Спосіб виробництва м’яса свиней, великої та малої рогатої худоби, що має поліпшені органолептичні властивості, і набір для анти-лгрг вакцинації

1. Способ производства мяса свиней, крупного и мелкого рогатого скота, имеющего улучшенные органолептические свойства, в частности, улучшенный запах, вкус и нежность, предусматривающий откорм некастрированных мужских особей указанных домашних животных и активную иммунонейтрализацию этих особей с использованием анти-ЛГРГ вакцины, отличающийся тем, что для поддержания преимуществ, обеспечиваемых мужской природой этих особей, по существу до их убоя, до или во время периода откорма этих животных, им делают однократную анти-ЛГРГ вакцинацию, предназначенную для вызывания первой, слабой иммунной реакции без заметного или даже измеримого действия на секрецию половых стероидов, а незадолго до убоя им дают антиЛГРГ вакцину для вызывания анти-ЛГРГ иммунонейтрализации, приводящей к подавлению или значительному снижению секреции стероидов. 2. Способ по п.1, отличающийся тем, что вакцину, вводимую при первой вакцинации, и вакцину, вводимую незадолго до убоя, выбирают из эмульсионных вакцин и вакцин в водном адъюванте. 3. Способ по п.1 или 2, отличающийся тем, что в качестве анти-ЛГРГ вакцины, вводимой при первой вакцинации, используют эмульсионную вакцину. 4. Способ по одному из пп.1 - 3, отличающийся тем, что в случае свиней, анти-ЛГРГ вакцину незадолго до убоя вводят с водным адъювантом. 5. Способ по п.4, отличающийся тем, что в качестве водного адъюванта используют гель гидроксида алюминия и/или сапонин. 6. Способ по п.4 или 5, отличающийся тем, что указанную вакцину в водном адъюванте вводят за 15 - 21 дней до убоя. C2 (54) СПОСІБ ВИРОБНИЦТВА М'ЯСА СВИНЕЙ, ВЕЛИКОЇ ТА МАЛОЇ РОГАТОЇ ХУДОБИ, ЩО МАЄ ПОЛІПШЕНІ ОРГАНОЛЕПТИЧНІ ВЛАСТИВОСТІ, І НАБІР ДЛЯ АНТИ-ЛГРГ ВАКЦИНАЦІЇ 40570 18. Способ по п.16 или 17, отличающийся тем, что указанное вещество вводят за пять - пятнадцать дней до убоя, путем подкожного или внутримышечного введения. 19. Способ по одному из пп.1 - 18, отличающийся тем, что указанное вещество вводят подкожно, предпочтительно в нескольких местах, с использованием безыгольного инъектора. 20. Способ по одному из пп.1 - 19, отличающийся тем, что анти-ЛГРГ вакцину вводят первый раз перед периодом откорма животного. 21. Способ по одному из пп.1 - 11, отличающийся тем, что вводят вакцину, содержащую иммуногенное активное начало, содержащее пептид ЛГРГ. 22. Набор для анти-ЛГРГ вакцинации, который может быть использован для производства мяса некастрированных свиней, крупного и мелкого рогатого скота, имеющего улучшенные органолептические свойства, содержащий: - анти-ЛГРГ вакцину, предназначенную для введения первой, перед или во время стадии откорма животных, и предназначенную для вызывания первой, слабой иммунной реакции без заметного или даже измеримого действия на секрецию половых стероидов, чтобы могла развиться мужская природа данных животных, и - анти-ЛГРГ вакцину, предназначенную для введения после первой вакцины и лишь незадолго до убоя, а при этом предназначенную для вызывания анти-ЛГРГ иммунонейтрализации, вызывающей подавление или значительное снижение секреции стероидов. 23. Набор для вакцинации по п.22, отличающийся тем, что указанные вакцины содержат в качестве активного начала конъюгат иммуногенного белка - носителя и пептид ЛГРГ. 24. Набор для вакцинации по п.23, отличающийся тем, что пептид ЛГРГ выбирают из группы, состоящей из: - общего или модифицированного ЛГРГ, - пептидного фрагмента ЛГРГ, который может быть модифицирован или нет, - агониста ЛГРГ. 25. Набор для вакцинации по п.23 или 24, отличающийся тем, что иммуногенный белок - носитель выбирают из группы, состоящей из: - сывороточного альбумина, - тироглобулина, - овальбумина, - анатоксинов, - столбнячного анатоксина, - лошадиных глобулинов, - человеческих глобулинов, - альфа - глобулинов. 26. Набор для вакцинации по одному из пп.22 - 25, отличающийся тем, что анти-ЛГРГ вакцина, подлежащая введению первой, является вакциной в форме эмульсии. 27. Набор для вакцинации по одному из пп.22 - 26, отличающийся тем, что анти-ЛГРГ вакцина, предназначенная для введения незадолго до убоя, является вакциной в форме эмульсии. 28. Набор для вакцинации по п.26 или 27, отличающийся тем, что вакциной в форме эмульсии является вакцина в форме эмульсии типа "вода - в - масле". 29. Набор для вакцинации по одному из пп.26 - 28, отличающийся тем, что указанная вакцина в форме эмульсии изготовлена из смеси минеральных масел и неионных поверхностно - активных веществ. 30. Набор для вакцинации по одному из пп.22 - 26, отличающийся тем, что анти-ЛГРГ вакцина, предназначенная для введения незадолго до убоя, является вакциной с адъювантом водного типа. 31. Набор для вакцинации по п.30, отличающийся тем, что адъювант водного типа выбран из группы, состоящей из геля гидроксида алюминия, сапонина или их смеси. 32. Набор для вакцинации по одному из пп.22 - 26 и 30, 31, отличающийся тем, что предназначен для свиней, а анти-ЛГРГ вакцина для введения незадолго до убоя, является вакциной с адъювантом водного типа. 33. Набор для вакцинации по одному из пп.22 - 29, отличающийся тем, что предназначен для крупного и мелкого рогатого скота, а анти-ЛГРГ вакцина для введения незадолго до убоя, является вакциной в форме эмульсии. 34. Набор для вакцинации по одному из пп.22 - 33, отличающийся тем, что он содержит идентичное количество доз каждой вакцины в одной упаковке. 35. Набор для вакцинации по п.22 или одному из пп.26 - 34, отличающийся тем, что указанные анти-ЛГРГ вакцины содержат иммуногенное активное начало, содержащее пептид ЛГРГ. _______________________ Настоящее изобретение относится к способу улучше ния органолепти ческих качеств, особенно запаха, вк уса и нежности, мяса некастрированных самцов домашних животных, в частности, бычков баранов и хря ков. Изобретение также относится к вакцинам, пригодным для использования по этому способу, к новому пептиду для получения таких вакцин и к набору для вакцинации по указанному способу. Преимущества использования интактных самцов по сравнению с кастрированными при откармливании домашних животных, предназначенных для производства мяса, подчеркиваются спе циалистами по зооте хнике в течение нескольких десятилетий. Это касается большей скорости роста, особенно у бычков и баранов, лучшей ути лизации пищевого рациона и соединительно-тканных образований, которые постнее, но лучше соотносятся с мышечной массой у всех ви дов домашних животных (S.C.Seideman et al., J. of Animal Science, 1982, 55 (4) 826–840 и M. Bonneau, INRA Prod. Anim. 1988, 1(2), 133–140). Основные недостатки использования интактных самцов подчеркнутые в выше упомянутых обзорах, свя заны с неприятным запахом и вкусом мяса хряков и баранов и с меньшей нежностью 2 40570 мяса интактных бычков и баранов, что оправдывает существующую практику хи рур гической кастрации. Фактически, хотя андрогенные стероиды, включая андростендиол, андростендион и тестостерон, являются решающи ми факторами в преимуществах, имеющи хся у все х ви дов домашних животных, в отношении ускоренного роста и лучшей усвояемости пищевого рациона, они несут ответственность за меньшую нежность мяса интактных бычков и баранов. Неандрогенные стероиды или производные 16-андростена, включая 5a-андросте нон (5a-андрост-16-ен-3-он), в частности, ответственны за неприятный запах и вкус мяса многих интактных хряков, достигши х половой зрелости, эти факто ры ухудшают качество мяса и являются препятствием для продажи его в свежем виде. Скатол, продукт обмена триптофа на и жизнедеятельности микрофлоры кишечника, является соединением, частично ответственным за неприятный запах и вкус мяса интактных хряков. Его образование зависит от факто ров окружающей среды, питания и породы. Накопление его в жировой ткани выше у хряков и считается зависящим от секреции половых сте роидных гормонов. В эксперименте уже предпринималась попытка уменьшить или исключить развитие мужских половых признаков у молодых животных или нарушить секрецию гормонов яичек, в частности, тестикулярных стероидов, путем активной или пассивной иммунизации против эти х гормонов или против гор монов, участвующих в их секреции, в частности, против лютеинизирующе го гормона (ЛГ) и гормона гонадолиберин (ГРГ), также известного как гормон, высвобождающий лютеинизирующий гормон (ЛГРГ). Также проводились на свиньях исследования по снижению уровня 5a-андростенона в тканях (гормона из группы 16-андростена) путем активной иммунизации против этого соединения (E.D. Williamson – et al., Livestock Production Science, 1985, 12, 251–264) или пассивной иммунизации против это го же соединения (R. Claus, Immunization uith Hormones in Reproduction Research, ed., Nieschlag, 1975). Можно добиться прекраще ния или снижения секреции тестикулярных стероидов при помощи иммунонейтрализации гонадотропного гормона ЛГ, специфи ческого для данного вида (R.E. Falvo et. al., J. Anim. Science, 1986, 63, 986–994), или путем анти-ЛГРГ иммунонейтрализации эндогенного ЛГРГ. Различные авторы рекомендуют только активную анти-ЛГРГ иммунизацию. Этим способом было получено снижение уровня a-андросте нона у свиней (A. Caraty and M. Bonneau, C.R. Acad. Sci. Paris 1986, 303, Series III (16) 673–676; R.E. Falvo et al., J. Anim. Sci., 1986, 63, 986–994). B.D. Schanbacher (Am. J. Ph ysiol., 1982, 242, E201–E205) рекомендует анти-ЛГРГ иммунизацию, чтобы задержать развитие яичек и вызвать эффект кастрации у молодых ба рашков. АнтиЛГРГ иммунологическая кастрация телят описывается в работе P.S. Robertson (Vet. Rec., 1979, 105, 516–517). Исследования анти-ЛГРГ иммунонейтрализации у лабораторных животных (Arimura et al., Endocrinology, 1973, 93, 1092–1103; Fraser H.M. et al., J. Endocr. 1974, 63, 399–406; Makino T. et al., Contraception, 1973, 8 (2), 133–145; Carelli C. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1982, 79, 5392–5395) и у нескольких ви дов домашних животных (Jeffcoate et al., Theriogenology, 1978, 10 (4), 323–335); Robertson I.S. et al., Veterinary Record, 1979, 105, 556; Schanbacher B.D., Am. J. Physiol, 1982, 242, E201– E205) показали, что можно добиться прекраще ния секреции тестостерона, обратного развития с уменьшением массы, яичек и придаточных желез, прекратить спермато генез и, на поведенческом уровне, исчезновения либидо. Эта работа привела к предложению прибегнуть к ранней иммунонейтрализации, в частности, анти-ЛГРГ, для замены традиционной хирургической кастрации в животноводстве. В патенте США №4556555 описан способ пассивной иммунизации животных до полового созревания при помощи антисыворотки, содержащей антитела к гонадотропину. В международной патентной заявке WO 90/11.298 описывается способ улучшения качества мяса свиней при помощи анти-ЛГРГ иммунизации новорожденных препаратом, состоящим из 2 последовательностей ЛГРГ, соединенных с белковым носителем. В международной патентной заявке WO 88/00.056 описывается способ улучше ния социального и сексуального поведения самцов животных при помощи анти-ЛГРГ иммунологической кастрации вместо хи рурги ческой кастрации, нарушающей скорость роста. Бычков вакцинировали в возрасте от 8 до 40 недель и затем ревакцинировали несколько раз. Ан ти-ЛГРГ вакцина австралийской компании Wedsters, продающаяся под названием VAXSTR ATE, применяется у коров. R.E. Falvo et al., (J. Anim. Sci., 1986, 63, 986– 994) иммунизировали несколько групп хряков ЛГРГ-сывороточным глобулином человека, конъюгированным с полным адъювантом Фрейнда или с мурамил-пептилом в качестве адъюванта. После вакцинации и нескольких ревакцинаций авторы наблюдали высокие титры анти-ЛГРГ анти тел, но чтобы поддерживать высокий титр антител необхо димо производить повторные реиммунизации. I.S. Robertson описывает способ иммунизации ЛГРГ, конъюгированным со столбнячным анатоксином или с тиреоглобулином, и высказывает предположение, что иммунологический подход сделает возможной позднюю кастрацию, от которой можно ожидать преимуществ с точки зрения прироста веса. Однако он приходит к выводу, что для разработки способа кастрации, который можно было бы применять на практике, необхо димы дальнейшие усо вершенствования как самого способа, так и адъюванта, поскольку адъювант Фрейнда запреще но применять в практических целях. Позже A. Caraty и M. Bonneau (C.R. Acad. Sci. Paris, Vol. 303, Series III, №16, 1986) осуществили анти-ЛГРГ иммунизацию кабанов. Авторы высказывают предположение, что блокада продукции стероидов за 2–3 недели до забоя даст возможность использовать высокий потенциал этого типа животных для производства мяса без затруднений, связанных с накоплением андростерона в 3 40570 жировой ткани. Однако, они пришли к заключению, что необходимо значительно улучшить технику иммунизации прежде, чем станет возможным предложить активную анти-ЛГРГ иммунизацию в качестве методики, которую можно применять в свиноводстве. Более того, поздняя иммунонейтрализация создает для практики значительную проблему безопасности этого воздействия и, в частности, проблему местных реакций, вызванных вакцинами, особенно масляными вакцинами, с риском вызвать этим отказ в реализации мяса или снижения оценки качества. Улучшение органолепти ческих качеств мяса телят и овец не предлагалось. Заяви тель факти чески нашел применимый в производстве способ улучше ния органолептических качеств мяса животных, при кото ром, незадолго до забоя животного, значительно исключается действие андрогенных и неандрогенных стероидов при помощи активной или пассивной антиЛГРГ иммунонейтрализации, в то время, как преимущества, связанные с мужским полом животного, сохраняются почти до забоя. В соответствии с первым предпочтительным воплоще нием этого способа анти-ЛГРГ вакцина вводится животному, предпочти тельно в ви де эмульсии, предпочтительно, в те чение или перед фа зой откорма животного, а затем, незадолго до забоя животного, анти-ЛГРГ вакцина вводится снова. Процедура может осуществляться путем двух раздельных введений или способом регулируемого вы деления. У свиней особенно благоприятные результаты дает вве дение перед забоем анти-ЛГРГ вакцины с адъювантом водного ти па, в частности, с гелем гидроксида алюминия и/или сапонином. Это введение предпочтительно производитьза 15–21 день до забоя. Напротив, телятам и, где уместно, овцам, введение перед забоем предпочтительно производить с адъювантом в эмульсионной форме, и, предпочтительно, за 1–2 месяца до забоя. Это введение предпочтительно производить не менее, чем через 4 недели, и предпочтительно, через несколько месяцев после первого введения. Во всяком случае, для вакцины в форме эмульсии, предназначенной для перво го введения, и, у те лят, для второго вве дения, предпочтительно, чтобы вакцина была в виде эмульсии вода-в-масле. Однако, могут предусматриваться другие виды эмульсий. Эта вакцина, предпочтительно, эмульсионного ти па, предназначается, согласно этому изобрете нию, чтобы вызвать первичный иммунный ответ низкой интенсивности без значительного или даже измеримого действия на секрецию половых стероидов. Предпочти тельна технология приготовления в виде эмульсии, но другие формы выпуска средства могут использоваться в том случае, если они оказывают та кое же действие. Введение, предшествующее забою, производится вакциной, предназначенной чтобы вызвать в это вре мя исключение или значительное снижение секреции стероидов без нежелательной общей или местной реакции, способной улучшить внешний вид или качество мяса. Предпочти тельным, в частности для свиней, является конъюгат в водном растворе, приготовленный в виде следующих двух прописей: первой, в виде стабильной эмульсии вода-в-масле из смеси высокоочищенного минерального, животного или растительного масла с неионным поверхностно-активным веществом, для индукции иммунного ответа малой интенсивности без измеримого действия на секрецию половых сте роидов, и вто рой, не эмульгированной, с гелем гидроксида алюминия и сапонином, запускающей быструю и интенсивную иммунную реакцию, приводящую к достаточной выработке нейтрализующи х анти-ЛГРГ антител для того, чтобы вызвать снижение или устранение половых сте роидов и снизить сопутствующий транспорт скатола кишечного происхождения. Применявшаяся эмульсия является, в отличие от те х, что получены с полным или неполным адъювантом Фрейнда, стабильной эмульсией, дающей возможность пригото вить готовую к употреблению вакцину. Воспалительная реакция кожи остается очень слабой и ограниченной местом введения двух форм выпуска вакцин и проявляется в виде четко отграниченной папулы при наружном осмотре. Ее развитие ограничивается пределами поверхностной дермы. К моменту забоя животного она исчезает, не оставляя заметной гранулемы. Соответственно другому воплощению этого способа животному за несколько дней до забоя, в частности, за 5–15 дней, вво дят гипериммунную анти-ЛГРГ сыворотку, или плазму, или альтернативно, анти-ЛГРГ моноклональные антитела. Пассивная анти-ЛГРГ иммунизация, приводящая к снижению или даже исчезновению секреции андрогенных и неандрогенных стероидов, была получена при внутримышечном введении гипериммунной лошадиной плазмы. Осуществленная до достаточного уровня, измеряемого титром анти-ЛГРГ антите ла в сыворотке реципиента, эта иммунизация вызывает снижение тестостерона в плазме, начиная с 3 дня; поддерживаемая на том же уровне в течение следующи х 12 дней, она достаточна, чтобы снизить содержание андростерона в тканях ниже 0,50 микрограмм/г, при таком уровне неприятный запах и привкус у мяса хряка не должны ощущаться потребителем. Этот способ пассивной иммунизации показал, что сохранение в те чение 12 дней значительного снижения тестостерона доста точно для снижения концентрации андростерона в тканях ниже пороговых ве личин. Эта пассивная иммунизация может осуществляться при помощи анти-ЛГРГ моноклональных антител, секретируемых свиными гибридомами или гетерогибридомами. Способ введения этих форм выпуска предпочти тельно чрескожный, в частности, с помощью безыгольного инъекционного аппарата, дающего струю под давлением, в частности, соответствующе го патенту по заявке FR-A-2652257. Способ, соответствующий это му изобретению, имеет большое преимущество, являясь полностью безопасным, в частности, не вызывающим местной реакции, способной привести к снижению качества мяса. Воспалительная реакция кожи ограничивается местами введения двух вакционных пропи 4 40570 сей и проявляется в виде четко отграниченных папул при наружном осмотре. Ее развитие ограничивается поверхностным слоем дермы. Она исчезает к моменту забоя животного, не оставляя заметной гранулемы. Воспалительная реакция, ограниченная по времени и местом вве дения, отражает толерантность к двум вакцинным прописям и получается при транскутанном введении вакцин безыгольным инъектором. Для анти-ЛГРГ иммунизации нужно конъюгировать ЛГРГ-пептид или его фрагмент, не являю щиеся иммуногенными в том виде, в котором они выпускаются для широкого применения, с иммуногенным белком, называемым носителем, при помощи ковалентной связи. ЛГРГ или ГРГ, как естественного происхождения, так и синтетические, составлены из 10 аминокислот с по рядковыми номерами от 1 до 10, в последовательности от аминоконца к карбоксиокончанию, в соответствии со следующей формулой: пироГлу-Гис-Три-Сер-Тир-Гли-Лей-Арг-Про-Гли-NH2 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Эти общепринятые сокраще ния обозначают: пироГлу - пироглутаминовая кислота; Гис - гистидин; Три - триптофан; Сер - се рин; Тир - ти розин; Гли - глицин; Лей - лейцин; Арг - аргинин; Про пролин. Ан ти-ЛГРГ иммуногенные конъюгаты, описанные различными авторами, можно получить, в зависимости от гап тена, в виде: а) цельного ЛГРГ или ЛГРГ с модификациями в одном или нескольких участках, чтобы получить желаемую конъюга цию с аминоконцом, карбокси-окончанием или с другими участками, б) одного из фрагментов его пептида, состоящего из 5–7 аминокислот, модифицированного или нет, что бы получить желаемую конъюгацию с аминоконцом, карбокси-концом или с другими участками, в) агониста, несущего замещенную аминокислоту, ча ще всего в положении 6, чтобы получить конъюгацию с серединой молекулы. В качестве белка-носителя использовались бычий сывороточный альбумин, сывороточный альбумин челове ка, тиреоглобулин, яичный альбумин и глобулины человека или лоша ди. Так, в европейской патентной заявке ЕР-А181236 описаны иммуногенные конъюгаты, включающие нонапептид или декапептид с последовательностью, соответствующей последним 8 аминокислотам молекулы ЛГРГ, к которой со стороны аминоконца добавлен лизин или последовательность цистеин-лизин. Более того, в патентной заявке WO 88/05.308 раскрываются конъюгаты, сделанные из фрагментов природной молекулы, состоящи х из 5, 6 или 7 соседствующи х аминокислот, в которых каждый фрагмент включает пироглутаминовую кислоту с аминоконцом или глицинамид с карбокси-концом и к которым можно добавить дополнительную аминокислоту или аминокислотную последовательность, чтобы связать с концом иммуногенный белок. Конъюгирующие вещества можно разделить на три основные катего рии: акти вирующие вещества, гомобифункциональные вещества и гетеробифункциональные вещества. В то время как с активирующими веществами связь между двумя молекулами осуществляется между двумя, уже существующи ми функциональными группами, с другими веществами связь устанавливается через углеводный остаток, которым оканчивается лиганд. Среди активи рующи х ве ществ можно упомянуть перйодную кислоту, применяемую для окис ления олигосахаридных остатков гликопротеинов до альдегидов, с которыми впоследствии вступают в реакцию аминогруппы другой молекулы, образующей конъюгат. Карбодиимиды являются активирующими веществами, широко использующимися для соединения антигенов с белками, и самым часто применяющимся из них,несомненно является N-этилN'-(3-диметиламинопропил)карбодиимид (ЭДК) гидрохлорид, который дает возможность проводить реакцию в водной среде. Их действие ве дет к образованию амидной связи между карбоксильной груп пой одного белка, активированного в ви де промежуточной О-алкилизомочевины, и аминогруппой, которую несет другая молекула. Их преимущество свя зано с простотой их применения. Гомобифункциональные вещества являются молекулами, обладающими двумя идентичными реактивными группами, разделенными углеводородной цепью. Из них можно упомянуть глутаральдегид, который вступает в реакцию двумя первичными аминогруппами, алкил или арилдиизоцианаты, которые реагируют с первичными аминами и тиолами, и бисдиазотизированный бензидин, который соединяется с ароматическими остатками тирозина. Для полноты можно упомянуть бисмалеимиды и бисамидинаты. Главным недостатком гомобифункциональных ве ществ является слабая возможность влиять на природу образующи хся конъюгатов, так как эти вещества могут вступать в реакцию с двумя молекулами одной и той же природы и приводить к образова нию олигомеров или полимеров. Чтобы это исправить, хи мики ввели гетеробифункциональные вещества, у которых две гр уппы имеют различные характеристики. В общем случае одна из этих групп является Nгидроксисукцинимидэфиром, который, в мягких условиях, реагирует со свободными аминогруппами белков, давая, с одной стороны, N-гидроксисукцинимид, а с другой стороны – белок, несущий через ковалентную амидную связь соединяющее вещество, у кото рого имеется вторая функциональная группа. С довольно общей точки зрения, последнее может реагировать с тиолами, соединенными с молекулой, которую нужно соединить, эти тиолы либо изначально присутствуют в молекуле в виде цистеиновых остатков (для последнего они могут быть естественными составными частями или, в случае пептидов, введенными специально во время синтеза), либо вводятся веществами, такими как 2-аминотиолан или N-[3-(2-пиридилтио) 5 40570 пропаноилокси]сукцинимид (SPDP) после восстановления. Из вышеуказанных возможностей предпочтительно использовать цельный ЛГРГ. В таком случае естественный ЛГРГ предпочтительнее агонистов, таких как (D-Лиз 6)-ЛГРГ, в отношении иммуногенной активности конъюгатов, по лучаемых с этими пепти дами. Карбодиимид предпочтительнее глутаральдегида в качестве реакти ва для конъюгирования естественной формы ЛГРГ с альфа-гло булином. Человеческий или лошадиный альфа-гло булин, фракция IV–1 или IV–4, предпочти тельнее человеческого или бычьего сывороточного альбумина. Предпочти тельно, чтобы вакцины включали одно и то же активное начало, предпочти тельно включающее конъюгат альфа-гло булин-ЛГРГ; ЛГРГ предпочтите лен в естественной форме и альфа-гло булин, полученный от человека или лошади, в частности, фракции IV-1 и/или IV-4. Конъюгат предпочтительно получать добавлением 0,5–2 объемов 2,5% раствора N-этил-N'-(3-диметиламинопропил)карбодиимид (ЭДК) гидрохлори да в 0,9% NaCl до 1 объема смеси альфа-гло булин, ЛГРГ в растворе, содержащем от 2- до 20 мг/мл в 0,9% NaCl. После перемеши вания смесь оставляют на ночь и затем очищают гель-проникающей хроматографией. В отноше нии белка-носителя возможно использовать альбумины сыворотки, в частности, бычьей или человеческой, тиреоглобулин, яичный альбумин, глобулины человека или лошади и анатоксины, в частности, столбнячный анатоксин. Преобладание иммунного отве та кабанов на фракцию ЛГРГ-пепти да с карбокси-концом, конъюгированным с карбодиимидом, или его агониста (D-Лиз 6)-ЛГРГ, конъюгированного с SPDP, перед альфа-гло булином, которое наблюдалось, привело к определению анти-ЛГРГ иммуногенного конъюгата, использующе го преимущественный пептид, обладающий карбокси-терминальным концом ЛГРГ. Следовательно, в соответствии со вторым предпочтительным воплоще нием изобретения, Заяви тель обнаружил, что очень выгодно использовать новый пептид, включающий последние 8 аминокислот ЛГРГ, то есть декапептид формулы: Три-Сер-Тир-Гли-Лей-Арг-Про-Гли-NH2 3 4 5 6 7 8 9 10 который обладает сильным иммуногенным действием и не проявляет гормонального действия естественного ЛГРГ. Предметом изобретения является, следовательно, этот новый пептид (3–10) и конъюгаты, включающие его, соединенные с иммуногенным белком-носителем, который выбирается из перечисленных вы ше, предпочтительным является яичный альбумин и лошадиный альфа-гло булин, в частности, фракции IV-1 и/или IV-4. Для предпочтительного приготовления конъюгата ЛГРГ (3–10) и белок-носитель, яичный альбумин или альфа-гло булин, растворяют в соотношении от 2 до 40 мг каждого на мл 0,1 М NaCl/0,1 M 2-(N-морфолино)этансульфо кислотного буфера. Затем добавляют от 0,5 до 2 объемов 2,5% раствора N-этил-N'-(3-диметиламинопропил)карбодиимида в том же самом буфере. Устанавливают рН добавлением 1N гидроксида натрия. После перемеши вания смесь оставляют стоять на ночь, а затем очищают гельфильтрацией, кото рая уда ляет несвязанный ЛГРГ (3–10), остатки карбодиимида и продук ты его гидролиза. Предметом изобретения являются также новые анти-ЛГРГ вакцины, использующие в качестве активного начала такие конъюгаты, и применимые для способа данного изобретения. Предметом изобретения также является пассивная анти-ЛГРГ (3–10) иммунизация в соответствии со способом, описанным выше. Теперь изобретение будет описано более подробно при помощи, с одной стороны, сравнительных испыта ний нескольких продук тов и способов вакцинации, соответственно изобрете нию и, с другой стороны, испытаний, показывающи х иммунный ответ кабанов на фракцию ЛГРГ-пептида с карбоксильным концом, и испытания анти-ЛГРГ вакцинации кабанов, произведенной соответственно изобрете нию. 1. Использование цельного ЛГРГ А. Большая иммуногенная активность конъюгата, сохраняющая интактной самую крупную фракцию пептида ЛГРГ с карбокси-концом, и выбор конъюгата, основанной на предпочтении конъюгата, образованного с агонистом (D-Лиз 6) ЛГРГ, конъюгату с естественным составом ЛГРГ А1. Ан ти-ЛГРГ иммунизация интактных кабанов и OF А самцов крыс Сравнение активности двух анти-ЛГРГ вакцин, состоящих из конъюгатов с естественной формой ЛГРГ (В1 и В2) или (D-Лиз 6) ЛГРГ (А1 и А2) и с человеческим альбумином, конъюга тов, полученных при помощи карбодиимида в водной фа зе и SPDP, соответственно, вве денных в эмульсию масло-в-воде и вве денных вн утримышечно свиньям и подкожно крысам, приводит к следующим выводам: – Большая активность вакцины, основанной на естественной форме ЛГРГ: масса конъюгированного ЛГРГ-пепти да меньше, чем масса конъюгированного (D-Лиз 6)-ЛГРГ-пепти да, для получения больше го количества животных, проявляющих иммунный ответ (таблицы 1 и 3). – Эффект дозы, который проявляется в получении большего количества животных, дающих иммунный ответ на один и тот же конъюгат (таблица 3). А.1.1. Приготовление конъюгатов (D-Лиз 6)ЛГРГ-альбумин при помощи SPDP Это также относится к наборам, объединяющим в одной паковке равное количество доз вакцины, которую вводят перед забоем, и вакцины, которую вво дят как первичную инъекцию. Предпочти тельно эти вакцины упаковываются в уменьшенном объеме и в концентрированном виде для подкожного введения, например, в соответствии с французским патентом, цити рованным выше. 6 40570 Приготовление конъюгатов (D-Лиз 6)-ЛГРГальбумин проводится в 3 стадии: приготовление {N-[3-(2-пиридилдитио)пропаноил]-D-Лиз 6}-ЛГРГ, приготовление N-(3-меркаптопропаноил)альбумина и конъюгирование. {Nє-[3-(2-Пиридилдитио)пропаноил]-D-Лиз 6}ЛГРГ готовится путем реакции избытка SPDP с ЛГРГ в водном растворе (6 моль SPDP на моль ЛГРГ) в течение ночи при 4оС и последующего центрифугирования. Полученный продукт растворяют в 8 М мочевине и оценивают присутствие 2-пиридилдитиогрупп. N-(3-Меркаптопропаноил)альбумин получают путем воздействия 0,2 ммоль SPDP на 1 г человеческого альбумина, растворенного в 100 мл 0,1 М фосфатного буфе ра, в течение ночи при 4оС и последующего подкисления до рН 6 путем восстановления дитиотреито лом. Затем его очищают гель-фильтрационной хроматографией. Анализ тиола и белка показывает средний уровень замеще ния. Конъюгирование производят, взяв одну 2пиридилдиотио-группу на 1,25 тио ловой груп пы. Доводят рН до 7–7,5 и через 1 час определяют выход путем измерения освобожденного 2-пиридинтиона. Из этого выводят средний уровень замещения. Наконец, конъюгат очищают хро матографией и концентрируют ультрафильтрацией. А.1.2. Приготовление конъюгата ЛГРГ-альбумин при помощи карбодиимида 1000 мг N-этил-N'-(3-диметиламинопропил)карбодиимида гидрохлорида, растворенные непосредственно перед употреблением в 40 мл 0,9% NaCl, добавляют к 300 мг ЛГРГ и 300 мг человеческого альбумина, растворенным в 30 мл 0,9% NaCl. После перемешива ния смесь оставляют стоять в те чение ночи при комнатной температуре, защи тив от све та. За тем ее хроматографируют на Sephadex G–50 геле, фракции, соответствующие конъюгату, со бирают, при необхо димости концентрируют и замораживают. По фракциям, содержащим несвязанный ЛГРГ, определяют количество несвязанного ЛГРГ и, следовательно, средний уровень конъюгации. Последнее является воспроизводимым и варьирует от 8 до 10 мг ЛГРГ конъюгированного со 100 мг альбумина. Определение УФ спектра конъюгата до и после хроматографии позво ляет вычислить хроматографический выход конъюгата и, следовательно, количество (или концентрацию) конъюгированного ЛГРГ. А.1.3. Мето дики анализов Титр антител определяется по методике, описанной – Іeffcoate et al., Acta Endocr., Copenh., 1974, 75, 625–635. Тестостерон определяется непосредственно в плазме методом радиоиммунного анализа, используя радиолиганд тестостерона С19-карбоксиметиловый эфир [125 I]гистамина. Связывание с меченым пептидом определяется после мечения различных пепти дов йодом125 согласно Coppoland et al., Endoсr. 1979, 104, 1504–1506 и определения по мето дике, описанной – Ieffсоаte et al., Acta Endoсr., Copenh., 1974, 75, 625–635. А.1.4. Иллюстрации – Испытания на крысах Таблица №1: образование анти-ЛГРГ антител, определенное по степени связывания ЛГРГ, меченого йодом-125. Таблица №2: влияние анти-ЛГРГ иммунизации на концентрацию тестостерона в плазме. Дозировка Вакцины А1: 50 мкг конъюгированного (DЛиз6)-ЛГРГ В1: 12 мкг конъюгированного ЛГРГ. Испытания на интактных кабанах Таблица №3: образование анти-ЛГРГ антител, определенное по степени связывания ЛГРГ, меченого йодом-125 Дозировка Вакцины А1: 0,5 мг конъюгированного (DЛиз6)-ЛГРГ А2: 6 мг конъюгированного (D-Лиз 6)-ЛГРГ В1: 0,15 мг конъюгированного ЛГРГ В2: 1,20 мг конъюгированного ЛГРГ А.2. Сравнительное испыта ние двух антиЛГРГ вакцин, составленных, соответственно, из ЛГРГ-a-глобулина, конъюгированного при помощи карбодиимида, и (D-Лиз 6)-ЛГРГ-a-глобулина, конъюгированного при помощи SPDP, вве денных в эмульсию масло-в-во де, вводимых внутримышечно (в/м) или чрескожно (ч/к) свиньям А.2.1. Приготовление конъюгата (D-Лиз 6)ЛГРГ-a-глобулин при помощи SPDP. Способ, описанный в примере А1, используется точно таким же образом, но вместо альбумина в концентрации 10 мг/мл применяется a-глобулин в концентрации 6 мг/мл. Общий выход конъюгированного (D-Лиз 6)ЛГРГ порядка 45–50%. Более того, по желанию можно изменить степень замеще ния a-глобулина и, следовательно, уровень конъюгирования, изменяя концентрацию SPDP и/или a-глобулина во время приготовления МР-a-глобулина. А.2.2. Приготовление конъюгата ЛГРГ-человеческий a-глобулин при помощи карбодиимида (ЭДК) Способ, описанный в примере А1, используется точно таким же образом, но с заменой человеческого альбумина на человеческий a-глобулин. Уровень конъюгации составляет от 24 до 28 мг ЛГРГ, связанного со 100 мг человеческого aглобулина. А.2.3. Эффективность вакцины, основанной на конъюгате ЛГРГ a-глобулин при помощи карбодиимида, выше, чем второй. Эффективность выражена числом животных, у которых обнаружено полное исчезновение тестостерона из плазмы (таблица 4). А.3. Преобладание иммунного ответа кабанов на фракцию ЛГРГ-пептида с карбокси-концом, конъюгированную с помощью карбодиимида, или его агониста (D-Лиз 6)-ЛГРГ, конъюгированного с помощью SPDP, с человеческим a-глобулином Это определяется сопоставлением процентов связанных анти-ЛГРГ и анти-(D-Лиз 6)-ЛГРГ сывороток двумя мечеными фрагментами ЛГРГ, за исключением, соответственно, ЛГРГ (3–10) из-за его фракции с амино-концом и ЛГРГ (1–10) в фор 7 40570 ме свободной аминокислоты из-за амидной фракции его естественного карбокси-конца. Эти две фракции распознаются, соответственно, более специфическими антителами, направленными против карбокси-терминальной фракции, с одной стороны, и амино-терминальной фракции, с другой стороны. Преобладание ответа на карбокси-терминальную фракцию пепти да проявляется числом животных, у которых образуются антитела, связывающие только пептид ЛГРГ (3–10) по сравнению со связыванием ЛГРГ в форме свободной кислоты (10/58 для сыворотки анти-ЛГРГ и 3/10 для сыворотки анти-(D-Лиз6)-ЛГРГ). Не было сыворотки, на 100% связывающей фракцию ЛГРГ в форме свободной кислоты, что должно отражать исключительное распознавание амино-терминальной фракции. Самые частые смешанные ответы показывают лучшее распознавание амино-терминальной фракции анти-(D-Лиз6)-ЛГРГ сыворотками по сравнению с анти-ЛГРГ сыворотками. В последних только 3 сыворотки из 58 выявляли более 40% амино-терминальных фракций против 4 из 10 анти-(D-Лиз 6)-ЛГРГ сывороток. В. Большая иммунологическая активность конъюгата ЛГРГ-a-глобулина, полученного с помощью карбодиимида, по сравнению с активностью конъюгата, приготовленного с помощью глутаральдегида. В.1. Приготовление конъюгата ЛГРГ-a-глобулин с помощью глутаральдегида 2,5 мл раствора глутаральдеги да, содержаще го 10 мг/мл, в те чение 30 мин добавляли по каплям к 10 мг ЛГРГ 50 мг человеческого a-глобулина (Serva), растворенным в 5 мл 0,1 М фосфатного буфе ра с рН 7,5, осторожно перемешивая после каждого добавления. Смесь оставляли стоять на 2,5 ч при комнатной температуре, затем реакцию останавливали добавлением 25 мл бисульфи та натрия, растворенных в 0,5 мл воды. Конъюгат диализировали против 150 мМ NaCl/10 мМ фосфатного буфе ра с рН 7,5 и концентрировали ультрафильтрацией. В.2. Сравнительное испытание на свиньях анти-ЛГРГ вакцин, приготовленных с равным количеством конъюгированного ЛГРГ. Эффективность выражается количеством животных, у которых полностью исчез тестосте рон плазмы (таблица 5). С. Большая иммуногенная активность конъюгата с человеческим a-глобулином по сравнению с активностью конъюгата с человеческим альбумином. Эффективность выражается количеством животных, у которых полностью исчез тестостерон плазмы (таблица 6). D. Иммуногенная активность конъюгата с лошадиным a-глобулином, фракцией IV-1, эквивалентного конъюгату с человеческим a-глобулином. D.1. Приготовление конъюгата ЛГРГ-лошадиный a-глобулин при помощи карбодиимида. Способ, описанный в примере А1, используется точно таким же образом, но вместо человеческого альбумина берется лошадиный a-глобулин (фракция IV-1). D.2. Подкожное введение вакцины крысам, дважды с интервалом в 4 недели, в дозе 12 мкг ЛГРГ, конъюгированного с человеческим или лошадиным a-глобулином (таблица 7). Е. Большая активность адъюванта в эмульсии изобрете ния вода-a-в-масле по сравнению с другими эмульсиями (таблица 8). Испытания на свиньях с применением одного и то го же конъюгата, состояще го из ЛГРГ и человеческого a-глобулина, конъюги рованного при помощи карбодиимида и введенного в одной и той же позе, в одном и том же объеме, в 5 местах чрескожно. Исследованы следующие эмульсии: жидкая эмульсия масло-в-воде (В), эмульсия изобрете ния (состав С в таблице), продажная эмульсия, разведенная с антигеном (Е) и масляная фаза, эмульгированная с конъюгатом (F). Во все этих составах конечное количество анти гена на дозу было тем же самым. Эмульсии получали при обычных условиях, принятых для прописей такого ти па. F. Эффективность пассивной анти-ЛГРГ иммунизации для улучшения органолептических качеств мяса, определенная по снижению тканевого андростенона (таблица 9). G. Э ффективность и переносимость прописей, содержащи х ЛГРГ, конъюгированный с глобулином при помощи карбодиимида, в ви де эмульсии вода-в-масле (1-ая вакцина) и в ге ле гидроксида алюминия и сапонина (2-ая вакцина); введенных чрескожно при одной и той же дозе конъюгированного ЛГРГ, в начале периода откорма и за 18–21 день до забоя, соответственно, безыгольным инъектором Pisjet. Проведены 2 испытания в 2 стадии, группы 1,3 и 5 для первой прописи и группы 2 и 4 – для вто рой, соответственно (таблицы 10 и 11). G.1. Э ффективность анти-ЛГРГ иммунонейтрализации возрастает при увеличении количества мест чрескожного вве дения без изменения объема вакцины G.2. То лерантность к введенным вакцинам оценивалась по развитию воспалительной реакции кожи с градацией от 0 до 4, в зависимости от размера папулы, появляющей ся после введения; папула развивается в каждой точке введения. Сумма баллов по шкале в каждой группе складывалась следующим образом: средняя оценка в баллах к концу первой недели после вве дения (А.1) и перед забоем (3б) для каждой вакцины (таблица 13). Самая лучшая переносимость наблюдалась при введении вакцины в группе 5. II. Использование пептида (3–10) А. Ме тодики измерения анти-ЛГРГ иммунного ответа и биологической эффективности по оценке тестостерона плазмы и тканевого андростерона. Ан ти-ЛГРГ иммунный ответ измеряется по титру антител, который определяется по методике, описанной Ieffcoate et al., Acta Endocr. (Copenh.), 1974, 75, 625–635. Cвязывание с мечеными пепти дами определяется после мечения различных пепти дов йодом125 по Coppoland et. al., Endocrinology, 1979, 104, 1504–1506. Определение сывороток по отношению к этим пептидам проводится по методике Ieffcoate et al., указанной выше. 8 40570 анти-ЛГРГ и анти-(D-Лиз 6)-ЛГРГ сыворотками двух меченых фрагментов ЛГРГ, ЛГРГ (3–10) (ЛГРГ исключается из-за присутствия фракции с аминоконцом), и ЛГРГ (1–10) в форме свободной кислоты (ЛГРГ исключается из-за присутствия амидной фракции карбокси-конца), соответственно. Эти две фракции распознают более специфи чески антитела к, соответственно, фракции карбокси-конца, с одной стороны, и фракции амино-конца, с другой стороны. Ответ на фракцию с карбокси-концом пептида является общим у все х животных, иммунизированных тем или иным конъюгатом (68/68). Сыворотки 3 из 10 животных, иммунизированных конъюгированным (D-Лиз 6)-ЛГРГ, и 10 из 68 животных, иммунизированных конъюгированным ЛГРГ, давали исключительное связывание фракции карбокси-конца. Другие животные давали смешанный ответ, преимущественно направленный на фракцию карбокси-конца. Ответ на фракцию амино-конца давали не все животные (55/68). Ни одна из сывороток не давала исключительного связывания с фракцией ЛГРГ в виде свободной кислоты. С. Испытания активной анти-ЛГРГ иммунонейтрализации конъюгатами ЛГРГ (3–10)-лоша диный a-глобулин IV-4 и ЛГРГ (3–10)-яичный альбумин, полученными с помощью карбодиимида. С.1. Приготовление конъюга та ЛГРГ (3–10)лошадиный a-глобулин IV-4 при помощи карбодиимида. 85 мг ЛГРГ (3–10) и 170 мг лоша диного aглобулина растворяются в 12,8 мл 0,1 М NaCl (0,1 М 2-(N-морфолино)этансульфо кислотного буфера. Затем добавляют 212 мг N-этил-N'-(3-диметиламинопропил)карбодиимид гидрохлорида, растворенных в 17 мл выше указанного раствора. Немедленно доводят рН до 6,0 добавлением 1,3 мл 1 н. гидроксида натрия. После перемеши вания смесь оставляют стоять 16 часов при комнатной температуре и затем очищают гель-фильтрацией, отделяя конъюгированный ЛГРГ от неконъюгированного. Измерение количества последнего дает возможность по разнице определить количество конъюгированного ЛГРГ. Можно определить выход конъюгирования. С.2. Приготовление конъюга та ЛГРГ (3–10)яичный альбумин с карбодиимидом 60 мг ЛГРГ (3–10) и 120 мг яичного альбумина растворяют в 9 мл 0,1 М NaCl (0,1 М 2-N-морфо лино)-этансульфокислотного буфера, 150 мг Nэтил-N'-(3-диметиламинопропил)карбодиимидгидрохлорида, растворенные в 12 мл того же самого буфера добавляют после этого. Добавлением 1 н. гидроксида натрия (приблизительно 1,9 мл) доводят рН до 7,0. Смесь оставляют на ночь при комнатной температуре и потом осветляют центрифугированием. Надосадочную жидкость хроматографи руют на Sephadex геле, что бы отделить конъюгированный ЛГРГ от неконъюгированного и от продуктов карбодиимида. По измерению количества несвязанного ЛГРГ (3–10) возможно установить выход конъюгирования ЛГРГ (3–10). С.3. Иммунный ответ, биологическая эффективность и толерантность к вакцине акти-ЛГРГ, приготовленной из конъюгата, полученного из Биологическая эффективность измеряется по снижению или исчезновению тестосте рона из плазмы и андростенона в тканях. Анализ тестостерона в плазме проводится прямым способом радиоиммунным анализом с использованием радиолиганда тестостерона С19-карбоксимeтиловый эфир [125I] гистамина (Furuyama S. et al., Steroids, 1972, 16, 415). Определение тканевого андростенона проводится в пробе жировой ткани радиоиммунным методом с радиолигандом 5a-[3H]андростеноном, описанным Claus, C.R. Acad. Sci., Paris, 1974, 278, 299–302. В. Преобладание иммунного ответа у кабанов на фракцию с карбокси-концом пептида ЛГРГ, конъюгированного при помощи карбодиимида или его агониста (D-Лиз 6)-ЛГРГ, конъюгированного с помощью SPDP с человеческим a-глобулином. В.1. Приготовление конъюгата ЛГРГ с человеческим a-глобулином при помощи карбодиимида. Конъюгат предпочтительно получается при добавлении от 0,5 до 2 объемов 2,5% раствора Nэтил-N'-(3-диметиламинопр опил)-карбодиими д (ЭДК) гидрохлорида в 0,9% NaCl к 1 объему смеси a-глобулина с ЛГРГ в растворе, содержащем от 2 до 20 мг на 1 мл 0,9% NaCl. После перемешивания смесь оставляют на ночь и затем очищают гель-фильтрацией. В.2. Приготовление конъюгатов (D-Лиз 6)-ЛГРГ с человеческим a-глобулином при помощи SPDP. Приготовление конъюгатов (D-Лиз 6)-ЛГРГ с человеческим a-глобулином проводится в три стадии: приготовление {N-[3-(2-пиридилдитио)пропаноил]-D-Лиз 6}-ЛГРГ, приготовление N-(3-меркаптопропаноил)-человеческого a-глобулина и конъюгирование. {Nє-[3-(2-Пиридилдитио)пропаноил]-D-Лиз 6}ЛГРГ готовится путем реакции избытка SPDP с ЛГРГ в водном растворе (6 моль SPDP на моль (D-Лиз 6)-ЛГРГ) и затем, после стояния при 4оС в течение ночи, получают продукт центрифугированием. Осадок растворяется в 8 М мочевина и определяют присутствие 2-пиридилтио-групп. N-(3-меркаптопропаноил)-человеческой aглобулин получается противодействием 0,2 мл SPDP на 0,5 г человеческого a-глобулина, растворенного в 100 мл 0,1 М фосфатного буфе ра, и затем, после контакта в те чение ночи при 4 оС и подкисления до рН 6, восстановлением дитиотреитолом. Затем реагент очищается гель-фильтрационной хроматографией. Определение тиола и протеина дает средний уровень замеще ния. Конъюгирование осуществляется соединением одной группы 2-пиридилдитио- с 1,25 тио ловых гр упп. Устанавливается рН на уровне 7–7,5 и через 1 час определяют выход по измерению освобожденного 2-пиридинтиона. Средний уровень замещения выводится по этому показателю. Наконец, конъюгат очищается хроматографией и концентрируется ультрафильтрацией. Общий вы ход конъюгированного (D-Лиз 6)ЛГРГ составляет порядка 45–50%. В.3. Преобладание иммунного ответа у кабанов на фракцию с карбокси-концом ЛГРГ-пептида, конъюгированного способом, описанным в А.А. и А.2, определяется путем сравнения связывания 9 40570 фрагментов ЛГРГ (3–10) и лошадиного a-глобулина IV–4 с карбодиимидом. Соста вы, включающие конъюгированный ЛГРГ (3–10), приготовленные в виде эмульсии вода-в-масле (1-ая вакцина) и в виде геля гидроксида алюминия с сапонином (2-ая вакцина) вводились чрескожно 6 кабанам в объеме 0,4 мл на дозу, в начале периода откорма и за 17 дней до забоя, соответственно, при помощи бе зыгольного инъектора, известного под названием Pigjet, выделяющего вакцину порциями по 0,2 мл, распределенными по 5 точкам введения для каждой порции. Иммунный ответ был максимальным через 10 дней после введения 2-ой вакцины. У отдельных животных титры антител (реципрокные вычис ления разведения, при котором связывается 50% йода-125) были, соответственно: 10 день 280 660 2700 3200 4600 13000 16 день 290 400 2000 2400 3100 8600 Биологическая эффективность этого иммунного ответа проявляется исчезнове нием тестостерона из плазмы с 10-го дня после вве дения 2-ой вакцины у всех 11 животных. Исчезновение тестостерона сопровождалось, при тех же условиях, исчезнове нием тканевого андростенона. Толерантность к вакцине показывается развитием воспалительной кожной реакции, градация которой зависит от размера папул, проявляющихся в каждом месте вве дения вакцины. Это местное воспаление полностью исчезает через 10 дней после введения 2-ой вакцины. Таблица 1 Образование анти-ЛГРГ антител, определенное по степени связывания ЛГРГ, меченого йодом-125. Определение антител (% Во/Т) в сы воротке (1/100) крыс Инъекция Время (нед) Группа А1 50 мкг D-Лиз6-ЛГРГ/сыв. альбум. чел./АЕ1 Группа В1 12 мкг ЛГРГ/ЭДК/ АЕ1 Титр В/Т=50% SC 0 SC 4 – – – – 0.0 7.8 0.0 0.0 4.3 14.1 5.9 15.8 0.0 11.3 11.7 0.0 14.5 0.0 0.0 11.5 19.6 0.0 9.2 0.0 – – – – 15.4 7.6 35.3 51.1 91.1 85.3 70.0 94.9 64.3 67.9 96.1 68.3 72.5 92.4 64.2 67.2 70.4 98.8 68.7 38.8 – – – –