоніста фактора D за даним винаходом являє собою здатність протидіяти (частково або повністю інгібувати) біологічній активності фактора D. Одним із прикладів біологічної активності антагоніста фактора D є здатність викликати помітне поліпшення стану, наприклад, патології, зв'язаного з фактором D захворювання або стану, такого як, наприклад, пов'язаний з комплементом патологічний стан очей. Активність можна визначати в аналізах in vitro або in vivo, включаючи аналізи на зв'язування, аналізи на гемоліз, пов'язаний з альтернативним шляхом активації (наприклад, аналізи, у яких вимірюють інгібування або активності активації комплементу альтернативним шляхом), використання відповідних моделей на тваринах або клінічні випробування на людині. Термін "пов'язане з комплементом захворювання" використовується в найширшому змісті і включає захворювання, пов'язані з надлишковою або неконтрольованою активацією комплементу. Вони включають активацію комплементу в процесі операцій серцево-легеневого шунтування, активацію комплементу в результаті ішемії-реперфузії при гострому інфаркті міокарда, аневризми, інсульту, геморагічного шоку, ушкодження з роздробленням тканин, поліорганної недостатності, гіповолемічного шоку, кишкової ішемії або інших подій, що є причиною ішемії. Також установлено, що активація комплементу пов'язана з запальними станами, такими як важкі опіки, ендотоксемія, септичний шок, респіраторний дистрес-синдром дорослих, гемодіаліз, анафілактичний шок, тяжка форма астми, набряк Квінке, хвороба Крона, серповидно-клітинна анемія, постстрептококовий гломерулонефрит і панкреатит. Захворювання може бути результатом побічної дії лікарських засобів, лікарської алергії, індукованого IL-2 синдрому судинного випоту або алергії на рентгеноконтрастну речовину. Сюди також належать аутоімунні захворювання, такі як системний червоний вовчак, міастенія, ревматоїдний артрит, хвороба Альцгеймера і розсіяний склероз. Активація комплементу також пов'язана з відторгненням трансплантату. Активація комплементу також пов'язана з очними хворобами, такими як вікова макулярна дегенерація, діабетична ретинопатія й інші зв'язані з ішемією ретинопатії, хороїдальна неоваскуляризація (CNV), увеїт, діабетичний макулярний набряк, патологічна короткозорість, хвороба фон Хіпель-Ліндау, гістоплазмоз очей, оклюзія центральної вени сітківки (CRVO), неоваскуляризація рогівки і неоваскуляризація сітківки. Термін "пов'язаний з комплементом патологічний стан очей" використовується в найширшому змісті і включає всі патологічні стани очей, патологія яких пов'язана з комплементом, включаючи класичний і альтернативний шляхи, і зокрема альтернативний шлях активації комплементу. Пов'язані з комплементом патологічні стани очей включають, без обмеження, макулярні дегенеративні захворювання, такі як усі стадії вікової макулярної дегенерації (AMD), у тому числі суху і мокру (не ексудативну і ексудативну) форми, хороїдальну неоваскуляризацію (CNV), увеїт, діабетичну й інші зв'язані з ішемією ретинопатії, а також інші внутрішньочні неоваскулярні захворювання, такі як діабетичний макулярний набряк, патологічна короткозорість, хвороба фон Хіпель-Ліндау, гістоплазмоз очей, оклюзія центральної вени сітківки (CRVO), неоваскуляризація рогівки і неоваскуляризація сітківки. В одному прикладі патологічні стани очей, зв'язані з комплементом, включають вікову макулярну дегенерацію (AMD), у тому числі не ексудативну (наприклад, проміжну суху AMD або географічну атрофію (GA)) і ексудативну (наприклад, мокру AMD (хороїдальну неоваскуляризацію (CNV)) AMD, діабетичну ретинопатію (DR), ендофтальміт і увеїт. У ще одному прикладі не ексудативна AMD може включати наявність твердих друз, м'яких друз, географічну атрофію і/або агрегацію пігменту. В одному прикладі патологічні стани очей, зв'язані з комплементом, включають вікову макулярну дегенерацію (AMD), у тому числі ранню AMD (наприклад, наявність від множини невеликих до однієї або більше не дисемінованих середнього розміру друз), проміжну AMD (наприклад, наявність від дисемінованих середніх друз до однієї або більше великих друз) і прогресуючу AMD (наприклад, включає географічну або атрофію прогресуючу мокру AMD (CNV). (Ferris et al., AREDS Report No. 18, Sallo et al., Eye Res., 34(3): 238-40 (2009); Jager et al., New Engl. J. Med., 359(1): 1735 (2008)). У наступному прикладі проміжна суха AMD може включати наявність великих друз, що зливаються. У ще одному прикладі географічна атрофія може включати втрату фоторецепторів і/або пігментованого епітелію сітківки (RPE). У ще одному прикладі ділянки географічної атрофії можуть бути маленькими або великими і/або можуть знаходитися в ділянці макули або в периферичній сітківці. В одному прикладі патологічний стан очей, зв'язаний з комплементом, являє собою проміжну суху AMD. В одному прикладі патологічний стан очей, зв'язаний з комплементом, являє собою географічну атрофію. В одному прикладі патологічний стан очей, зв'язаний з комплементом, являє собою мокру AMD (хороїдальну неоваскуляризацію (CNV)). "Лікування" означає втручання, яке здійснюється з метою запобігання або розвитку зміни патології захворювання. Відповідно, "лікування" означає як терапевтичне лікування, так і 9 UA 100888 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 профілактичні або превентивні міри. Ті, хто має потребу в лікуванні, включають тих, хто вже страждає від даного захворювання, а також тих, у кого захворювання повинно бути відвернуте. При лікуванні захворювань, пов'язаних з імунною системою, терапевтичний засіб може безпосередньо змінювати інтенсивність імунної реакції компонента імунної ї відповіді або робити захворювання більш сприйнятливим до лікування іншими терапевтичними засобами, наприклад, антибіотиками, протигрибковими препаратами, протизапальними засобами, засобами для хіміотерапії і так далі. "Патологія"захворювання, такого як пов'язаний з комплементом патологічний стан очей, включає всі явища, що піддають ризику здоров'я пацієнта. Це включає, без обмеження, аномальний або неконтрольований ріст клітин (клітин нейтрофілів, еозинофілів, моноцитів, лімфоцитів), продукцію антитіл, продукцію аутоантитіл, продукцію комплементу, перешкоду нормальному функціонуванню сусідніх клітин, виділення цитокінів або інших секреторних продуктів в аномальних кількостях, або придушення загострення будь-якої запальної або імунної відповіді, інфільтрацію запальних клітин (нейтрофілів, еозинофілів, моноцитів, лімфоцитів) у клітинний простір, і так далі. Термін "ссавець", використовуваний у даному документі, означає будь-яку тварину, що класифікується як ссавець, включаючи, без обмеження, людей, вищих приматів, домашніх і сільськогосподарських тварин і тварин у зоопарку, тварин для занять спортом або домашніх улюбленців, таких як коні, свині, велика рогата худоба, собаки, кішки і тхори, і так далі. В одному варіанті здійснення винаходу ссавець являє собою людину. Введення "у сполученні з" одним або великою кількістю додаткових терапевтичних засобів включає одночасне (спільне) або послідовне введення в будь-якому порядку. "Терапевтично ефективна кількість" являє собою кількість "антагоніста фактора D", яка необхідна для досягнення вимірних поліпшень у стані, наприклад, патології, цільового захворювання або стану, такого як, наприклад, пов'язаний з комплементом патологічний стан очей. Термін "контролюючі послідовності" означає послідовності ДНК, необхідні для експресії функціонально зв'язаної кодуючої послідовності у конкретному організмі-хазяїні. Контролюючі послідовності, що підходять для прокаріот, наприклад, включають промотор, необов'язково послідовність оператора і сайт зв'язування рибосоми. У еукаріотичних клітинах, як відомо, використовуються промотори, сигнали поліаденілювання і енхансери. Нуклеїнова кислота є "функціонально зв'язаною", коли вона знаходиться у функціональній залежності від іншої послідовності нуклеїнової кислоти. Наприклад, ДНК для передпослідовності або секреторної лідерної послідовності є функціонально зв'язаною з ДНК для поліпептиду, якщо він експресується у вигляді білка-попередника, що приймає участь у секреції поліпептиду; або промотор енхансер є функціонально зв'язаним з кодуючою послідовністю, якщо він впливає на транскрипцію послідовності; або сайт зв'язування рибосоми є функціонально зв'язаним з кодуючою послідовністю, якщо він розташований таким чином, щоб полегшувати трансляцію. У цілому, "функціонально зв'язаний" означає, що послідовності ДНК, які зв'язані, є суміжними і, у випадку секреторної лідерної послідовності, є суміжними й у фазі зчитування. Однак енхансери не обов'язково повинні бути суміжними. Сполука здійснюється шляхом лігування в прийнятних сайтах рестрикції. Якщо таких сайтів не існує, відповідно до звичайної практики використовують синтетичні олігонуклеотидні або адаптери лінкери. "Суворість умов" реакцій гібридизації може бути легко визначена рядовим фахівцем у даній галузі і, як правило, визначається емпіричним розрахунком у залежності від довжини зонда, температури промивання і концентрації солі. Як правило, більш довгі зонди вимагають більш високих температур для належного відпалу, тоді як для більш коротких зондів потрібні більш низькі температури. Гібридизація в основному залежить від здатності денатурованої ДНК до повторного відпалу, коли комплементарні нитки присутні в середовищі при температурі нижчій їхньої температури плавлення. Чим вищий ступінь бажаної гомології між зондом і здатної до гібридизації послідовністю, тим вища відносна температура, яку можна використовувати. З цього випливає, що більш високі відносні температури будуть робити умови реакції більш суворими, а більш низькі температури – менш суворими. Щоб одержати додаткову інформацію і роз'яснення щодо твердості умов реакції гібридизації, дивися Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Wiley Interscience Publishers, (1995). "Жорсткі умови" або "дуже жорсткі умови", відповідно до даного документа, можна визначити як такі, якщо: (1) використовують низьку іонну силу і високу температуру для промивання, наприклад, 0,015M хлорид натрію/0,0015М цитрат натрію/0,1 % додецилсульфат натрію при 50C; (2) використовують у процесі гібридизації денатуруючу речовину, таку як формамід, наприклад, 50 % (про/про) формамід із сумішшю 0,1 % бичачого сироваткового 10 UA 100888 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 альбуміну/0,1 % фіколу/0,1 % полівінілпіролідону/50 мМ натрій-фосфатного буфера при pH 6,5 з 750 мМ хлориду натрію, 75 мМ цитрату натрію при 42C; або (3) використовують 50 % формамід, 5SSC (0,75М NaCl, 0075M цитрат натрію), 50 мМ фосфат натрію (pH 6,8), 0,1 % пірофосфат натрію, 5розчин Денхардта, оброблену ультразвуком ДНК зі сперми лосося (50 мкг/мл), 0,1 % SDS і 10 % сульфат декстрану при 42ºC, із промиванням при 42C у 0,2SSC (хлорид натрію/цитрат натрію) і 50 % формаміду при 55 °C, з наступним промиванням у дуже суворих умовах, що представляють собою використання 0,1SSC зі вмістом EDTA при 55ºC. "Помірковано суворі умови" відповідають визначенню, приведеному в Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor Press, 1989, і включають використання промиваючого розчину, і умов гібридизації (наприклад, температури, іонної сили і %SDS) менш суворих, ніж ті, які описані вище. Прикладом помірковано суворих умов є інкубація протягом ночі при 37 °C у розчині, що містить: 20 % формаміду, 5SSC (150 мм NaCl, 15 мм тринатрівєвий цитрат), 50 мм фосфат натрію (p 7,6), 5розчин Денхардта, 10 % сульфат декстрану і 20 мг/мл денатурованої фрагментованої ДНК сперми лосося, з наступним промиванням фільтрів у 1SSC приблизно при 37-50 °C. Кваліфікований фахівець у даній галузі знає як регулювати температуру, іонну силу і так далі в міру необхідності для відповідності таким факторам, як довжина зонда тощо. Термін "варіабельний" у контексті варіабельного домену антитіл означає той факт, що деякі частини варіабельних доменів широко розрізняються по послідовності середовищ антитіл і відповідають за зв'язування і специфічність кожного конкретного антитіла у відношенні його конкретної мішені. Однак варіабельність не розподілена рівномірно по всіх варіабельних доменах антитіл. Вона зосереджена в трьох сегментах, що називаються визначальними комплементарність ділянками (CDRs), також відомих як гіперваріабельні ділянки (HVRs), у варіабельних доменах як легкого ланцюга, так і важкого ланцюга. Більш висококонсервативні частини варіабельних доменів називаються каркасними ділянками (FR). Кожен з варіабельних доменів природних важких і легких ланцюгів містить чотири FR ділянки, що, переважно, приймають β-складчасту конфігурацію, з'єднані трьома CDRs, що утворюють петлі, які з'єднуються і в деяких випадках утворюють частину β-складчастої структури. CDRs у кожному ланцюзі містяться разом у безпосередній близькості за допомогою FR ділянок і разом з CDRs з іншого ланцюга вносять вклад в утворення сайту зв'язування мішені в антитілах (дивися Kabat et al.). Нумерація амінокислотних залишків імуноглобуліну, використовувана в даному документі, виконана відповідно до системи нумерації амінокислотних залишків імуноглобулінів Kabat et al. (Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institute of Health, Bethesda, Md. 1987), якщо не зазначене інше. Термін "гіперваріабельна ділянка", "HVR" або "HV", використовуваний у даному документі, означає ділянки варіабельного домену антитіла, що є гіперваріабельними в послідовності і/або утворюють структурно обкреслені петлі. Як правило, антитіла містять шість гіперваріабельних ділянок, три в VH (H1, H2, H3) і три в VL (L1, L2, L3). Ряд діаграм гіперваріабельних ділянок використовуються й охоплюються рамками даного документа. Система Kabat визначальних комплементарність ділянок (CDRs) основана на варіабельності послідовностей і використовується найчастіше (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)). Chothia замість цього посилається на розташування структурних петель (Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196: 901917 (1987)). Кінець петлі CDR-H1 по Chothia при нумерації відповідно до системи нумерації Kabat варіює між H32 і H34 у залежності від довжини петлі (це відбувається через те, що за схемою нумерації Kabat наявні вставки на H35A і H35B; якщо відсутній як 35A, так і 35B, петля закінчується на 32; якщо є присутнім тільки 35A, петля закінчується на 33; якщо є присутнім і 35A і 35B, петля закінчується на 34). Гіперваріабельні ділянки Ab являють собою компроміс між CDRs по Kabat і структурними петлями по Chothia, і використовуються програмою для моделювання антитіл Oxford Моlесulаr's Ab antibody modeling. Зони "контакту" гіперваріабельних ділянок основані на аналізі наявних у розпорядженні складних кристалічних структур. Залишки з кожної з таких гіперваріабельних ділянок приведені нижче. 11 UA 100888 C2 Петля Kabat L1 L24-L34 L2 L50-L56 L3 L89-L97 H1 H31-H35B (Нумерація Kabat) H1 H31-H35 (Нумерація Chothia) H2 H50-H65 H3 H95-H102 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 AbM L24-L34 L50-L56 L89-L97 H26-H35B Chothia L24-L34 L50-L56 L89-L97 H26-H32…34 Контакт L30-L36 L46-L55 L89-L96 H30-H35B H26-H35 H26-H32 H30-H35 H50-H58 H95-H102 H52-H56 H95-H102 H47-H58 H93-H101 Гіперваріабельні ділянки можуть включати наступні "подовжені гіперваріабельні ділянки": 24-36 або 24-34 (L1), 46-56 або 50-56 (L2) і 89-97 (L3) у VL і 26-35B (H1), 50-65, 47-65 або 49-65 (H2) і 93-102, 94-102 або 95-102 (H3) у VH. Залишки варіабельного домену пронумеровані згідно з Kabat et al., вище для кожної з даних дефініцій. "Каркасні" або "FR" залишки являють собою такі залишки варіабельного домену, що відрізняються від залишків гіперваріабельної або ділянки залишків CDR, визначених у даному документі. Терміни "нумерація залишків варіабельного домену по Kabat" або "нумерація амінокислотних позицій по Kabat", а також їхньої варіації означають систему нумерації, використовувану для варіабельних доменів важкого або ланцюга варіабельних доменів легкого ланцюга компіляції антитіл у Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991). При використанні цієї системи нумерації фактична лінійна амінокислотна послідовність може містити менше або більше амінокислот, що відповідає укорочуванню або вставці в FR або CDR варіабельного домену. Наприклад, варіабельний домен важкого ланцюга може містити вставку однієї амінокислоти (залишок 52a згідно Kabat) після залишку 52 у H2 і вставлені залишки (наприклад, залишки 82a, 82b і 82c і так далі згідно Kabat) після залишку 82 у FR важкого ланцюга. Нумерацію залишків по Kabat можна проводити для даного антитіла шляхом вирівнювання в ділянках гомології послідовності антитіла з "стандартною" пронумерованою послідовністю Kabat. Систему нумерації Kabat, як правило, використовують при посиланні на залишок у варіабельному домені (приблизно залишки 1-107 у легкому ланцюзі і залишки 1-113 у важкому ланцюзі) (наприклад, публікація Kabat et al., Sequences of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991), спеціально включена в даний документ за допомогою посилання). "Систему нумерації EU" або "індекс EU", як правило, використовують при посиланні на залишок у константній ділянки важкого ланцюга імуноглобуліну (наприклад, індекс EU, приведений у Kabat et al., вище; шарнірна ділянка у константному домені важкого ланцюга приблизно відповідає залишкам 216-230 (нумерація EU) важкого ланцюга). "Індекс EU по системі Kabat" означає нумерацію залишків антитіла EU Ig1 чоловік. Якщо в даному документі не зазначене інше, посилання на номери залишків у варіабельному домені антитіл означають нумерацію залишків по системі нумерації Kabat. Якщо в даному документі не зазначене інше, посилання на номери залишків у константному домені антитіл означає нумерацію залишків по системі нумерації EU (наприклад, дивися попередню заявку Сполучених Штатів № 60/640323, фігури для нумерації EU). Термін "поліпептид", використовуваний у даному документі, як правило, означає пептиди і білки, що містять більше, ніж приблизно десять амінокислот. В одному прикладі поліпептид являє собою білок ссавця, приклади якого включають фактор D і фрагменти і/або варіанти фактора D. В іншому прикладі поліпептид являє собою повнорозмірне антитіло або фрагмент даного антитіла (наприклад, антигензв'язувальний фрагмент), що зв'язує фактор D людини, приклади якого включають фрагменти Fab, Fab', F(ab') 2 і Fv, діатіла, лінійні антитіла, одноланцюжкові молекули антитіл і мультиспецифічні антитіла, утворені з фрагментів антитіл (наприклад, антигензв'язувальних фрагментів). "Варіант" або "варіант амінокислотної послідовності" вихідного поліпептиду являє собою поліпептид, що містить амінокислотну послідовність, відмінну від послідовності вихідного поліпептиду. Як правило, варіант буде мати щонайменше 80 % ідентичності послідовності, переважно, щонайменше 90 % ідентичності послідовності, більш переважно щонайменше 95 % ідентичності послідовності і найбільше переважно щонайменше 98 % ідентичності послідовності з природним поліпептидом. Ідентичність послідовності у відсотках визначають, наприклад, за 12 UA 100888 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 допомогою статті Fitch et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80: 1382-1386 (1983), версії алгоритму, описаної Needleman et al., J. Mol. Biol., 48: 443-453 (1970), після вирівнювання послідовностей для забезпечення максимальної гомології. Варіанти амінокислотної послідовності поліпептиду можна одержувати, вносячи відповідні нуклеотидні зміни в ДНК, що кодує поліпептид, або за допомогою пептидного синтезу. Такі варіанти включають, наприклад, делеції і/або вставки і/або заміни залишків в амінокислотній послідовності цікавлячого поліпептиду. Здійснюють будь-які сполучення делецій, вставок і замін для одержання кінцевої конструкції, за умови, що кінцева конструкція має необхідні характеристики. Амінокислотні зміни також можуть змінювати посттрансляційні процеси в поліпептиді, наприклад, змінюючи або число положення сайтів глікозилування. Способи одержання варіантів амінокислотної послідовності поліпептидів описані, наприклад, у патенті США № 5534615, спеціально включеному в даний документ за допомогою посилання. "Варіант антитіла" або "модифіковане антитіло" з вихідного антитіла являє собою антитіло, що містить амінокислотну послідовність, відмінну від послідовності вихідного антитіла, у якій один або більше амінокислотних залишків вихідного антитіла були модифіковані. Як правило, варіант антитіла буде мати щонайменше 80 % ідентичності послідовності, переважно, щонайменше 90 % ідентичності послідовності, більш переважно щонайменше 95 % ідентичності послідовності і найбільш переважно щонайменше 98 % ідентичності послідовності з вихідним антитілом. Ідентичність послідовності у відсотках визначають, наприклад, за допомогою статті Fitch et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 80: 1382-1386 (1983), версії алгоритму, описаної Needleman et al., J. Mol. Biol., 48: 443-453 (1970), після вирівнювання послідовностей вихідного антитіла і потенційного варіанта антитіла для забезпечення максимальної гомології. Або ідентичність подібність стосовно вихідної послідовності визначають у даному документі як процентний вміст амінокислотних залишків у послідовності потенційного варіанта, що ідентичні (тобто, той же самий залишок) або аналогічні (тобто, амінокислотний залишок з тієї ж групи за принципом спільності властивостей бічних ланцюгів, дивися нижче) залишкам вихідного антитіла, після вирівнювання послідовностей і внесення розривів при необхідності для досягнення максимальної процентної ідентичності послідовності. Варіанти амінокислотної послідовності антитіла можна одержувати, вносячи відповідні нуклеотидні зміни в ДНК, що кодує антитіло, або за допомогою пептидного синтезу. Такі варіанти включають, наприклад, делеції і/або вставки і/або заміни залишків в амінокислотній послідовності цікавлячого антитіла. Здійснюють будь-як сполучення делецій, вставок і замін для одержання кінцевої конструкції, за умови, що кінцева конструкція має необхідні характеристики. Амінокислотні зміни також можуть змінювати посттрансляційні процеси в антитілі, наприклад, змінюючи або число положення сайтів глікозилування. Способи одержання варіантів послідовності антитіла для антитіл аналогічні способам одержання варіантів амінокислотної послідовності поліпептидів, наприклад, описаним у патенті США № 5534615, спеціально включеному в даний документ за допомогою посилання. "Дезамідований" варіант поліпептидної молекули являє собою поліпептид, у якому один або більше залишків аспарагіну (N або Asn) оригінального поліпептиду були перетворені в аспартат (D або Asp), тобто, нейтральний амідний бічний ланцюг був перетворений у залишок, який має у цілому кислу характеристику. Дезамідування можна запобігти, перетворюючи залишки аспарагіну (N або Asn) у залишки глютаміну (Q або Gln) або аланіну (A або Ala) або серину (S або Ser) (Amphlett, G. et al., Pharm. Biotechnol., 9: 1-140 (1996)). "Окиснений" варіант поліпептидної молекули являє собою поліпептид, у якому один або більше залишків метіоніну (M або Met) або триптофану (W або Trp) оригінального поліпептиду були перетворені в сульфон або сульфоксид через сірку залишку метіоніну. Окислюванню можна запобігти, перетворюючи залишки метіоніну (M або Met) у залишки лейцину (L або Leu) або ізолейцину (I або Ile) (Amphlett, G. et al., Pharm. Biotechnol., 9: 1-140 (1996)). "Піроглютаматний" варіант поліпептидної молекули являє собою поліпептид, у якому один або більше залишків глютаміну (Q або Gln) оригінального поліпептиду були перетворені в піроглютамат, що утворюється, коли залишки глютаміну, наприклад N-кінцеві залишки глютаміну, спонтанно циклізуються з утворенням піроглютамату. Піроглютаматним перетворенням можна запобігти, перетворюючи залишки глютаміну (Q або Gln) у глютамат (E або Glu) (Amphlett, G. et al., Pharm. Biotechnol., 9: 1-140 (1996)). Термін "фрагмент антитіла" означає частину повнорозмірного антитіла, як правило, що зв'язує мішень або варіабельну ділянку. Приклади фрагментів антитіл включають фрагменти Fab, Fab', F(ab')2 і Fv. Фраза "функціональний фрагмент або аналог" антитіла означає сполуку, що має якісну біологічну активність, спільною з повнорозмірним антитілом. Наприклад, функціональний фрагмент або аналог антитіла проти фактора D людини являє собою фрагмент 13 UA 100888 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 або аналог, що може зв'язуватися з фактором D таким чином, що запобігає або істотно знижує активацію комплементу. Термін "функціональний фрагмент", використовуваний у даному документі, стосовно антитіл означає фрагменти Fv, F(ab) і F(ab') 2. Фрагмент "Fv" являє собою мінімальний фрагмент антитіла, що містить цілий сайт розпізнавання і зв'язування мішені. Ця ділянка складається з димера варіабельного домену одного важкого й одного легкого ланцюга в щільній нековалентній асоціації (димер V H-VL). Саме в цій конфігурації три CDRs кожного варіабельного домену взаємодіють, утворюючи сайт зв'язування мішені на поверхні димера V HVL. У сукупності шість CDRs визначають специфічність зв'язування мішені антитіла. Однак навіть один варіабельний домен (або половина Fv, що містить тільки три CDRs, специфічних для мішені) має здатність розпізнавати і зв'язувати мішень. "Одноланцюжкові Fv" або "sFv" фрагменти антитіла містять VH і VL домени антитіла, при цьому дані домени знаходяться на одному поліпептидному ланцюзі. Як правило, поліпептид Fv додатково містить поліпептидний лінкер між VH і VL доменами, що дозволяє sFv утворювати необхідну структуру для зв'язування мішені. Fab-фрагмент містить константний домен легкого ланцюга і перший константний домен (CH1) важкого ланцюга. Fаb'-фрагменти відрізняються від Fab-фрагментів додаванням декількох залишків на карбоксильному кінці домену CH1 важкого ланцюга, включаючи один або більше залишків цистеїну із шарнірної ділянки антитіла. F(ab')-фрагменти одержують шляхом розщеплення дисульфідного моста на залишках цистеїну шарнірної ділянки продукту розщеплення пепсином F(ab')2. Рядовим фахівцям у даній галузі відомі й інші хімічні сполуки фрагментів антитіл (наприклад, антигензв'язувальних фрагментів). Термін "бібліотека", використовуваний у даному документі, означає множину послідовностей антитіла або фрагментів антитіла (наприклад, поліпептидів за винаходом), або нуклеїнових кислот кодуючих дані послідовності, при цьому послідовності розрізняються по сполученню варіантів амінокислот, що введені в дані послідовності у відповідності зі способами за винаходом. Термін "моноклональне антитіло", використовуваний у даному документі, означає антитіло, отримане з в основному гомогенній популяції антитіл, тобто, окремі антитіла, що складають популяцію, ідентичні, за винятком можливих природних мутацій, що можуть бути присутнім у незначних кількостях. Моноклональні антитіла високоспецифічні, будучи спрямованими проти одного цільового сайта. Крім того, на відміну від препаратів звичайних (поліклональних) антитіл, що, як правило, включають різні антитіла, спрямовані проти різних детермінант (епітопів), кожне моноклональне антитіло спрямоване проти однієї детермінанти на мішені. На додаток до їхньої специфічності, моноклональні антитіла мають ту перевагу, що їх можна синтезувати за допомогою культури гібридом без домішки інших імуноглобулінів. Визначення "моноклональне" вказує на характер антитіла як отриманого з в основному гомогенної популяції антитіл, і не повинно тлумачитися як вимога одержання антитіла будь-яким конкретним методом. Наприклад, моноклональні антитіла для використання за даним винаходом можна виділяти з фагової бібліотеки антитіл за допомогою добре відомих методів. Вихідні моноклональні антитіла для використання згідно із даним винаходом можна одержувати методом гібридом, вперше описаним Kohler і Milstein, Nature 256, 495 (1975), або можна одержувати рекомбінантними методами. "Гуманізовані" форми антитіл, відмінних від людських (наприклад, мишачих), являють собою химерні імуноглобуліни, ланцюги або імуноглобулінів їхні фрагменти (такі як Fv, Fab, Fab', F(ab')2 або інші єднальні мішені підпослідовності антитіл), що містять мінімальну послідовність, що походить з імуноглобуліну, відмінного від людського. Як правило, гуманізоване антитіло містить практично усі з щонайменше одного, і звичайно двох варіабельних доменів, у яких всі або майже всі ділянки CDR відповідають ділянкам імуноглобуліну, відмінного від людського, і всі або майже всі ділянки FR є ділянками консенсусної послідовності імуноглобуліну людини. Гуманізоване антитіло може також містити щонайменше частину константної ділянки (Fc) імуноглобуліну, як правило, ділянки з вибраною матриці імуноглобуліну людини. Терміни "клітина", "лінія клітин" і "культура клітин" включають і їхнє потомство. Також очевидно, що все потомство може бути не повністю ідентичним по сполуці ДНК, в результаті навмисних або випадкових мутацій. Варіантні нащадки, що мають ту ж функцію або біологічні властивості, на яких проводиться добір споконвічно трансформованих клітин, також включені. "Клітини-хазяї", використовувані в даному винаході, як правило, є прокаріотичними або еукаріотичними хазяїнами. Термін "вектор" означає конструкцію ДНК, що містить послідовність ДНК, що функціонально зв'язана з відповідною контролюючою послідовністю, здатною здійснювати експресію ДНК у прийнятному хазяїні. Такі контролюючі послідовності включають промотор для здійснення 14 UA 100888 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 транскрипції, необов'язкову послідовність оператора для керування такою транскрипцією, послідовність, що кодує відповідні сайти зв'язування мРНК із рибосомою, і послідовності, що контролюють термінацію транскрипції і трансляції. Вектор може являти собою плазміду, фагову частинку або просто потенційну геномну вставку. Після трансформації в прийнятного хазяїна вектор може реплікуватися і функціонувати незалежно від геному хазяїна, або може в деяких випадках інтегруватися в геном. У даному описі терміни "плазміда" і "вектор" іноді використовуються як синоніми, оскільки плазміда є найбільш часто використовуваною формою вектора. Однак винахід повинен включати й інші форми векторів, які виконують аналогічні функції і відомі або будуть відомі в даній галузі. Термін "мітка", використовуваний у даному документі, означає детектовану сполуку або композицію, який можна прямо або опосередковано кон'югувати з молекулою або білком, наприклад, з антитілом. Мітка може сама бути детектованою (наприклад, радіоізотопні мітки або флуоресцентні мітки) або, у випадку ферментативної мітки, можуть каталізувати хімічні зміни субстратної сполуки або композиції, які можна виявляти. Термін "тверда фаза", використовуваний у даному документі, означає неводну матрицю, до якої антитіло за даним винаходом може прикріплюватися. Приклади твердих фаз, охоплених даним документом, включають ті, котрі частково або повністю створені зі скла (наприклад, скла з контрольованим розміром пор), полісахаридів (наприклад, агарози), поліакриламідів, полістиролу, полівінілового спирту і силіконів. У деяких варіантах здійснення в залежності від контексту тверда фаза може являти собою лунку аналітичного планшета; в інші – колонку для очищення (наприклад, колонку для афінної хроматографії). "Фаговий дисплей" являє собою метод, за допомогою якого варіантні поліпептиди експонуються у вигляді злитих білків із щонайменше частиною білка оболонки на поверхні часток фагу, наприклад, нитчастого фагу. Корисність фагового дисплея полягає в тому, що великі бібліотеки рандомізованих варіантів білка можна швидко й ефективно сортувати в пошуках тих послідовностей, що з високої афінністю зв'язуються з цільовим антигеном. Дисплей пептидних і білкових бібліотек на фагах був використаний для скринінгу мільйонів поліпептидів у пошуках поліпептидів з визначеними єднальними властивостями. Методи полівалентного фагового дисплея були використані для експонування малих випадкових пептидів і невеликих білків шляхом злиття або з геном III, або з геном VIII нитчастого фагу. Wells and Lowman (1992) Curr. Opin. Struct. Biol. 3: 355-362 і приведені там посилання. У моновалентному фаговому дисплеї білкова або пептидна бібліотека є злитою з геном III або його частиною, і експресується на низьких рівнях у присутності білка гена III дикого типу, так, що частинки фагу експонують одну або ні однієї копії злитих білків. Ефекти авідності знижені в порівнянні з полівалентним фагом, так, що сортування відбувається на основі власної афінності ліганду, і використовуються фагмідні вектори, що спрощують маніпуляції з ДНК. Lowman and Wells (1991) Methods: A companion to Methods in Enzymology 3: 205-0216. "Фагміда" являє собою плазмідний вектор, що має бактеріальну крапку початку реплікації, наприклад Co1E1, і копію міжгенної ділянки бактеріофага. Фагміда може бути використана на будь-якому відомому бактеріофагу, включаючи нитчастий бактеріофаг і лямбдоподібний бактеріофаг. Плазміда також звичайно містить селектований маркер резистентності до антибіотиків. Сегменти ДНК, клоновані в такі вектори, можуть репродукуватися як плазміди. Коли в клітинах, що містять такі вектори, є всі гени, необхідні для продукції фагових часток, спосіб реплікації плазміди змінюється на реплікацію по типу "кільця, що котиться, » для створення копій однієї нитки плазмідної ДНК і упакування фагових часток. Фагміда може утворювати інфекційні або неінфекційні частинки фагу. Даний термін включає фагміди, що містять ген білка оболонки фагу або його фрагмент, зв'язаний з геном гетерологічного поліпептиду у вигляді злитого гена таким чином, що даний гетерологічний поліпептид експонується на поверхні фагової частинки. "Варіантна Fc-ділянка" містить амінокислотну послідовність, що відрізняється від послідовності іншої Fc-ділянки через щонайменше одну "модифікацію амінокислоти", описану в даному документі. Переважно, варіантна Fc-ділянка містить щонайменше одну амінокислотну заміну в порівнянні Fc-ділянкою з природною послідовністю або з Fc- ділянкою вихідного поліпептиду, наприклад, від приблизно однієї до приблизно десяти амінокислотних замін, і, переважно, від приблизно однієї до приблизно п'яти амінокислотних замін у Fc-ділянки з природною послідовністю або в Fc-ділянки вихідного поліпептиду. У даному документі варіантна Fc-ділянка буде, переважно, мати щонайменше приблизно 80 % гомології з Fc- ділянкою з природною послідовністю і/або з Fc- ділянкою вихідного поліпептиду, і найбільш переважно щонайменше приблизно 90 % гомології з нею, більш переважно щонайменше приблизно 95 % гомології з нею. Приклади "Fc-ділянок людини з природною послідовністю" представлені на 15 UA 100888 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 фігурі 23 у WO 00/42072 і включають Fc-ділянка Ig1 людини із природною послідовністю (алотипи не-A і A), Fc-ділянка Ig2 людини із природною послідовністю, Fc-ділянка Ig3 людини із природною послідовністю і Fc-ділянка Ig4 людини із природною послідовністю, а також їхні природні варіанти. Fc-ділянки миші з природною послідовністю представлені на фігурі 22A у WO 00/42072. Відповідно до даного винаходу "змінена" афінність зв'язування FcRn являє собою афінність, що характеризується або підвищеною, або зниженою активністю зв'язування FcRn у порівнянні з вихідним поліпептидом або з поліпептидом, що містить Fc-ділянку із природною послідовністю. В одному прикладі, антитіло зі зміненою афінністю зв'язування FcRn сильніше зв'язується з FcRn при pH 6,0 і/або слабше зв'язується з FcRn при pH 7,0. Варіант, що "демонструє посилене зв'язування" з Fc, зв'язує щонайменше одну Fc із кращою афінністю, ніж вихідний поліпептид. Варіант, що "демонструє ослаблене зв'язування" з Fc, зв'язує щонайменше одну Fc з гіршою афінністю, ніж вихідний поліпептид. Варіант, що зв'язує Fc з "кращою афінністю", ніж вихідний поліпептид, являє собою варіант, що зв'язує Fc з істотно вищою афінністю зв'язування, ніж вихідне антитіло, коли кількості варіанта поліпептиду і вихідного поліпептиду в аналізі на зв'язування є практично однаковими. Наприклад, варіант поліпептиду з поліпшеної афінністю зв'язування Fc може демонструвати від приблизно 1,15кратного до приблизно 100-кратного, наприклад, від приблизно 1,2-кратного до приблизно 50кратного посилення афінності зв'язування Fc у порівнянні з вихідним поліпептидом при визначенні афінності зв'язування Fc. "Амінокислотна модифікація" означає зміну в амінокислотній послідовності заданої амінокислотної послідовності. Приклади модифікацій включають амінокислотну заміну, вставку і/або делецію. Одним із прикладів амінокислотної модифікації в даному документі є заміна. "Амінокислотна модифікація на" визначеній позиції, наприклад, у Fc-ділянки, означає заміну або делецію визначених залишків, або вставку щонайменше одного амінокислотного залишку поруч з визначеним залишком. Під вставкою "поруч" з визначеним залишком розуміють вставку в межах одного-двох залишків від нього. Вставка може бути з N-кінця або C-кінця стосовно визначеного залишку. "Амінокислотна заміна" означає заміну щонайменше одного існуючого амінокислотного залишку в заданій амінокислотній послідовності іншим відмінним "замінюючим" амінокислотним залишком. Замінюючий залишок або залишки можуть являти собою "природні амінокислотні залишки" (тобто, кодовані генетичним кодом) і вибрані з групи, що складається з: аланіну (ala), аргініну (Arg), аспарагіну (Asn), аспарагінової кислоти (Asp), цистеїну (Cys), глютаміну (Gln), глютамінової кислоти (Glu), гліцину (Gly), гістидину (His), ізолейцину (Ile), лейцину (Leu), лізину (Lys), метіоніну (Met), фенілаланіну (Phe), проліну (Pro), серину (Ser), треоніну (Thr), триптофану (Trp), тирозину (Tyr) і валіну (Val). Заміна одним або декількома неприродними амінокислотними залишками також охоплена визначенням амінокислотної заміни, приведеним у даному документі. "Неприродний амінокислотний залишок" означає залишок, відмінний від природних амінокислотних залишків, перерахованих вище, що здатний ковалентно зв'язувати сусідній амінокислотний залишок(ки) у поліпептидному ланцюзі. Приклади неприродних амінокислотних залишків включають норлейцин, орнітин, норвалін, гомосерин та інші аналоги амінокислотних залишків, такі як ті, що описані в Ellman et al., Meth. Enzym, 202: 301-336 (1991). Для створення таких неприродних амінокислотних залишків можна використовувати методи, описані в Noren et al., Science, 244: 182 (1989) і Ellman et al., вище. Коротенько, дані методи включають хімічну активацію супресорної тРНК за допомогою неприродного амінокислотного залишку, з наступною in vitro транскрипцією і трансляцією РНК. "Амінокислотна вставка" означає вбудовування щонайменше однієї амінокислоти в задану амінокислотну послідовність. Хоча вставка, як правило, складається з вставки одного або двох амінокислотних залишків, дійсна заявка передбачає довші "пептидні вставки", наприклад, вставку від приблизно трьох до приблизно п'яти або навіть аж до приблизно десяти амінокислотних залишків. Уставлений залишок(ки) може бути природним або неприродної, як описано вище. "Амінокислотна делеція" означає видалення щонайменше одного амінокислотного залишку з заданої амінокислотної послідовності. II. Докладний опис Описаний в даному документі винахід належить до антагоністів фактора D, включаючи антитіла проти фактора D і їхні варіанти, а також їхні фрагменти (наприклад, антигензв'язувальні фрагменти), корисні для запобігання і лікування зв'язаних з комплементом станів, включаючи патологічні стани очей (усі патологічні стани і захворювання очей, патологія яких зв'язана з комплементом, включаючи класичний і альтернативний шляхи, і зокрема, 16 UA 100888 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 альтернативний шлях активації комплементу), такі як, наприклад, макулярні дегенеративні захворювання, такі як всі стадії вікової макулярної дегенерації (AMD), у тому числі суха і мокра (не ексудативна і ексудативна) форми, хороїдальна неоваскуляризація (CNV), увеїт, діабетична й інші зв'язані з ішемією ретинопатії, ендофтальміт і інші внутрішньочні неоваскулярні захворювання, такі як діабетичний макулярний набряк, патологічна короткозорість, хвороба фон Хіпель-Ліндау, гістоплазмоз очей, оклюзія центральної вени сітківки (CRVO), неоваскуляризація рогівки і неоваскуляризація сітківки. Одна група патологічних станів очей, зв'язаних з комплементом, включає вікову макулярну дегенерацію (AMD), у тому числі не ексудативну (наприклад, проміжну суху AMD або географічну атрофію (GA)) і ексудативну (наприклад, мокру AMD (хороїдальну неоваскуляризацію (CNV)) AMD, діабетичну ретинопатію (DR), ендофтальміт і увеїт. В одному прикладі патологічний стан очей, зв'язаний з комплементом, являє собою проміжну суху AMD. В одному прикладі патологічний стан очей, зв'язаний з комплементом, являє собою географічну атрофію. В одному прикладі патологічний стан очей, зв'язаний з комплементом, являє собою мокру AMD (хороїдальну неоваскуляризацію (CNV)). AMD являє собою вікову дегенерацію макули, що є ведучою причиною необоротного порушення зору в осіб у віці старше 60. Існує два типи AMD, не ексудативна (суха) і ексудативна (мокра) AMD. Суха або не ексудативна форма включає атрофічні і гіпертрофічні зміни пігментного епітелію сітківки (RPE), що знаходиться під центральною сітківкою (макулою), а також депозити (друзи) на RPE. Не ексудативна AMD у пацієнтів може прогресувати до мокрої або ексудативної форми AMD, при якій аномальні кровоносні судини, які називаються хороїдальними неоваскулярними мембранами (CNVMs), розвиваються під сітківкою, виникає витік рідини і крові і в остаточному підсумку виникає сліпучий дископодібний шрам у сітківці і під нею. Не ексудативна AMD, що, як правило, передує ексудативної AMD, зустрічається частіше. Проявлення не ексудативної AMD варіюють: можуть бути присутніми тверді друзи, м'які друзи, географічна атрофія RPE і агрегація пігменту. Компоненти комплементу осаджуються на RPE на ранній стадії AMD і є основними складовими друз. 1. Гуманізовані антитіла проти фактора D Описаний в даному документі винахід включає одержання і використання гуманізованих антитіл проти фактора D і їхніх фрагментів. Приклади способів одержання антитіл описані більш докладно в наступних розділах. Способи гуманізації антитіл, відмінних від людських, добре відомі в даній галузі. Як правило, у гуманізованому антитілі мається один або більше амінокислотних залишків, введених у нього з джерела, відмінного від людини. Дані амінокислотні залишки, відмінні від людських, часто називають "імпортними" залишками, що, як правило, узяті з "імпортного" варіабельного домену. Гуманізацію можна в основному проводити по методу Winter і співробітників [Jones et al., Nature, 321: 522-525 (1986), Riechmann et al., Nature, 332: 323-327 (1988), Verhoeyen et al., Science, 239: 1534-1536 (1988)], шляхом заміни послідовностями CDRs або CDR гризунів відповідних послідовностей людського антитіла. Відповідно, такі "гуманізовані" антитіла є химерними антитілами (патент США № 4816567), у яких істотно менше, ніж цілий варіабельний домен людини, замінено відповідною послідовністю з видів, відмінних від людини. На практиці, гуманізовані антитіла, як правило, є людськими антитілами, у яких деякі залишки CDR і, можливо, деякі залишки FR замінені залишками з аналогічних сайтів в антитілах гризунів. Вибір людських варіабельних доменів, як легкого, так і важкого ланцюга, використовуваних для одержання гуманізованих антитіл, може в деяких випадках бути важливим для зменшення антигенності і/або HAMA-реакції (імунна відповідь людини на антитіло миші), якщо антитіло призначене для терапевтичного застосування для людини. Або зменшення виключення HAMAреакції, як правило, є важливим аспектом клінічної розробки відповідних терапевтичних засобів. Дивися, наприклад, Khaxzaeli et al., J. Natl. Cancer Inst. (1988), 80: 937, Jaffers et al., Transplantation (1986), 41: 572, Shawler et al., J. Immunol. (1985), 135: 1530, Sears et al., J. Biol. Response Mod. (1984), 3: 138; Miller et al., Blood (1983), 62: 988, Hakimi et al., J. Immunol. (1991), 147: 1352, Reichmann et al., Nature (1988), 332: 323, Junghans et al., Cancer Res. (1990), 50: 1495. Винахід, описаний у даному документі, належить до антитіл, що гуманізовані таким чином, що HAMA-реакція знижена або виключена. Варіанти даних антитіл можна також одержувати, використовуючи рутинні методи, відомі в даній галузі, деякі з який додатково описані нижче. Згідно з так званим методом "найкращої відповідності" проводять скринінг послідовності варіабельного домену антитіла гризуна проти цілої бібліотеки відомих послідовностей варіабельних доменів людини. Послідовність людського V-домену, що найбільш близька до послідовності гризуна, ідентифікують і людську каркасну ділянку (FR) у її сполуці вибирають для гуманізованого антитіла (Sims et al., J. Immunol. 151: 2296 (1993), Chothia et al., J. Mol. Biol., 196: 901 (1987)). В іншому методі використовують конкретну каркасну ділянку з консенсусної 17 UA 100888 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 послідовності всіх людських антитіл конкретної підгрупи легких або важких ланцюгів. Той самий каркас можна використовувати для декількох різних гуманізованих антитіл (Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89: 4285 (1992), Presta et al., J. Immunol. 151: 2623 (1993)). Наприклад, амінокислотна послідовність з антитіла, описаного в даному документі, може служити стартовою (вихідною) послідовністю для диверсифікованості каркасної і/або гіперваріабельної послідовності(тей). Вибрана каркасна послідовність, до якої приєднана стартова гіперваріабельна послідовність, називається в даному документі акцепторною каркасною послідовністю людини. При тому, що акцепторна каркасна послідовність людини може бути з, або походити з, людського імуноглобуліну (його VL і/або VH ділянок), акцепторні каркасні послідовності людини можуть бути з, або походити з, консенсусної каркасної послідовності людини, оскільки встановлено, що такі каркасні послідовності мають мінімальну або зовсім не мають імуногенності для пацієнтів-людей. Термін "акцепторна каркасна послідовність людини", використовуваний у даному документі, означає каркасну послідовність, що містить амінокислотну послідовність каркаса VL або VH, що походить з каркаса людського імуноглобуліну або з консенсусної каркасної послідовності людини. Акцепторна каркасна послідовність людини, "походить з" каркаса людського імуноглобуліну або з консенсусної каркасної послідовності людини, може містити незмінену амінокислотну послідовність з нього, або може містити вже існуючі зміни амінокислотної послідовності. Якщо маються вже існуючі зміни амінокислотної послідовності, переважно, присутні не більше ніж 5 і, переважно, 4 або менше, або 3 або менше, вже існуючих змін амінокислотної послідовності. В одному варіанті здійснення акцепторна каркасна послідовність VH людини ідентична по послідовності каркасної послідовності VH імуноглобуліну людини або консенсусної каркасної послідовності людини. В одному варіанті здійснення акцепторна каркасна послідовність VL людини ідентична по послідовності каркасної послідовності VL імуноглобуліну людини або консенсусної каркасної послідовності людини. "Консенсусна каркасна послідовність людини" є каркасною послідовністю, що являє собою амінокислотні залишки, які найчастіше зустрічаються в наборі каркасних послідовностей VL або VH імуноглобуліну людини. Як правило, набір послідовностей VL або VH імуноглобуліну людини походить з підгрупи послідовностей варіабельних доменів. Як правило, підгрупа послідовностей являє собою підгрупу по Kabat et al. В одному варіанті здійснення для VL, підгрупа являє собою підгрупу каппа I по Kabat et al. В одному варіанті здійснення для VH підгрупа являє собою підгрупу III по Kabat et al. Якщо акцепторна послідовність походить з імуноглобуліну людини, можна за бажанням вибирати людську каркасну послідовність, що вибрана на основі їїгомології з донорською каркасною послідовністю при вирівнюванні донорської каркасної послідовності з різними каркасними послідовностями людини в колекції людських каркасних послідовностей, і вибирати найбільш гомологічну каркасну послідовність як акцепторну. Акцепторна каркасна послідовність людини може бути з, або походити з послідовностей зародкової лінії антитіл людини, доступних у публічних базах даних. В одному варіанті здійснення по даному документу консенсусні послідовності людини є, або походять з підгрупи VII VH і/або підгрупи I каппа VL консенсусних каркасних послідовностей. В одному варіанті здійснення матриця каркасної послідовності людини, використовувана для одержання антитіла проти фактора D, може містити каркасні послідовності з матриці, що містить сполучення VI-4.1 b+ (сімейство VH7) і JH4d для ланцюга VH і/або сполучення DPK4 (сімейство VκI) і JK2 для ланцюга VL. В одному варіанті здійснення акцепторна каркасна послідовність VH людини включає одну, дві, три або всі з наступних каркасних послідовностей: FR1, що містить QVQLVQSGPELKKPGASVKVSCKAS (амінокислоти 1-25 з SEQ ID №: 2), FR2, що містить WVRQAPGQGLE (амінокислоти 36-49 з SEQ ID №: 2), FR3, що містить RFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCER (амінокислоти 67-98 з SEQ ID №: 2), RFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCE (амінокислоти 67-97 з SEQ ID №: 2), RFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYC (амінокислоти 67-96 з SEQ ID №: 2), RFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCS (SEQ ID №: 3), або RFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCSR (SEQ ID №: 4) FR4, що містить WGQGTLVTVSS (амінокислоти 105-115 з SEQ ID №: 2). В одному варіанті здійснення акцепторна каркасна послідовність VL людини може включати одну, дві, три або всі з наступних каркасних послідовностей: FR1, що містить DIQVTQSPSSLSASVGDRVTITC (амінокислоти 1-23 з SEQ ID №: 1), FR2, що містить WYQQKPGKVPKLLIS (амінокислоти 35-49 з SEQ ID №: 1), 18 UA 100888 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 FR3, що містить GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDVATYYC (амінокислоти 57-88 з SEQ ID №: 1), FR4, що містить FGQGTKLEIK (амінокислоти 98-107 з SEQ ID №: 1), або FGQGTKVEIK (SEQ ID №: 5). При тому, що акцептор може бути ідентичний по послідовності з вибраною каркасною послідовністю людини, чи вона з людського імуноглобуліну або консенсусної каркасної послідовності людини, за даним винаходом передбачено, що акцепторна послідовність може містити вже існуючі амінокислотні заміни в порівнянні з послідовністю імуноглобуліну людини або консенсусною каркасною послідовністю людини. Такі вже існуючі заміни, переважно, мінімальні; як правило, всього чотири, три, два або одне амінокислотне розходження в порівнянні з послідовністю імуноглобуліну людини або консенсусною каркасною послідовністю людини. Залишки гіперваріабельної ділянки антитіла, відмінного від людського, включають в акцепторні каркасні послідовності VL і/або VH людини. Наприклад, можна включати залишки, що відповідають залишкам CDR по Kabat, залишки гіперваріабельних петель по Chothia, залишки Abm і/або контактні залишки. За бажанням, включають наступні залишки подовженої гіперваріабельної ділянки: 24-36 або 24-34 (L1), 46-56 або 50-56 (L2) і 89-97 (L3), 26-35B (H1), 50-65, 47-65 або 49-65 (H2) і 93-102, 94-102 або 95-102 (H3). В одному аспекті винахід належить до антитіла проти фактора D, який містить варіабельний домен важкого ланцюга, що містить SEQ ID №: 2. В одному аспекті винахід належить до антитіла проти фактора D, який містить варіабельний домен легкого ланцюга, що містить SEQ ID №: 1. В одному аспекті винахід належить до антитіла проти фактора D, який містить варіабельний домен важкого ланцюга, що містить SEQ ID №: 2, і варіабельний домен легкого ланцюга, що містить SEQ ID №: 1. В одному прикладі винахід належить до фрагментів зазначених антитіл проти фактора D (наприклад, антигензв'язувальних фрагментів). В одному аспекті винахід належить до антитіла проти фактора D, який містить варіабельний домен важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, що має щонайменше 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % або 99 % ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю SEQ ID №: 2. У деяких варіантах здійснення амінокислотна послідовність, що має щонайменше 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % або 99 % ідентичності послідовності, містить заміни, вставки або делеції в порівнянні з контрольною послідовністю, але антитіло, що містить таку амінокислотну послідовність, зберігає здатність зв'язувати фактор D. У деяких варіантах здійснення в цілому від 1 до 10 амінокислот були замінені, вставлені або делетовані в послідовності SEQ ID №: 2. У деяких варіантах здійснення заміни, вставки і делеції мають місце в ділянках за межами HVRs (тобто, у FRs). У деяких варіантах здійснення антитіло проти фактора D містить варіабельний домен важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID №: 2. В одному прикладі винахід належить до фрагментів зазначених антитіл проти фактора D (наприклад, антигензв'язувальних фрагментів). У деяких варіантах здійснення винахід належить до антитіла проти фактора D, який містить варіабельний домен легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, що має щонайменше 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % або 99 % ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю SEQ ID №: 1. У деяких варіантах здійснення амінокислотна послідовність, що має щонайменше 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % або 99 % ідентичності послідовності, містить заміни, вставки або делеції в порівнянні з контрольною послідовністю, але антитіло, що містить таку амінокислотну послідовність, зберігає здатність зв'язувати фактор D. У деяких варіантах здійснення в цілому від 1 до 10 амінокислот були замінені, вставлені або делетовані в послідовності SEQ ID №:1. У деяких варіантах здійснення заміни, вставки і делеції мають місце в галузях за межами HVRs (тобто, у FRs). У деяких варіантах здійснення антитіло проти фактора D містить варіабельний домен легкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID №: 1. В одному прикладі винахід належить до фрагментів зазначених антитіл проти фактора D (наприклад, антигензв'язувальних фрагментів). Антитіло проти фактора D може містити будь-яку прийнятну каркасну послідовність варіабельного домену, за умови, що антитіло зберігає здатність зв'язувати фактор D. Наприклад, у деяких варіантах здійснення антитіла проти фактора D за винаходом містять каркасну послідовність варіабельного домену важкого ланцюга, що являє собою сполучення VI.4.1 b+ і JH4d (дивися фігуру 3). У деяких варіантах здійснення антитіла проти фактора D за винаходом містять консенсусну каркасну послідовність важкого ланцюга підгрупи VII людини. У деяких варіантах здійснення антитіла проти фактора D за винаходом містять каркасну послідовність варіабельного домену важкого ланцюга, що містить FR1, що містить амінокислоти 19 UA 100888 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 1-25 з SEQ ID №: 2, FR2, що містить амінокислоти 36-49 з SEQ ID №: 2, FR3, що містить амінокислоти 67-98 з SEQ ID №: 2 і FR4, що містить амінокислоти 105-115 з SEQ ID №: 2. В одному варіанті здійснення даних антитіл послідовність варіабельного домену важкого ланцюга містить заміну(и) у позиції 40 і/або 88 (нумерація Kabat). В одному варіанті здійснення даних антитіл позиція 40 являє собою цистеїн (C) або аланін (A) і/або позиція 88 являє собою цистеїн (C) або аланін (A). У деяких варіантах здійснення антитіла проти фактора D за винаходом містять каркасну послідовність варіабельного домену легкого ланцюга, що являє собою сполучення DPK4 і JK2 (дивися фігуру 4). У деяких варіантах здійснення антитіла проти фактора D за винаходом містять консенсусную каркасну послідовність легкого ланцюга каппа I (κI) людини. У деяких варіантах здійснення антитіла проти фактора D за винаходом містять каркасну послідовність варіабельного домену легкого ланцюга, що містить FR1, що містить амінокислоти 1-23 з SEQ ID №: 1, FR2, що містить амінокислоти 35-49 з SEQ ID №: 1, FR3, що містить амінокислоти 57-88 з SEQ ID №: 1, і FR4, що містить амінокислоти 98-107 з SEQ ID №: 1. В одному варіанті здійснення даних антитіл каркасна послідовність варіабельного домену легкого ланцюга містить одну або більше замін у позиції 15, 43 і/або 104 (нумерація Kabat). В одному варіанті здійснення даних антитіл позиція 15 являє собою цистеїн (C) або валін (V), позиція 43 являє собою цистеїн (C) або аланін (A), позиція 104 являє собою валін (V) або лейцин (L). В одному прикладі винахід належить до фрагментів зазначених антитіл проти фактора D (наприклад, антигензв'язувальних фрагментів). Крім того, антитіло проти фактора D може містити будь-яку прийнятну послідовність константного домену, за умови, що антитіло зберігає здатність зв'язувати фактор D. Наприклад, у деяких варіантах здійснення антитіла проти фактора D за винаходом містять щонайменше частину константного домену важкого ланцюга. В одному варіанті здійснення антитіла проти фактора D за винаходом містять константний домен важкого ланцюга або з одним, або із сполученням α, δ, ε, γ або μ важких ланцюгів. У залежності від амінокислотної послідовності константного домену їхніх важких ланцюгів (CH), імуноглобуліни можуть бути віднесені до різних класів або ізотипів. Існує п'ять класів імуноглобулінів: Ig, Ig, Ig, Ig і Ig з важкими ланцюгами, позначеними α, δ, ε, γ і μ, відповідно. Класи γ і α додатково поділяються на підкласи на основі порівняно незначних розходжень у послідовності і функції CH, наприклад, у людини експресуються наступні підкласи: Ig1, Ig2, Ig3, Ig4, Ig1 і Ig2. В одному варіанті здійснення антитіла проти фактора D за винаходом містять константний домен важкого ланцюга, який містить заміни на амінокислотних позиціях, що потрібним чином впливають на ефекторну функцію (наприклад, афінність зв'язування). В одному варіанті здійснення антитіла проти фактора D за винаходом містять константний домен важкого ланцюга, що містить заміни на амінокислотних позиціях, що не впливають на ефекторну функцію (наприклад, афінність зв'язування). В одному варіанті здійснення антитіла проти фактора D за винаходом містять константний домен важкого ланцюга Ig типу (наприклад, Ig1, Ig2, Ig3 або Ig4) і додатково містять заміну в позиції 114 (нумерація Kabat; еквівалентно 118 у нумерації EU), 168 (нумерація Kabat; еквівалентно 172 у нумерації EU), 172 (нумерація Kabat; еквівалентно 176 у нумерації EU) і/або 228 (нумерація EU). В одному варіанті здійснення антитіла проти фактора D за винаходом містять константний домен важкого ланцюга Ig типу (наприклад, Ig1, Ig2, Ig3 або Ig4) і додатково містять заміну в позиції 114, де позиція 114 являє собою цистеїн (C) або аланін (A), позиція 168 являє собою цистеїн (C) або аланін (A), позиція 172 являє собою цистеїн (C) або аланін (A) і/або позиція 228 являє собою пролін (P), аргінін (R) або серин (S). В одному прикладі винахід належить до фрагментів зазначених антитіл проти фактора D (наприклад, антигензв'язувальних фрагментів). Крім того, наприклад, у деяких варіантах здійснення антитіла проти фактора D за винаходом містять щонайменше частину константного домену легкого ланцюга. В одному варіанті здійснення антитіла проти фактора D за винаходом містять константний домен легкого ланцюга або з одного, або зі сполученням каппа або лямбда легких ланцюгів, оскільки легкий ланцюг будь-якого виду хребетних можна віднести до одного з двох чітко розрізнюваних типів, які називаються каппа і лямбда, на основі амінокислотних послідовностей їхній константних доменів. В одному варіанті здійснення антитіла проти фактора D за винаходом містять константний домен легкого ланцюга, що містить заміни на амінокислотних позиціях, що потрібним чином впливають на ефекторну функцію (наприклад, афінність зв'язування). В одному варіанті здійснення антитіла проти фактора D за винаходом містять константний домен легкого ланцюга, що містить заміни на амінокислотних позиціях, що не впливають на ефекторну функцію (наприклад, афінність зв'язування). В одному варіанті здійснення антитіла проти фактора D за винаходом містять константний домен легкого ланцюга типу каппа і додатково містять заміни в позиції 110, 144, 146 і/або 168 (нумерація Kabat). В одному варіанті здійснення 20 UA 100888 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 антитіла проти фактора D за винаходом містять константний домен легкого ланцюга типу каппа і додатково містять заміни в позиції 110, де 110 являє собою цистеїн (С) або валін (V), у позиції 144, де 144 являє собою цистеїн (C) або аланін (A), у позиції 146, де 146 являє собою ізолейцин (I) або валін (V) і/або в позиції 168, де 168 являє собою цистеїн (C) або серин (S). В одному прикладі винахід належить до фрагментів зазначених антитіл проти фактора D (наприклад, антигензв'язувальних фрагментів). 2. Модифіковані антитіла проти фактора D У даному документі винахід включає одержання і використання модифікованих антитіл проти фактора D, наприклад, модифікованих гуманізованих антитіл проти фактора D і їхніх варіантів, а також їхніх фрагментів (наприклад, антигензв'язувальних фрагментів). Типові методи одержання модифікованих антитіл описані більш докладно в наступних розділах. Вихідне антитіло проти фактора D, включаючи гуманізоване антитіло проти фактора D, можна модифікувати для створення модифікованих антитіл проти фактора D і їхніх варіантів. В одному варіанті здійснення дані модифіковані антитіла проти фактора D і їхні варіанти можуть мати поліпшеними в порівнянні з вихідним антитілом фізичними, хімічними, біологічними або властивостями гомогенністю. В одному прикладі винахід належить до фрагментів зазначених антитіл проти фактора D (наприклад, антигензв'язувальних фрагментів). В одному варіанті здійснення антитіло за даним винаходом містить один або більше амінокислотних змін (наприклад, замін) в одній або декількох з гіперваріабельних ділянок вихідного антитіла. Або альтернативно додатково у вихідне антитіло можна вносити одну або більше змін (наприклад, замін) залишків каркасної ділянки. Приклади залишків каркасної ділянки для модифікації включають ті, котрі безпосередньо нековалентно зв'язують антиген (Amit et al., (1986) Science, 233: 747-753), взаємодіють/впливають на конформацію CDR (Chothia et al. (1987) J. Mol. Biol., 196: 901-917) і/або знаходяться в зоні контакту VL-VH (EP 239 400B1). У деяких варіантах здійснення модифікація одного або більшої кількості таких залишків каркасної ділянки приводить до збільшення афінності зв'язування антитіла з антигеном. Наприклад, у даному варіанті здійснення винаходу можна змінювати від приблизно одного до приблизно 5 каркасних залишків. Приклади залишків каркасної або HVR ділянки для модифікації включають сайти, у яких модифікації приводять до утворення дезамідованих варіантів (наприклад, залишок(ки) аспарагіну (N або Asn), модифікований до аспартату (D або Asp), окислених варіантів (наприклад, залишок(ки) метіоніну (М або Met) і/або залишок(ки) триптофану (W або Trp), модифікований до сульфону або сульфоксиду), або піроглютаматних варіантів (наприклад, залишок(ки) глютаміну (Q або Gln), модифікований до піроглютамату). Приклади залишків каркасної або ділянки HVR ділянки для модифікації включають потенційні сайти дезамідування (тобто, аспарагін (N або Asn)), сайти окислювання (тобто, метіонін (М або Met) або триптофан (W або Trp)), або сайти конверсії піроглютамата (тобто, глютамін (Q або Gln)), у яких модифікація запобігає дезамідування і/або окислювання, і/або конверсію піроглютамата, відповідно. Для запобігання утворення дезамідованих варіантів аспарагін (N або Asn) може бути мутований в аланін (A або Ala), глютамін (Q або Gln) або серин (S або Ser). Для запобігання утворення окислених варіантів, метіонін (Met) або триптофан (W або Trp) може бути мутований у лейцин (L) або ізолейцин (I). Для запобігання утворення піроглютаматних варіантів, глютамін (Q або Gln) може бути мутований у глютамат (E або Glu). (Amphlett, G. et al., Pharm. Biotechnol., 9: 1-140 (1996)). Або альтернативно додатково, одна або більше змін (наприклад, замін) залишків каркасної ділянки можуть знаходитися в Fc-ділянці вихідного антитіла. В одному прикладі винахід належить до фрагментів зазначених антитіл проти фактора D (наприклад, антигензв'язувальних фрагментів). В одному варіанті здійснення антитіло за даним винаходом містить такий варіант Fc-ділянки, що час напівжиття антитіла in vivo збільшується або зменшується в порівнянні з вихідним антитілом або антитілом, що містить Fc-ділянку із природною послідовністю. В одному варіанті здійснення антитіло містить варіант Fc-ділянки, що збільшує або зменшує афінність зв'язування неонатального Fc-рецептора (FcRn) з антитілом (дивися WO2000042072, повний зміст якого включено за допомогою посилання). Наприклад, таке антитіло може містити модифікацію амінокислот на будь-який одній або більшій кількості амінокислотних позицій 238, 252, 253, 254, 255, 256, 265, 272, 286, 288, 303, 305, 307, 309, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 386, 388, 400, 413, 415, 424, 433, 434, 435, 436, 439 або 447 Fc-ділянки, де нумерація залишків у Fc-ділянці відповідає індексу EU по системі Kabat. Такі поліпептидні варіанти зі зниженим зв'язуванням з FcRn можуть містити модифікацію амінокислот на будь-якій одній або більшій кількості амінокислотних позицій 252, 253, 254, 255, 288, 309, 386, 388, 400, 415, 433, 435, 436, 439 або 447 Fc-ділянки, де нумерація залишків у Fc-ділянці відповідає індексу EU по системі Kabat. Вищевказані поліпептидні варіанти можуть, альтернативно, демонструвати 21 UA 100888 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 підвищене зв'язування з FcRn і містити модифікацію амінокислот на будь-якій одній або більшій кількості амінокислотних позицій 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 або 434 Fc-ділянки, де нумерація залишків у Fc-ділянці відповідає індексу EU по системі Kabat. Наприклад, антитіло містить варіант Fc-ділянки, що зв'язується з підвищеним часом напівжиття in vivo у порівнянні з вихідним антитілом або антитілом, що містить Fc-ділянку із природною послідовністю. Наприклад, антитіло містить варіант Fc-ділянки, що зв'язується з FcRn з підвищеної афінністю в порівнянні з вихідним антитілом або антитілом, що містить Fc-ділянку із природною послідовністю. Афінність зв'язування FcRn можна вимірювати в такий спосіб: Зв'язування антитіл проти FcRn людини за даним винаходом можна вивчати за допомогою поверхневого плазмонного резонансу, наприклад, приладу BiaCore 3000. Людський FcRn зв'язують із сенсорним чіпом за допомогою набору для зв'язування через аміногрупи. Наприклад, сенсорний чіп CM5 можна активувати за допомогою EDC/NHS протягом 7 хв. при 5 мкл/хв. Людський FcRn (100 мкг/мл) можна ін'єктувати протягом 30 сек. - 2 хв. при швидкості потоку 10 мкл/хв над поверхнею активованого чіпа, що дає остаточне число одиниць реакції зв'язування (RU) від 100 до 200. Після кон'югації чіп зі зв'язаним FcRn можна блокувати ін'єкцією 35 мкл 1 М гідрохлориду етаноламіну при 5 мкл/хв. Можна визначати зв'язування антитіл за даним винаходом з FcRn людини при рН 6,0 або рН 7,4. Рухливий буфер для експериментів по зв'язуванню являє собою PBS або з рН 6,0, або з рН 7,4, що містить 0,01 % P20 і 0,02 % азиду натрію. Антитіла за даним винаходом можна переводити в рухливий буфер або з рН 6,0, або з рН 7,4. В одному варіанті здійснення експерименти проводять при 25 °C. Для серії з рН 6,0 антитіла в концентраціях від 4 мкМ до 0,7 нМ пропускають потоком над чіпом, покритим FcRn, при 30 мкл/хв. протягом 4 хв., а потім дають можливість відокремитися від чіпа протягом 5 хв. Для серії з рН 7,4 антитіла в концентраціях від 12 мкМ до 100 нМ ін'єктують над чіпом, покритим FcRn, при 20 мкл/хв. протягом 1,5 хв., а потім вивільняють протягом 2 хв. Антитіла також пропускають потоком над некон'югованим стільником на сенсорному чіпі, що дозволяє відняти фонове неспецифічне зв'язування зі зв'язування з чіпом, до якого приєднаний FcRn. Чіп можна регенерувати шляхом 30-секундного упорскування 0,1М Тріс рН 8,3 у проміжку між ін'єкціями. Рівноважне значення RU для кожної ін'єкції можна реєструвати наприкінці кожної фази ін'єкції, і константи дисоціації (K D) можна потім розраховувати шляхом побудови графіка залежності рівноважних RU від ін'єкційних концентрацій. Один з корисних способів для одержання таких модифікованих антитіл і їхніх фрагментів (наприклад, антигензв'язувальних фрагментів), а також їхніх варіантів, називається "аланінскануючий мутагенез" (Cunningham and Wells (1989) Science 244: 1081-1085). У даній роботі один або більше залишків гіперваріабельної ділянки заміщають залишком(ами) аланіну або поліаланіну, щоб вплинути на взаємодію амінокислот з антигеном. Той залишок(ки) гіперваріабельної ділянки, що має функціональну чутливість до замін, потім уточнюють шляхом введення додаткових або інших мутацій на сайтах або для сайтів заміни. Таким чином, при тому, що сайт для введення варіації амінокислотної послідовності визначений, характер мутацій, власне кажучи, не обов'язково визначати заздалегідь. Для мутантів, отриманих таким способом, проводять скринінг на їхню біологічну активність (тобто, аналіз на афінність або зв'язування гемоліз), як описано в даному документі. Як правило, починають з консервативної заміни, такої як представлено нижче під заголовком "переважні заміни". Якщо такі заміни приводять до зміни біологічної активності (наприклад, афінності зв'язування), то вносять більш істотні зміни, названі в наступній таблиці "типові заміни" або описані нижче в застосуванні до груп амінокислот, і проводять скринінг продуктів. Переважні заміни приведені нижче в таблиці. 22 UA 100888 C2 Таблиця 1 Переважні заміни Вихідний залишок Ala (A) Arg (R) Asn (N) Asp (D) Cys (C) Gln (Q) Glu (E) Gly (G) His (H) Ile (I) Leu (L) Lys (K) Met (M) Phe (F) Pro (P) Ser (S) Thr (T) Trp (W) Tyr (Y) Val (V) 5 10 15 20 25 30 Типові заміни val, leu, ile lys, gln, asn gln, his, lys, arg Glu Ser Asn Asp pro, ala asn, gln, lys, arg leu, val, met, ala, phe, норлейцин норлейцин, ile, val, met, ala, phe arg, gln, asn leu, phe, ile leu, val, ile, ala, tyr Ala Thr Ser tyr, phe trp, phe, thr, ser ile, leu, met, phe, ala, норлейцин Переважні заміни val lys gln glu ser asn asp ala arg leu ile arg leu leu ala thr ser tyr phe leu Ще більш істотні модифікації біологічних властивостей або антитіл їхніх фрагментів (наприклад, антигензв'язувальних фрагментів) здійснюють шляхом підбору замін, що значно відрізняються за своїм впливом на підтримку (a) структури кістяка поліпептиду в ділянці заміни, наприклад, у вигляді складчастої або спіральної конформації, (b) або заряду гідрофобності молекули на цільовому сайті, або (c) основного обсягу бічного ланцюга. Природні залишки поділяються на групи на основі загальних властивостей бічного ланцюга: (1) гідрофобні: норлейцин, met, ala, val, leu, ile, (2) нейтральні гідрофільні: cys, ser, thr, asn, gln, (3) кислі: asp, glu, (4) основні: his, lys, arg, (5) залишки, що впливають на орієнтацію ланцюга: gly, pro, і (6) ароматичні: trp, tyr, phe. Неконсервативні заміни спричиняють заміну члена однієї з цих груп на члена іншої групи. В іншому варіанті здійснення сайти, вибрані для модифікації, модифікують і модифікації з підвищеної афінністю зв'язування відбирають методом фагового дисплея. Молекули нуклеїнових кислот кодуючі мутантні амінокислотні послідовності або модифіковані амінокислотні послідовності, одержують різними методами, відомими в даній галузі. Ці методи включають, але не обмежуються ними, олігонуклеотид-опосередкований (або сайт-спрямований) мутагенез, мутагенез за допомогою ПЛР і касетний мутагенез раніше створених варіантних або неваріантних версій вихідного антитіла. Одним з методів одержання мутантів або варіантів, або модифікованих амінокислотних послідовностей є сайт-спрямований мутагенез (дивися, наприклад, Kunkel (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82: 488). У деяких варіантах здійснення в модифікованого антитіла буде тільки один замінений залишок у гіперваріабельній ділянці. В інших варіантах здійснення будуть замінені два або більше залишків гіперваріабельної ділянки вихідного антитіла, наприклад, від приблизно двох до приблизно десяти замін у гіперваріабельній ділянці. В одному прикладі винахід належить до фрагментів зазначених антитіл проти фактора D (наприклад, антигензв'язувальних фрагментів). Як правило, модифіковане антитіло має амінокислотну послідовність, що має щонайменше 75 % ідентичності або подібності амінокислотної послідовності (як зазначено вище в розділі "Визначення") з амінокислотною послідовністю варіабельного домену або важкого, або легкого ланцюга вихідного антитіла, більш переважно щонайменше 80 %, більш переважно щонайменше 85 %, більш переважно щонайменше 90 %, і найбільше переважно щонайменше 23 UA 100888 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 95 %. В одному прикладі винахід належить до фрагментів зазначених антитіл проти фактора D (наприклад, антигензв'язувальних фрагментів). Після одержання модифікованого антитіла або його фрагмента (наприклад, антигензв'язувального фрагмента) визначають біологічну активність молекули в порівнянні з вихідним антитілом або його фрагментом (наприклад, антигензв'язуюючим фрагментом). Як відзначалося вище, це може включати визначення афінності зв'язування і/або інших біологічних активностей варіанта антитіла або його фрагмента (наприклад, антигензв'язувального фрагмента). В одному варіанті здійснення винаходу створюють панель модифікованих антитіл або їхніх фрагментів (наприклад, антигензв'язувальних фрагментів) і проводять її скринінг на афінність зв'язування антигену, такого як фактор D або його фрагмент. Одне або більше з мутантних антитіл або модифікованих антитіл, або їхніх фрагментів (наприклад, антигензв'язувальних фрагментів), відібраних у результаті такого первісного скринінгу, необов'язково піддають одному або декільком додатковим аналізам біологічної активності, щоб підтвердити, що даний варіант(и) антитіла або його фрагменти (наприклад, антигензв'язувальні фрагменти) дійсно є корисними, наприклад, для проведення досліджень. Модифіковані антитіла проти фактора D або їхні фрагменти (наприклад, антигензв'язувальні фрагменти), описані в даному документі, можуть бути піддані подальшим модифікаціям, часто в залежності від передбачуваного використання модифікованого антитіла або його фрагмента (наприклад, антигензв'язувального фрагмента). Такі модифікації можуть включати подальша зміна амінокислотної послідовності, злиття з гетерологічним поліпептидом(ами) і/або ковалентні модифікації, такі як докладно описані нижче. Що стосується змін амінокислотної послідовності, типові модифікації докладно описані вище. Наприклад, будь-який залишок цистеїну, що не бере участь у підтримці правильної конформації модифікованого антитіла, також можна заміняти, як правило, серином для підвищення окисної стійкості молекули і запобігання аномальної перехресної зшивки. Навпаки, антитілу можна додавати цистеїновий зв'язок(и) для підвищення його стабільності (особливо в тому випадку, коли антитіло є фрагментом антитіла, таким як Fvфрагмент). Інший тип амінокислотного мутанта має змінений характер глікозування. Це може бути досягнуте шляхом видалення однієї або декількох вуглеводних функціональних груп, що входять до складу антитіла, і/або додавання одного або більше сайтів глікозування, що відсутні в антитілі. Глікозування антитіл фрагментів або антитіл (наприклад, антигензв'язувальних фрагментів), як правило, є або N-зв'язаним, або О-зв'язаним. N-зв'язане означає приєднання вуглеводної функціональної групи до бічного ланцюга залишку аспарагіну. Трипептидні послідовності аспарагін-Х-серин і аспарагін-Х-треонін, де X є будь-якою амінокислотою за винятком проліну, є послідовностями розпізнавання для ферментативного приєднання вуглеводної функціональної групи до бічного ланцюга аспарагіну. Таким чином, наявність у поліпептиді кожної з цих трипептидних послідовностей створює потенційний сайт глікозування. O-зв'язане глікозування означає приєднання одного з цукрів N-ацетилгалактозаміну, або галактози ксилози до гідроксіамінокислоти найчастіше серину або треоніну, хоча також можна використовувати 5-гідроксипролін або 5-гідроксилізин. Додавання сайтів глікозування в антитіло зручно здійснювати шляхом такої зміни послідовності амінокислот, щоб вона містила одну або більше з описаних вище трипептидних послідовностей (для N-зв'язаних сайтів глікозування). Така зміна також можна здійснювати шляхом додавання або заміни на один або кілька залишків серина або треоніну в послідовності вихідного антитіла (для O-зв'язаних сайтів глікозування). В одному варіанті здійснення винахід належить до модифікованого антитіла проти фактора D, отриманого з вихідного антитіла проти фактора D за даною заявкою, де модифіковане антитіло проти фактора D містить амінокислотну послідовність такого вихідного антитіла проти фактора D за даною заявкою, де щонайменше на одній позиції (відповідно до нумерації по Kabat) амінокислотної послідовності такого вихідного антитіла проти фактора D за даною заявкою має місце заміна одним або декількома з наступного: (a) амінокислота в позиції 33 легкого ланцюга являє собою L або I, (b) амінокислота в позиції 34 легкого ланцюга являє собою A або Q, (c) амінокислота в позиції 52 легкого ланцюга являє собою S або A, (d) амінокислота в позиції 104 легкого ланцюга являє собою V. В одному прикладі винахід належить до фрагмента вказаного антитіла проти фактора D (наприклад, антигензв'язувального фрагмента). В одному варіанті здійснення винахід належить до модифікованого антитіла проти фактора D, отриманого з вихідного антитіла проти фактора D за даною заявкою, де модифікований варіант антитіла проти фактора D містить амінокислотну послідовність такого вихідного антитіла проти фактора D за даною заявкою, де щонайменше на одній позиції (відповідно до 24 UA 100888 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 нумерації по Kabat) амінокислотної послідовності такого вихідного антитіла проти фактора D за даною заявкою має місце заміна одним або декількома з наступного: (a) амінокислота в позиції 1 важкого ланцюга являє собою E, (b) амінокислота в позиції 99 важкого ланцюга являє собою A або Q, або (c) амінокислота в позиції 100 важкого ланцюга являє собою A або Q. В одному прикладі винахід належить до фрагмента вказаного антитіла проти фактора D (наприклад, антигензв'язувального фрагмента). В одному варіанті здійснення винахід належить до модифікованого антитіла проти фактора D, отриманого з вихідного антитіла проти фактора D за даною заявкою, де модифіковане антитіло проти фактора D містить амінокислотну послідовність такого вихідного антитіла проти фактора D за даною заявкою, де щонайменше на одній позиції (відповідно до нумерації по Kabat) амінокислотної послідовності такого вихідного антитіла проти фактора D за даною заявкою має місце заміна одним або декількома з наступного: (a) амінокислота в позиції 33 легкого ланцюга являє собою L або I, (b) амінокислота в позиції 34 легкого ланцюга являє собою A або Q, (c) амінокислота в позиції 52 легкого ланцюга являє собою S або A, (d) амінокислота в позиції 104 легкого ланцюга являє собою V, (e) амінокислота в позиції 1 важкого ланцюга являє собою E, (f) амінокислота в позиції 99 важкого ланцюга являє собою A або Q, або (g) амінокислота в позиції 100 важкого ланцюга являє собою A або Q. В одному прикладі винахід належить до фрагмента вказаного антитіла проти фактора D (наприклад, антигензв'язувального фрагмента). В одному варіанті здійснення винахід належить до модифікованого антитіла проти фактора D, отриманого з вихідного антитіла проти фактора D за даною заявкою, де модифіковане антитіло проти фактора D містить амінокислотну послідовність такого вихідного антитіла проти фактора D за даною заявкою, де щонайменше на двох позиціях (відповідно до нумерації по Kabat) амінокислотної послідовності такого вихідного антитіла проти фактора D за даною заявкою має місце заміна одним або декількома з наступного: (a) амінокислота в позиції 33 легкого ланцюга являє собою L або I, (b) амінокислота в позиції 34 легкого ланцюга являє собою A або Q, (c) амінокислота в позиції 52 легкого ланцюга являє собою S або A, (d) амінокислота в позиції 104 легкого ланцюга являє собою V. В одному варіанті здійснення винахід належить до модифікованого антитіла проти фактора D, отриманого з вихідного антитіла проти фактора D за даною заявкою, де модифіковане антитіло проти фактора D містить амінокислотну послідовність такого вихідного антитіла проти фактора D за даною заявкою, де щонайменше на двох позиціях (відповідно до нумерації по Kabat) амінокислотної послідовності такого вихідного антитіла проти фактора D за даною заявкою має місце заміна одним або декількома з наступного: (a) амінокислота в позиції 1 важкого ланцюга являє собою E, (b) амінокислота в позиції 99 важкого ланцюга являє собою A або Q, або (c) амінокислота в позиції 100 важкого ланцюга являє собою A або Q. В одному прикладі винахід належить до фрагмента вказаного антитіла проти фактора D (наприклад, антигензв'язувального фрагмента). В одному варіанті здійснення винахід належить до модифікованого антитіла проти фактора D, отриманого з вихідного антитіла проти фактора D за даною заявкою, де модифіковане антитіло проти фактора D містить амінокислотну послідовність такого вихідного антитіла проти фактора D за даною заявкою, де щонайменше на двох позиціях (відповідно до нумерації по Kabat) амінокислотної послідовності такого вихідного антитіла проти фактора D за даною заявкою має місце заміна одним або декількома з наступного: (a) амінокислота в позиції 33 легкого ланцюга являє собою L або I, (b) амінокислота в позиції 34 легкого ланцюга являє собою A або Q, (c) амінокислота в позиції 52 легкого ланцюга являє собою S або A, (d) амінокислота в позиції 104 легкого ланцюга являє собою V, (e) амінокислота в позиції 1 важкого ланцюга являє собою E, (f) амінокислота в позиції 99 важкого ланцюга являє собою A або Q, або (g) амінокислота в позиції 100 важкого ланцюга являє собою A або Q. В одному прикладі винахід належить до фрагмента вказаного антитіла проти фактора D (наприклад, антигензв'язувального фрагмента). В одному варіанті здійснення винахід належить до модифікованого антитіла проти фактора D, отриманого з вихідного антитіла проти фактора D за даною заявкою, де модифіковане 25 UA 100888 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 антитіло проти фактора D містить амінокислотну послідовність такого вихідного антитіла проти фактора D за даною заявкою, де щонайменше на трьох позиціях (відповідно до нумерації по Kabat) амінокислотної послідовності такого вихідного антитіла проти фактора D за даною заявкою має місце заміна одним або декількома з наступного: (a) амінокислота в позиції 33 легкого ланцюга являє собою L або I, (b) амінокислота в позиції 34 легкого ланцюга являє собою A або Q, (c) амінокислота в позиції 52 легкого ланцюга являє собою S або A, (d) амінокислота в позиції 104 легкого ланцюга являє собою V. В одному прикладі винахід належить до фрагмента вказаного антитіла проти фактора D (наприклад, антигензв'язувального фрагмента). В одному варіанті здійснення винахід належить до модифікованого антитіла проти фактора D, отриманого з вихідного антитіла проти фактора D за даною заявкою, де модифіковане антитіло проти фактора D містить амінокислотну послідовність такого вихідного антитіла проти фактора D за даною заявкою, де щонайменше на трьох позиціях (відповідно до нумерації по Kabat) амінокислотної послідовності такого вихідного антитіла проти фактора D за даною заявкою має місце заміна одним або декількома з наступного: (a) амінокислота в позиції 1 важкого ланцюга являє собою E, (b) амінокислота в позиції 99 важкого ланцюга являє собою A або Q, або (c) амінокислота в позиції 100 важкого ланцюга являє собою A або Q. В одному прикладі винахід належить до фрагмента вказаного антитіла проти фактора D (наприклад, антигензв'язувального фрагмента). В одному варіанті здійснення винахід належить до модифікованого антитіла проти фактора D, отриманого з вихідного антитіла проти фактора D за даною заявкою, де модифіковане антитіло проти фактора D містить амінокислотну послідовність такого вихідного антитіла проти фактора D за даною заявкою, де щонайменше на трьох позиціях (відповідно до нумерації по Kabat) амінокислотної послідовності такого вихідного антитіла проти фактора D за даною заявкою має місце заміна одним або декількома з наступного: (a) амінокислота в позиції 33 легкого ланцюга являє собою L або I, (b) амінокислота в позиції 34 легкого ланцюга являє собою A або Q, (c) амінокислота в позиції 52 легкого ланцюга являє собою S або A, (d) амінокислота в позиції 104 легкого ланцюга являє собою V, (e) амінокислота в позиції 1 важкого ланцюга являє собою E, (f) амінокислота в позиції 99 важкого ланцюга являє собою A або Q, або (g) амінокислота в позиції 100 важкого ланцюга являє собою A або Q. В одному прикладі винахід належить до фрагмента вказаного антитіла проти фактора D (наприклад, антигензв'язувального фрагмента). В одному варіанті здійснення винахід належить до антитіла проти фактора D, який містить HVRs легких ланцюгів контрольного антитіла, де вказане антитіло проти фактора D додатково містить заміну на одній або декількох позиціях вказаного контрольного антитіла, де вказане контрольне антитіло містить HVR-1 легкого ланцюга, що містить ITSTDIDDDMN (SEQ ID №: 30), HVR-2 легкого ланцюга, що містить GGNTLRP (SEQ ID №: 35), і HVR-3 легкого ланцюга, що містить LQSDSLPYT (SEQ ID №: 38), і вказана заміна являє собою одне або декілька з наступного: (a) амінокислота в позиції 33 легкого ланцюга являє собою L або I, (b) амінокислота в позиції 34 легкого ланцюга являє собою A або Q, (c) амінокислота в позиції 52 легкого ланцюга являє собою S або A, (d) амінокислота в позиції 104 легкого ланцюга являє собою V, (e) амінокислота в позиції 1 важкого ланцюга являє собою E, (f) амінокислота в позиції 99 важкого ланцюга являє собою A або Q, або (g) амінокислота в позиції 100 важкого ланцюга являє собою A або Q. В одному прикладі винахід належить до фрагмента вказаного антитіла проти фактора D (наприклад, антигензв'язувального фрагмента). В одному варіанті здійснення винахід належить до антитіла проти фактора D, який містить HVRs важких ланцюгів контрольного антитіла, де вказане антитіло проти фактора D додатково містить заміну на одній або декількох позиціях вказаного контрольного антитіла, де вказане контрольне антитіло містить HVR-1 важкого ланцюга, що містить GYTFTNYGMN (SEQ ID №: 39), HVR-2 важкого ланцюга, що містить WINTYTGETTYADDFKG (SEQ ID №: 40), і HVR-3 важкого ланцюга, що містить EGGVNN (SEQ ID №: 41), і де вказана заміна являє собою одне або декілька з наступного: (a) амінокислота в позиції 33 легкого ланцюга являє собою L або I, 26 UA 100888 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 (b) амінокислота в позиції 34 легкого ланцюга являє собою A або Q, (c) амінокислота в позиції 52 легкого ланцюга являє собою S або A, (d) амінокислота в позиції 104 легкого ланцюга являє собою V' (e) амінокислота в позиції 1 важкого ланцюга являє собою E, (f) амінокислота в позиції 99 важкого ланцюга являє собою A або Q, або (g) амінокислота в позиції 100 важкого ланцюга являє собою A або Q. В одному прикладі винахід належить до фрагмента вказаного антитіла проти фактора D (наприклад, антигензв'язувального фрагмента). В одному варіанті здійснення винахід належить до антитіла проти фактора D, який містить HVRs легких ланцюгів і HVRs важких ланцюгів контрольного антитіла, де вказане антитіло проти фактора D додатково містить заміну в одній або декількох позиціях вказаного контрольного антитіла, де вказане контрольне антитіло містить HVR-1 легкого ланцюга, що містить ITSTDIDDDMN (SEQ ID №: 30), HVR-2 легкого ланцюга, що містить GGNTLRP (SEQ ID №: 35), і HVR-3 легкого ланцюга, що містить LQSDSLPYT (SEQ ID №: 38), а також HVR-1 важкого ланцюга, що містить GYTFTNYGMN (SEQ ID №: 39), HVR-2 важкого ланцюга, що містить WINTYTGETTYADDFKG (SEQ ID №: 40), і HVR-3 важкого ланцюга, що містить EGGVNN (SEQ ID №: 41), і де вказана заміна являє собою одне або декілька з наступного: (a) амінокислота в позиції 33 легкого ланцюга являє собою L або I, (b) амінокислота в позиції 34 легкого ланцюга являє собою A або Q, (c) амінокислота в позиції 52 легкого ланцюга являє собою S або A, (d) амінокислота в позиції 104 легкого ланцюга являє собою V, (e) амінокислота в позиції 1 важкого ланцюга являє собою E, (f) амінокислота в позиції 99 важкого ланцюга являє собою A або Q, або (g) амінокислота в позиції 100 важкого ланцюга являє собою A або Q. В одному прикладі винахід належить до фрагмента вказаного антитіла проти фактора D (наприклад, антигензв'язувального фрагмента). В одному аспекті винахід належить до модифікованого антитіла проти фактора D, який містить: (a) щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість HVRs, вибраних з: (і) HVR-H1, що містить амінокислотну послідовність, що має щонайменше 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % або 99 % ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю, вибраною з SEQ ID №: 39, (ii) HVR-H2, що містить амінокислотну послідовність, що має щонайменше 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % або 99 % ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю, вибраною з SEQ ID №: 40, (iii) HVR-H3, що містить амінокислотну послідовність, що має щонайменше 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % або 99 % ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю, вибраною з SEQ ID №: 41, SEQ ID №: 42, SEQ ID №: 43, SEQ ID №: 44 і SEQ ID №: 45, (iv) HVR-L1, що містить амінокислотну послідовність, що має щонайменше 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % або 99 % ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю, вибраною з SEQ ID №: 30, SEQ ID №: 31, SEQ ID №: 32, SEQ ID №: 33 і SEQ ID №: 34, (v) HVR-L2, що містить амінокислотну послідовність, що має щонайменше 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % або 99 % ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю, вибраною з SEQ ID №: 35, SEQ ID №: 36 і SEQ ID №: 37, і (vi) HVR-L3, що містить амінокислотну послідовність, що має щонайменше 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % або 99 % ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю, вибраною з SEQ ID №: 38, або (b) щонайменше один варіант HVR, де даний варіант HVR містить модифікацію щонайменше одного залишку послідовності, представленої в SEQ ID №: 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37 або 38. В одному прикладі винахід належить до фрагмента вказаного антитіла проти фактора D (наприклад, антигензв'язувального фрагмента). У деяких варіантах здійснення HVR, що має амінокислотну послідовність, яка має щонайменше 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % або 99 % ідентичності послідовності, містить заміни, вставки або делеції в порівнянні з контрольною послідовністю, однак антитіло, що містить дану амінокислотну послідовність, зберігає здатність зв'язуватися з фактором D. У деяких варіантах здійснення в цілому від 1 до 10 амінокислот були замінені, вставлені або вилучені в контрольній послідовності, вибраній з групи, що складається з SEQ ID 27 UA 100888 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 №: 39, SEQ ID №: 40, SEQ ID №: 41, SEQ ID №: 42, SEQ ID №: 43, SEQ ID №: 44, SEQ ID №: 45, SEQ ID №: 30, SEQ ID №: 31, SEQ ID №: 32, SEQ ID №: 33, SEQ ID №: 34, SEQ ID №: 35, SEQ ID №: 36, SEQ ID №: 37 і SEQ ID №: 38. В одному аспекті винахід належить до модифікованого антитіла проти фактора D, який містить: (a) щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять або шість HVR, вибраних з: (і) HVR-H1, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з SEQ ID №: 39, (ii) HVR-H2, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID №: 40, (iii) HVR-H3, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з SEQ ID №: 41, SEQ ID №: 42, SEQ ID №: 43, SEQ ID №: 44 і SEQ ID №: 45, (iv) HVR-L1, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з SEQ ID №: 30, SEQ ID №: 31, SEQ ID №: 32, SEQ ID №: 33 і SEQ ID №: 34, (v) HVR-L2, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з SEQ ID №: 35, SEQ ID №: 36 і SEQ ID №: 37, і (vi) HVR-L3, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з SEQ ID №: 38, або (b) щонайменше один варіант HVR, де даний варіант HVR містить модифікацію щонайменше одного залишку послідовності, представленої в SEQ ID №: 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37 або 38. В одному прикладі винахід належить до фрагмента вказаного антитіла проти фактора D (наприклад, антигензв'язувального фрагмента). В одному варіанті здійснення винахід належить до модифікованого антитіла проти фактора D, який містить HVR-H1, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID №: 39. В іншому варіанті здійснення винахід належить до модифікованого антитіла проти фактора D, який містить HVR-H2, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID №: 40. В іншому варіанті здійснення винахід належить до модифікованого антитіла проти фактора D, який містить HVRH3, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID №: 41. В іншому варіанті здійснення винахід належить до модифікованого антитіла проти фактора D, який містить HVR-L1, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID №: 30. В іншому варіанті здійснення винахід належить до модифікованого антитіла проти фактора D, який містить HVR-L2, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID №: 35. В іншому варіанті здійснення винахід належить до модифікованого антитіла проти фактора D, який містить амінокислотну послідовність SEQ ID №: 38. В одному прикладі винахід належить до фрагментів зазначених антитіл проти фактора D (наприклад, антигензв'язувальних фрагментів). В іншому варіанті здійснення винахід належить до модифікованого антитіла проти фактора D, який містить HVR-H1, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID №: 39, HVR-H2, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID №: 40, і HVR-H3, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID №: 41. В одному прикладі винахід належить до фрагмента вказаного антитіла проти фактора D (наприклад, антигензв'язувального фрагмента). В іншому варіанті здійснення винахід належить до модифікованого антитіла проти фактора D, який містить HVR-L1, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID №: 30, HVR-L2, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID №: 35, і HVR-L3, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID №: 38. В одному прикладі винахід належить до фрагмента вказаного антитіла проти фактора D (наприклад, антигензв'язувального фрагмента). В іншому варіанті здійснення винахід належить до модифікованого антитіла проти фактора D, який містить HVR-H1, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID №: 39, HVR-H2, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID №: 40, HVR-H3, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID №: 41, HVR-L1, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID №: 30, HVR-L2, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID №: 35, і HVR-L3, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID №: 38. В одному прикладі винахід належить до фрагмента вказаного антитіла проти фактора D (наприклад, антигензв'язувального фрагмента). В одному аспекті винахід належить до модифікованого антитіла проти фактора D, який містить варіабельний домен важкого ланцюга, що містить амінокислотну послідовність, яка має щонайменше 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % або 99 % ідентичності послідовності з амінокислотною послідовністю, вибраною з групи, що складається з SEQ ID №: 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28 і 29. У деяких варіантах здійснення амінокислотна послідовність, що має щонайменше 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 %, 95 %, 96 %, 97 %, 98 % або 99 % ідентичності послідовності, містить заміни, вставки або делеції в порівнянні з контрольною послідовністю, однак антитіло, що містить дану амінокислотну послідовність, зберігає здатність зв'язуватися з фактором D. У деяких варіантах здійснення в цілому від 1 до 10 амінокислот були замінені, вставлені або вилучені в послідовності, вибраної з групи, що складається з SEQ ID №: 28
ДивитисяДодаткова інформація
Назва патенту англійськоюHumanized anti-factor d antibodies and uses thereof
Автори англійськоюHuang, Arthur, J., Kelley, Robert, F., Lowman, Henry, van Lookeren Campagne, Menno, Winter, Charles, M.
Назва патенту російськоюГуманизированное антитело против фактора d и его применение
Автори російськоюХуан Артур Дж., Келли Роберт Ф., Лоумен Генри, Ван Локерен Кампагне Менно, Винтер Чарльз М
МПК / Мітки
МПК: C07K 16/18, C12N 15/13, A61K 39/395, C07K 19/00, A61P 27/02, A61P 37/00
Мітки: фактора, гуманізоване, антитіло, застосування
Код посилання
<a href="https://ua.patents.su/100-100888-gumanizovane-antitilo-proti-faktora-d-ta-jjogo-zastosuvannya.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Гуманізоване антитіло проти фактора d та його застосування</a>
Гуманізоване антитіло, що зв’язується з бета-амілоїдним пептидом (ab), полінуклеїнова кислота, що його кодує, фармацевтична композиція, що його містить, та застосування даного гуманізованого антитіла для вигото
Номер патенту: 75881
Опубліковано: 15.06.2006
Автори: Васкес Максіміліано, Холцмен Дейвід М., Дематтос Роналд, Цурушіта Нойа, Пол Стівен М., Бейлз Келлі Р.
МПК: C12N 15/13, A61P 25/28, C12N 5/10, A61K 39/395, C07K 16/18
Мітки: фармацевтична, бета-амілоїдним, застосування, зв'язується, композиція, гуманізованого, кислота, вигото, антитіло, пептидом, даного, полінуклеїнова, гуманізоване, антитіла, кодує, ab, містить
Формула / Реферат:
1. Гуманізоване антитіло або його фрагмент, до складу якого входять:а) легкий ланцюг, який включає три гіперваріабельні ділянки (CDR) легкого ланцюга, що мають такі амінокислотні послідовності:CDR-1 легкого ланцюга:(Послідовність № 1) або(Послідовність № 15)CDR-2 легкого ланцюга:(Послідовність № 2)та CDR-3 легкого ланцюга:(Послідовність № 3);і каркасну...
Химерне антитіло проти cd40 людини, молекула нуклеїнової кислоти, вектор експресії, фармацевтична композиція для лікування захворювань, опосередкованих т-клітинами, яка містить химерне антитіло
Номер патенту: 71909
Опубліковано: 17.01.2005
Автори: Уоткінс Джеффрі Д., Херріс Лінда Дж., Торн Барбара А., Сайдек Ентоні В., Бейорет Юрген, Аруффо Аледжандро А., Ву Херрен, Беррі Карен К., Холленбау Даєн, Хьюз Уільям Д.
МПК: A61K 39/395, C12N 15/09, A61P 43/00, C07K 14/725, C12N 15/13, A61P 37/02, A61P 29/00, A61P 37/06, C07K 16/28, C07K 14/46, A61P 19/02, C12N 1/21
Мітки: фармацевтична, опосередкованих, нуклеїнової, молекула, яка, людини, химерне, т-клітинами, вектор, експресії, захворювань, лікування, антитіло, композиція, кислоти, містить
Формула / Реферат:
1. Варіабельна ділянка легкого ланцюга химерного антитіла, що зв’язується з CD40 людини, яка містить амінокислотну послідовність SEQ ID NО:1 (Фіг. 4а).2. Варіабельна ділянка важкого ланцюга химерного антитіла, що зв’язується з CD40 людини, яка містить амінокислотну послідовність SEQ ID NО:2 (Фіг. 4b).3. Химерне антитіло, що зв'язується з CD40 людини, яке містить легкий і важкий ланцюг, причому зазначений легкий ланцюг містить ...
Антитіло проти ngf і спосіб його застосування
Номер патенту: 92449
Опубліковано: 10.11.2010
Автори: Шелтон Девід Л., Розенталь Арнон, Понз Хауме
МПК: A61P 37/00, A61K 39/395, C07K 19/00, C07K 16/22
Мітки: застосування, антитіло, спосіб
Формула / Реферат:
1. Антитіло проти фактора росту нервів (NGF) або його фрагмент, що містять(a) варіабельну область важкого ланцюга, що включає:(i) ділянку CDR1 послідовності SEQ ID NO: 30;(ii) ділянку CDR2 послідовності SEQ ID NO: 31;(iii) ділянку CDR3, вибрану із групи, що складається з послідовностей SEQ ID NO: 5, 58, 60, 62 і 64; і(b) варіабельну область легкого ланцюга, що включає:(i) ділянку CDR1 послідовності...
Гуманізоване моноклональне антитіло, що зв’язується з steap-1, та його застосування
Номер патенту: 94628
Опубліковано: 25.05.2011
Автори: Денніс Майкл С., Полакіс Пол, Рубінфелд Бонні, Якобовіц Айя
МПК: A61P 35/00, C07K 16/30, C12N 15/13, A61K 39/395
Мітки: гуманізоване, зв'язується, моноклональне, антитіло, steap-1, застосування
Формула / Реферат:
1. Гуманізоване моноклональне антитіло, що зв'язується з STEAP-1, що містить важкий ланцюг (НС), який містить(1) HVR-H1, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO:14;(2) HVR-H2, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO:15;(3) HVR-H3, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO:16; і(4) HC-FR1, що містить амінокислотну послідовність SEQ ID NO:25.2. Антитіло за п. 1, що додатково містить...
Моноклональне антитіло, химерне антитіло, повністю гуманізоване антитіло, антитіло до антиідіотипічного антитіла або його фрагмент до рецептора ліпопротеїнів низької щільності (лпнщ) людини, спосіб їх одержання
Номер патенту: 78489
Опубліковано: 10.04.2007
Автори: Антонетті Франческо, Дреано Мішель, Бельзер Ілана, Смоларскі Моше, Йонах Начум, Суісса Дані
МПК: C12P 21/08, C12N 5/20, G01N 33/68, G01N 33/577, C07K 16/28
Мітки: гуманізоване, антиідіотипічного, химерне, низької, моноклональне, повністю, лпнщ, фрагмент, спосіб, людини, ліпопротеїнів, антитіла, рецептора, щільності, одержання, антитіло
Формула / Реферат:
1. Моноклональне антитіло, химерне антитіло, повністю гуманізоване антитіло, антитіло до антиідіотипічного антитіла або його фрагмент, що специфічно розпізнає і зв'язує розчинний рецептор ліпопротеїнів низької щільності (ЛПНЩ)людини і його фрагменти, а також здатне інгібувати реплікацію вірусу гепатиту С, і яке одержують шляхом імунізації тварин формою +291 розчинного рецептора ЛПНЩ людини, тобто формою розчинного рецептора людини, що містить...
Попередній патент: Спосіб прокатки заготовок залізничних коліс
Випадковий патент: Горілка