Спосіб тривалої терапії із застосуванням 4-амінопіридину

Реферат: Винахід стосується способу збереження поліпшення ходьби протягом тривалого періоду часу у пацієнта з розсіяним склерозом, який включає введення пацієнту з розсіяним склерозом композиції з уповільненим вивільненням, яка містить 10 міліграмів 4-амінопіридину, два рази на день протягом щонайменше одного року. UA 104307 C2 (12) UA 104307 C2 UA 104307 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Перехресне посилання на споріднені заявки По даній заявці вимагається пріоритет попередньої заявки на патент США 61/151679, що одночасно розглядається, поданої 11 лютого 2009 р.; попередньої заявки на патент США 61/259563, поданої 9 листопада 2009 р.; попередньої заявки на патент США 61/285872, поданої 11 грудня 2009 р.; попередньої заявки на патент США 61/288953, поданої 22 грудня 2009 р. і попередньої заявки на патент США 61/299259, поданої 28 січня 2010 р., які включені в дану заявку як посилання в повному обсязі. Урядові інтереси: не заявляються. Учасники угоди по спільних дослідженнях: не заявляються. Включення шляхом посилання матеріалу, наданого на компакт-диску: не заявляються. Рівень техніки 1. Галузь техніки, до якої належить винахід: не використовується. 2. Опис попереднього рівня техніки: не використовується. Короткий виклад суті винаходу Варіанти здійснення даного винаходу стосуються способів застосування 4-амінопіридину для лікування розсіяного склерозу і його симптомів. Такі варіанти здійснення включають наступне. Представлений спосіб ефективного лікування розсіяного склерозу у пацієнта протягом тривалого періоду часу, який включає введення терапевтично ефективної кількості 4амінопіридину вказаному пацієнту протягом тривалого періоду часу. У іншому варіанті здійснення представлений спосіб довготривалого лікування розсіяного склерозу у пацієнта, який включає введення терапевтично ефективної кількості 4-амінопіридину вказаному пацієнту протягом тривалого періоду часу. У іншому варіанті здійснення представлений спосіб, в якому тривалість довготривалого періоду дорівнює щонайменше або перевищує: 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 або 22 тижні; 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 або 18 місяців; або 1, 2, 3, 4, 5, 6 або більше 5 років. У іншому варіанті здійснення представлений спосіб підтримання поліпшення симптому розсіяного склерозу у пацієнта, який включає введення терапевтично ефективної кількості 4-амінопіридину вказаному пацієнту після попереднього досягнення поліпшення симптому розсіяного склерозу у вказаного пацієнта під час введення 4амінопіридину. У іншому варіанті здійснення представлений спосіб підтримання поліпшеної здатності пересуватися у пацієнта з розсіяним склерозом, який включає введення терапевтично ефективної кількості 4-амінопіридину вказаному пацієнту протягом тривалого періоду часу. У іншому варіанті здійснення представлений спосіб досягнення довготривалого поліпшення швидкості ходьби у пацієнта з розсіяним склерозом, який включає тривале введення терапевтично ефективної кількості 4-амінопіридину вказаному пацієнту протягом тривалого періоду часу. У іншому варіанті здійснення представлений спосіб, в якому вказана терапевтично ефективна кількість 4-амінопіридину складає 10 міліграмів в композиції з уповільненим вивільненням два рази на день. У іншому варіанті здійснення представлений спосіб, в якому вказана терапевтично ефективна кількість 4-амінопіридину досягає Cminss, що дорівнює щонайменше або перевищує: 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 або 20 нг/мл. У іншому варіанті здійснення представлений спосіб, в якому вказана терапевтично ефективна кількість 4амінопіридину досягає середньої Cminss, що дорівнює щонайменше або перевищує: 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 або 20 нг/мл. У одному варіанті здійснення деяка кількість лікарського засобу дається індивідуальному пацієнту (наприклад, величина дози), де величина дози відповідає такій кількості, яка, при введенні в нормальній або контрольній популяції, забезпечує середню Cminss, що дорівнює щонайменше або перевищує: 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 або 20 нг/мл. Рівні в рідинах або тканинах (наприклад, Cminss, Cmaxss, Cavss) в контрольній популяції можуть згадуватися як стандартні значення. У іншому варіанті здійснення представлений спосіб, в якому вказана терапевтично ефективна кількість 4-амінопіридину забезпечує Cminss в діапазоні приблизно від 13 до 15 нг/мл. У іншому варіанті здійснення представлений спосіб, в якому вказана терапевтично ефективна кількість 4-амінопіридину забезпечує Cminss в діапазоні 20 нг/мл. У деяких варіантах здійснення Cminss в діапазоні 20 нг/мл забезпечує Cminss приблизно 20 нг/мл. У іншому варіанті здійснення представлений спосіб, в якому вказана терапевтично ефективна кількість 4-амінопіридину забезпечує Cminss приблизно 20 нг/мл; в деяких варіантах здійснення Cminss, що дорівнює приблизно 20 нг/мл, включає нижнє граничне значення 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 або 20 нг/мл і верхнє граничне значення 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 або 27 нг/мл. У іншому варіанті здійснення представлена композиція, як по суті описано в даній заявці. У іншому варіанті здійснення представлений спосіб, як по суті описано в даній заявці. У іншому варіанті здійснення представлений спосіб поліпшення здатності пересуватися, як по суті 1 UA 104307 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 описано в даній заявці. У іншому варіанті здійснення представлений спосіб лікування симптомів розсіяного склерозу, як по суті описано в даній заявці. У альтернативних варіантах здійснення представлений спосіб лікування розсіяного склерозу у пацієнта, який включає введення терапевтично ефективної кількості 4-амінопіридину вказаному пацієнту, при цьому досягається Cminss в діапазоні від 12 нг/мл до 20 нг/мл. У іншому варіанті здійснення представлений спосіб, в якому вказана терапевтично ефективна кількість 4амінопіридину забезпечує Cminss в діапазоні 20 нг/мл. У деяких варіантах здійснення Cminss в діапазоні 20 нг/мл забезпечує Cminss приблизно 20 нг/мл. У іншому варіанті здійснення представлений спосіб, в якому вказана терапевтично ефективна кількість 4-амінопіридину забезпечує Cminss приблизно 20 нг/мл; в деяких варіантах здійснення Cminss, що дорівнює приблизно 20 нг/мл, включає нижнє граничне значення 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 або 20 нг/мл і верхнє граничне значення 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26 або 27 нг/мл. У іншому варіанті здійснення представлений спосіб лікування розсіяного склерозу у пацієнта, який включає введення терапевтично ефективної кількості 4-амінопіридину вказаному пацієнту, при цьому досягається Cminss, що дорівнює щонайменше або перевищує 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 або 20 нг/мл. У іншому варіанті здійснення представлений спосіб лікування розсіяного склерозу у пацієнта, який включає введення терапевтично ефективної кількості 4-амінопіридину вказаному пацієнту, при цьому досягається Cminss в діапазоні щонайменше від 12 нг/мл до 15 нг/мл. У іншому варіанті здійснення представлений спосіб лікування розсіяного склерозу у пацієнта, який включає введення терапевтично ефективної кількості 4-амінопіридину вказаному пацієнту, при цьому досягається Cminss в діапазоні щонайменше від 13 нг/мл до 15 нг/мл. У іншому варіанті здійснення представлений спосіб, в якому вказану терапевтично ефективну кількість 4-амінопіридину вводять один раз на день, два рази на день або три рази на день. У іншому варіанті здійснення представлений спосіб, в якому вказана терапевтично ефективна кількість 4-амінопіридину складає 10 міліграмів в композиції з уповільненим вивільненням два рази на день. У іншому варіанті здійснення представлений спосіб, в якому вказана терапевтично ефективна кількість 4-амінопіридину забезпечує середню Cminss, що дорівнює щонайменше або перевищує: 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 або 20 нг/мл. У одному варіанті здійснення кількість лікарського засобу дається індивідуальному пацієнту (наприклад, величина дози), де вказана величина дози відповідає такій дозі, яка, при введенні в нормальній або контрольній популяції, забезпечує середню Cminss, що дорівнює щонайменше або перевищує: 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 або 20 нг/мл; рівні в плазмі (наприклад, C minss, Cmaxss, Cavss) в контрольній популяції можуть згадуватися як стандартні значення. У іншому варіанті здійснення представлена композиція, як по суті описано в даній заявці. У іншому варіанті здійснення представлений спосіб, як по суті описано в даній заявці. У іншому варіанті здійснення представлений спосіб підвищення здатності пересуватися, як по суті описано в даній заявці. У іншому варіанті здійснення представлений спосіб лікування симптомів розсіяного склерозу, як по суті описано в даній заявці. Опис креслень Наступні креслення є частиною даного опису і включені з метою більш докладної демонстрації деяких аспектів даного опису. Винахід може бути краще зрозумілий при зверненні до однієї з наданих фігур, в поєднанні з докладним описом деяких варіантів здійснення, представлених в даній заявці. Електронний файл даної заявки на патент може містити щонайменше одну фотографію або фігуру, виконані в кольорі. Копії даної заявки на патент з кольоровою фігурою (фігурами) або фотографією (фотографіями) можуть бути надані Відомством по Патентах і Товарних знаках після запиту і оплати необхідного мита. Для більш повного розуміння суті і переваг даного винаходу, потрібно звернутися до подальшого докладного опису в поєднанні з супроводжуючими кресленнями, в яких: Фігура 1 є гістограмою, на якій показане число відвідувань з метою проведення терапії, при яких пацієнти демонстрували підвищення швидкості ходьби на відрізку довжиною 25 футів на час, в порівнянні зі всіма п'ятьма відвідуваннями без проведення терапії. Фігура 2 є графіком середніх швидкостей ходьби (футів/сек.) на день дослідження (спостережувані випадки, ITT-популяція (популяція, що одержувала призначену терапію)). Фігура 3 є гістограмою процентної зміни середньої швидкості ходьби протягом 12-тижневого періоду з незмінною дозою (спостережувані випадки, ITT-популяція). Фігура 4 є гістограмою процента зареєстрованих респондерів (суб'єктів з середньою зміною швидкості ходьби протягом 12-тижневого періоду при незмінній дозі, що складає щонайменше 20%) в терапевтичній групі (спостережувані випадки, ITT-популяція). Фігура 5 є графіком LEMMT на день дослідження (спостережувані випадки, ITT-популяція). 2 UA 104307 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Фігура 6 є гістограмою змін LEMMT протягом 12-тижневого періоду з незмінною дозою (спостережувані випадки, ITT-популяція). Фігура 7 є гістограмою процента post-hoc респондерів в терапевтичній групі (ITT-популяція) згідно з аналізом респондерів даного винаходу. Фігура 8 є гістограмою процентного відношення респондерів серед суб'єктів плацебо до пулів суб'єктів, що одержували 4-амінопіридин (ITT-популяція), згідно з аналізом респондерів даного винаходу. Фігура 9 є гістограмою валідації змінної post-hoc респондерів з використанням суб'єктивних шкал (спостережувані випадки, ITT-популяція). Фігура 10 є графіком процентної зміни швидкості ходьби при кожному подвійному сліпому відвідуванні в групах аналізу респондерів (спостережувані випадки, ITT-популяція). Фігура 11 є графіком зміни LEMMT при кожному подвійному сліпому відвідуванні в групах аналізу респондерів (спостережувані випадки, ITT-популяція). Фігура 12 є графіком зміни загального бала по шкалі Ашворта при кожному подвійному сліпому відвідуванні в групах аналізу респондерів (спостережувані випадки, ITT-популяція). На Фігурі 13 представлена інформація стосовно 4-амінопіридину. На Фігурі 14 представлена схема і дизайн дослідження, відвідування в дослідженні показані числами в кружках. На Фігурі 15 представлена схема розподілу пацієнтів в рандомізованому випробуванні CONSORT. На Фігурі 16 показані: A) Процент відповідей при ходьбі на час у пацієнтів, що одержували плацебо і 4-амінопіридин (F-SR). B) Процентна зміна швидкості ходьби відносно базового рівня при кожному відвідуванні після рандомізації по групах в аналізі респондерів (ITT-популяція); респондери в ходьбі на час, що одержували 4-амінопіридин, показали стійке поліпшення в ході терапії, яке зазнавало повної реверсії при подальшому контрольному відвідуванні через дві тижня (F-U). F-SR = Фампридин-SR (4-амінопіридин-SR); TW = ходьба на час. Фігура 17: Первинна змінна ефективності: процент респондерів в ходьбі на час в дослідженнях MS-F202, MS-F203, MS-F204 і при їх об'єднанні (спостережувані випадки, ITTпопуляція). Примітка 1: Респондер в ходьбі на час був визначений як пацієнт з більш високою швидкістю ходьби щонайменше в трьох відвідуваннях в ході періоду подвійної сліпої терапії (з усього чотирьох можливих) в порівнянні з максимальною швидкістю для будь-якого з чотирьох відвідувань перед терапією і відвідування через два тижні після терапії. Примітка 2: Для кожного дослідження р-значення при терапії було одержане з моделі логістичної регресії, скоректованої по центру. Дослідження було включене як фактор в об'єднаній моделі. Фігура 18: Клінічна значущість первинної змінної ефективності: середня зміна відносно базового рівня на шкалі MSWS-12 в дослідженнях MS-F202, MS-F203, MS-F204 і при їх об'єднанні (спостережувані випадки, ITT-популяція). Примітка 1: Один ITT нереспондер в ходьбі на час не мав подвійних сліпих оцінок по MSWS-12 в MS-F202. Примітка 2: Негативна зміна по шкалі MSWS-12 (непрацездатність) є показником поліпшення у пацієнта. Примітка 3: MSWS-12 перетворює суму 12 окремих питань по непрацездатності (від 1=зовсім немає до 5=в найвищій мірі) в шкалу 0-100. Фігура 19: Процентне поліпшення середніх значень MSWS-12 для досліджень MS-F202, MSF203, MS-F204 і при їх об'єднанні (спостережувані випадки, ITT-популяція). Скорочення: FNR = "4-амінопіридин-SR нереспондери в ходьбі на час"; FR = "4-амінопіридин-SR респондери в ходьбі на час". Описова статистика: Процентне поліпшення середніх значень було обчислене для кожної групи шляхом ділення середнього значення зміни відносно базового рівня в групі на середнє значення базового рівня в групі, виражених в процентах. Зміна відносно базового рівня була основана на подвійному сліпому середньому. *: р-значення відносно нереспондерів в ходьбі на час 4-амінопіридину-SR основане на середній зміні відносно базового рівня в MSWS12. Примітка: Один ITT плацебо пацієнт не мав подвійних сліпих оцінок по MSWS-12 в MSF202. Фігура 20: Процент пацієнтів із зростаючим середнім процентним збільшенням відносно базового рівня швидкості ходьби за період подвійної сліпої терапії в дослідженнях MS-F202, MS-F203, MS-F204 і при їх об'єднанні, в терапевтичній групі (спостережувані випадки, ITTпопуляція). Фігура 21: Зміна відносно базового рівня (футів/сек.) швидкості ходьби в кінцевій точці подвійного сліпого дослідження MS-F202, MS-F203 і MS-F204 (спостережувані випадки, ITTпопуляція). Скорочення: FNR = "4-амінопіридин-SR нереспондери в ходьбі на час"; FR = "4амінопіридин-SR респондери в ходьбі на час". *: р-значення відносно групи респондерів в ходьбі на час 4-амінопіридину-SR. Примітка: У аналізі кінцевою точкою подвійного сліпого 3 UA 104307 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 дослідження MS-F204 було Відвідування 6 (День 56). Подвійне сліпе відвідування 7 (День 63) використовувалося, передусім, для одержання даних по ефективності і концентрації плазми препарату в кінці нормального 12-годинного інтервалу між прийомом доз. По суті, дане відвідування (Відвідування 7) не було частиною первинного критерію ефективності. Фігура 22: Процентна зміна швидкості ходьби відносно базового рівня при контрольному спостереженні в об'єднаних дослідженнях MS-F202, MS-F203 і MS-F204 (спостережувані випадки, ITT-популяція). Скорочення для даної фігури: FNR = "4-амінопіридин-SR 10 мг два рази на день нереспондери в ходьбі на час"; FR = "4-амінопіридин-SR 10 мг два рази на день респондери в ходьбі на час". *: р-значення відносно групи респондерів в ходьбі на час 4амінопіридину-SR. (Примітка: У контрольному спостереженні 1 для FNR в порівнянні з плацебо р=0,017). Примітка 1: Тільки MS-F203 включало друге контрольне відвідування. Примітка 2 (спостережувані випадки): Для кожного контрольного відвідування чисельність терапевтичної вибірки, представлена в підписах на фігурі, являє собою кількість ITT-пацієнтів з оцінкою вказаної змінної. Фігура 23: Середня процентна зміна швидкості ходьби відносно базового рівня для респондерів в ходьбі на час і нереспондерів в ходьбі на час, які взяли участь в розширених дослідженнях MS-F203 і MS-F203EXT. Фігура 24: Профілі PK в стаціонарному стані в День 8 для індивідуальних пацієнтів з розсіяним склерозом при стандартній дозі 10 мг; PK = фармакокінетика. Фігура 25: MS-F204: Ефективність в кінці циклу дозування; DB = подвійна сліпа терапія; *Довірчі інтервали не показані для ясності. Фігура 26: MS-F204: Залежність концентрації фампридину (4-амінопіридину) в плазмі від часу, що пройшов після введення попередньої дози. Фігура 27: MS-F204: Процентна зміна швидкості ходьби в порівнянні з концентрацією фампридину (4-амінопіридину) в плазмі. Фігура 28: Процентна зміна швидкості ходьби з концентрацією фампридину (4амінопіридину) в плазмі: MS-F204; SEM: стандартна помилка середнього. Фігура 29: PK фампридин-SR (4-амінопіридин-SR) популяції у пацієнтів з розсіяним склерозом; PK = фармакокінетика; MS-F202 (10 мг два рази на день), MS-F203, MS-F204; Середнє значення +/-95%-ий довірчий інтервал. Фігура 30: Об'єднані: Оцінка ефективності в кінці циклу дозування; MS-F202 (10 мг два рази на день), MS-F203, MS-F204; FNR = "Фампридин-SR нереспондери в ходьбі на час"; FR = "Фампридин-SR респондери в ходьбі на час". Фігура 31: Зміна швидкості ходьби у часі: MS-F203 і MS-F203 EXT (фампридин-SR респондери в ходьбі на час і фампридин-SR нереспондери в ходьбі на час); FNR = "Фампридин-SR нереспондери в ходьбі на час"; FR = "Фампридин-SR респондери в ходьбі на час". Фігура 32: Зміна швидкості ходьби у часі: MS-F204 і MS-F204 EXT (фампридин-SR респондери в ходьбі на час і фампридин-SR нереспондери в ходьбі на час); DB = подвійний сліпий; FNR = "Фампридин-SR нереспондери в ходьбі на час"; FR = "Фампридин-SR респондери в ходьбі на час". Фігура 33: Кумулятивне утримання пацієнтів при розширеному дослідженні в групі респондерів в ходьбі на час, в розширеному дослідженні MS-F202EXT; Примітка: NR вказує, що серединне значення не було досягнуте. Випадок вказує на припинення або завершення терапії. Фігура 34: Кумулятивне утримання пацієнтів при розширеному дослідженні в групі респондерів в ходьбі на час, в розширеному дослідженні MS-F203EXT; NR вказує, що серединне значення не було досягнуте. Випадок вказує на припинення або завершення терапії. Фігура 35: Кумулятивне утримання пацієнтів при розширеному дослідженні в групі респондерів в ходьбі на час, в розширеному дослідженні MS-F204EXT; NR вказує, що серединне значення не було досягнуте. Випадок вказує на припинення або завершення терапії. Фігура 36: Середня процентна зміна відносно базового рівня швидкості ходьби в групах респондерів в ходьбі на час в розширених дослідженнях MS-F202/MS-F202EXT; в дослідженні MS-F202, відвідування 3, 5, 6 і 10 були відвідуваннями тільки з метою безпеки; оцінок ефективності не проводили; в дослідженні MS-F202EXT, запланованими відвідуваннями були відвідування 4=14 тижнів; відвідування 6=26 тижнів; відвідування 8=38 тижнів; відвідування 10=50 тижнів; відвідування 12=62 тижні; відвідування 14=74 тижні. Фігура 37: Середня процентна зміна відносно базового рівня швидкості ходьби при кожному відвідуванні, залежно від стану респондерів в вихідному/розширеному дослідженні, для пацієнтів, рандомізованих до фампридину (4-амінопіридину), в дослідженнях MS-F202/MSF202EXT; в дослідженні MS-F202, відвідування 3, 5, 6, і 10 були відвідуваннями тільки з метою 4 UA 104307 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 безпеки; оцінок ефективності не проводили; в дослідженні MS-F202EXT, запланованими відвідуваннями були відвідування 4=14 тижнів; відвідування 6=26 тижнів; відвідування 8=38 тижнів; відвідування 10=50 тижнів; відвідування 12=62 тижні; відвідування 14=74 тижні. Фігура 38: Середня процентна зміна швидкості ходьби відносно базового рівня відносно тих, що одержували плацебо у вихідному дослідженні MS-F202, і респондерів в ходьбі на час в розширеному дослідженні F202EXT; в дослідженні MS-F202, відвідування 3, 5, 6 і 10 були відвідуваннями тільки з метою безпеки; оцінок ефективності не проводили; в дослідженні MSF202EXT, запланованими відвідуваннями були відвідування 4=14 тижнів; відвідування 6=26 тижнів; відвідування 8=38 тижнів; відвідування 10=50 тижнів; відвідування 12=62 тижні; відвідування 14=74 тижні. Фігура 39: Середня процентна зміна швидкості ходьби відносно базового рівня в групах респондерів в ходьбі на час в дослідженнях MS-F203/MS-F203EXT; в дослідженні MS-F203EXT, запланованими відвідуваннями були відвідування 1=2 тижні; відвідування 2=14 тижнів; відвідування 3=26 тижнів; відвідування 4=52 тижні; відвідування 5=78 тижнів; відвідування 6=104 тижні. Фігура 40: Середня процентна зміна швидкості ходьби відносно базового рівня при кожному відвідуванні, залежно від стану респондерів у вихідному/розширеному дослідженні, для пацієнтів, рандомізованих до фампридину (4-амінопіридину), в дослідженнях MS-F203/MSF203EXT; в дослідженні MS-F203EXT, запланованими відвідуваннями були відвідування 1=2 тижні; відвідування 2=14 тижнів; відвідування 3=26 тижнів; відвідування 4=52 тижні; відвідування 5=78 тижнів; відвідування 6=104 тижні. Фігура 41: Середня процентна зміна швидкості ходьби відносно базового рівня відносно тих, що одержували плацебо у вихідному дослідженні MS-F203, і респондерів в ходьбі на час в розширеному дослідженні F203EXT; в дослідженні MS-F203EXT, запланованими відвідуваннями були відвідування 1=2 тижні; відвідування 2=14 тижнів; відвідування 3=26 тижнів; відвідування 4=52 тижні; відвідування 5=78 тижнів; відвідування 6=104 тижні. Фігура 42: Середня процентна зміна швидкості ходьби відносно базового рівня в групах респондерів в ходьбі на час в дослідженнях MS-F204/MS-F204EXT; в дослідженні MS-F204EXT, запланованими відвідуваннями були відвідування 1=2 тижні; відвідування 2=14 тижнів; відвідування 3=26 тижнів; відвідування 4=52 тижні. Фігура 43: Середня процентна зміна швидкості ходьби відносно базового рівня при кожному відвідуванні, залежно від стану респондерів у вихідному/розширеному дослідженні, для пацієнтів, рандомізованих до фампридину, в дослідженнях MS-F204/MS-F204EXT; в дослідженні MS-F204EXT, запланованими відвідуваннями були відвідування 1=2 тижні; відвідування 2=14 тижнів; відвідування 3=26 тижнів; відвідування 4=52 тижні. Фігура 44: Середня процентна зміна швидкості ходьби відносно базового рівня відносно тих, що одержували плацебо у вихідному дослідженні MS-F204, і респондерів в ходьбі на час в розширеному дослідженні F204EXT; в дослідженні MS-F204EXT, запланованими відвідуваннями були відвідування 1=2 тижні; відвідування 2=14 тижнів; відвідування 3=26 тижнів; відвідування 4=52 тижні. Фігура 45: Приклад результату по шкалі MSWS-12 при введенні 4-амінопіридину відповідно до даного винаходу. На Фігурі 46 показана відповідність швидкості ходьби і класу здатності до самостійного пересування. На Фігурі 47 показано збереження поліпшення ходьби в ході дослідження MS-F203. На Фігурі 48 показана попередня статистика досліджень в пацієнто-роках в трьох розширених дослідженнях (MS-F203EXT, MS-F204EXT, MS-F205EXT). На даній діаграмі показаний хід розширених досліджень і кількість пацієнто-років при дозі 10 мг два рази на день з припиненням в листопаді 2008 року. Загальна експозиція протягом даних досліджень при дозі 10 мг два рази на день склала більше 1200 пацієнто-років на листопад 2008 року. На Фігурі 49 представлені обчислені концентрації в плазмі для типового пацієнта з нормальною нирковою функцією, визначеною по CrCl (кліренс креатиніну) вище 80 мл/хв.; вказаний типовий пацієнт був чоловічої статі і, як слід розуміти, трохи більш великим, ніж типовий пацієнт з розсіяним склерозом. Докладний опис Перед описом композицій і способів потрібно згадати, що необхідно розуміти, що даний винахід не обмежується конкретними описаними способами, композиціями або методами, оскільки вони можуть змінюватися. Потрібно також розуміти, що термінологія, використовувана в описі, служить виключно з метою опису конкретних варіантів або варіантів здійснення і не призначена для обмеження обсягу даного винаходу, який обмежується тільки формулою, що 5 UA 104307 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 додається. Якщо не вказане інше, всі технічні і наукові терміни, використовувані в даній заявці, мають такі ж значення, як їх звичайно розуміють середні фахівці в даній галузі техніки. Хоч будь-які способи і матеріали, аналогічні або еквівалентні описаним в даній заявці, можуть застосовуватися при здійсненні або перевірці варіантів здійснення даного винаходу, далі описуються переважні способи, пристрої і матеріали. Всі публікації, заявки на патенти і патенти, вказані в даній заявці, повністю включені шляхом посилання. Ніщо в даній заявці не треба розглядати як допущення того, що винахід не правочинно протиставляти такий опис внаслідок пріоритету винаходу. У описі, кресленнях і таблицях в даній заявці використовується множина термінів. З метою забезпечення повного і послідовного розуміння даного опису і формули наводяться наступні визначення. Оптичні Ізомери - Діастереомери - Геометричні ізомери - Таутомери: Сполуки, описані в даній заявці, можуть містити асиметричний центр і можуть, таким чином, існувати у вигляді енантіомерів. Якщо сполуки згідно з винаходом мають два або більше асиметричних центрів, вони можуть додатково існувати у вигляді діастереомерів. Даний винахід включає всі можливі стереоізомери як по суті чисті розділені енантіомери, їх рацемічні суміші, а також суміші діастереомерів. Формули показані без точно визначеної стереохімії в певних положеннях. Даний винахід включає всі стереоізомери таких формул і їх фармацевтично прийнятні солі. Діастереоізомерні пари енантіомерів можуть бути розділені, наприклад, за допомогою фракційної кристалізації з придатного розчинника, при цьому пара енантіомерів, одержаних таким чином, може бути розділена на індивідуальні стереоізомери стандартними способами, наприклад, за допомогою оптично активної кислоти або основи як розділяючого агента або на хіральній ВЕРХ колонці. Крім того, будь-який енантіомер або діастереомер сполуки загальної формули може бути одержаний за допомогою стереоспецифічного синтезу з використанням оптично чистих вихідних речовин або реагентів з відомою конфігурацією. Використовуваний в даній заявці термін "приблизно" означає плюс або мінус 15, 14, 13, 12, 11, 10% або менше 10% від значення, з яким він використовується. "Приблизно" є включним. Таким чином, в одному прикладі, коли приблизно означає 10%, "приблизно 50%" означає діапазон 45-55% включно. "Введення", при використанні в поєднанні з лікарським засобом, означає введення лікарського засобу безпосередньо в або на цільову тканину або введення лікарського засобу пацієнту, в результаті чого лікарський засіб позитивно діє або надає вплив на тканину, на яку він направлений. Таким чином, використовуваний в даній заявці термін "введення", при використанні в поєднанні із сполукою, може включати, крім іншого, доставку сполуки в або на цільову тканину; доставку сполуки системно пацієнту, наприклад внутрішньовенну ін'єкцію (наприклад, парентеральну) або пероральне введення (наприклад, ентеральне), або місцеве (наприклад, трансдермальне, черезшкірне, за допомогою пластиру, супозиторія), або інгаляційне (наприклад, трансмукозальне) введення, при якому лікарський засіб досягає цільової тканини. "Введення" композиції може бути виконане різними способами, описаними в даній заявці. Крім того, "введення" стосується дії надання або доставки композиції або сполуки пацієнту, що виконується пацієнтом безпосередньо або виконується особою, що здійснює догляд за пацієнтом, наприклад медичним працівником; включаючи акт прийому їжі або застосування пацієнтом або що-небудь подібне, при якій композиція або сполука можуть виявляти свої ефекти. Термін "тварина", використовуваний в даній заявці, включає, крім іншого, людей, а також хребетних крім людини, таких як дикі, домашні і сільськогосподарські тварини. Термін "поліпшення" визначає зміну параметра в необхідному напрямі. Використовуваний в даній заявці термін "поліпшення" також включає стабілізацію параметра, який в іншому випадку міг би погіршитися або змінитися в небажаному напрямі. Термін "інгібування" включає введення сполуки даного винаходу з метою запобігання розвитку симптомів, полегшення симптомів або усунення захворювання, патологічного стану або порушення. "Місцеве введення" означає пряме введення несистемним шляхом на ділянку пошкодження, порушення або болю, що відчувається, або поблизу неї. Під "фармацевтично прийнятним" мається на увазі, що носій, розріджувач або наповнювач повинні бути сумісні з іншими компонентами лікарської форми і не викликати небажаних ефектів у її реципієнта. Термін "проліки" стосується сполук, які піддаються швидкому перетворенню in vivo з утворенням вихідних сполук вищезгаданої формули, наприклад, при гідролізі в крові. Докладний опис наведений в Higuchi T. and Stella V., "Pro-drugs as Novel Delivery Systems", Vol. 14, A.C.S. Symposium Series, а також в Bioreversible Carriers in Drug Design, ed. Edward В. Roche, 6 UA 104307 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987, які включені в дану заявку шляхом посилання. Терміни "пацієнт" і "суб'єкт" означають тварин, включаючи ссавців, а також, в одному варіанті здійснення, людей. Приклади пацієнтів або суб'єктів включають людей, корів, собак, кішок, кіз, овець і свиней. Використовуваний в даній заявці термін "Респондер" загалом є статистичним терміном, і не призначений для вираження існування або відсутності застосовності або забезпечення результату винаходу. Таким чином, індивід може демонструвати корисну відповідь на спосіб винаходу, але в той же час не задовольняти специфічному набору статистичних критеріїв як "Респондер". Термін "солі" стосується відносно нетоксичних солей приєднання неорганічних і органічних кислот сполук даного винаходу. Вказані солі можуть бути одержані in situ в ході остаточного виділення і очищення сполук або шляхом окремої взаємодії очищеної сполуки у формі вільної основи з придатною органічною або неорганічною кислотою і подальшого виділення утворюваної в результаті солі. Репрезентативні солі включають гідробромід, гідрохлорид, сульфат, гідросульфат, нітрат, ацетат, оксалат, валерат, олеат, пальмітат, стеарат, лаурат, борат, бензоат, лактат, фосфат, тозилат, цитрат, малеат, фумарат, сукцинат, тартрат, нафтилат, мезилат, глюкогептаноат, лактобіонат і лаурилсульфат і т. п. Вони можуть включати катіони лужних і лужноземельних металів, такі як катіони натрію, літію, калію, кальцію, магнію і т. п., а також нетоксичний амоній, тетраметиламоній, метиламін, диметиламін, триметиламін, триетиламін, етиламін і т. п. (див., наприклад, Barge S. M. et al., "Pharmaceutical Salts, " J. Pharm. Sci., 1977, 66:1-19, включений в дану заявку шляхом посилання). Використовуваний в даній заявці термін "стаціонарний стан" означає систему, яка має одну або більше властивостей, що залишаються незмінними з перебігом часу, або "стаціонарний стан" означає систему, яка має одну або більше властивостей, що змінюються в межах обмеженого діапазону з перебігом часу. Як правило, стаціонарний стан є більш поширеною ситуацією, ніж динамічна рівновага. Якщо система знаходиться в стаціонарному стані, то нещодавно спостережувані характеристики системи будуть, як правило, зберігатися в майбутньому. У багатьох системах стаціонарний стан не досягається, поки не проходить деякий час після задіювання або ініціації системи. Вказану початкову ситуацію часто називають перехідним станом, періодом титрування, початковим періодом або періодом розігрівання. Використовуваний в даній заявці термін "уповільнене вивільнення", що стосується композицій амінопіридину, включає вивільнення амінопіридину з дозованої лікарської форми з уповільненою швидкістю, в результаті чого терапевтично ефективний рівень в крові зберігається протягом щонайменше приблизно 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30 годин або більше ніж 18 годин, або більше ніж 24 годин, або більше ніж 30 годин. Переважно, кількість амінопіридину в дозованих лікарських формах для перорального застосування згідно з варіантами здійснення даного винаходу забезпечує терапевтично ефективну концентрацію в плазмі або ЦНС при введенні фармацевтичної композиції три рази на день, два рази на день або один раз на день. Терміни "уповільнене вивільнення" і "тривале вивільнення" загалом є синонімічними, якщо з контексту прямо не випливає інше. Використовуваний в даній заявці термін "лікарський засіб" означає засіб, застосовуваний для лікування, боротьби, зменшення інтенсивності, полегшення, запобігання або поліпшення небажаного стану або захворювання пацієнта. Частково варіанти здійснення даного винаходу направлені на лікування розсіяного склерозу і/або будь-якого його симптому. Частково варіанти здійснення даного винаходу направлені на спосіб досягнення терапевтичного результату при розсіяному склерозі і/або будь-якому його симптомі. "Терапевтично ефективна кількість" є кількістю, достатньою для досягнення лікувального або терапевтичного результату. У одному з варіантів здійснення "терапевтично ефективна" кількість сполуки даного винаходу є такою кількістю, яка при введенні, необов'язково в складі фізіологічно переносимої допоміжної композиції, є достатньою для досягнення ефективної системної концентрації або місцевої концентрації в тканині. Використовуваний в даній заявці термін "лікування" включає будь-що з наступного: результат, який зменшує інтенсивність, полегшує, зменшує або запобігає симптомам, пов'язаним із захворюванням або нездужанням, спосіб нормалізації функцій організму при захворюванні або порушеннях, що приводять до погіршення деяких фізичних функцій, або поліпшення одного або декількох клінічно вимірюваних параметрів захворювання. У одному з варіантів здійснення "терапевтично ефективна кількість" є такою кількістю, яка здатна 7 UA 104307 C2 5 10 15 20 25 30 35 забезпечити терапію. Переважно, поліпшення симптомів, пов'язаних з розсіяним склерозом, включає швидкість ходьби, тонус м'язів нижніх кінцівок, силу м'язів нижніх кінцівок і/або м’язову спастичність. У рамках даної заявки терапевтично ефективна кількість може також бути кількістю, достатньою для зменшення болю або м’язової спастичності, пов'язаної з неврологічним порушенням, яке піддається лікуванню. Крім того, терміни "лікувати", "який одержує лікування", "лікування" і тому подібне, використовувані в даній заявці, стосуються і терапевтичного впливу, і профілактичних або запобіжних заходів, мета яких полягає в запобіганні або уповільненні (зменшенні) небажаного фізіологічного стану, порушення або захворювання або в одержанні вигідного або бажаного результату. Результатом може бути, наприклад, медична, фізіологічна, клінічна, фізична терапія, професійна терапія, виконувана медичним працівником або пацієнтом; або параметр, відомий в рівні техніки як "якість життя" або "активність повсякденного життя". У рамках даного винаходу вигідні або бажані клінічні результати включають, крім іншого, полегшення симптомів; зменшення міри тяжкості стану, порушення або захворювання; стабілізацію (тобто не погіршення) стану, порушення або захворювання; затримання розвитку або уповільнення прогресії стану, порушення або захворювання; поліпшення інтенсивності або полегшення стану, порушення або захворювання; і ремісію (часткову або повну), виявлювану або невиявлювану; або поліпшення стану, порушення або захворювання. У одному варіанті здійснення лікування включає індукцію клінічно суттєвої відповіді без перевищення рівнів побічних ефектів. У одному варіанті здійснення лікування також включає збільшення тривалості життя в порівнянні з очікуваною тривалістю життя без одержання лікування. У одному варіанті здійснення лікування стосується введення лікарського засобу або надання медичних процедур пацієнту, в цілях або профілактики (запобігання), для лікування нездужання або хвороби у ураженого пацієнта, або поліпшення клінічного стану пацієнта, включаючи зменшення тривалості захворювання або тяжкості захворювання, або суб'єктивного поліпшення якості життя пацієнта або збільшення тривалості життя пацієнта. Потрібно розуміти, що один або декілька варіантів здійснення "лікування", лікарського засобу або "терапевтично ефективний" можуть існувати спільно. Крім того, сполуки за даним винаходом можуть існувати як в несольватованих, так і в сольватованих формах з фармацевтично прийнятними розчинниками, такими як вода, етанол і т. п. В більшості випадків, сольватовані форми в рамках даного винаходу прирівнюються до несольватованих форм. По суті термін "тканина" стосується будь-якого скупчення клітин з аналогічною дією, які об'єднані при виконанні специфічної функції. Інші терміни і/або скорочення наведені нижче. Скорочення або спеціалізований термін ADME Ае APD30, APD50, APD90 AUC AUC(0-t), AUC(0-∞) або AUC(0-inf) AUC(0-12), AUC(0-24) b.i.d. 14 C CGI CHO CI CL/F CIR см Cmax Cmaxss Cmin Cminss ЦНС Пояснення Поглинання, розподіл, метаболізм і виділення Кількість виділеного лікарського засобу Потенційна тривалість дії 30, 50, 90% Площа під кривою динамічної концентрації Площа під кривою залежності концентрації в плазмі від часу, до останнього вимірного рівня, і екстрапольована до нескінченності Площа під кривою залежності концентрації в плазмі від часу, 0-12 годин, 0-24 години Два рази на день Радіоактивний вуглець 14 Клінічна оцінка загального стану Яєчник китайського хом’ячка Довірчий інтервал Уявний загальний кліренс після введення Нирковий кліренс Сантиметр Максимальна виміряна концентрація в плазмі Максимальна виміряна концентрація в плазмі в стаціонарному стані Мінімальна виміряна концентрація в плазмі Мінімальна виміряна концентрація в плазмі в стаціонарному стані Центральна нервова система 8 UA 104307 C2 CR CrCl CumAe CYP, CYP-450 Далфампридин DAP DER, D-ER ЕКГ EDSS ЕЕГ F Фампридин FOB FSR, F-SR г, кг, мг, мкг, нг GABA GLP год. HDPE hERG ВЕРХ IC50 IKr IND IR в/в (i.v.) + K Kel л, мл РХМС, РХ/МС/МС LD50 LEMMT Ln LOQ М MedDRA хв. мМ, мкM MRT РС MSWS-12 MTD NA ND NDA NE NF NOAEL NOEL норм. NZ рарр p.o. q.d. (qd) SAE SCI Контрольоване вивільнення Кліренс креатиніну Виділена кумулятивна кількість лікарського засобу Ізофермент цитохром p450 Фампридин діамінопіридин Далфампридин тривалого вивільнення, див. також FSR Електрокардіограма Розширена шкала оцінки статусу інвалідності Електроенцефалограма Жінка Далфампридин Серія функціональних тестів Фампридин-SR, Фампридин тривалого вивільнення, 4-амінопіридин уповільненого вивільнення (наприклад, Ампіра (AMPYRA™), Acorda Therapeutics, Hawthorne, NY); також див. D-ER Грам, кілограм, міліграм, мікрограм, нанограм Гамма-аміномасляна кислота Належна лабораторна практика Години Поліетилен низького тиску Ген специфічних калієвих каналів серця людини Високоефективна рідинна хроматографія 50%-на інгібуюча концентрація Калієвий іонний канал, активність якого вимірюють в аналізі hERG Заявка на реєстрацію нового лікарського засобу Швидке вивільнення Внутрішньовенний Калій Константа виведення Літр, мілілітр Рідинна хроматографія/мас-спектрометрія Середня летальна доза Мануальне обстеження м'язів нижніх кінцівок Натуральний логарифм Межа вимірювання Чоловік Медичний словник термінології регулятивної діяльності Хвилини Мілімолярний, мікромолярний Середній час перебування Розсіяний склероз Шкала оцінки ходьби при розсіяному склерозі, що включає 12 пунктів Максимальна переносима доза Не застосовний Не виявлений Заявка на реєстрацію нового лікарського засобу Не піддається оцінці Національний формуляр Рівень відсутності помітних небажаних ефектів Рівень відсутності помітних ефектів Нормалізований Нова Зеландія Уявний коефіцієнт проникності Пероральний Один раз на день Серйозне небажане явище Пошкодження спинного мозку 9 UA 104307 C2 SD сек. SEM SGI SPF SR SS t1/2 T25FW t.i.d. (tid) TK ТШХ Tmax TWR USP UTI Vd Vdss WS 4AP 3,4-DAP 5 10 15 20 25 30 35 Стандартне відхилення Секунди Стандартна помилка середнього Самооцінка загального стану суб'єкта Не містить специфічних патогенів Уповільнене вивільнення Стаціонарний стан Уявний кінцевий елімінаційний період напіввиведення Ходьба на час на дистанції 25 футів Три рази щодня Токсикокінетика Тонкошарова хроматографія Період досягнення максимальної вимірюваної концентрації в плазмі Респондер в ходьбі на час Фармакопея США Інфекція сечовивідних шляхів Об'єм розподілу Об'єм розподілу в стаціонарному стані Швидкість ходьби 4-амінопіридин 3,4-діамінопіридин Розсіяний склероз відомий як аутоімунне захворювання і характеризується наявністю осередків демієлінізації (осередків руйнування мієліну) в ЦНС. Вказана характерна демієлінізація і супутня запальна відповідь приводять до порушення передачі нервових імпульсів або блокування провідності нервових волокон бляшками. Осередки склерозу можуть виникати в різних областях ЦНС, однак найвразливішими областями представляються певні ділянки, такі як зоровий нерв, стовбур мозку, спинний мозок і перивентрикулярна область. Порушена провідність потенціалу дії, ймовірно, здійснює основний внесок в розвиток найбільш поширених симптомів (наприклад, параліч, порушення зору, м’язова слабкість, ністагм, сенсорні порушення і порушення мовлення). Дослідження 4-амінопіридину (далфампридин, фампридин) проводили, використовуючи внутрішньовенне (в/в) введення і лікарські форми у вигляді капсул зі швидким вивільненням (IR) для перорального введення на доповнення до лікарських форм з контрольованим вивільненням або уповільненим вивільненням. Введення IR капсул приводило до швидких і короткочасних піків 4-амінопіридину в плазмі. Перші фармакокінетичні дослідження проводили з використанням лікарських форм зі швидким вивільненням (IR) для перорального введення, які складалися з порошку 4-амінопіридину в капсулі на основі желатину або розчину для перорального введення. Введення приводило до швидкої зміни рівнів 4-амінопіридину в плазмі, що переносилося погано. Потім розробили матричну таблетку з уповільненим вивільненням (наприклад, Фампридин-SR; Ампіра (AMPYRA™), Acorda Therapeutics, Hawthorne, NY). Матрична таблетка з уповільненим вивільненням демонструвала підвищену стабільність і відповідний фармакокінетичний профіль при введенні два рази на день. Композиції 4амінопіридину з уповільненим вивільненням описані, наприклад, в патенті США 5370879, патенті США 5540938; USSN 11/101828; USSN 11/102559. Наприклад, придатні лікарські форми, способи виготовлення, фармакокінетичні властивості композицій амінопіридину з уповільненим вивільненням і способи лікування різних неврологічних порушень додатково описані в заявці на патент США 11/010828, що одночасно розглядається, озаглавленій "Sustained Release Aminopyridine Composition", поданій 13 грудня 2004 р.; і заявці на патент США 11/102559, що одночасно розглядається, озаглавленій "Methods of Using Sustained Release Aminopyridine Compositions", поданій 8 квітня 2005 р.; зміст яких повністю включений в дану заявку шляхом посилання. Дослідження на пацієнтах з розсіяним склерозом (РС), які включали Фазу 1, 2 і 3 клінічних випробувань, показали, що лікарська сполука 4-амінопіридин поліпшує різні неврологічні функції, порушені при вказаному захворюванні, при цьому особливу увагу зосередили на ефектах препарату по поліпшенню здатності до пересування і підвищення сили ніг. У рівні техніки зберігається потреба в способах зменшення інтенсивності ефектів РС або симптомів РС. 10 UA 104307 C2 + 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Сполука 4-амінопіридин являє собою блокатор калієвих (K ) каналів, схвалений Управлінням по контролю продуктів зарчування і лікарських засобів США, для лікування пацієнтів з РС. Як показано на Фігурі 13, далфампридин є офіційним найменуванням в США (USAN) хімічної сполуки 4-амінопіридину (4AP), який має молекулярну формулу C5H6N2 і молекулярну масу 94,1; первинною назвою USAN даної сполуки був фампридин. Терміни "далфампридин", "фампридин" і "4-амінопіридин" використовуються по всьому тексту даного опису для позначення активної речовини лікарського засобу. 4-Амінопіридин одержували у вигляді матричної таблетки з уповільненим вивільненням (SR) або тривалим вивільненням (ER) при різному дозуванні, наприклад від 5 до 40 мг, де переважними в цьому випадку є 5-, 7,5-, 10-, 12,5-, 15-, 17,5 і 20 мг; переважним в цьому випадку є включення 10 мг 4-амінопіридину-SR, що переважно, при введенні два рази на день, інші режими дозування включені в обсяг винаходу, відповідно інші кількості активного компонента в лікарських формах з уповільненим вивільненням також включені в обсяг винаходу. У одному з варіантів здійснення в кожну таблетку звичайно включені наступні наповнювачі: гідроксипропілметилцелюлоза, USP; мікрокристалічна целюлоза, USP; колоїдний діоксид кремнію, NF; стеарат магнію, USP; і опадрай білий. У деяких варіантах здійснення 10 мг 4амінопіридину може бути присутньо в фармацевтичних композиціях, таких як таблетки. + Фармакологічно, блокуючі властивості 4-амінопіридину відносно K -каналів і його ефекти відносно передачі потенціалу дії в препаратах демієлінізованих нервових волокон були широко описані. При низьких концентраціях, які узгоджуються з клінічним досвідом, в діапазоні 0,2-2 + мкM (18-180 нг/мл), 4-амінопіридин здатний блокувати деякі потенціалозалежні K -канали в нейронах. Саме ця особливість, ймовірно, пояснює здатність вказаного лікарського засобу відновлювати передачу потенціалів дії в демієлінізованих нервових волокнах. У більш високих + (мілімолярних) концентраціях 4-амінопіридин діє на інші типи K -каналів, як в нервових + тканинах, так і в інших. Блокада реполяризаційних K -струмів може посилювати синаптичну передачу по всій нервовій системі, збільшуючи тривалість пресинаптичного потенціалу дії. Діапазон неврологічних ефектів, узгоджуваних із збільшеною збудливістю пресинаптичних нервових закінчень, відбувається при клінічно відповідних дозах 4-амінопіридину. + Ефекти відносно блокади аксональної провідності. K -канали, що блокуються 4амінопіридином при низьких концентраціях, частково відповідальні за реполяризацію нейронних потенціалів дії. Вони, ймовірно, включають канали, виявлені під мієліновими оболонками в мієлінізованих нервових волокнах дорослих ссавців. Вказані канали розташовані, передусім, в паранодальній і інтернодальній мембрані аксона, де вони не активуються значною мірою при передачі потенціалу дії, оскільки мієлінові оболонки діють як електричний екран. Тому потенціал дії нормальних зрілих мієлінізованих аксонів демонструє низьку чутливість або відсутність чутливості до 4-амінопіридину при концентраціях нижче 100 мкM (9,4 мкг/мл). Концентрації вище 1 мМ (94,1 мкг/мл) схильні викликати поступову деполяризацію потенціалу спокою аксона, можливо, при взаємодії з каналами витоку. Коли аксон демієлінізований, інтернодальна мембрана і її іонні канали піддаються дії більш високих короткочасних електричних струмів під час потенціалу дії. Витік іонного струму через + K -канал, при описаних умовах, може надавати свій внесок в явище блокади передачі потенціалу дії. 4-Амінопіридин може збільшувати тривалість потенціалів дії нерва, блокуючи вказані відкриті канали і інгібуючи реполяризацію. Це узгоджується зі здатністю вказаного лікарського засобу знімати блокаду провідності і підвищувати захищеність провідності в деяких аксонах з критичною демієлінізацією, включаючи аксони в пошкодженому протягом тривалого періоду і частково ремієлінізованому спинному мозку ссавців. Додаткове дослідження показало, що даний ефект 4-амінопіридину в пошкодженому протягом тривалого періоду спинному мозку морських свинок виникав при пороговій концентрації 0,2-1 мкM (19,1-94,1 нг/мл), хоч в даній тканині він найбільш ефективний при концентрації приблизно 10 мкM (941 нг/мл). Повторна імпульсна активність, спонтанна або у відповідь на одиничні стимули, спостерігається в деяких демієлінізованих аксонах, підданих дії 4-амінопіридину при більш високих рівнях [0,1-1 мМ (9,4-94,1 мкг/мл)] in vitro. Подібний ефект при більш низьких концентраціях в чутливих нейронах або нервових закінченнях може пояснювати парестезію і біль в області внутрішньовенної інфузії, про які повідомляли як про побічні ефекти при клінічному впливі 4-амінопіридину на пацієнтів. Проте, немає ніяких опублікованих даних, які вказують, що повторна спонтанна активність спостерігається в таких нервових волокнах при більш низьких, клінічно відповідних концентраціях в діапазоні 0,25-1 мкM (23,5-94,1 нг/мл). + Необхідно розуміти, що блокада K -струмів посилює синаптичну передачу по всьому головному і спинному мозку. Цілий ряд нейрологічних ефектів спостерігається при підвищенні концентрацій 4-амінопіридину в центральній нервовій системі (ЦНС), аж до виникнення судом. 11 UA 104307 C2 5 10 15 20 25 30 Різні in vitro експерименти на зрізах мозку показали епілептиформні розряди в мигдалині і гіпокампі щурів при нанесенні на тканину розчинів, що містять 5-500 мкM (0,47-47 мкг/мл) 4амінопіридину. Судомну активність у тварин спостерігали після великих доз 4-амінопіридину, при цьому судомна активність є частиною токсикологічного профілю лікарського засобу. Синхронну розривну активність в спинному мозку децереброваних кішок реєстрували після введення дуже великих доз 4-амінопіридину (5-20 мг/кг), які передбачувано дають рівні в плазмі в межах декількох сотень нг/мл. Уперше в даній заявці вказані неврологічні ефекти розкриті як аспект в лікуванні нейрокогнітивного порушення (і супутніх психоневрологічних проблем) і усунені за допомогою способів за винаходом. Абсорбція. 4-Амінопіридин швидко абсорбується після перорального прийому всередину. У дослідженні in situ, 4-амінопіридин швидше абсорбується з тонкої кишки, ніж з шлунка. Напівперіод абсорбції складав 108,8 хвилини і 40,2 хвилини для шлунка і тонкої кишки, відповідно. У дослідженні in vitro з васкулярно перфузованими сегментами кишечнику щура, -6 коефіцієнт регіонарної уявної проникності (papp×10 см/сек.) 4-амінопіридину був високим у верхньому відділі тонкої кишки (22,7 см/сек.) і зменшувався дистально в напрямі товстої кишки (2,9 см/сек.) в порівнянні з погано проникаючим маркером (атенолол; 1,9 см/сек. у верхньому відділі тонкої кишки і 0 см/сек. в товстій кишці). Після перорального введення (неуповільнене вивільнення) 4-амінопіридину пікові концентрації в плазмі у тварин спостерігаються протягом 1 години після дозування. На основі порівнянь областей під кривою залежності концентрації в плазмі від часу (AUC (0-∞)) після в/в і перорального введення 4-амінопіридину (2 мг/кг), біодоступність 4-амінопіридину, як повідомляли, складала приблизно 66,5% у самців щурів і 55% у самиць щурів (M 2001-03). Після перорального введення пікові концентрації в плазмі у самиць були на 38% нижче, ніж у самців, хоч (AUC(0-∞)) і маса тіла були аналогічні; значення AUC у самців і самиць після в/в введення не відрізнялися. 14 Дослідження проводили на щурах і собаках, використовуючи C-мічений 4-амінопіридин (1 14 мг/кг), який давали через зонд у вигляді разової пероральної дози в розчині. У обох видів C-4амінопіридин швидко абсорбувався. Пікові рівні в плазмі були досягнуті в межах 0,5-1 години у обох видів. Пікові рівні в плазмі (Cmax) і міра абсорбції, як відображено AUC, у собаки були приблизно в чотири рази вище, ніж у щура, після введення рівних доз, на основі мг/кг. У даних дослідженнях в обох видах не було ніяких очевидних статевих відмінностей. Вказані результати наведені в Таблиці 1. Таблиця 1 Підсумкові дані по абсорбції для щурів і собак після 14 разового перорального введення 1 мг/кг C-4-амінопіридину Параметр Cmax (мкг/г) Tmax (год.) AUC (мкг·год./мл) t½ (год.) Щури 1 1 Самці (N=3 ) Самки (N=3 ) 0,189±0,0202 0,168±0,0157 1,0 0,5 0,498±0,0176 0,506±0,0633 1,1±0,04 1,4±0,17 Собаки Самці (N=3) Самки (N=3) 0,574±0,1230 0,635±0,1028 1,0±0 0,8±0,3 2,03±0,406 1,92±0,150 2,1±0,14 1,8±0,04 1 В момент часу. 35 40 45 При пероральному введенні 4-амінопіридин повністю абсорбується з шлунково-кишкового тракту. Абсолютна біодоступність IR таблеток двох складів, як повідомляли, склала 95%. Відносна біодоступність таблеток 4-амінопіридину-SR (в порівнянні з водним розчином для перорального введення) склала 95%. Абсорбція проходить швидко, крім введення в модифікованій матриці. При введенні однієї таблетки 4-амінопіридину-SR з дозою 10 мг здоровим добровольцям натщесерце середні пікові концентрації, що варіюють в різних дослідженнях від 17,3 нг/мл до 21,6 нг/мл, спостерігали через 3-4 години після введення (Tmax). У порівнянні, Cmax, досягнута при такій же дозі 10 мг розчину 4-амінопіридину для перорального введення, склала 42,7 нг/мл, спостерігалася через приблизно 1,1 години після введення дози. Вплив зростав пропорційно з дозою, і максимальні концентрації в стаціонарному стані приблизно на 29-37% вище, ніж для разових доз. У Таблиці 2 показана пропорційність дози 25 мг і 10 мг разових доз і відносна біоеквівалентність твердої дозованої пероральної лікарської форми і перорального розчину. 12 UA 104307 C2 Таблиця 2 Підсумкові результати дослідження біодоступності/біоеквівалентності, проведеного на здорових дорослих добровольцях (N=26 з даними) Доза Параметр 10 мг v.s. розчин Доза Буферний Відношення Фампридину SR розчин геометрич. в таблетці (0,83 Середніх* мг/мл) 10 мг 25 мг ln-Cmax 3,77 3,73 43,6 ln-AUC(0-t) 5,21 6,09 5,35 86,7 ln-AUC(0-inf) 5 2,91 5,37 6,17 5,42 94,7 90% CI 41,0746,35 80,6093,26 88,23101,55 (доза, що вводиться) 10 мг v.s. 25 мг Відношення геометрич. Середніх* 104,3 102,1 110,9 90% CI 98,07110,88 94,96109,99 103,20119,25 Пропорційність дози впливу після разових доз 4-амінопіридину-SR представлена в Таблиці 3. Фармакокінетичне розташування після декількох доз 4-амінопіридину-SR показане в Таблиці 4. Таблиця 3 Нормалізовані по дозі значення фармакокінетичних параметрів (середнє±SEM) після разового перорального прийому таблеток 4-амінопіридину-SR пацієнтами з розсіяним склерозом Параметр Cmax-норм* (нг/мл) Tmax (год.) AUC-норм* (нг·год./мл) t½ (год.) Cl/F (мл/хв.) Доза (мг) 10 (n=24) 15 (n=24) 12,6±0,7 12,3±0,7 3,9±0,3 3,6±0,3 122,1±9,4 131,5±7,4 5,6±0,4 5,5±0,4 641,4±39,1 632,4±39,0 5 (n=24) 13,1±0,6 3,9±0,2 122,1±9,4 5,8±0,5 619,8±36,2 20 (n=23) 12,3±0,8 3,6±0,3 127,8±6,9 5,1±0,3 653,9±37,1 *Значення нормалізоване по дозі 5 мг. Таблиця 4 Значення фармакокінетичних параметрів (середнє і 95% CI) після декількох пероральних доз таблеток 4-амінопіридину-SR (40 мг/день, 20 мг два рази на день) у 20 пацієнтів з розсіяним склерозом Параметр День AUC(0-12) Cmax (нг/мл) Tmax (год.) t½ (год.) CI/F (мл/хв.) (нг·год./мл) 48,6 3,8 День 1 NE NE NE (42,0, 55,3) (3,2, 4,3) 66,7 3,3 531 700 День 7/8 NE (57,5, 76,0) (2,8, 3,9) (452, 610) (557, 844) 62,6 3,3 499 5,8 703 День 14/15 (55,7, 69,4) (2,6, 3,9) (446, 552) (5,0, 6,6) (621, 789) NE = Не оцінювали. 10 Розподіл. Об'єм розподілу в стаціонарному стані (Vdss) у щурів, як повідомляли, приблизно відповідав повному об'єму тіла (без корекції по біонакопиченню). Після введення разової р.о. (пероральної) дози 4-аминопіридину (2 мг/кг) самцям і самицям щурів V dss був на 13% нижче у самиць, ніж у самців (1094,4 мл у самців проти 947,5 мл у самиць); проте, відмінність не була 13 UA 104307 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 статистично значущою. Крім того, при корекції з урахуванням відмінностей по масі тіла між самцями і самицями не було відмінності (2%). 14 У дослідженні з разовою дозою щурам вводили C-мічений 4-амінопіридин (1 мг/кг) p.o. Трьох тварин в кожний момент часу, 1, 3, 8 і 24 години після введення дози, умертвляли. Забирали кров і вирізали тканини для визначення радіоактивності. Через годину після введення дози, в момент, приблизно відповідний піковій концентрації в плазмі, радіоактивність реєстрували у всіх взятих тканинах. Кількості відповідали малим процентам від дози; проте, загалом нарахували тільки 58,3% дози. Найбільш високі концентрації були присутніми в печінці (2,6%), нирці (1,6%) і крові (0,7%); 51% радіоактивність виявили в тілі (передусім в шлунковокишковому тракті і скелетно-м’язовій системі). Період напіввиведення з тканин варіював від 1,1 до 2,0 годин. Через 3 години після введення дози, кількість радіоактивності, виявленої у всіх тканинах, була незначною (за винятком тіла, яке містило 15,4% радіоактивних дози). In vitro дослідження проводили з метою оцінки зв’язування з білками плазми в плазмі щура і собаки. Використовували концентрації 4-амінопіридину 5, 50 або 500 нг/мл. 4-Амінопіридин значною мірою був вільний від білків і у всіх трьох протестованих концентраціях містив велику фракцію вільного лікарського засобу. Після 4-годинного діалізу середній процент вільного лікарського засобу варіював від 73 до 94% в плазмі щура і від 88 до 97% в плазмі собаки. Цільові дослідження, що описують розподіл 4-амінопіридину через гематоенцефалічний 14 бар'єр, плаценту або в молоко, не були ідентифіковані. Однак у щура C-мічений 4амінопіридин був виявлений в головному мозку і мозочку при відношеннях тканини до крові 3,07 і 1,48, відповідно, вказуючи на те, що 4-амінопіридин проникав через гематоенцефалічний бар'єр після введення пероральної дози. 4-Амінопіридин виводився з мозку з аналогічною швидкістю, як і з крові. Зокрема, періоди напіввиведення 4-амінопіридину з тканин мозку (мозочок і головний мозок) і крові аналогічні (1,24, 1,63 і 1,21 години, відповідно). 4-Амінопіридин значною мірою вільний від білків плазми (97-99%). При введенні разової внутрішньовенної дози 20 мг середній Vd складає 2,6 л/кг, що значно перевищує загальний об'єм води в тілі, аналогічно значенням, обчисленим у здорових добровольців і пацієнтів з SCI, які одержували таблетки 4-амінопіридину-SR. Динамічний профіль концентрації в плазмі складається з двох або трьох компартментів зі швидкою початковою фазою розподілу. Вимірні рівні присутні в слині. Токсикологія. У дослідженнях токсичності при введенні разової дози і повторних доз режим дозування сильно впливав на рівень смертності і частоту вияву клінічних симптомів у всіх досліджуваних видів (з можливим виключенням миші). Як правило, більш високі рівні смертності і велика частота вияву несприятливих клінічних симптомів були відмічені при введенні 4амінопіридину в разовій високій дозі в порівнянні з тим, коли ту ж повну дозу давали у вигляді двох, трьох або чотирьох рівно розділених субдоз. Токсичні реакції на 4-амінопіридин, що вводиться перорально, швидко розвивалися і частіше за все спостерігалися в межах перших 2 годин після введення дози. Клінічні симптоми, спостережувані після введення високих разових доз або повторних більш низьких доз, були аналогічними у всіх досліджуваних видів і включали тремор, судоми, атаксію, утруднене дихання, розширені зіниці, прострацію, порушення звукоутворення, прискорене дихання, надмірну слинотечу, порушення ходи, а також гіпер- і гіпозбудливість. Перераховані клінічні симптоми не були несподіваними і відповідають фармакології 4-амінопіридину при перевищенні дози. У контрольованих клінічних дослідженнях, що включають застосування 4-амінопіридину, найбільш часті несприятливі явища в організмі відбувалися в нервовій системі, в організмі загалом і в травній системі. Запаморочення, безсоння, парестезія, біль, головний біль і астенія є найбільш поширеними несприятливими явищами в нервовій системі, а про нудоту найчастіше повідомляють в категорії травної системи. ОГЛЯД КЛІНІЧНОЇ ЕФЕКТИВНОСТІ Лікарська форма 4-амінопіридину-SR призначена для лікування пацієнтів з розсіяним склерозом з метою поліпшення ходьби. Погіршення ходьби є помітним виявом розсіяного склерозу; до 85% пацієнтів ідентифікують це як свою первинну скаргу, при цьому нездатність самостійно пересуватися оцінювалася і пацієнтами, страждаючими розсіяним склерозом, і невропатологами як фактор, що здійснює найбільший негативний вплив на якість життя пацієнтів. 4-Амінопіридин-SR представляє новий клас засобів для терапії розсіяного склерозу, відмінний від симптоматичної або імуномодулюючої терапії, де сполука усуває блокаду провідності нервів на фоні демієлінізації, яка є характерним симптомом патофізіології розсіяного склерозу. Хоч деякі з доступних на даний час лікарських засобів для лікування розсіяного склерозу призначаються з метою уповільнення прогресії інвалідизації протягом 14 UA 104307 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 тривалих періодів, на даний момент доступних лікарських засобів, що дозволяють поліпшити функцію демієлінізованої нервової системи або супутніх здатностей, наприклад здатності ходити, в порівнянні з поточним вихідним рівнем, не існує. Дані на підтвердження даного винаходу включають велику програму клінічних досліджень при розсіяному склерозі, що проводиться із застосуванням доз 4-амінопіридину (наприклад, 4амінопіридину-SR) до 40 мг два рази на день. Отже, є цілком достатні клінічні дані відносно застосовності, ефективності і безпеки 4-амінопіридину у випадку його застосування на пацієнтах з розсіяним склерозом. Розсіяний склероз є складним і багатофакторним захворюванням, що зачіпає центральну нервову систему (ЦНС), із змінними і непередбачуваними періодами раптового або тривалого погіршення і тимчасового поліпшення, і може виявлятися в цілому ряді ознак і симптомів з перебігом часу. Безпосередньою причиною функціональних порушень при розсіяному склерозі є блокада провідності аксонів на фоні осередків демієлінізації, які в свою чергу опосередковані аутоімунним процесом невизначеної етіології. У міру прогресії захворювання самі аксони можуть поступово руйнуватися, що приводить до вторинної втрати нейронів в ЦНС. При наростаючому пошкодженні і неповному відновленні пацієнти з розсіяним склерозом звичайно мають ускладнення в ряді областей, що включають, на доповнення до ходьби, когнітивні здатності, тонку координацію рухів рук, силу, енергію, зір, вегетативні функції і настрій, що впливає серйозний чином на їх повсякденну активність і якість життя. Серед перерахованих функцій обмеження в здатності пересуватися розглядаються як такі, що представляють особливу важливість. Ходьба є дуже складною фізичною активністю, яка вимагає інтеграції багатьох неврологічних функцій і працездатності їх відповідних шляхів ЦНС. Вказані функції включають, серед інших, рухову силу, координацію, рівновагу, соматичну чутливість, пропріоцепцію і зір, одна з яких або всі можуть зачіпатися у індивідуального пацієнта з розсіяним склерозом. Тому тести на здатність ходити грають ключову роль в клінічній оцінці РС, як самі по собі, так і в оцінці тяжкості і прогресії захворювання загалом. Тести ходьби, які передусім дозволяють вимірювати витривалість, такі як шестихвилинна ходьба, як було показано, корисні при таких патологіях як серцева недостатність із застійними явищами і хвороба легенів. Проте, є зростаюче підтвердження того, що вимірювання швидкості ходьби є більш надійним підходом для оцінки стану при РС. Повна дистанція, яку може пройти пацієнт з розсіяним склерозом, може значно змінюватися з дня в день, тоді як середня швидкість ходьби, мабуть, є більш постійною. Крім того, на більш довгих дистанціях компенсаторні механізми, що функціонують на більш коротких відрізках, можуть вимикатися, що збільшує варіабельність. У тесті з ходьбою на час на дистанцію 25 футів (T25FW) пацієнта просять пройти даний відносно короткий відрізок якнайшвидше. Було показано, що вказаний тест є чутливим і відтворюваним, вимагаючи при цьому відносно невеликої підготовки і демонструючи малий практичний ефект. Зміна на 20% або більше вважається клінічно значущою. T25FW використовується як один з трьох тестів, включених в шкалу комплексної функціональної оцінки при розсіяному склерозі (MSFC), яка також включає тест з 9 отворами і стрижнями (для оцінки функцій верхньої частини тіла) і слуховий тест на додавання в заданому темпі (PASAT). 1.1 Схема клінічних програм Первинна програма клінічних досліджень для 4-амінопіридину і розсіяного склерозу включала два дослідження ефективності (MS-F203 і MS-F204), одне дослідження з контролем плацебо, для визначення оптимальної дози (MS-F202), одне дослідження з контролем плацебо, для визначення оптимальної дози на ранній стадії (MS-F201), і три тривалих, відкритих, розширених дослідження (MS-F202EXT, MS-F203EXT і MS-F204EXT). Дані дослідження, що розглядаються окремо або разом, підтверджують застосовність і ефективність 4-амінопіридинуSR. Кожне з двох досліджень Фази 3 (MS-F203 і MS-F204) являло собою рандомізоване, подвійне сліпе дослідження в паралельних групах, в якому з плацебо порівнювали 10 мг 4амінопіридину-SR два рази на день. Первинною змінною ефективності була Відповідь в ходьбі на час, визначена як послідовне підвищення швидкості ходьби на основі T25FW (Аналіз респондерів T25FW), де щонайменше в трьох з чотирьох ефективних відвідувань з терапією була показана більш висока швидкість ходьби, ніж найбільша швидкість ходьби, досягнута в п'яти відвідуваннях без терапії (тобто чотири відвідування перед терапією і одне відвідування після терапії, через два тижні після відміни лікарського засобу). Шкалу оцінки ходьби при розсіяному склерозі з 12 пунктів, а також Самооцінку загального стану суб'єкта і Клінічну оцінку загального стану використовували для перевірки клінічної значущості критерію відповіді при 15 UA 104307 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 ходьбі на час. Вторинні змінні ефективності включали швидкість ходьби, бал при Мануальному обстеженні м'язів нижніх кінцівок (LEMMT) і бал по шкалі спастичності Ашворта, причому останні два показники усереднювали для восьми і шести груп оцінки м'язів нижніх кінцівок, відповідно. Тривалість подвійної сліпої терапії, на якій була основана ефективність, склала 14 тижнів в першому дослідженні і 8 тижнів у другому дослідженні. Двотижневий односторонньо сліпий підготовчий період з плацебо передував подвійному сліпому періоду. Дослідження Фази 2 з підбором оптимальної дози (MS-F202) було подвійним сліпим, рандомізованим, з контролем плацебо дослідженням в паралельних групах, з рівнями дози 4амінопіридину-SR 10 мг, 15 мг або 20 мг два рази на день. Пацієнтів титрували до їх рандомізованої дози більше ніж два тижні; і фаза терапії з фіксованою дозою мала тривалість 12 тижнів. Перспективно визначена первинна змінна ефективності була процентною зміною середньої швидкості ходьби відносно базового рівня в тесті T25FW за останні три відвідування при призначеній незмінній дозі. Інші вторинні змінні ефективності були іншими оцінками MSFC (тест з 9 отворами і стрижнями і PASAT 3"), комбінований бал MSFC, LEMMT, Шкала оцінки ходьби при розсіяному склерозі з 12 пунктами (MSWS-12), Шкала оцінки якості життя при розсіяному склерозі (MSQLI), бал по шкалі м’язової спастичності Ашворта, Клінічна оцінка загального стану (CGI) і Самооцінка загального стану суб'єкта (SGI). Дослідження Фази 2 з визначенням оптимальної дози (MS-F201) було подвійним сліпим, рандомізованим, з контролем плацебо дослідженням 4-амінопіридину-SR в дозах, що зростають щотижня з приростом на 5 мг два рази на день, починаючи з 10 мг два рази на день до 40 мг два рази на день, і плацебо. Тривалість подвійної сліпої терапії складала сім тижнів. Було декілька пробних критеріїв ефективності: Коротка шкала оцінки слабкості (BFI), Шкала комплексної функціональної оцінки при розсіяному склерозі (MSFC, яка включає T25FW, Тест з 9 отворами і стрижнями, а також слуховий тест на додавання в заданому темпі або PASAT 3"), Шкала оцінки якості життя при розсіяному склерозі (MSQLI, яка включає змінену шкалу оцінки слабкості), Мануальне обстеження м'язів нижніх кінцівок (LEMMT), бал по шкалі Ашворта, Клінічна оцінка зміни загального стану (CGI) і Самооцінка загального стану суб'єкта (SGI). Три тривалих дослідження (MS-F202EXT, MS-F203EXT, MS-F204EXT) є безперервними багатоцентровими, відкритими розширеними дослідженнями тривалої терапії із застосуванням 4-амінопіридину-SR на пацієнтах з клінічно підтвердженим розсіяним склерозом, які брали участь або в двох дослідженнях Фази 3 або в більш ранніх дослідженнях Фази 2. Оцінками ефективності є ходьба на час на дистанції 25 футів, CGI і SGI при кожному відвідуванні, а також EDSS, що оцінюється кожні два роки. 1.2 Визначення змінних ефективності Первинні змінні Первинні критерії трьох випробувань Фази 2 наведені нижче. У дослідженні MS-F203, первинна змінна ефективності була станом Респондера, основаним на послідовному підвищенні швидкості ходьби в ходьбі на час на дистанції 25 футів. Респондер в ходьбі на час був визначений як пацієнт щонайменше з трьома з чотирьох швидкостей ходьби при терапії, більш високих, ніж найвища швидкість ходьби, досягнута в п'яти відвідуваннях без терапії (тобто чотири відвідування перед терапією і одне відвідування через два тижні після терапії). Тристадійний ступінчатий аналіз, оснований на даній змінній, використовували для встановлення позитивного результату в первинній кінцевій точці і встановлення його клінічної значущості відносно загальної здатності ходити. Перший етап повинен був показати значно більшу пропорцію Респондерів в ходьбі на час в групі 4-амінопіридину-SR в порівнянні з групою плацебо. Другий етап повинен був реєструвати суттєве поліпшення бала MSWS-12 для Респондерів в ходьбі на час в порівнянні з Нереспондерами в ходьбі на час. Третій етап повинен був підтвердити збереження ефекту за допомогою перевірки, чи буде все ще реєструватися у тих пацієнтів, які відповідали на 4-амінопіридин-SR в тесті T25FW, суттєве підвищення швидкості ходьби в порівнянні з пацієнтами, що одержували плацебо в останньому, спостережуваному подвійному сліпому відвідуванні (тобто зміна швидкості ходьби відносно базового рівня в подвійній сліпій кінцевій точці). На Фігурі 47 показані поліпшення швидкості ходьби, знайдені в дослідженні MS-F203: на Фігурі 47, на двох графіках показана середня зміна швидкості ходьби відносно базового рівня в кожному з чотирьох відвідувань за 3 місяці подвійної сліпої терапії. На графіку ліворуч показана зміна швидкості у пацієнтів, що одержували 4-амінопіридин, в порівнянні з плацебо, з демонстрацією суттєвого підвищення швидкості ходьби в групі, що одержувала фампридин, в кінці періоду терапії. На графіку праворуч показане процентне збільшення швидкості ходьби у Респондерів в ходьбі на час, що одержували фампридин (золотистий колір), і у Нереспондерів в ходьбі на час, що одержували 4-амінопіридин (синій колір). Група Респондерів в ходьбі на час показала приблизно 25%-не 16 UA 104307 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 поліпшення за весь період терапії; Нереспондери в ходьбі на час показали поліпшення, аналогічне поліпшенню в групі плацебо, приблизно 7%. Ознак втрати ефективності протягом, наприклад, 12 тижнів, 13 тижнів, 14 тижнів, 3 місяців терапії в даному дослідженні не спостерігалося. Дослідження MS-F203 показало, що підвищення швидкості ходьби, відмічене у Респондерів, що піддавалися терапії, в ходьбі на час, зберігалося, наприклад, протягом 12 тижнів, 13 тижнів, 14 тижнів, 3 місяців терапії. Дані цього розширеного дослідження показали, що більш тривалі періоди, ніж періоди в даному дослідженні, можуть бути ефективними, наприклад, як довготривала і тривала терапія. У дослідженні MS-F204, первинною змінною ефективності також був статус Респондера, оснований на послідовному підвищенні швидкості ходьби в тесті T25FW. Респондера в ходьбі на час визначали як пацієнта з більш високою швидкістю ходьби щонайменше в трьох з перших чотирьох подвійних сліпих відвідувань в порівнянні з максимальною швидкістю ходьби в будьякому з відвідувань перед терапією і у відвідуванні після терапії. У дослідженні MS-F202, первинною змінною ефективності також була процентна зміна середньої швидкості ходьби відносно базового рівня, виміряна за допомогою T25FW. У наступних розділах наведені деталі відносно різних оцінок. Ходьба на час на дистанції 25 футів: тест T25FW є стандартним неврологічним тестом, який використовують для оцінки ступеня тяжкості розсіяного склерозу відносно функції ходьби, яка також відображає більш широку групу неврологічних функцій, що включають силу, координацію, рівновагу і зір. Було показано, що даний тест є чутливим і відтворюваним, вимагає відносно невеликої підготовки і показує невеликий практичний ефект. Більш широку клінічну значущість змін в тесті T25FW перевіряли в ряді досліджень. У двох нещодавніх повідомленнях була показана чітка кореляція між змінами в даному тесті і виявленням у пацієнта порушень неврологічних функцій, викликаних РС, при оцінці за допомогою Шкали неврологічного дефіциту і інвалідності Гая (GNDS). У ході тесту пацієнта просять йти так швидко, як тільки він або вона може йти без ризику, від одного кінця до іншого кінця чітко відміченої дистанції, що не містить перешкод, довжиною 25 футів. При Тесті в ходьбі на час на дистанції 25 футів по можливості намагаються використовувати ту ж кімнату, ту ж позначену зону і температуру повітря при кожному відвідуванні. При необхідності пацієнт може використовувати відповідний попередньо підібраний допоміжний пристрій, такий як палиця або ходунки, однак допоміжні пристрої і взуття повинні залишатися тими ж у всіх відвідуваннях протягом даного тесту. Можливість присутності зовнішніх відволікаючих подразників необхідно по можливості зберігати на мінімальному рівні. Носки взуття пацієнтів повинні стояти на стартовій лінії (позначеній смугою на підлозі), і відлік часу повинен початися при перетині смуги якою-небудь частиною ноги пацієнта. Відлік часу повинен закінчитися, коли яка-небудь частина ноги пацієнта перетне фінішну лінії (позначену смугою на підлозі). Час повинен бути зареєстрований в секундах і округлений до десятих секунди при використанні цифрового секундоміра, передбаченого для дослідження. Задачу треба негайно виконати знов (між випробуваннями максимально допускається п’ятихвилинний період відпочинку), при цьому пацієнт проходить в зворотному напрямі ту ж відстань. У всіх випробуваннях, що розглядаються в даній заявці, тест проводив і реєстрував результати Експерт, який не був повідомлений відносно загальних аспектів клінічного прогресу пацієнтів в дослідженні, включаючи суб'єктивні оцінки сприятливої дії терапії, які реєструвалися окремим Клінічним лікарем. При кожному відвідуванні Експерт обчислював середнє значення для двох виконань задачі. Кожного пацієнта інструктували, щоб він/вона зберігав(ла) свою нормальну активність без підготовки або тренування для поліпшення оцінки при виконанні тесту між відвідуваннями. Вторинні змінні MSWS-12 Шкала оцінки ходьби при розсіяному склерозі з 12 пунктів являє собою оцінну шкалу, що складається з декількох пунктів, спеціально розроблену для застосування існуючих психометричних методів при самозвіті пацієнта, зосередженому на аспектах нездатності до пересування при РС. Шкала дозволяє реєструвати самооцінку здатності пересування пацієнта, що зачіпається при розсіяному склерозі, протягом двох попередніх тижнів. Опитний лист MSWS-12 включає наступні питання. На скільки за 2 останніх тижні Ваш РС: - Обмежував вашу здатність ходити? - Обмежував вашу здатність бігати? - Обмежував вашу здатність підійматися вгору і спускатися вниз по сходах? - Ускладнював перебування в положенні стоячи при виконанні яких-небудь справ? - Обмежував вашу рівновагу в положенні стоячи або при ходьбі? 17 UA 104307 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 - Обмежував, наскільки довго ви можете йти? - Збільшував зусилля, яке вам необхідно прикладати для того, щоб йти? - Примушував вас використовувати опору при пересуванні в приміщенні? - Примушував вас використовувати опору при пересуванні на відкритому повітрі? - Сповільнював вашу ходьбу? - Впливав на плавність вашої ходьби? - Примушував вас концентруватися на вашій ходьбі? Можливими відповідями на кожне питання є: 1 = зовсім ні, 2 = трохи, 3 = помірно, 4 = досить сильно і 5 = дуже. Можливий сумарний бал змінюється в межах від 12 до 60 і перетворюється при аналізі даних в шкалу від 0 (відсутній/немає інвалідності) до -100 (максимальна інвалідність). Шкалу оцінки ходьби при розсіяному склерозі з 12 пунктів (MSWS-12) вибрали для первинного підтвердження клінічної значущості об'єктивних функціональних змін в тесті T25FW, зокрема для перевірки критерію Відповіді в ходьбі на час, використовуваної в базових дослідженнях. MSWS-12 показує чудові характеристики вимірювання, які повністю сфокусовані на функціональній області ходьби, але при цьому охоплюють повний спектр аспектів ходьби в повсякденній діяльності, включаючи знаходження в положенні стоячи, рівновагу, підйом по сходах, пересування в будинку і поза будинком, а також потребу в допомозі. Дана шкала була перевірена в групах хворих розсіяним склерозом і інших, і також є очевидно валідною як критерій при оцінці інформації, одержаної від пацієнта при опитуванні. Мануальне обстеження м'язів нижніх кінцівок (LEMMT) Змінений мануальний м’язовий тест Ради по медичних дослідженнях Великобританії (BMRC) використовується для оцінки сили м'язів білатерально, в чотирьох групах м'язів: згинальних м'язів стегна, згинальних м'язів коліна, розгинальних м'язів коліна і згинальних м'язів гомілковостопного суглоба. Даний тест виконується Експертом. Обстеження починається з того, що пацієнт приймає зручне положення лежачи на спині. Силу кожної групи м'язів оцінюють таким чином: 5,0 = нормальна сила м'язів. 4,5 = вільний рух, що долає суттєвий опір, який прикладається експертом, але не нормальний. 4,0 = вільний рух, що долає помірний опір, який прикладається експертом. 3,5 = вільний рух, що долає слабкий опір, який прикладається експертом. 3,0 = вільний рух, що долає силу ваги, але не опір. 2,0 = вільний рух присутній, але не здатний долати силу ваги. 1,0 = видиме скорочення м'яза або прощупуване, але без руху кінцівки. 0,0 = відсутність якого-небудь вільного скорочення. Клінічна оцінка загального стану (CGI) Клінічний лікар, що веде спостереження, використовував 7-бальну шкалу для оцінки змін неврологічного стану пацієнта після терапії в порівнянні зі станом пацієнта до терапії (без порівняння з попереднім тижнем). Оцінка основана на оцінці клінічним лікарем загального неврологічного стану і загального стану здоров'я пацієнта, пов'язаного з його або її участю в дослідженні (особливо ознаки і симптоми, пов'язані з РС). Можливі відповіді є наступними: 1=дуже значне поліпшення, 2=значне поліпшення, 3=деяке поліпшення, 4=без змін, 5=деяке погіршення, 6=значне погіршення і 7= дуже значне погіршення. Клінічний лікар, що виконує CGI, не повинен виконувати тест з ходьбою на час на дистанції 25 футів, LEMMT або тест по Ашворту. Проте, клінічний лікар може мати доступ до результатів вказаних тестів і до всіх інших клінічних спостережень, оцінюючи прогрес пацієнта відносно вихідного стану. Самооцінка загального стану суб'єкта (SGI) При SGI, основаній на 7-бальній шкалі з градаціями від "жахливо" до "чудово", пацієнта просять оцінити своє враження від впливу лікування в дослідженні на його/її фізичне самопочуття протягом попереднього тижня. Можливі відповіді є наступними: 1=жахливо, 2=незадоволений, 3=більшою частиною незадоволений, 4=невизначено/змішане відчуття, 5=більшою частиною задоволений, 6=задоволений і 7=у захваті. Приділяється увага, щоб даний тест не проводив Експерт, що проводить оцінку пацієнта, який відповідає за проведення об'єктивних функціональних тестів. Оцінка по шкалі Ашворта М’язову спастичність Експерт оцінює при використанні шкали Ашворта. Оцінка по шкалі Ашворта повинна бути одержана перед оцінкою LEMMT і включає шість груп м'язів нижніх кінцівок: згинальні м'язи коліна, розгинальні м'язи коліна і привідні м'язи стегна на правій і лівій 18 UA 104307 C2 5 10 15 стороні тіла. Бал по Ашворту ставлять по шкалі від 0 до 4, з 0 = немає посилення тонусу до 4=кінцівка ригідна при згинанні або розгинанні. Всі Експерти, що проводять тестування по Ашворту, навчені проводити даний тест і використовують ті ж процедури кожного разу при проведенні тестування. По можливості, один і той же Експерт проводить всі тести пацієнта по Ашворту протягом всього періоду дослідження. Якщо постійний Експерт пацієнта недоступний при якому-небудь відвідуванні, резервний Експерт навчається проводити тест таким же способом, і при цьому до дослідження проводять перевірку кореляції оцінок. Інші вторинні змінні Додаткові показники були наступними: MSQLI (комплексна оцінка показників якості життя, що складається з 10 окремих шкал); MSFC, який включає тест T25FW, тест з 9 отворами і стрижнями (кількісна оцінка функції і координації верхніх кінцівок) і Слуховий тест на додавання в заданому темпі (показник когнітивної функції, який оцінює обробку слухової інформації і обчислення); а також Модифікована шкала втоми MFIS (показник втоми). У Таблиці 15 нижче наведений огляд первинних і вторинних змінних ефективності в двох дослідженнях MS-F201 і MS-F202, і в дослідженнях MS-F203 і MS-F204. Таблиця 15 Ефективність і показники здоров’я, використовувані в Дослідженнях ефективності з контролем плацебо Показники Первинна змінна Відповідь при ходьбі на час (щонайменше в 3 відвідуваннях з терапією в тесті T25FW показані більш високі швидкості, ніж найбільша швидкість без терапії) Вторинні змінні Швидкість в тесті T25FW при кожному відвідуванні Тестування м’язів нижніх кінцівок (LEMMT) Оцінка м’язової спастичності (оцінка по Ашворту) Шкала оцінки ходьби при РС з 12 пунктів (MSWS-12) Клінічна оцінка зміни загального стану (CGI) Самооцінка загального стану суб’єкта (SGI) Відповідь >20% серед. підвищення швидкості ходьби Комплексна функціональна оцінка РС Коротка шкала оцінки втоми (BFI) Модифікована шкала втоми (MF1S) Шкала оцінки якості життя MS (MSQLI) 20 25 Дослідження MS-F204 MS-F201 MS-F203 MS-202 X (за час, що пройшов) X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X X 1.3. Статистичні Методи У MS-F203 і MS-F204, первинною змінною ефективності був стан Респондера в ходьбі на час, оснований на постійному підвищенні швидкості ходьби в тесті T25FW. Додатково, MS-F203 вимагало, щоб постійне підвищення швидкості ходьби зберігалося протягом періоду терапії і щоб постійне підвищення швидкості ходьби підтверджувалося як показник клінічної значущості. При виконанні двох вказаних додаткових вимог в MS-F203 (підтвердження клінічної значущості і збереження ефекту), вони не враховувалися як вимоги в MS-F204. У параграфах нижче наведені ключові елементи досліджень MS-F204 і MS-F203. 19 UA 104307 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 1.3.1. Первинна змінна ефективності Респондер в ходьбі на час був визначений як пацієнт з більш високою швидкістю ходьби в тесті T25FW щонайменше в трьох з чотирьох (ефективних) відвідувань протягом періоду подвійної сліпої терапії, в порівнянні з максимальною швидкістю ходьби, досягнутою в будьякому з чотирьох відвідувань перед терапією і у відвідуванні після терапії, через два тижні після припинення терапії. Первинну змінну ефективності аналізували шляхом порівняння дози 4-амінопіридину-SR 10 мг два рази на день, схваленої FDA клінічної дози, з плацебо відносно пропорції пацієнтів з постійними поліпшеннями в швидкості ходьби (Респондери в ходьбі на час). Критерій Кохрана-Мантела-Хенсела, контрольований по центру, використовували для порівняння 4-амінопіридину з плацебо по швидкостях Респондерів в ходьбі на час в звітах вихідних клінічних досліджень. 1.3.2. Вторинні змінні ефективності Цілі аналізу вторинних змінних ефективності були наступними: - Охарактеризувати величину Відповіді в ходьбі на час, порівнюючи зміни швидкості ходьби при терапії між групами аналізу Респондерів в ходьбі на час (плацебо, Нереспондери в ходьбі на час, що одержували 4-амінопіридин, і Респондери в ходьбі на час, що одержували 4амінопіридин). - Підтвердити клінічну значущість критерію Відповіді в ходьбі на час шляхом порівняння суб'єктивних показників сприятливого ефекту (MSWS-12, SGI, CGI) між Нереспондерами в ходьбі на час і Респондерами в ходьбі на час, незалежно від терапії. - Дослідити потенційні відношення між Відповіддю в ходьбі на час і змінами двох інших неврологічних показників, LEMMT і бала по шкалі Ашворта, шляхом порівняння вказаних змін між групами аналізу Респондерів в ходьбі на час (плацебо, Нереспондери в ходьбі на час, що одержували 4-амінопіридин, і Респондери в ходьбі на час, що одержували 4-амінопіридин). Одна з причин аналізу вторинних змінних в методі Респондерів в ходьбі на час, в порівнянні з традиційним підходом порівнянь терапії, полягала в тому, щоб ті пацієнти, у яких, ймовірно, був досягнутий сприятливий ефект, могли бути охарактеризовані з більшою точністю і повнотою, особливо відносно клінічної значущості спостережуваних змін. Крім того, даний метод дозволяв виконати оцінку відношень між Відповіддю в ходьбі на час і змінами двох інших неврологічних показників, LEMMT і бала по шкалі Ашворта. Важливо зазначити, що первинну змінну ефективності (Відповідь в ходьбі на час) аналізували на основі повного ITT порівняння всіх пацієнтів, що одержували 10 мг 4амінопіридину-SR два рази на день, зі всіма пацієнтами, що одержували плацебо. Ціль аналізу вторинних змінних полягала в тому, щоб охарактеризувати відповідь на терапію більш детально, а також дослідити потенційний внесок змін сили ніг і м’язової спастичності в поліпшення, спостережуване в здатності пересуватися. У кожному статистичному плані досліджень MS-F203 і MS-F204 було прямо указано, при використанні покрокового методу тестування, що результати вторинних змінних не будуть враховуватися для значущості, якщо пропорція Респондерів в ходьбі на час в групі, що одержувала 10 мг 4-амінопіридину-SR два рази на день, не буде значно більшою, ніж в групі плацебо. Також було потрібно, щоб будь-які попередні протестовані вторинні змінні були значущими, щоб продовжувати тестування. Таким чином, весь спектр досліджень, в яких використовувався даний покроковий метод тестування, зберігав сумарний рівень значущості ≤0,05. Розглядали наступні об'єктивні і суб'єктивні змінні. - Об'єктивні змінні: зміна швидкості ходьби відносно базового рівня в останньому, зареєстрованому подвійному сліпому (ефективному) відвідуванні (тобто подвійна сліпа кінцева точка); процентна зміна швидкості ходьби відносно базового рівня в кожному подвійному сліпому (ефективному) відвідуванні і усереднена за подвійний сліпий (ефективний) період; зміна LEMMT відносно базового рівня в кожному подвійному сліпому (ефективному) відвідуванні і усереднена за подвійний сліпий (ефективний) період; зміна Середнього бала по шкалі Ашворта відносно базового рівня в кожному подвійному сліпому (ефективному) відвідуванні і усереднена за весь подвійний сліпий (ефективний) період. - Суб'єктивні змінні: середня зміна бала MSWS-12 відносно базового рівня протягом подвійного сліпого (ефективного) періоду; середній бал SGI протягом подвійного сліпого (ефективного) періоду; бал CGI, зареєстрований в кінці подвійного сліпого (ефективного) періоду. 20 UA 104307 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 У оригінальному клінічному дослідженні порівняння групи звітів проаналізували за допомогою дисперсійного аналізу з головними ефектами по групі і центру. Для об'єднаного аналізу дослідження додавали як головний ефект. 1.3.3. Апостеріорні змінні ефективності Ряд апостеріорних досліджень з використанням традиційного визначення відповіді, основаного на пороговій зміні, проводили з метою одержання додаткового свідчення надійності первинних досліджень з використанням критерію Респондерів в ходьбі на час. Для вказаних досліджень пацієнт визначався як "% Респондер" при різних порогах відповіді (при середньому збільшенні швидкості ходьби протягом періоду терапії щонайменше 10, 20% і тому подібне, до 60% відносно базового рівня). Точний критерій Фішера використовували для порівняння 4амінопіридину з плацебо для кожного дослідження і для об'єднаного аналізу. 1.4. Повні результати по ефективності і дозуванню Дані, одержані у всіх індивідуальних клінічних дослідженнях ефективності, виконаних з 4амінопіридином-SR, і об'єднані дані з досліджень MS-F202, MS-F203 і MS-F204, послідовно і без виключення підтримували застосовність і можливість одержання ефективності 4-амінопіридину, наприклад, як терапевтичного засобу для лікування пацієнтів з розсіяним склерозом з метою поліпшення ходьби. Клінічно значуще підвищення швидкості ходьби спостерігали в обох дослідженнях Фази 3 (MS-F203, MS-F204) в більшій пропорції пацієнтів при активній терапії в порівнянні з плацебо, при цьому дана відмінність мала високу статистичну значущість. Одержані результати підтверджувалися більш ранніми спостереженнями в дослідженнях Фази 2. Це є важливим і клінічно значущим сприятливим ефектом, підтверджуваним по поліпшенню самооцінок повсякденної діяльності, пов'язаної з функціональною здатністю пересуватися (MSWS-12), а також по поліпшенню оцінок загального стану суб'єкта, зроблених самим суб'єктом і клінічним лікарем. Подальше підтвердження було забезпечене групою фармакокінетичного/фармакодинамічного дослідження "PK/PD", яке демонструвало відношення між рівнями 4-амінопіридину в плазмі і імовірністю Відповіді в ходьбі на час. Зокрема, було показано, що ефективність не залежить від класифікації захворювання, тяжкості порушення або будь-якої іншої тестованої змінної. Поліпшення обмежувалося не тільки тестом ходьби на час, але спостерігалося також і по інших шкалах, що вимірюють силу ніг і м’язову спастичність, навіть у пацієнтів, не кваліфікованих як Респондери в ходьбі на час в первинній кінцевій точці. Фармакокінетичні/фармакодинамічні дані і дані клінічних досліджень підтвердили, що дозування 10 мг b.i.d. є переважною на даний момент дозою і частотою дозування для 4амінопіридину-SR. Як уперше викладено в даній заявці, було продемонстровано, що ефективність не була тимчасовим поліпшенням, а зберігалася протягом періоду терапії в подвійних сліпих дослідженнях з контролем плацебо. Раніше, в деяких варіантах здійснення введення 4амінопіридину, при використанні препарату застосовували титрування. У ході титрування деякий побічний ефект, як встановили, зменшувався з часом. Як відомо фахівцям в даній галузі, побічний ефект є усього лише ефектом лікарського засобу, який довільно визначається як не дуже бажаний. При титруванні дійсно зменшуються деякі побічні ефекти. Таким чином, до даного винаходу існувало питання відносно тривалого збереження бажаного ефекту (ефектів) терапії із застосуванням 4-амінопіридину. На дане питання остаточна відповідь була дана завдяки цим даним, і відповідь була ствердною: встановлено, що 4-амінопіридин викликає тривалий терапевтичний ефект. Дані довгострокових, відкритих розширених досліджень, в яких брали участь 756 пацієнтів з розсіяним склерозом, з яких більше ніж 330 пацієнтів проходили лікування протягом 2 років або довше (наприклад, вказані люди проходили лікування до 4,4 року на 31 липня 2008 р.; щонайменше 5 років на лютий 2009 р. і щонайменше 6 років на лютий 2010 р.), забезпечують додаткове підтвердження тривало збережуваних сприятливих ефектів. Таким чином, було виявлено, що застосовність і ефективність способів згідно з винаходом зберігалися протягом багатьох періодів тривалістю щонайменше або більше: 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21 або 22 тижнів; 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 або 18 місяців; або 1, 2, 3, 4, 5, 6 або більше 5 років. Функціональне поліпшення, спостережуване в ході терапії із застосуванням 10 мг 4-амінопіридину-SR два рази на день в подвійних сліпих дослідженнях, втрачалося після відміни терапії, причому це відбувалося без ознак синдрому відміни або поновлення симптомів. 2. УЗАГАЛЬНЕНІ РЕЗУЛЬТАТИ ІНДИВІДУАЛЬНИХ ДОСЛІДЖЕНЬ У даному розділі представлений докладний огляд результатів всіх досліджень ефективності, що проводяться на пацієнтах з розсіяним склерозом із застосуванням 4 21 UA 104307 C2 5 амінопіридину-SR. У Таблиці 16 нижче наведений структурний огляд досліджень і короткий опис результатів кожного дослідження. Тут наводиться оцінка об'єднаних даних досліджень ефективності MS-F202, MS-F203 і MS-F204. У зв'язку з виключно описовою природою аналізу даних розширених досліджень, вони були скомбіновані для всіх трьох розширених досліджень в кінці даного розділу. Таблиця 16 Загальна схема досліджень 4-амінопіридину-SR MS-F202, MS-F203 і MS-F204 (MSWS-12 = Шкала оцінки ходи при розсіяному склерозі з 12 пунктів; SGI = Самооцінка загального стану суб’єкта; CGI = Клінічна оцінка загального стану; LEMMT = Мануальне обстеження м’язів нижніх кінцівок) Тривалість дослідження (тижні) № дослідження назва протоколу, схема Кількість пацієнтів MS-F202: Подвійне сліпе, з контролем плацебо, 20тижневе, дослідження в паралельних групах для оцінки безпеки, звикання і активності при пероральному прийомі всередину 4амінопіридинуSR у хворих розсіяним склерозом 211 включено 206 Рандомізовано (47, плацебо; 52, 10 мг два рази на день 50, 15 мг два рази на день 57, 20 мг два рази на день 4Схема: амінопіридинуПодвійне сліпе, SR) рандомізоване, з контролем плацебо, дослідження з порівнянням доз MS-F203: 304 включено Подвійне сліпе, 301 Доза, режим, шлях Подвійний Загальна сліпий тривалість період досліджень FAM-SR Табл.; 10, 15, 20 мг; два рази на день; перор. 15 тижнів FAM-SR Табл.; 14 тижнів 21 тиждень 22 20 тижнів Результати досліджень Первинні Проспективні первинні результати: процентна зміна середньої швидкості ходьби відносно базового рівня, виміряна за допомогою тесту з ходьбою на годину на дистанції 25 футів Апостеріорний аналіз респондерів: Збереження підвищення швидкості ходьби (Відповідь в ходьбі на годину). Респондер був визначений як пацієнт, який мав більш високу швидкість ходьби щонайменше в трьох з чотирьох відвідувань протягом подвійного сліпого періоду у порівнянні з максимальною швидкістю у всіх п’яти з подвійних сліпих відвідувань без терапії Проспективний первинний Вторинні Проспективні вторинні результати: критерій відповіді оснований на середньому підвищенні >20% швидкості ходьби протягом подвійного сліпого періоду терапії; середньому поліпшенні бала в Мануальному обстеженні м’язів нижніх кінцівок (LEMMT) і тесті з 9 отворами і стрижнями; балах в Слуховому тесті на додавання в заданому темпі (обидва з Шкали комплексної функціональної оцінки РС MSFC); комбінований бал MSFC; тест м’язової спастичності (бал по шкалі Ашворта); Клінічна оцінка зміни загального стану (CGI); Самооцінка загального стану суб’єкта (SGI); Шкала оцінки ходи при РС з 12 пунктів (MSWS12); Шкала оцінки якості життя при розсіяному склерозі (MSQLI) Проспективний покроковий аналіз UA 104307 C2 З контролем плацебо, 21тижневе дослідження в паралельних групах для оцінки безпеки і ефективності перорального введення 4амінопіридинуSR (10 мг два рази на день) у суб’єктів з розсіяним склерозом Схема: Подвійне сліпе, рандомізоване дослідження, з контролем плацебо MS-F204: Подвійне сліпе, з контролем плацебо, дослідження в паралельних групах для оцінки безпеки і ефективності перорального рандомізовано (72, плацебо; 229, 10 мг два рази на день 4амінопіридинуSR) 10 мг; два рази на день; Всередину перор. 240 включено 239 рандомізовано (119, плацебо; 120, 10 мг два рази на день 4амінопіридинSR) FAM-SR Табл.; 10 мг; два рази на день; Всередину пероральн. 9 тижнів 23 14 тижнів результат, як визначено в SPA: Відповідь в ходьбі на годину оснований на Тесті з ходьбою на годину на дистанції 25 футів. Респондер був визначений як пацієнт, який мав більш високу швидкість ходьби щонайменше в трьох з чотирьох відвідувань під час подвійного сліпого періоду у порівнянні з максимальною швидкістю в перших п’яти подвійних сліпих відвідуваннях без терапії Додаткові вимоги SPA: Збереження ефекту, визначеного як значно больш підвищені швидкості ходьби при останній подвійній сліпій оценці у Респондерів в ходьбі на час, що одержують 4амінопіридин-SR, у порівнянні з пацієнтами, що одержують плацебо. Перевірка критерію Відповіді в ходьбі на час статистично значущо більше поліпшення бала MSWS-12 у Респондерів в ходьбі на час у порівнянні з Нереспондерами в ходьбі на час. Проспективний первинний результат як визначено в SPA: Відповідь в ходьбі на час, основанный на Тесті з ходьбою на час на дистанції 25 вторинних результатів: ·Зміна відносно базового рівня в LEMMT, усереднена за подвійний сліпий період терапії і порівняна окремо для Респондерів в ходьбі на час і Нереспондерів в ходьбі на час ·Зміна відносно базового рівня середнього бала по шкалі Ашворта за подвійний сліпий період терапії і порівняна окремо для Респондерів в ходьбі на час і Нереспондерів в ходьбі на час Проспективний вторинний результат: Середня зміна відносно базового рівня в LEMMT протягом восьмитижневого подвійного сліпого періоду терапії, UA 104307 C2 введення 4амінопіридинуSR (10 мг два рази на день) у пацієнтів з розсіяним склерозом Схема: Подвійне сліпе, рандомізоване дослідження з контролем плацебо 5 10 15 20 25 футів. Респонденр був визначений як пацієнт, який мав більше високу швидкість ходьби щонайменше в трьох из перших чотирьох відвідувань во час подвійного сліпого періоду у порівнянні з максимальной швидкістю во всех п’яти подвійних сліпих відвідуваннях без терапії. що порівнює Респондерів в ходьбі на час і Нереспондерів в ходьбі на час окремо і послідовно з одержуючими плацебо пацієнтами. Фармакокінетичні дані потрібно було зібрати в додаткове п’яте подвійне сліпе відвідування з терапією (Відвідування 7), яке не було частиною аналізу загальної ефективності. Додаткові оцінки, що включають MSWS-12, SGI, CGI і бал по шкалі Ашворта, були зібрані в рамках об’єднаного аналізу з іншими дослідженнями і не були формальними вторинними результатами. 2.1. MS-F201 Тридцять шість пацієнтів рандомізували і тридцять один пацієнт (86%; 20/25 4амінопіридин-SR, 11/11 плацебо) був включений в дослідження. Зміна бала LEMMT відносно базового рівня була значущою між групами терапії, за тижні дослідження, згідно з оцінкою за допомогою дисперсійного аналізу (ANOVA) з повторними вимірюваннями (р=0,01). Зміна часу, необхідного для виконання тесту T25FW, відносно базового рівня не була значущо різною між групами терапії за тижні дослідження або в кінці дослідження, згідно із запланованим аналізом. На основі ретроспективного аналізу ефекту значень, що виходять за межі, протягом часу ходьби, зворотну величину часу ходьби (швидкість ходьби) ідентифікували як придатне перетворення, щоб поліпшити нормальність даних. Результуючий апостеріорний аналіз відносно змін швидкості ходьби відносно базового рівня показав значущість (р=0,03) з перевагою групи, що одержувала 4-амінопіридин, протягом тижнів дослідження, згідно з оцінкою за допомогою дисперсійного аналізу з повторними вимірюваннями. Підвищення швидкості ходьби, спостережуване в даному дослідженні, виявилося максимальним при рівні дози 20 мг два рази на день і зберігалося, але не збільшувалося при подальшому збільшенні дози. 2.2. MS-F202 У загальній складності 206 пацієнтів з розсіяним склерозом були рандомізовані, і 195 включені в групу терапії (50/52 з дозою 10 мг 4-амінопіридину-SR b.i.d., 49/50 з дозою 15 мг два рази на день, 51/57 з дозою 20 мг два рази на день і 45/47 з плацебо). Проспективно визначена первинна змінна ефективності була процентною зміною середньої швидкості ходьби відносно базового рівня в тесті T25FW, в останніх трьох відвідуваннях з призначеною дозою (Відвідування 7-9, посттитрування, період з незмінною дозою). Вторинна змінна ефективності була відповіддю, визначеною як 20%-не або більше підвищення швидкості ходьби протягом 12тижневого подвійного сліпого періоду терапії з незмінною дозою (тобто вимірювання при Відвідуваннях 7-9). Інші вторинні змінні ефективності були іншими оцінками MSFC (тест з 9 отворами і стрижнями і PASAT 3"), комбінованим балом MSFC, LEMMT, MSWS-12, MSQLI, балом по шкалі м’язової спастичності Ашворта, CGI і SGI. 24 UA 104307 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Середнє процентне підвищення швидкості ходьби для кожної з груп, що одержували 4амінопіридин-SR, в числовій формі перевищувало відповідний показник, спостережуваний в групі плацебо: 1,2% (плацебо), 7,5% (10 мг два рази на день), 9,7% (15 мг два рази на день) і 6,9% (20 мг два рази на день), відповідно. Крім того, процент пацієнтів, які задовольняли заданий критерій відповіді (середня зміна швидкості ходьби відносно базового рівня складає щонайменше 20%) також був вище в групах, що одержували 4-амінопіридин-SR, ніж в групах плацебо: 12,8% (плацебо), 23,5% (10 мг два рази на день), 26,0% (15 мг два рази на день) і 15,8% (20 мг два рази на день). Статистична значущість була одержана для вторинного критерію ефективності, сили м'язів нижніх кінцівок, оціненої за допомогою Мануального обстеження м'язів нижніх кінцівок або LEMMT. Всі три групи, що одержували різні дози 4амінопіридину-SR, показали більше середнє збільшення сили м'язів нижніх кінцівок відносно базового рівня в порівнянні з групою плацебо, причому відмінності були статистично значущі для груп, що одержували дози 4-амінопіридину-SR 15 мг і 10 мг, в порівнянні з плацебо (р