Стабілізований продукт з підшлункової залози

1. Стабілізований продукт з підшлункової залози, що містить емульговані підшлункові залози і один або більше ферментів підшлункової залози у зимогенній формі, в якому вказаний один або більше ферментів являють собою протеазу, де вказаний стабілізований продукт з підшлункової залози є стабільним при впливі повітря або води, і де вказаний стабілізований продукт з підшлункової залози не знежирюють. 2. Стабілізований продукт з підшлункової залози за п. 1, де вказаний продукт містить приблизно від 1 % до 20 % вологи. 3. Стабілізований продукт з підшлункової залози за п. 1, де вказаний продукт містить приблизно від 20 % до 95 % вологи. 4. Стабілізований продукт з підшлункової залози за п. 1, де вказаний продукт при активації має активність амілази, що складає щонайменше приблизно 0 % від активності амілази панкреатину. 5. Стабілізований продукт з підшлункової залози за п. 1, де вказаний продукт при активації має активність амілази, що складає щонайменше приблизно 3 % від активності амілази панкреатину. 6. Стабілізований продукт з підшлункової залози за п. 1, де вказаний продукт при активації має активність амілази, що складає щонайменше приблизно 75 % від активності амілази панкреатину. 2 (19) 1 3 91343 4 19. Корм для тварини за п. 15, де вказаний раціон складений для тварини, вибраної з групи, яка складається з кішки, великої рогатої худоби, оленя, собаки, риби, кози, коня, лами, свині, свійської птиці, кролика і вівці. 20. Спосіб, що передбачає пероральне введення тварині стабілізованого продукту з підшлункової залози за п. 1. 21. Спосіб за п. 20, відповідно до якого вказаний стабілізований продукт з підшлункової залози вводять тварині, починаючи приблизно за 1 тиждень до зміни умов вирощування і закінчуючи приблизно через 1 тиждень після зміни умов вирощування. 22. Спосіб за п. 20, відповідно до якого зміна умов вирощування являє собою перехід від першого джерела корму до другого джерела корму. 23. Спосіб за п. 20, відповідно до якого зміна умов вирощування являє собою перехід від рідкого джерела корму до твердого джерела корму. 24. Спосіб за п. 20, відповідно до якого зміна умов вирощування являє собою відлучення від матки. 25. Спосіб за п. 20, відповідно до якого вказаний раціон складають для тварини, вибраної з групи, яка складається з кішки, великої рогатої худоби, оленя, собаки, риби, кози, коня, лами, свині, свійської птиці, кролика і вівці. 26. Спосіб за п. 20, відповідно до якого вказаний період зміни умов вирощування є результатом зміни факторів оточуючого середовища. 27. Спосіб за п. 26, відповідно до якого зміни факторів оточуючого середовища вибрані з групи, яка складається зі змін температури або клімату, впливу яких піддається тварина; змін в утриманні тварин і змін у суспільній групі тварин, і їх поєднань. 28. Спосіб одержання стабілізованого продукту з підшлункової залози, що включає в себе стадії: емульгування підшлункових залоз, з утворенням емульгованої підшлункової залози; і змішування емульгованої підшлункової залози з підкислювачем, з одержанням, тим самим, стабілізованого продукту з підшлункової залози, де вказаний спосіб не включає в себе видалення жирів з вказаних підшлункових залоз, і де вказаний стабілізований продукт з підшлункової залози є стабільним при впливі повітря або води. 29. Спосіб за п. 28, відповідно до якого підкислювач вибраний з групи, яка складається з пропіонової кислоти, оцтової кислоти і їх комбінацій. 30. Спосіб за п. 28, відповідно до якого емульговану підшлункову залозу підкислюють до рН від приблизно 6,0 до приблизно 4,5. 31. Спосіб за п. 28, що додатково передбачає стадію змішування стабілізованого продукту з підшлункової залози з джерелом клітковини або її побічним продуктом. 32. Спосіб за п. 31, відповідно до якого джерело клітковини або її побічний продукт являє собою соєве лушпиння. 33. Спосіб одержання стабілізованого продукту з підшлункової залози, що включає в себе стадії: змішування емульгованої підшлункової залози з носієм; і екструзії суміші, з одержанням, тим самим, стабілізованого продукту з підшлункової залози. 34. Спосіб за п. 33, відповідно до якого носій вибраний з групи, яка складається з джерела клітковини або її побічного продукту, зернових або їх побічного продукту і будь-яких їх комбінацій. 35. Спосіб за п. 34, відповідно до якого носій вибраний з групи, яка складається з соєвого лушпиння, кукурудзи і будь-якої їх комбінації. 36. Спосіб за п. 33, що додатково передбачає стадію висушування стабілізованого продукту з підшлункової залози щонайменше в одному апараті, вибраному з групи, яка складається з охолоджувача і випарного конвеєра. 37. Спосіб одержання стабілізованого продукту з підшлункової залози, що включає в себе стадії: розпилення емульгованої підшлункової залози у сушильній камері; і збору розпиленої підшлункової залози, з одержанням, тим самим, стабілізованого продукту з підшлункової залози. 38. Спосіб одержання корму, що включає в себе стадії: забезпечення ряду поживних інгредієнтів; і змішування інгредієнтів зі стабілізованим продуктом з підшлункової залози за п. 1, з одержанням, тим самим, корму, що містить стабілізований продукт з підшлункової залози. 39. Спосіб за п. 38, що додатково передбачає стадію формування корму у гранули. 40. Стабілізований продукт з підшлункової залози за п. 1, що містить трипсин в його зимогенній формі. 41. Стабілізований продукт з підшлункової залози за п. 1, що містить хімотрипсин в його зимогенній формі. Даний винахід стосується стабілізованого продукту з підшлункової залози, придатного, наприклад, як кормова добавка для тварини. У тварин є періоди субоптимальної утилізації корму, наприклад, під час періодів зміни умов їх вирощування, таких як перехід від одного джерела корму або раціону до іншого джерела корму або раціону. Дані зміни часто приводять до низької утилізації поживних речовин корму, і їх наслідком є менш ефективна продуктивність і підвищена вартість корму. Наприклад, у свинарстві вважається, що годування і максимальна утилізація корму є важливими, оскільки свині ростуть значно швидше пропорційно до їх маси тіла у порівнянні з більш великими тваринами. Див. Ensminger, Animal th Science, 9 Ed. Interstate Publishers, Inc., Danville, Illinois (1991). Для забезпечення ефективного росту свиням можна згодовувати високоенергетичний раціон з низьким вмістом клітковини. Однак свині відрізняються за типом і кількістю необхідних поживних речовин, в залежності від ряду факторів, включаючи вік, призначення, хворобливий стан, 5 взаємодію поживних речовин і оточуюче середовище. Див., наприклад, Hill et al, Tri-State Swine Nutrition Guide, Bull. No. 869-98, The Ohio State Univ., Columbus, Ohio (1998) і National Research th Council, Nutrient Requirements of Swine, 10 Ed., Natl. Acad. Press, Washington, D.C. (1998). Для задоволення вказаних різних потреб свинарі можуть складати базові раціони з широкого ряду інгредієнтів, включаючи, але не обмежуючись цим, зернові концентрати, протеїнові корми, рослинність пасовищ, сухі фуражі, силоси і трав'яні культури. Крім того, можна використовувати добавки для гарантії того, що раціон забезпечує необхідні харчові потреби. Оскільки доступність, вартість, кількість і якість поживних речовин, що входять до його складу, кожного з вказаних інгредієнтів варіює, то свинарі час від часу змінюють склад раціонів. Наприклад, свинар може дотримуватися комплексної схеми використання різних раціонів з врахуванням харчових потреб для кожної стадії життя свиней, впливу факторів оточуючого середовища на такі харчові потреби і доступності конкретних кормових інгредієнтів. Перехідний період після відлучення, період, під час якого поросят віднімають від свиноматок і переводять на корми, включає деякі найбільш виражені зміни у харчуванні і способі життя у порівнянні з усіма подальшими стадіями життя. Див., наприклад, Efird et al., J. Anim. Sci. 55: 1370 (1982). У результаті у поросят-відлученців часто спостерігають зупинку росту, яку часто називають лагперіодом після відлучення. Під час лаг-періоду після відлучення у поросят можуть бути відсутніми прирости ваги, і вони можуть навіть втрачати у вазі тіла. Лаг-період після відлучення може також викликати істотні втрати у свинарстві, коли вартість кормів складає приблизно від 65 до 75% загальної вартості виробництва. Свинарі намагаються звести до мінімуму лаг-період після відлучення за допомогою застосування спеціальних джерел кормів і кормових добавок, таких як одержаний з плазми і цільної крові протеїн, молочні продукти і соєвий концентрат, для годування поросят-відлученців у фазовій програмі годування. Дані джерела корму і добавки тісно відповідають харчовим потребам поросят-відлученців, і вони можуть істотно підвищити вартість кінцевого раціону. Таким чином, період відлучення і лаг-період після відлучення здійснюють істотний негативний вплив на ефективність і ціни у свинарстві. Незважаючи на те, що великий ряд стресових факторів оточуючого середовища може здійснювати свій внесок у тривалість лаг-періоду після відлучення, вважають, що домінуючими факторами є зміна форми корму (від молока свиноматки до корму) і адаптація до нових кормових інгредієнтів. Див. McCracken et al., J. Nutr. 125: 2838 (1995); і Pierzynowski et al.; J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 16: 287 (1993). Під час перехідного періоду після відлучення поросята повинні адаптуватися від рідкого корму, що складається з молока свиноматок, до твердого корму, що складається з формульованих кормів для тварин. Дана зміна у кормі і кормових поживних речовинах, яка може відбутися різко, часто викликає значні фізіологічні реакції у 91343 6 відповідь у поросят-відлученців, включаючи зміни у морфології тонкого кишечнику і екзокринній функції підшлункової залози, Cera et al., J. Animal. Sci. 66: 574 (1988); Cera et al., J. Animal. Sci. 68: 384 (1990); і кількісні та якісні зміни в екзокринній функції підшлункової залози, Lindemann et al., J. Animal. Sci. 62: 1298 (1986). Фізіологія і функція підшлункової залози Підшлункова залоза являє собою важливий придатковий орган травної системи, який функціонує одночасно як ендокринна залоза і як екзокринна секреторна залоза. Див., наприклад, Currie, Structure and Function of Domestic Animals, Butterworths Pub., Boston, Massachusetts (1988). Розташована у черевній порожнині у брижі, підшлункова залоза секретує травні ферменти, які проходять через одну або більше проток підшлункової залози у тонкий кишечник. Відомо спектр різних ферментів, і в основному ці ферменти відповідальні за гідролітичну обробку поживних речовин кормів, з перетворенням в одиниці, здатні всмоктуватися у тонкому кишечнику. Підшлункова залоза секретує ферменти, здатні обробляти кожну з основних груп поживних речовин - вуглеводи, ліпіди і протеїни. Приклади ферментів для обробки кожної з цих груп поживних речовин відомі, відповідно, як амілази, ліпази і протеази. Активність ферментів підшлункової залози у кількісному і якісному відношенні змінюється протягом життя свиней, в залежності від кількості і складу поживних речовин корму. Ethridge et al, J. Animal. Sci. 58: 1396 (1984). У непатологічному стані клітини ацинусу підшлункової залози продукують неактивні форми вказаних травних ферментів. Такі форми відомі як зимогени або проферменти. Неактивні травні ферменти знаходяться всередині зимогенних гранул і активуються внаслідок протеолітичного розщеплення, в основному під дією ферменту трипсину, після чого вони виділяються у тонкий кишечник. У свою чергу, активація трипсину регулюється інгібіторами трипсину, присутніми в ацинарному і протоковому секретах, і ентерокіназою дванадцятипалої кишки, ферментом, що в основному знаходиться тільки у ділянках тонкого кишечнику. Сумарна дія даної системи регуляції забезпечує те, що ферменти підшлункової залози активуються тільки коли необхідно піддати поживні речовини корму гідролітичній обробці. Функція підшлункової залози під час періодів найбільших змін умов вирощування Деякі дослідники повідомляли про розвиток здатності до травлення у поросят і вплив віку, маси і раціону поросят на екзокринну функцію підшлункової залози. Наприклад, Pierzynowski et al., J. Pediatr. Gastroenterol. Nutr. 16: 287 (1993) повідомляли, що дозрівання екзокринної функції підшлункової залози у більшій мірі залежить від відлучення, ніж від віку. Спочатку травна активність ферментів підшлункової залози у поросятвідлученців знижується у порівнянні з поросятамисосунами. Однак згодом фонова активність і активність після згодовування амілаз, ліпаз, протеаз і загальна екзокринна секреція підшлункової залози у поросят-відлученців зростають. Дані зміни тісно 7 корелюють з кормом у поросят-відлученців, але не з віком. Обмеження терапії екзогенними ферментами Деякі свинарі застосовують екзогенні ферменти як кормові добавки. Вивчення і промислове використання даних ферментів тільки нещодавно стало доступним внаслідок застосування прогресивної технології рекомбінантної ДНК і екзогенної експресії ферментів у бактеріях та інших мікроорганізмах. Однак є декілька факторів, що обмежують застосовність екзогенних ферментів у кормі для тварин. По-перше, фахівці у даній галузі протягом тривалого періоду вважали, що екзогенні ферменти не потрібні для поліпшення травлення у здорових тварин. Наприклад, Holden et al., Life Cycle Swine Nutrition, PM-489, 17th Rev., Iowa State Univ., Ames, Iowa (2000) роблять висновок про те, що поросята «продукують адекватні кількості травних ферментів для перетравлювання білків, вуглеводів і ліпідів, які вони здатні перетравлювати». Замість цього фахівці використовують екзогенні ферменти для поліпшення перетравлювання речовин, які тварини не можуть самі перетравлювати. Наприклад, ячмінь містить β-глюкани або водорозчинні вуглеводи, які погано перетравлюються у свиней, і фахівці вважають, що корми, які містять β-глюканазу, можуть сприяти перетравлюванню ячменю, коли він застосовується як інгредієнт корму. По-друге, кожний екзогенний фермент, як правило, направлений на вузький ряд субстратів. Таким чином, для застосування екзогенних ферментів для поліпшення перетравлювання корму в основному потрібне складне перемішування корму, що містить визначені комбінації ферментних субстратів і екзогенних ферментів. Для такого об'єднання буде необхідне хороше знання доступних препаратів екзогенних ферментів, їх конкретна специфічність відносно субстрату і правильне складання кормів і умови зберігання. Отже, при використанні екзогенних ферментів для даної мети свинарі повинні будуть зробити вибір детального складу раціону, підвищуючи тим самим вартість виробництва. По-третє, ефективність препаратів екзогенних ферментів істотно змінюється під час промислової обробки і складання корму. Промислова обробка корму для тварин часто включає нагрівання, екструзію і гранулювання. Агресивні умови промислової обробки екзогенних ферментів істотно знижують активність ферментів. Крім того, екзогенні ферменти, як правило, самі руйнуються або каталізують розкладання інгредієнтів корму після складання корму. Обидві цих події істотно зменшують час, протягом якого може зберігатися корм, що містить ферменти. Крім того, сама травна система стимулює застосування екзогенних ферментів як кормових добавок. Корм для тварин, які не належать до жуйних, таких як свині, повинен пройти через сильнокислотний вміст шлунку, де починається перетравлювання білків. Потім хімус надходить зі шлунку через воротаря у просвіт тонкого кишечнику. Незважаючи на те, що він як і раніше є сильнокислотним, хімус швидко нейтралізується і стає 91343 8 слабо лужним. При цьому велика частина травних ферментів має оптимум значень при нейтральних рН або близьких до нейтральних. Таким чином, за рахунок властивостей самої травної системи потрібно, щоб екзогенні ферменти залишалися стабільними у сильнокислотних умовах, з оптимумом функціонування у слаболужних умовах. Панкреатин Панкреатин являє собою продукт, одержаний з підшлункової залози, який готують шляхом висушування і гідролізу підшлункової залози свиней. Див., наприклад, патент США № 3956483 («Preparing Pancreatin»). Панкреатин готують з висушеної, знежиреної підшлункової залози. Його одержують зі свіжої або свіжозамороженої підшлункової залози. Звичайно підшлункові залози подрібнюють і змішують при подрібненні з дванадцятипалою кишкою, яку додають для активації протеолітичних ферментів або зимогенів у підшлунковій залозі. Альтернативно протеолітичну активність іноді забезпечують у препараті панкреатину, додаючи активний трипсин. Потім суміш піддається активації ферментів. Після цього підшлункову залозу знежирюють і висушують, як правило, використовуючи вакуумне сушіння при кімнатній температурі. Панкреатин в основному застосовували у тваринництві для лікування порушень травної системи. Див., наприклад, патент США № 5112624 («Prevention of digestive disturbances in herbivores»); див. також патент Росії № 829115 («Gastrointestinal disorder in calves»). Панкреатин також запропонований для застосування як кормова добавка. Наприклад, Cortamira et al., Proc. Of the 7th Int. Symp. on Digestive Physiology in Pigs, Univ. Alberta, Edmonton, Alberta (1997), досліджували застосування 0,01-0,03% обробленого панкреатину у кормі для свиней. Див. також патент США № 2878123 («Use of Proteolytic Enzymes in Poultry Feed»). Отже, відсутня придатна до вживання кормова добавка на основі стабілізованого продукту з підшлункової залози. Наприклад, у патенті США №3313705 розкривається низькотемпературний спосіб одержання ліофілізованого лікарського препарату на основі підшлункової залози. Див. стор. 1, рядки 65-69. Однак спосіб є трудомістким і непрактичним для відтворення у промислових масштабах для одержання корму для тварин. Див. стор. 2, рядки 16-51. Крім того, розкритий продукт піддається автолізу в атмосферних умовах, і для нього потрібні особливі умови зберігання (наприклад, застосування дегідратуючої пробки). Див. стор. 3, рядки 27-39. Отже, є актуальна потреба у придатному для вживання стабілізованому продукті з підшлункової залози, який можна використовувати, наприклад, як кормову добавку. Суть винаходу Даний винахід стосується стабілізованих продуктів з підшлункової залози, кормових добавок, включаючи стабілізовані продукти з підшлункової залози, способів одержання і способів застосування стабілізованих продуктів з підшлункової залози. В одному варіанті здійснення винахід стосується 9 продукту з підшлункової залози, що містить один або більше ферментів підшлункової залози в їх зимогенній формі. В інших варіантах здійснення винахід стосується стабілізованих продуктів з підшлункової залози зі специфічною амілазною або протеазною активністю. У ще одному варіанті здійснення винахід стосується кормових добавок, що містять стабілізовані продукти з підшлункової залози. В інших варіантах здійснення винахід стосується кормів, що містять кормову добавку на основі стабілізованого продукту з підшлункової залози. В інших варіантах здійснення даний винахід стосується способів збагачення кормів для тварин стабілізованими кормовими продуктами. Деякі варіанти здійснення включають в себе спосіб збагачення кормів для тварин стабілізованими кормовими продуктами перед, під час і після періодів зміни умов вирощування тварин. У деяких варіантах здійснення період зміни умов вирощування являє собою перехідний період від першого джерела корму до другого джерела корму, перехідний період від рідкого до твердого джерела корму або відлучення молодняку від матки. В інших варіантах здійснення даний винахід стосується способів одержання стабілізованих продуктів з підшлункової залози. В одному варіанті здійснення даний винахід стосується способу одержання стабілізованого продукту з підшлункової залози, що включає в себе стадії емульгування підшлункових залоз і змішування емульгованої підшлункової залози з підкислювачем. В іншому варіанті здійснення винахід стосується способів одержання стабілізованого продукту з підшлункової залози шляхом змішування емульгованої підшлункової залози з придатним носієм і екструзії суміші. У ще одному варіанті здійснення винахід стосується способу одержання стабілізованого продукту з підшлункової залози, що включає в себе стадії розпилення емульгованої підшлункової залози і збору розпиленої підшлункової залози. Докладний опис винаходу Даний винахід базується на дивному і несподіваному виявленні стабілізованого продукту з підшлункової залози, який можна одержати у великих кількостях, який просто зберігати і обробляти, і який є придатним, наприклад, як кормова добавка для підвищення утилізації поживних речовин у тварин, які піддаються змінам умов їх вирощування. Даний винахід широко застосовний у ряді сільськогосподарських і кормових виробництв, включаючи розведення водних організмів, м'ясне і молочне виробництво, виробництво промислових кормів для домашніх тварин, конярство, птахівництво і свинарство. Стабілізовані продукти з підшлункової залози Один варіант здійснення даного винаходу стосується стабілізованого продукту з підшлункової залози, який є придатним, наприклад, як кормова добавка. Тут термін «стабілізований продукт з підшлункової залози» стосується композиції, одержаної по суті з цілих підшлункових залоз. Вказані залози можна звільнити від шарів брижі або можна в основному звільнити від пухкої з'єднувальної 91343 10 тканини, що лежить зверху. Альтернативно залози можуть знаходитися у тому вигляді, в якому їх дістають, без видалення брижі і жиру, що лежать зверху. У будь-якому випадку видалення ліпідів зі стабілізованих продуктів з підшлункової залози відповідно до винаходу не є необхідним. Тут термін «стабілізований» стосується деяких властивостей продукту з підшлункової залози, таких як стійкість до ферментативного розщеплюючого гідролізу, стійкість до псування під дією мікробів і грибків і стійкість до окиснення жиру. Таким чином, стабілізовані продукти з підшлункової залози відповідно до винаходу є стійкими до ферментативного розщеплюючого гідролізу, стійкими до псування під дією мікробів і грибків і стійкими до окиснення жиру. Отже, стабілізовані продукти з підшлункової залози відповідно до винаходу залишаються стабільними і стійкими до автолізу або розкладання при впливі повітря або води. Крім того, за рахунок даних властивостей для стабілізованих продуктів з підшлункової залози відповідно до винаходу не потрібно видалення жирів або ліпідів або проведення ліофілізації. В одному варіанті здійснення стабілізований продукт з підшлункової залози відповідно до винаходу включає в себе підшлункову залозу, яку не гідролізують, а обробляють для стабілізації ферментів підшлункової залози. Більш конкретний варіант здійснення включає в себе стабілізований продукт з підшлункової залози, що містить ферменти підшлункової залози у зимогенній формі. У тому значенні, в якому тут використовуються дані терміни, «зимоген» або «зимогенна форма» стосуються неактивних або практично неактивних попередників ферменту. Ферменти, синтезовані у вигляді зимогенів, потім можуть активуватися при розщепленні одного абобільше визначених пептидних зв'язків. Таке розщеплення має місце, наприклад, коли попередник протеолітичного ферменту трипсину, трипсиноген, гідролізується під дією ферменту ентеропептидази. Див., наприклад, Berg et al, (Eds.), Biochemistry, 5th Ed., W. H. Freeman and Co., New York (2002). Стабілізований продукт з підшлункової залози відповідно до винаходу включає в себе ферменти підшлункової залози, які не піддаються ферментативному руйнуванню під час зберігання. В одному варіанті здійснення стабілізований продукт з підшлункової залози зберігає щонайменше приблизно 75% своєї вихідної ферментативної активності. В інших варіантах здійснення стабілізований продукт з підшлункової залози зберігає щонайменше приблизно 80% своєї вихідної ферментативної активності; щонайменше приблизно 85% своєї вихідної ферментативної активності; щонайменше приблизно 90% своєї вихідної ферментативної активності; або щонайменше приблизно 95% своєї вихідної ферментативної активності. В іншому варіанті здійснення стабілізований продукт з підшлункової залози включає в себе ферменти підшлункової залози, які не піддаються істотному ферментативному руйнуванню під час зберігання протягом не менш ніж 2 діб. В інших варіантах здійснення стабілізований продукт з підшлункової залози включає в себе ферменти під 11 шлункової залози, які не піддаються істотному ферментативному руйнуванню під час зберігання протягом, відповідно, не менш ніж 10 і 30 діб. У ще одному варіанті здійснення стабілізований продукт з підшлункової залози включає в себе ферменти підшлункової залози, які не піддаються істотному ферментативному руйнуванню під час зберігання протягом не менш ніж одного року. Стабілізований продукт з підшлункової залози відповідно до винаходу забезпечений у рідкій і сухій формах. В одному варіанті здійснення винахід стосується сухих стабілізованих продуктів з підшлункової залози. Більш конкретні варіанти здійснення включають в себе сухі стабілізовані продукти з підшлункової залози, які мають вміст вологи у межах від приблизно 1% до приблизно 20%. В інших варіантах здійснення винахід стосується вологих стабілізованих продуктів з підшлункової залози. Більш конкретні варіанти здійснення включають в себе вологі стабілізовані продукти з підшлункової залози, які мають вміст вологи у межах від приблизно 20% до приблизно 95%. В інших варіантах здійснення стабілізований продукт з підшлункової залози має конкретний профіль активованих ферментів. У тому значенні, в якому тут використовується даний термін, «профіль активованих ферментів» стосується рівнів ферментативної активності, що. виявляються стабілізованим продуктом з підшлункової залози, коли продукт відповідним чином активований. Для фахівців у даній галузі можуть представляти інтерес декілька ферментів підшлункової залози, таких як групи ферментів підшлункової залози, перераховані у наш час як дозволені для застосування у тваринництві Асоціацією американських інспекторів з контролю за кормами («AAFCO»). Дані дозволені для застосування групи ферментів підшлункової залози включають в себе, серед іншого, α-амілазу, ліпазу і трипсин. Очевидно, фахівцям у даній галузі зрозуміло, що, наприклад, зимогени протеази можна активувати шляхом інкубації стабілізованих продуктів з підшлункової залози, серед іншого, з вмістом тонкого кишечнику. Можна активувати інші ферменти, як це відомо у даній галузі. Стабілізовані продукти з підшлункової залози відповідно до винаходу можуть мати різноманітні профілі активованих ферментів. В одному варіанті здійснення стабілізований продукт з підшлункової залози може виявляти амілазну і протеазну активність. У використовуваному тут значенні термін, «активність амілази» можна визначити з використанням методик, добре відомих у даній галузі, таких як методики, описані у Cesca et al, Clin. Chim. Acta 26: 437-44 (1969) і Von Worthington (Ed.), Worthington enzyme manual: enzymes and related biochemicals 399, Worthington Chemicals, Lakewood, New Jersey (1993). Коротко, одна одиниця активності амілази еквівалентна кількості ферменту, яка каталізує один мікромоль (1 мкМ) глікозидних зв'язків за одну хвилину при визначених умовах. В одному методі придатний тест з субстратом можна проводити з використанням таблеток амілази для проведення тесту Phadebas® (Pharmacia Diagnostics AB, Uppsala, 91343 12 Швеція), дотримуючись інструкцій виробника. Спочатку аліквоту проби, що тестується, розводять розчином реагенту. Аліквоту підігрівають до 37°С і вносять таблетку амілази для проведення тесту. Розчин інкубують протягом визначеного періоду, і реакцію зупиняють доданням розчину гідроксиду натрію. Розчин освітлюють центрифугуванням або фільтруванням, і визначають поглинання проти контрольної проби з реагентом. Поглинання проби пропорційне активності ex-амілази, що міститься у ній. Крім того, у даній галузі добре відомі інші методики і методи визначення активності амілази. Такі методи можна використовувати у тих випадках, коли активність амілази порівнюють з ферментативною активністю панкреатину і виражають у процентах. У тому значенні, в якому тут використовується даний термін, «активність протеази» можна визначити з використанням методик, добре відомих у даній галузі, таких як описані Gessesse A. and B.A. Gashe, Biotechnol. Lett. 19(5): 479-81 (1997). Одна одиниця активності протеази еквівалентна кількості ферменту, яка вивільняється з субстрату під дією одного мікрограму фенольної сполуки, вираженої в еквівалентах тирозину, за одну хвилину при ряді визначених умов. В одному методі проби активують інкубацією з вмістом кишечнику або суспензією тканини, що взята з тонкого кишечнику. Після активації проби екстрагують розчином хлориду натрію, і готують відповідні профільтровані розведення. Після зрівноваження температури розведень проби і реагентів для проведення тесту розчин, що містить казеїн Hammarsten Casein (Merck KGaA, Darmstadt, Німеччина), ретельно перемішують з розведеними пробами та інкубують. Після визначеного періоду додають розчин трихлороцтової кислоти, і проби продовжують інкубувати. Після інкубації проби фільтрують або центрифугують, і визначають їх поглинання проти контрольної проби з реагентом і стандартною кривою, побудованою з маточними розчинами Lтирозину. Крім того, у даній галузі добре відомі інші методики і методи визначення активності протеази. Такі методи можна використовувати у тих випадках, коли активність протеази порівнюють з ферментативною активністю панкреатину і виражають у процентах. Аналогічно фахівці у даній галузі можуть використовувати відомі аналітичні методи для порівняння ферментативної активності конкретного, такого, що представляє інтерес, ферменту підшлункової залози у стабілізованому продукті з підшлункової залози з ферментативною активністю панкреатину. Наприклад, можна порівняти активність трипсину і хімотрипсину з використанням аналітичного протоколу, описаного Erlanger et al., Arch. Biochem. Biophys. 95: 271-78 (1961). В іншому варіанті здійснення активність ліпази порівнюють, використовуючи протоколи, описані I.G. Borlongan, Chanos Aquaculture 89: 315-25 (1990); Gupta et al., Biotechnol. Appl. Biochem. 37: 63-71 (2003) або Jahic et al., J. Biotechnol. 102: 45-53 (2003). У тому значенні, в якому тут використовується даний термін, панкреатин відповідає опису, опуб 13 лікованому Фармакопейною конвенцією США (Rockville, Maryland). Прикладом панкреатину для застосування як порівняльного контролю, наприклад, може бути такий виробництва Sigma-Aldrich, Inc. (St. Louis, Missouri), номер за каталогом Р7545. Один варіант здійснення стабілізованого продукту з підшлункової залози включає в себе конкретний профіль активованих ферментів. У деяких варіантах здійснення стабілізовані продукти з підшлункової залози включають в себе профілі активованих ферментів, які, по відношенню до сухої речовини панкреатину, відповідають, щонайменше приблизно 0% активності амілази, щонайменше приблизно 3% активності амілази, щонайменше приблизно 5% активності амілази, щонайменше приблизно 10% активності амілази, щонайменше приблизно 15% активності амілази, щонайменше приблизно 20% активності амілази, щонайменше приблизно 60% активності амілази, щонайменше приблизно 70% активності амілази, щонайменше приблизно 77% активності амілази, щонайменше приблизно 80% активності амілази, щонайменше приблизно 90% активності амілази, щонайменше приблизно 100% активності амілази, щонайменше приблизно 105% активності амілази, щонайменше приблизно 110% активності амілази або, щонайменше приблизно 120% активності амілази. В інших варіантах здійснення стабілізовані продукти з підшлункової залози включають профілі активованих ферментів, які, по відношенню до сухої речовини панкреатину, відповідають, щонайменше приблизно 20% активності протеази, щонайменше приблизно 30% активності протеази, щонайменше приблизно 40% активності протеази, щонайменше приблизно 70% активності протеази, щонайменше приблизно 80% активності протеази, щонайменше приблизно 90% активності протеази, щонайменше приблизно 100% активності протеази, щонайменше приблизно 110% активності протеази, щонайменше приблизно 120% активності протеази, щонайменше приблизно 130% активності протеази, щонайменше приблизно 140% активності протеази, щонайменше приблизно 180% активності протеази, щонайменше приблизно 190% активності протеази, щонайменше приблизно 200% активності протеази, щонайменше приблизно 210% активності протеази або, щонайменше приблизно 220% активності протеази. В інших варіантах здійснення стабілізований продукт з підшлункової залози відповідно до винаходу включає профілі активованих ферментів, які, по відношенню до сухої речовини панкреатину, відповідають, щонайменше приблизно 20% активності ліпази, щонайменше приблизно 30% активності ліпази, щонайменше приблизно 40% активності ліпази, щонайменше приблизно 70% активності ліпази, щонайменше приблизно 80% активності ліпази, щонайменше приблизно 90% активності ліпази, щонайменше приблизно 100% активності ліпази, щонайменше приблизно 110% активності ліпази, щонайменше приблизно 120% активності ліпази, щонайменше приблизно 130% активності ліпази, щонайменше приблизно 140% активності ліпази, щонайменше приблизно 180% 91343 14 активності ліпази, щонайменше приблизно 190% активності ліпази, щонайменше приблизно 200% активності ліпази, щонайменше приблизно 210% активності ліпази або, щонайменше приблизно 220% активності ліпази. В інших варіантах здійснення винахід стосується стабілізованого продукту з підшлункової залози, що має профіль активованих ферментів, який складає комбінацію будь-якого з представлених вище значень активності амілази, протеази або ліпази. Одержання стабілізованого продукту з підшлункової залози Винахід також стосується способів одержання стабілізованого панкреатичного продукту з підшлункової залози тварини. У кожному способі метою обробки є стабілізація ферментів підшлункової залози, тобто захист одержаного продукту від ферментативного розщеплюючого гідролізу, псування під дією мікробів і грибків та окиснення жиру. Кожний з наведених далі способів одержання забезпечує різні засоби стабілізації продукту з підшлункової залози відповідно до винаходу. Підшлункові залози тварин можна одержати з різних джерел, таких як відходи від забійної худоби на бойнях. В одному варіанті здійснення підшлункові залози одержують від свиней. В іншому варіанті здійснення підшлункові залози одержують від великої рогатої худоби. Фахівці у даній галузі, очевидно, розуміють, що підшлункові залози багатьох інших видів тварин можна одержати від тварин, яких піддають забою на місцевих бойнях. Однак винахід не обмежується джерелом підшлункових залоз. В одному варіанті здійснення стабілізований продукт з підшлункової залози одержують з емульгованих підшлункових залоз. Підшлункові залози можна емульгувати будь-якими способами, відомими у даній галузі. Наприклад, емульгування можна провести з використанням решітчастої дробарки або аналогічного обладнання з доданням або без додання води. У результаті емульгування підшлункова залоза може містити від приблизно 5% до приблизно 95% сухої речовини. Фахівцям у даній галузі повинно бути зрозуміло, що вміст сухої речовини емульгованої підшлункової залози може варіювати, в залежності від вибраного способу одержання. Наприклад, для способу розпилювального сушіння може бути необхідна емульгована підшлункова залоза з вмістом сухої речовини у межах приблизно від 5% до приблизно 50%. Один варіант здійснення даного винаходу стосується способу одержання стабілізованого продукту з підшлункової залози з використанням процесу екструзії. Коротко, емульговану підшлункову залозу змішують з носієм. Є багато придатних носіїв, наприклад, кормові інгредієнти, зернові або джерела клітковини, включаючи їх відповідні побічні продукти. Більш конкретно, придатні носії включають в себе кукурудзяне і/або соєве лушпиння. Необов'язково до суміші можна додати джерело клітковини або її побічний продукт, такий як клітковина лушпиння, клітковина сім'ядоль, клітковина висівок, клітковина коріння рослин або їх комбінації. Більш конкретно, соєве лушпиння мож 15 на додати у суміш як джерело клітковини. Інші придатні джерела клітковини або їх побічні продукти включають в себе, але не обмежуються цим, клітковину рисового лушпиння, клітковину рисових висівок, клітковину вівсяного лушпиння, бурякові вижимки, клітковину соняшникового лушпиння, клітковину кукурудзяного лушпиння і клітковину сім'ядоль сої. Суміш висушують, наприклад, її швидко пропускають через ряд нагрітих затворів під тиском. Потім суміш розпилюють у колекторі. Необов'язково екструдований стабілізований продукт з підшлункової залози можна додатково висушити з використанням охолоджувачів і/або випарних конвеєрів. В іншому варіанті здійснення стабілізовані продукти з підшлункової залози відповідно до винаходу одержують шляхом розпилювального сушіння. Можна використовувати будь-яку розпилювальну сушарку, включаючи розпилювальні сушарки з соплами, такі як барабанні розпилювальні сушарки і розпилювачі з двома рідинами. В одному варіанті здійснення у способі розпилювального сушіння використовують емульговану підшлункову залозу з вмістом сухої речовини у межах від приблизно 5% до приблизно 50%. Для поліпшення процесу розпилювального сушіння до емульгованої підшлункової залози додають порошкоподібні речовини, що підвищують текучість. Під час проведення даного способу одержання емульговану підшлункову залозу можна нагріти до температури підтримки рідкого стану приблизно від 50°С до приблизно 80°С, в залежності від вмісту сухої речовини в емульгованій підшлунковій залозі. Емульговану підшлункову залозу можна пропустити під тиском через розпилювальне сопло у сушильну камеру. Потім з сушильної камери вивантажують стабілізований продукт з підшлункової залози. Вміст сухої речовини в одержаному стабілізованому продукті з підшлункової залози може складати від приблизно 80% до приблизно 100%. У ще одному варіанті здійснення стабілізовані продукти з підшлункової залози одержують, змішуючи з підкислювачем для досягнення мікробіологічної і ферментативної стабілізації. Відповідно до даного способу одержання, підшлункові залози або необов'язково емульговану підшлункову залозу можна змішати з придатним джерелом клітковини або побічним продуктом, таким як соєве лушпиння, або іншими джерелами рослинної клітковини, описаними вище. Суміш стабілізують підкислювачем, який знижує рН суміші до значень у межах від приблизно 7,5 до приблизно 3,5, від приблизно 7,0 до приблизно 4,0, від приблизно 6,5 до приблизно 4,0 або від приблизно 6,0 до приблизно 4,5. Пропіонова кислота представляє приклад підкислювача, і можна використовувати найрізноманітніші неорганічні і органічні кислоти, включаючи оцтову кислоту. Внаслідок даного способу стабілізації рН одержують стабілізований продукт з підшлункової залози з вмістом сухої речовини у межах від приблизно 5% до приблизно 95%. Дивно, але даний стабілізований за рН продукт з підшлункової залози є виключно стійким до ферментативного розщеплюючого гідролізу, стійким до псування під дією мікробів і грибків та стій 91343 16 ким до окиснення жиру. При цьому вологий стабілізований за рН продукт з підшлункової залози можна зберігати і використовувати аналогічно до фуражу, наприклад, у вигляді силосу. Стабілізовані продукти з підшлункової залози відповідно до винаходу готові для застосування як кормові добавки. Однак стабілізовані продукти з підшлункової залози можна додатково піддати обробці різними способами, відомими фахівцям у даній галузі. В інших варіантах здійснення вміст сухої речовини у стабілізованих продуктах з підшлункової залози відповідно до винаходу складає від приблизно 5% до приблизно 95%. У деяких варіантах здійснення вміст сухої речовини у сухих стабілізованих продуктах з підшлункової залози відповідно до винаходу може складати від приблизно 70% до приблизно 95%. В інших варіантах здійснення вміст сухої речовини у вологих стабілізованих продуктах з підшлункової залози може складати від приблизно 5% до приблизно 30%. У ще одному варіанті здійснення стабілізовані продукти з підшлункової залози можуть знаходитися у вигляді кормової суміші або у вигляді поверхневого покриття. Альтернативно стабілізовані продукти з підшлункової залози можуть являти собою сухий порошок. В одному варіанті здійснення стабілізований продукт з підшлункової залози є сухим порошком, що містить менш ніж приблизно 20% вологи. Крім того, стабілізовані продукти з підшлункової залози відповідно до винаходу можна додатково обробити і використовувати як компонент складеного корму. Застосування стабілізованого продукту з підшлункової залози Інший варіант здійснення винаходу стосується кормової добавки, що включає в себе стабілізований продукт з підшлункової залози. В одному варіанті здійснення кормову добавку змішують або складають з одержанням повного корму, який вводять тварині перорально. В іншому варіанті здійснення кормову добавку змішують або складають з одним або більше компонентами раціону вільного вибору. У ще одному варіанті здійснення кормову добавку вносять у корм, наприклад, шляхом (1) ретельного перемішування перед згодовуванням, (2) розпилення на корм з використанням пристроїв, таких як розпилювальні аплікатори, або (3) нанесення покриття на корм. У ще одному варіанті здійснення кормову добавку вводять у поєднанні з введенням кормових добавок, наприклад, брикетів з мінералами. В іншому варіанті здійснення корм, що містить стабілізований продукт з підшлункової залози, може знаходитися у твердій або рідкій формі. Зразковий твердий корм можна складати, включаючи приблизно 0,1% (мас/мас.) кормової добавки на основі стабілізованого продукту з підшлункової залози. В інших варіантах здійснення твердий корм можна складати з включенням від приблизно 0,001% до приблизно 1% кормової добавки на основі стабілізованого продукту з підшлункової залози. Зразковий рідкий корм можна складати з включенням приблизно 0,1% (мас/мас.) кормової 17 добавки на основі стабілізованого продукту з підшлункової залози. В інших варіантах здійснення рідкі корми можна складати з включенням від приблизно 0,001% до приблизно 1% кормової добавки на основі стабілізованого продукту з підшлункової залози. Корм можна приготувати з широкого ряду кормових інгредієнтів. Наприклад, фахівцям має бути зрозуміло, що енергетичний компонент корму може базуватися на зернових і їх побічних продуктах, таких як кукурудза, сорго, овес, ячмінь, пшениця і рис. Аналогічно протеїновий компонент корму може базуватися на протеїні тваринного або рослинного походження, такому як піддані тепловій обробці суцільні соєві боби, висушений шляхом розпилювального сушіння білок плазми крові, сухе знежирене молоко або молочна сироватка. Ліпідний компонент корму можна одержати з джерел кормових жирів і масел, включаючи такі тваринного походження (топлений тваринний жир, твердий тваринний жир), жири рослинного походження (кукурудзяна олія і соєва олія) і ресторанні і побічні продукти їх переробки (суміші жирів і масел). Корм може містити також кормові і некормові джерела клітковини і/або відповідні їм побічні продукти. Крім того, корм може бути збалансований з використанням кормових добавок, таких як вітаміни і мінерали. Корм може включати в себе інші компоненти, з врахуванням кормових поживних і/або медичних потреб у тварини. Корма відповідно до винаходу можна одержати будь-яким методом, відомим у даній галузі, таким як подрібнення або плющення, гранулювання і/або теплова обробка. В одному варіанті здійснення корм формують у гранули. Наприклад, див. патент США № 4183675 («Energy conserving method and apparatus for pelleting particulate animal feed»). Коротко, гранули можна формувати стадіями дозування, змішування і гранулювання на відомому промислово доступному обладнанні. Дане обладнання можна об'єднати в установці, що включає змішувач, який вивантажується у приймальний бункер, який у свою чергу вивантажується у прес-гранулятор, що складається з подавального механізму з різною швидкістю, парової кондиційної камери і вузла матриці з роликами. Суміш надходить з подавального пристрою через кондиціонер, який розвантажується у вузол матриці з роликами, де стабілізований продукт з підшлункової залози екструдують, з утворенням гранул. Потім гранули вивантажують з пресгранулятора. Парова кондиційна камера не є важливою для даного зразкового способу, і її можна опустити. Зміни умов вирощування тварин В одному варіанті здійснення даний винахід стосується способів застосування стабілізованого продукту з підшлункової залози як кормової добавки перед, під час або після будь-якого періоду зміни умов вирощування тварин. У тому значенні, в якому тут використовується даний вираз, «зміна умов вирощування тварин» представляє термін, відомий у даній галузі, для позначення переходу з одного корму на інший або зміни в оточуючому середовищі. Зміна умов вирощування може бути пов'язана з певною стадією у житті тварини, такою 91343 18 як відлучення від матки, початок і проходження вагітності або прискорена відгодівля тварин. В іншому варіанті здійснення стабілізований продукт з підшлункової залози використовується як кормова добавка у періоди зміни умов вирощування, викликані іншими факторами, такими як фактори оточуючого середовища. Фактори оточуючого середовища можуть включати зміни температури або клімату, впливам яких піддається тварина, зміни утримання тварини і зміни суспільної групи тварини. В інших варіантах здійснення стабілізований продукт з підшлункової залози використовують як кормову добавку перед, під час або після зміни умов вирощування, що має місце під час переходу з одного джерела корму на інший, як це відбувається, наприклад, коли використовується нова партія корму, коли змінюється відносна кількість і/або тип компонентів раціону, коли тварині згодовують раціон, змішаний або формульований з використанням інших джерел корму у порівнянні з попереднім раціоном, або при будь-якому переході з одного раціону на інший раціон. У ще одному варіанті здійснення стабілізований продукт з підшлункової залози використовується перед, під час або після періоду зміни умов вирощування тварини, яка знаходиться у періоді компенсаторного росту. Період компенсаторного росту у більшості тварин йде за періодом обмеження у поживних речовинах корму і може відноситися фахівцями у даній галузі до циклу з відсутністю росту. Інший варіант здійснення винаходу стосується способів застосування стабілізованого продукту з підшлункової залози для посилення у тварини ендогенної продукції ферментів підшлункової залози. Способи відповідно до винаходу є придатними під час періодів зміни умов вирощування, коли продукція ферментів підшлункової залози є недостатньою для задоволення потреб, обумовлених кількістю субстрату у тонкому кишечнику. У тому значенні, в якому тут використовується даний термін, вираз «перед зміною умов вирощування тварини» означає години-доби перед зміною умов вирощування. В одному варіанті здійснення винахід стосується способів застосування стабілізованого продукту з підшлункової залози у період від приблизно за 1 год. до приблизно за 5 год., приблизно до 1 доби перед зміною умов вирощування. У ще одному варіанті здійснення винахід стосується способів застосування стабілізованого продукту з підшлункової залози у період від приблизно за 1 добу до приблизно за 2 доби, приблизно до 1 тижня перед зміною умов вирощування. У третьому варіанті здійснення винахід стосується способів застосування стабілізованого продукту з підшлункової залози у період, починаючи приблизно за 1 тиждень або більше перед зміною умов вирощування. У тому значенні, в якому тут використовується даний термін, вираз «під час зміни умов вирощування тварини» означає години або доби, протягом яких може мати місце зміна умов вирощування. Він стосується різного за тривалістю періоду часу, який починається зі зміни умов вирощування 19 і може продовжуватися протягом годин або діб в залежності від природи і якості зміни умов вирощування. Наприклад, його тривалість може обчислюватися годинами, коли тварина піддається змінам оточуючої температури, або добами, якщо тварина перевозиться на далекі відстані. У ще одному варіанті здійснення він може продовжуватися протягом доби, коли тварина піддається переходу з одного джерела корму на інше джерело корму. Фахівцям у даній галузі, очевидно, зрозуміло, що є періоди часу іншої тривалості в залежності від природи і якості зміни умов вирощування. У тому значенні, в якому тут використовується даний термін, вираз «після зміни умов вирощування тварини» означає години або доби, що йдуть за зміною умов вирощування. В одному варіанті здійснення винахід стосується способів застосування стабілізованого продукту з підшлункової залози у період від приблизно через 1 добу до приблизно через 2 доби, до приблизно 1 тижня після зміни умов вирощування. У ще одному варіанті здійснення винахід стосується способів застосування стабілізованого продукту з підшлункової залози у період від приблизно через 1 тиждень до приблизно через 2 тижні або більше після зміни умов вирощування. Способи застосування стабілізованого продукту з підшлункової залози відповідно до винаходу можна практикувати на будь-якій тварині, яка має підшлункову залозу, або у якої продукуються травні ферменти. Способи відповідно до винаходу стосуються будь-якої тварини, у якої утворюються травні ферменти, що належать до груп ферментів, які звичайно виділяються підшлунковою залозою (тобто протеази, амілази, ліпази). Конкретні варіанти здійснення винаходу стосуються змін умов вирощування котів, великої рогатої худоби, оленя, собаки, риби, кози, коня, лами, свині, птиці, кролика і вівці. Винахід також включає способи застосування стабілізованого продукту з підшлункової залози при змінах умов вирощування тварин, специфічних для даного сільськогосподарського виробництва. Наприклад, різні сільськогосподарські виробництва можуть мати визначені періоди зміни умов вирощування, що базуються на промислових способах минулого, теперішнього і майбутнього. Приклади наведені нижче. Водні організми Одна зміна умов вирощування має місце у рибництві, коли кишечник риби дозріває до повної функціональної зрілості. Інші зміни умов вирощування можуть включати, але не обмежуються цим, значні зміни температури і аерації оточуючої води. Стабілізований продукт з підшлункової залози за даним винаходом є придатним для застосування у кормах у рибництві, у той час як продуктів попереднього рівня немає, оскільки активовані ферменти підшлункової залози у продуктах попереднього рівня швидко піддаються автолізису при впливі води. Таким чином, даний винахід забезпечує раціон, що включає стабілізований продукт з підшлункової залози, який підходить для згодовування рибі та іншим водним організмам. В одному варіанті здійснення стабілізований продукт з підш 91343 20 лункової залози включає ферменти підшлункової залози в їх зимогенній формі. В іншому варіанті здійснення стабілізований продукт з підшлункової залози є у достатній мірі стабільним при зануренні у воду так, щоб не відбувалися розчинення і авто лізис ферментів. Велика рогата худоба У великої рогатої худоби зміна умов вирощування може включати, але не обмежується цим, перехід від годування молоком до годування твердим кормом у телят; перехід від кормів з високим вмістом фуражу і низьким вмістом концентрату до кормів з низьким вмістом фуражу і високим вмістом концентрату; перехід до кормів з високим вмістом крохмалю і перехід від пасовищного вмісту до згодовування кормів з високим вмістом зернових у великої рогатої худоби при відгодівлі у загонах. Олені Періоди зміни умов вирощування у оленів, таких як олень аксис, лань, благородний олень і плямистий олень і лось, включають перехід від молока до твердого корму у телят. Коні У коней зміни умов вирощування за рахунок змін у раціоні, таких як перехід від одного джерела корму або раціону до іншого джерела корму або раціону, є особливо частими, оскільки коней часто переводять з раціонів на основі сіна до пасовищного раціону. Аналогічно зміни умов вирощування мають місце, коли коня переводять з добавки на основі одних зернових на добавку на основі інших зернових. Крім того, період зміни умов вирощування відбувається під час стресового періоду, при якому травна функція є недостатньою для попередження проходження крохмалю у товстий відділ кишечнику і сліпу кишку. Свині У свиней періоди зміни умов вирощування можуть включати, але не обмежуються цим, перехідний період після відлучення, стимулююче годування, поросність, початок лактації у свиноматок і фазу прискореної відгодівлі у відгодівельних поросят. Домашня птиця У домашньої птиці має місце особливо критичний період зміни умов вирощування, оскільки курчатам згодовують сухий корм перший раз відразу після народження. Інші періоди зміни умов вирощування включають, але не обмежуються цим, періоди линяння у курей-несучок і прискорену відгодівлю у бройлерів та індичок. Стабілізований продукт з підшлункової залози можна використовувати як кормову добавку під час або після періодів зміни умов вирощування і/або перед початком таких періодів при їх очікуванні. Передбачуване застосування стабілізованого продукту з підшлункової залози може попередити ускладнення, що виникають внаслідок періодів зміни умов вирощування або внаслідок природних наслідків будь-якої зміни у раціоні тварини. В одному варіанті здійснення стабілізований продукт з підшлункової залози змішують з джерелом корму, таким як замінник молока і/або стартером для телят з метою попередження розвитку 21 діареї або інших природних наслідків переходу від материнського молока до твердого корму. В іншому варіанті здійснення стабілізований продукт з підшлункової залози змішують з кормом для домашніх тварин, таких як коти і собаки, для профілактики або ослаблення природних наслідків їх раціону і звичок. В одному варіанті здійснення котам згодовують раціон, що включає стабілізований продукт з підшлункової залози, для профілактики або ослаблення скочування шерсті або утворення безоарних каменів у шлунку або кишечнику. ПРИКЛАДИ Наведені нижче приклади ілюструють даний винахід і не призначаються для його обмеження. Приклад 1. Підшлункові залози Свинячі підшлункові залози одержують з відходів на бойнях або аналогічних підприємствах з переробки худоби. Підшлункові залози можна зберігати при охолоджуванні або зразу ж емульгувати. Потім залози емульгують з використанням решітчастої дробарки з водою так, щоб вміст сухої речовини в емульгованих підшлункових залозах становив приблизно 25%. Необов'язково свіжі підшлункові залози можна заморозити і подрібнити пізніше. Приклад 2. Екструзія Стабілізований продукт з підшлункової залози одержували екструзією. Емульговану підшлункову залозу змішували з приготованим соєвим лушпинням у співвідношенні 35% емульгованої підшлункової залози до 65% соєвого лушпиння. Суміш пропускали через екструдер, що складається з ряду парових запорів з температурою металевої поверхні, що дорівнює 300°С. Суміш пропускали через апарат приблизно протягом 20 сек. і розпилювали у колекторі. Приклад 3. Розпилювальне сушіння Стабілізований продукт з підшлункової залози одержували розпилювальним сушінням. Емульговану підшлункову залозу, що містить приблизно 62% вологи, подавали через ряд нагрітих розпилювальних сопел, розташованих у спіновій сушильній камері. Одночасно у сушильну камеру подавали нагріте повітря. Розпилений продукт з підшлункової залози капав на підлогу сушильної камери, де його збирали. Приклад 4. Стабілізація рН Стабілізований продукт з підшлункової залози одержували стабілізацією рН. Емульговану підшлункову залозу одержували з вмістом вологи приблизно 75%. До емульгованої підшлункової залози додавали пропіонову кислоту для доведення значення рН, що дорівнює 4,5. Після додання кислоти стабілізований продукт з підшлункової залози ставав сірим і набував в'язкість від слабкої текучості до каучукоподібної. В іншому прикладі емульговану підшлункову залозу одержували, як описано вище, і перемішували з приготованим соєвим лушпинням. Змішана підшлункова залоза складалася приблизно з 35% емульгованої підшлункової залози і 65% приготованого соєвого лушпиння. Додавали пропіонову кислоту до суміші емульгованої підшлункової залози з розрахунку 10 фунтів на тонну для доведення значення рН до 4,5. 91343 22 Приклад 5. Композиція для водних організмів Можна приготувати корм, придатний для застосування у водних організмів, з використанням стабілізованого продукту з підшлункової залози. Зразковою композицією корму для креветок є: Інгредієнт Пшеничне борошно Соєве борошно Рибне борошно Кальмарове борошно Лецитин Борошно з кукурудзяної клейковини Риб'ячий жир Різні вітаміни і мінерали Зв'язувальна речовина Стабілізований продукт з підшлункової залози Процент (мас./мас.) композиції 28,00 35,50 20,00 4,00 2,00 6,00 2,50 1,00 0,90 0,10 Зразковою композицією корму для тиляпії тигрової є: Інгредієнт Пшеничне борошно Соєве борошно Кукурудза Рисові висівки Рибне борошно Різні вітаміни і мінерали Борошно з кукурудзяної клейковини Стабілізований продукт з підшлункової залози Процент (мас/мас.) композиції 27,00 35,00 5,90 10,00 12,00 1,00 9,00 0,10 Приклад 6. Композиція для великої рогатої худоби Можна приготувати корм, придатний для застосування у великої рогатої худоби, з використанням стабілізованого продукту з підшлункової залози. Зразковою композицією замінника молока, що включає стабілізований продукт з підшлункової залози, є: Інгредієнт Процент (мас/мас.) композиції Пшеничний протеїновий концентрат Висушена молочна сироватка Сухий жир (7,7% сирого протеїну/60% сирого жиру) Карбонат кальцію Дикальцій фосфат Різні вітаміни, мінерали і добавки Стабілізований продукт з підшлункової залози Амінокислоти Приклад 7. Композиція для оленів 33,00 31,73 31,00 0,55 0,40 2,00 0,32 1,00 23 Можна приготувати корм, придатний для застосування у оленів, з використанням стабілізованого продукту з підшлункової залози. Зразковою композицією корму для оленів є: 91343 24 Дрібно подрібнені злакові 4,10 Різні вітаміни, мінерали і добавки 0,42 Стабілізований продукт з підшлункової залози 0,10 Інгредієнт Процент Амінокислоти 0,14 (мас/мас.) композиції Приклад 10. Композиція для свиней Дрібно подрібнена кукурудза 0,60 Можна приготувати корм, придатний для заПшеничне борошно 30,00 стосування у свиней, з використанням стабілізоСоєве лушпиння ваного 15,00 продукту з підшлункової залози. Зразковою Солодові паростки композицією корму для свиней є: 10,00 Сіль 17,00 Інгредієнт Процент Збезводнена люцерна 3,00 (мас/мас.) компоКарбонат кальцію 3,00 зиції Дистилят злакових з розчинними речовинами 21,00 Подрібнена кукурудза 40,53 Канолове борошно 0,25 Висушена молочна сироватМікроелементи 0,05 ка 0,10 25,00 Стабілізований продукт з підшлункової залози Соєве борошно 22,00 Сіль 0,05 Приклад 8. Композиція для коней Жир 5,00 Можна приготувати корм, придатний для заКарбонат кальцію 0,22 стосування у коней, з використанням стабілізованого продукту з підшлункової залози. Зразковою Дикальцій фосфат 0,90 композицією корму для коней є: Протеїнові продукти тваринного походження 5,50 Інгредієнт Процент Різні вітаміни, мінерали і до(мас/мас.) комбавки 0,70 позиції Стабілізований продукт з піПодрібнена кукурудза 11,00 дшлункової залози 0,10 Подрібнений овес 23,00 Пшеничне борошно 30,55 Приклад 11. Активність ферментів у стабілізованому продукті з підшлункової залози Соєве борошно 0,25 У даному прикладі проводиться порівняння акСіль 0,60 тивності ферментів у різних препаратах стабілізоЗбезводнена люцерна 4,00 ваного продукту з підшлункової залози. Карбонат кальцію 2,40 Визначали вміст вологи, активність протеази і Дистилят злакових з розчинактивність амілази у висушених розпилювальним ними речовинами 20,00 сушінням, висушених шляхом сублімації і стабіліМасло 2,50 зованих за рН продуктах з підшлункової залози. У Різні вітаміни, мінерали і дотаблиці 1 наведені дані щодо активності протеази і бавки 5,25 амілази у різних стабілізованих продуктах з підшСтабілізований продукт з пілункової залози за даним винаходом. Для кожного дшлункової залози 0,10 препарату ферментативна активність панкреатину Амінокислоти 0,35 використовується як порівняльний контроль. У таблиці 1 «висушений розпилювальним суПриклад 9. Композиція для домашньої птиці шінням» стосується способу, описаного у прикладі Можна приготувати корм, придатний для за3; «висушений шляхом сублімації» стосується лістосування у птиці, з використанням стабілізоваофілізованих підшлункових залоз способами, віного продукту з підшлункової залози. Зразковою домими у даній галузі; «екструзія» стосується спокомпозицією корму для домашньої індички є: собу, описаного у прикладі 2, і «стабілізований за рН» стосується стабілізованих продуктів з підшлуІнгредієнт Процент нкової залози, змішаних з носієм з соєвого луш(мас/мас.) компопиння, як описано у прикладі 4. зиції Всі проби зберігали в умовах, вказаних у табДрібно подрібнена кукурулиці 1, протягом 6 діб. дза 53,71 Для кожного препарату 1 частину стабілізоваПшеничне борошно 11,54 ного продукту з підшлункової залози змішували з 4 М'ясне і кісткове борошно 8,00 частинами вмісту тонкого кишечнику дорослої Пір'яне борошно 5,00 свині при кімнатній температурі протягом 2 хв. Солодові паростки 10,00 Аліквотні порції кожного препарату розводили і Соєве борошно 6,40 визначали активність протеази. Сіль 0,15 Активність протеази визначали наступним чиКарбонат кальцію 0,44 ном. Для проб з активністю менш ніж приблизно 25 91343 26 1000 Е/г 10 г проб змішували з приблизно 80 мл 2% розчину хлориду натрію приблизно протягом 30 хв. Об'єм розчину доводили до 100 мл 2% розчином хлориду натрію і фільтрували через паперовий фільтр зі скловолокном (Glass Microfibre GF/A, Whatman pic, Florham Park, New Jersey). 1 мл розчину проби і реагенти зрівноважували при 40°С. У кожну пробу вносили 5 мл 0,6% розчину субстрату казеїну (мас/об.) (Hammarten Casein, Merck & Co., Inc., Whitehouse Station, New Jersey) та інкубували при 40°С протягом приблизно 30 хв. Додавали 5 мл реагенту для осадження (18,8 г трихлороцтової кислоти, 18,1 г безводного ацетату натрію і 18,8 г оцтової кислоти у дистильованій воді до об'єму 1000 мл). Потім проби інкубували при 40°С протягом приблизно 30 хв. Проби зразу ж фільтрували через фільтрувальний папір для лабораторних досліджень (Whatman Grade 1, Whatman ріс, Florham Park, New Jersey), охолоджували до кімнатної температури і визначали поглинання при 660 нм. Поглинання проб визначали проти контролів на фермент і стандартною кривою, побудованою з розчинами тирозину, вивільненого реагентом Фоліна-Кіокалту для фенолів. Активність α-амілази визначали наступним чином. Готували розчин реагенту (9 г хлориду натрію, 2 г бичачого сироваткового альбуміну і 2,2 г хлориду кальцію у дистильованій воді до об'єму 1000 мл) і 0,5 Μ розчин гідроксиду натрію. Готували проби розведенням у 204 мл розчину реагенту і зрівноважували при 37°С. У кожну пробу вносили субстрат таблетовану амілазу для проведення тесту Phadebas (Pharmacia Diagnostics, Uppsala, Швеція) і енергійно перемішували протягом 10 сек. Потім проби інкубували протягом 15 хв. Додавали 1 мл 0,5 Μ розчину пероксиду натрію і розчин відразу ж центрифугували при 3500 об./хв. протягом 10 хв. Визначали поглинання проб при 620 нм проти контролю на реагент і активність α-амілази визначали дотримуючись інструкцій виробника. Отже, стабілізовані продукти з підшлункової залози, наведені у таблиці 1, зберігають таку ж, якщо не більш високу, активність протеази у порівнянні з панкреатином. Крім того, стабілізовані продукти з підшлункової залози, наведені у таблиці 1, зберігають таку ж, якщо не більш високу, активність амілази у порівнянні з панкреатином. Дані результати є особливо дивними з врахуванням того, що стабілізовані продукти з підшлункової залози зберігалися при кімнатній температурі протягом 6 діб. Такі результати свідчать про стабільність продуктів відповідно до винаходу. Приклад 12. Дослід з годування на поросятахвідлученцях У даному прикладі проводили дослід з годування для оцінки ефективності висушеної шляхом сублімації підшлункової залози для зменшення лаг-періоду після відлучення у поросят. Шести дослідним групам згодовували раціони, що включають: (1) без панкреатину або стабілізованого продукту з підшлункової залози; (2) 0,1% (мас/мас.) панкреатину; (3) 0,2% (мас/мас.) панкреатину; (4) 0,1% стабілізованого продукту з підшлункової залози; (5) 0,2% стабілізованого продукту з підшлункової залози і (6) 0,4% стабілізованого продукту з підшлункової залози. Дані статистично обробляли у вигляді рандомізованого повного блоку з використанням методики GLM (SAS Institute Inc., Cary, North Carolina). Як наведено у таблиці 2, висушена шляхом сублімації підшлункова залоза здійснює позитивний квадратичний вплив на споживання корму і прирости ваги під час першого тижня після відлучення. Обидва даних фактори зростають з підвищенням вмісту висушеної шляхом сублімації підшлункової залози у раціоні. На раціоні з вмістом 0,2% висушеної шляхом сублімації підшлункової 27 91343 28 залози споживання корму збільшується на 31%, і прирости ваги зростають на 83%. Як наведено у таблиці 3, висушена шляхом сублімації підшлун кова залоза не здійснює впливу на дані показники у наступні два тижні. Всі публікації, патенти і заявки на патент, вказані вище, включені у даний опис у вигляді посилань. Очевидно, фахівцям у даній галузі зрозуміло, що описаний тут винахід можна варіювати багать ма шляхами, не відступаючи від суті і об'єму винаходу. Такі варіації входять в об'єм заявленого винаходу. Комп’ютерна верстка І. Скворцова Підписне Тираж 26 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601