Антитіла проти рецептора фолієвої кислоти 1, їх імунокон’югати і застосування

Реферат: Винахід стосується гуманізованого антитіла, що специфічно зв'язується з людським рецептором фолієвої кислоти 1, де зазначене гуманізоване антитіло включає: (a) CDR1 важкого ланцюга, що містить GYFMN (SEQ ID NO: 1); CDR2 важкою ланцюга, що містить RIHPYDGDTFYNQKFQG (SEQ ID NO: 2); і CDR3 важкого ланцюга, що містить YDGSRAMDY (SEQ ID NO: 3); і (b) CDRl легкого ланцюга, що містить KASQSVSFAGTSLMH (SEQ ID NO: 7); CDR2 легкого ланцюга, що містить RASNLEA (SEQ ID NO: 8); і CDR3 легкого ланцюга, що містить QQSREYPYT (SEQ ID NO: 9). Винахід також стосується імунокон'югату, що включає вказане гуманізоване антитіло, його застосування для інгібування росту пухлини та фармацевтичної композиції, що містить такий імунокон'югат. UA 110783 C2 (12) UA 110783 C2 UA 110783 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 [0001] Дана заявка претендує на пріоритет заявки на патент США № 61/307797, поданої 24 лютого 2010, заявки на патент США № 61/346595, поданої 20 травня 2010, і заявки на патент США № 61/413172, поданої 12 листопада 2010, зміст яких включений в дану заявку за допомогою посилання у всій повноті. Галузь техніки [0002] Галузь техніки винаходу в цілому належить до антитіл, їх антиген-зв’язуючих фрагментів, поліпептидів, імунокон’югатів, що з'єднуються з людським рецептором фолієвої кислоти 1, а також до способів застосування антитіл й імунокон’югатів для терапії захворювань, наприклад, онкологічних захворювань. Рівень техніки [0003] Онкологічні захворювання — одна з основних причин смертності в розвинених країнах; за один рік тільки в США діагноз онкологічного захворювання ставиться більш ніж одному мільйону людей, а помирають через онкологічні захворювання 500000 людей. По оцінках більш ніж у 1 людини з 3-х протягом життя розвинеться онкологічне захворювання . Відомо більш 200 різних видів раку, чотири з яких — рак молочної залози, легень, колоректальний і рак передміхурової залози — відзначаються в більш ніж половині нових випадків раку (Jemal et al., 2003, Cancer J. Clin. 53:5-26). [0004] Рецептор фолієвої кислоти 1 (FOLR1), також відомий як альфа-рецептор фолієвої кислоти або фолат-зв’язуючий білок, являє собою N-глікозильований білок, який експресується на плазматичній мембрані клітин. FOLR1 володіє високою афінністю до фолієвої кислоти і ряду її відновлених похідних. FOLR1 опосередковує доставку фізіологічного фолату 5метилтетрагідрофолату всередину клітин. [0005] FOLR1 надлишково експресується при більшості видів онкологічних захворювань яєчника, а також при великій кількості онкологічних захворювань матки, ендометрію, підшлункової залози, нирок, легенів і молочної залози, у той час як у нормальних тканинах FOLR1 експресується лише в апікальній мембрані епітеліальних клітин проксимальних канальців нирок, альвеолярних пневмоцитах легенів, у сечовому міхурі, яєчках, хоріоїдному сплетінні й у щитовидній залозі (Weitman SD, et al., Cancer Res 52: 3396-3401 (1992); Antony AC, Annu Rev Nutr 16: 501-521 (1996); Kalli KR, et al.Gynecol Oncol 108: 619-626 (2008)). Завдяки цій схемі експресії, FOLR1 є підходящою мішенню для FOLR 1-спрямованої протипухлинної терапії. [0006] Оскільки рак яєчника, як правило, протікає безсимптомно аж до пізньої стадії, його часто діагностують на пізній стадії з поганим прогнозом при терапії доступними на даний час процедурами, - як правило, хіміотерапією після циторедуктивного хірургічного втручання (von Gruenigen V et al., Cancer 112: 2221-2227 (2008); Ayhan A et al.,Am J Obstet Gynecol 196: 81 e8186 (2007); Harry VN et al., Obstet Gynecol Surv 64: 548-560 (2009)). Таким чином, є чітка незадоволена медична потреба в більш ефективних засобах лікування онкологічних захворювань яєчника. [0007] У якості потенційних протипухлинних лікарських засобів були вивчено три антитіла проти FOLR1. Мишачі моноклональні антитіла Mov18 і Mov19 були виділені в пізніх 1980-х рр. (Miotti S et al., Int J Cancer 39: 297-303 (1987)), була підтверджена їх афінність проти FOLR1 (Coney LR et al.,Cancer Res 51: 6125-6132 (1991)), а потім вони були протестовані в доклінічних дослідженнях на здатність у вигляді кон’югатів із цитотоксичним білком, що інактивиує рибосоми, ліквідувати ракові клітини, що експресують антиген (Conde FP et al., Eur J Biochem 178: 795-802 (1989)). [0008] Mov19 було протестовано в якості біспецифічного антитіла, націленого на цитотоксичні Т-клітини й клітини-натуральні кілери (Mezzanzanica D et al., Int J Cancer 41: 609615 (1988); Ferrini S et al., Int J Cancer Suppl 4: 53-55 (1989); Ferrini S et al., Int J Cancer 48: 227233 (1991)), а також у вигляді злитого білка, що складається з одноланцюгового Fv (scFv) Mov19 і интерлейкіну-2 in vivo (Melani C et al., Cancer Res 58: 4146-4154 (1998)). Для хімерних (мишача варіабельна/людська константна) антитіл проти FOLR1 Mov18 і Mov19 доклінічно була вивчена здатність опосередковувати цитотоксичну імунну клітиннозалежну загибель клітин пухлин, що експресують FOLR1 in vitro (Coney LR et al.,Cancer Res 54: 2448-2455 (1994)), хімерне Mov18-IgE було протестовано в IgE-залежнихімунотерапевтичних доклінічних моделях (Karagiannis SN et al., J Immunol 179: 2832-2843 (2007); Gould HJ et al., Eur J Immunol 29: 3527-3537 (1999)). [0009] Mov18 у вигляді кон’югатів з різними радіонуклідами пройшло доклінічні дослідження, а на початку 1990-х рр. — і клінічні (Zacchetti A et al.,, Nucl Med Biol 36: 759-770 (2009)), за результатами яких жоден препарат не був затверджений. [0010] MORAb003 - гуманізована форма мишачого моноклонального антитіла проти FOLR1 LK26 - пройшла доклінічне дослідження у вигляді немодифікованого антитіла (Ebel W et al.,Cancer Immun 7:6 (2007)) і у вигляді кон’югата з радіонуклідом 111In (Smith-Jones PM et al., 1 UA 110783 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Nucl Med Biol 35: 343-351 (2008)), і в даний час проходить клінічні дослідження як немодифіковане антитіло (D. K. Armstrong et al. J. Clin. Oncol. 26: 2008, May 20 suppl; abstract 5500). Сутність винаходУ [0011] У даному винаході пропонуються нові антитіла, що зв'язуються з людським рецептором фолієвої кислоти 1, імунокон’югати, що містять ці антитіла, а також способи їх застосування. Крім цього, у даному винаході пропонуються нові поліпептиди, наприклад, антитіла, що зв'язуються з людським рецептором фолієвої кислоти 1, фрагменти таких антитіл і інші поліпептиди, зв'язані з такими антитілами. Також пропонуються полінуклеотиди, що містять нуклеотидні послідовності, що кодують поліпептиди, і вектори, що містять полінуклеотиди. Крім цього, пропонуються клітини, що містять поліпептиди й/або полінуклеотиди згідно з винаходом. Також пропонуються композиції (наприклад, фармацевтичні композиції), що містять нові антитіла проти рецептора фолієвої кислоти 1. Крім цього, пропонуються способи одержання і застосування нових антитіл проти рецептора фолієвої кислоти 1 або імунокон’югатів, наприклад, способи, в яких нові антитіла проти рецептора фолієвої кислоти 1 або імунокон’югати використовуються для інгібування росту пухлини і/або для лікування раку. [0012] Таким чином, в одному аспекті у винаході пропонується гуманізоване антитіло або його антиген-зв’язуючий фрагмент, які специфічно зв'язуються з рецептором фолієвої кислоти 1, які відрізняються тим, що антитіло містить (a) CDR1 важкого ланцюга, що містить GYFMN (SEQ ID NO: 1); CDR2 важкого ланцюга, що містить RIHPYDGDTFYNQXaa1FXaa2Xaa3 (SEQ ID NO: 56); і CDR3 важкого ланцюга, що містить YDGSRAMDY (SEQ ID NO: 3); і (б) CDR1 легкого ланцюга, що містить KASQSVSFAGTSLMH (SEQ ID NO: 7); CDR2 легкого ланцюга, що містить RASNLEA (SEQ ID NO: 8); CDR3 легкого ланцюга, що містить QQSREYPYT (SEQ ID NO: 9); де Xaa1 вибраний з K, Q, H і R; Xaa2 вибраний з Q, H, N і R; і Xaa3 вибраний з G, E, T, S, A і V. У певному варіанті втілення гуманізоване антитіло або його антиген-зв’язуючий фрагмент зв'язуються з людським рецептором фолієвої кислоти 1 із практично такою самою афінністю, що й хімерне антитіло Mov19. У певному варіанті втілення гуманізоване антитіло або його антиген-зв’язуючий фрагмент містить послідовність CDR2 важкого ланцюга RIHPYDGDTFYNQKFQG (SEQ ID NO: 2). [0013] У певному варіанті втілення зв’язуючу здатність вимірюють способом проточної цитометрії, Biacore або за допомогою радіоімунологічного аналізу. [0014] В іншому варіанті втілення у винаході пропонується гуманізоване антитіло або його антиген-зв’язуючий фрагмент, які специфічно зв'язуються з людським рецептором фолієвої кислоти 1, що відрізняються тім, що антитіло містить: (a) CDR1 важкого ланцюга, що містить GYFMN (SEQ ID NO: 1), або її варіант, що включає 1, 2, 3 або 4 консервативних амінокислотних заміни; CDR2 важкого ланцюга, що містить RIHPYDGDTFYNQKFQG (SEQ ID NO: 2), або її варіант, що включає 1, 2, 3 або 4 консервативних амінокислотних заміни; і CDR3 важкого ланцюга, що містить YDGSRAMDY (SEQ ID NO: 3), або її варіант, що включає 1, 2, 3 або 4 консервативних амінокислотних заміни; і/або (б) CDR1 важкого ланцюга, що містить KASQSVSFAGTSLMH (SEQ ID NO: 7), або її варіант, що включає 1, 2, 3 або 4 консервативних амінокислотних заміни; CDR2 важкого ланцюга, що містить RASNLEA (SEQ ID NO: 8), або її варіант, що включає 1, 2, 3 або 4 консервативних амінокислотних заміни; CDR3 важкого ланцюга, що містить QQSREYPYT (SEQ ID NO: 9), або її варіант, що включає 1, 2, 3 або 4 консервативних амінокислотних заміни. [0015] У певному варіанті втілення у винаході пропонується гуманізоване антитіло або його антиген-зв’язуючий фрагмент, які специфічно зв'язуються з людським рецептором фолієвої кислоти 1, що містять важкий ланцюг з SEQ ID NO: 6. В іншому варіанті втілення гуманізоване антитіло або його антиген-зв’язуючий фрагмент кодуються плазмідною ДНК, депонованою в ATCC 7 квітня 2010 під номерами депонентів ATCC PTA-10772 і PTA-10773 або 10774. [0016] У певному варіанті втілення у винаході пропонується гуманізоване антитіло або його антиген-зв’язуючий фрагмент, які конкурують по зв'язуванню з FOLR1 з антитілом, що містить (a) CDR1 важкого ланцюга, що містить GYFMN (SEQ ID NO: 1); CDR2 важкого ланцюга, що містить RIHPYDGDTFYNQXaa1FXaa2Xaa3 (SEQ ID NO: 56); і CDR3 важкого ланцюга, що містить YDGSRAMDY (SEQ ID NO: 3); і (б) CDR1 легкого ланцюга, що містить KASQSVSFAGTSLMH (SEQ ID NO: 7); CDR2 легкого ланцюга, що містить RASNLEA (SEQ ID NO: 8); CDR3 легкого ланцюга, що містить QQSREYPYT (SEQ ID NO: 9); де Xaa1 вибраний з K, Q, H і R; Xaa2 вибраний з Q, H, N і R; і Xaa3 вибраний з G, E, T, S, A і V. У певному варіанті втілення гуманізоване антитіло містить послідовність CDR2 важкого ланцюга RIHPYDGDTFYNQKFQG (SEQ ID NO: 2). 2 UA 110783 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 [0017] У певному варіанті втілення у винаході пропонується поліпептид, гуманізоване антитіло або його антиген-зв’язуючий фрагмент, що містять варіабельний домен важкого ланцюга, щонайменше на приблизно 90% ідентичний SEQ ID NO: 4, і варіабельний домен легкого ланцюга, щонайменше на приблизно 90% ідентичний SEQ ID NO: 10 або SEQ ID NO: 11. В іншому варіанті втілення гуманізоване антитіло або його антиген-зв’язуючий фрагмент містять варіабельний домен важкого ланцюга, щонайменше на приблизно 95% ідентичний SEQ ID NO: 4, і варіабельний домен легкого ланцюга, щонайменше на приблизно 95% ідентичний SEQ ID NO: 10 або SEQ ID NO: 11. У ще одному варіанті втілення гуманізоване антитіло містить варіабельний домен важкого ланцюга, щонайменше на приблизно 99% ідентичний SEQ ID NO: 4, і варіабельний домен легкого ланцюга, щонайменше на приблизно 99% ідентичний SEQ ID NO: 10 або SEQ ID NO: 11. У певному варіанті втілення гуманізоване антитіло містить варіабельний домен важкого ланцюга послідовності SEQ ID NO: 4, і варіабельний домен легкого ланцюга послідовності SEQ ID NO: 10 або SEQ ID NO: 11. У певних варіантах втілення у винаході пропонується поліпептид, антитіло або антиген-зв’язуючий фрагмент, що містять варіабельний домен важкого ланцюга, щонайменше на приблизно 90% ідентичний SEQ ID Nos: 88-119. У певних варіантах втілення у винаході пропонується поліпептид, антитіло або антигензв’язуючий фрагмент, що містять варіабельний домен важкого ланцюга, щонайменше на приблизно 95% ідентичний SEQ ID Nos: 88-119. У певних варіантах втілення у винаході пропонується поліпептид, антитіло або антиген-зв’язуючий фрагмент, що містять варіабельний домен важкого ланцюга, щонайменше на приблизно 99% ідентичний SEQ ID Nos: 88-119. [0018] У певному варіанті втілення у винаході пропонується гуманізоване антитіло або його антиген-зв’язуючий фрагмент, які в клітинах еукаріотів експресуються щонайменше більш ніж удесятеро інтенсивніше в порівнянні з chMov19. У певному варіанті втілення еукаріотні клітини — клітини HEK-293T. [0019] У певних варіантах втілення у винаході пропонується антитіло або його антигензв’язуючий фрагмент, які специфічно зв'язуються з людським рецептором фолієвої кислоти 1, що відрізняються тім, що антитіло містить: (a) CDR1 важкого ланцюга, що містить SSYGMS (SEQ ID NO: 30); CDR2 важкого ланцюга, що містить TISSGGSYTY (SEQ ID NO: 31); і/або CDR3 важкого ланцюга, що містить DGEGGLYAMDY (SEQ ID NO: 32); і/або (б) CDR1 легкого ланцюга, що містить KASDHINNWLA (SEQ ID NO: 27); CDR2 легкого ланцюга, що містить GATSLET (SEQ ID NO: 28); і CDR3 легкого ланцюга, що містить QQYWSTPFT (SEQ ID NO: 29). В іншому варіанті втілення у винаході пропонується антитіло або його антиген-зв’язуючий фрагмент, які специфічно зв'язуються з людським рецептором фолієвої кислоти 1, що відрізняються тім, що антитіло містить: (a) CDR1 важкого ланцюга, що містить TNYWMQ (SEQ ID NO: 60); CDR2 важкого ланцюга, що містить AIYPGNGDSR (SEQ ID NO: 61); і/або CDR3 важкого ланцюга, що містить RDGNYAAY (SEQ ID NO: 62); і/або (б) CDR1 легкого ланцюга, що містить RASENIYSNLA (SEQ ID NO: 57); CDR2 легкого ланцюга, що містить AATNLAD (SEQ ID NO: 58); і CDR3 легкого ланцюга, що містить QHFWASPYT (SEQ ID NO: 59). В іншому варіанті втілення у винаході пропонується антитіло або його антиген-зв’язуючий фрагмент, які специфічно зв'язуються з людським рецептором фолієвої кислоти 1, що відрізняються тим, що антитіло містить: (a) CDR1 важкого ланцюга, що містить TNYWMY (SEQ ID NO: 66); CDR2 важкого ланцюга, що містить AIYPGNSDTT (SEQ ID NO: 67); і/або CDR3 важкого ланцюга, що містить RHDYGAMDY (SEQ ID NO: 68); і/або (б) CDR1 легкого ланцюга, що містить RASENIYTNLA (SEQ ID NO: 63); CDR2 легкого ланцюга, що містить TASNLAD (SEQ ID NO: 64); і CDR3 легкого ланцюга, що містить QHFWVSPYT (SEQ ID NO: 65). В іншому варіанті втілення у винаході пропонується антитіло або його антиген-зв’язуючий фрагмент, які специфічно зв'язуються з людським рецептором фолієвої кислоти 1, що відрізняються тим, що антитіло містить: (a) CDR1 важкого ланцюга, що містить SSFGMH (SEQ ID NO: 72); CDR2 важкого ланцюга, що містить YISSGSSTIS (SEQ ID NO: 73); і/або CDR3 важкого ланцюга, що містить EAYGSSMEY (SEQ ID NO: 74); і/або (б) CDR1 легкого ланцюга, що містить RASQNINNNLH (SEQ ID NO: 69); CDR2 легкого ланцюга, що містить YVSQSVS (SEQ ID NO: 70); і CDR3 легкого ланцюга, що містить QQSNSWPHYT (SEQ ID NO: 71). В іншому варіанті втілення у винаході пропонуються антитіло або його антиген-зв’язуючий фрагмент, які специфічно зв'язуються з людським рецептором фолієвої кислоти 1, що відрізняються тим, що антитіло містить: (a) CDR1 важкого ланцюга, що містить TSYTMH (SEQ ID NO: 78); CDR2 важкого ланцюга, що містить YINPISGYTN (SEQ ID NO: 79); і/або CDR3 важкого ланцюга, що містить GGAYGRKPMDY (SEQ ID NO: 80); і/або (б) CDR1 легкого ланцюга, що містить KASQNVGPNVA (SEQ ID NO: 75); CDR2 легкого ланцюга, що містить SASYRYS (SEQ ID NO: 76); і CDR3 легкого ланцюга, що містить QQYNSYPYT (SEQ ID NO: 77). [0020] У певних варіантах втілення поліпептиди по винаходу є повнорозмірним антитілом або антигензв’язуючими фрагментами. У певних варіантах втілення антитіла або антиген 3 UA 110783 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 зв’язуючі фрагменти є Fab, Fab', F(ab')2, Fd, одноланцюговим Fv або scFv, дисульфіднозв'язаним Fv, доменом V-NAR, IgNar, інтратілом, IgGΔCH2, мінітілом, F(ab')3, тетратілом, триатілом, діатілом, однодоменним антитілом, DVD-Ig, Fcab, mAb2, (scFv)2 або scFv-Fc. . [0021] У певних варіантах втілення антитіло або поліпептид згідно з винаходом зв'язуються з людським рецептором фолієвої кислоти 1 з Kd від приблизно 1,0 до приблизно 10 нМ. В одному варіанті втілення антитіло або поліпептид згідно з винаходом зв'язуються з людським рецептором фолієвої кислоти 1 з Kd приблизно 1,0 нМ або краще. У певному варіанті втілення зв’язуючу здатність вимірюють способом проточної цитометрії, Biacore або радіоімунологічним аналізом. [0022] У винаході також пропонується спосіб одержання антитіла згідно з винаходом, який полягає в культивуванні клітини, що експресує зазначене антитіло; і (б) виділенні антитіла із зазначеної культивованої клітини. У певному варіанті втілення клітина є еукаріотною клітиною. [0023] У винаході також пропонується імунокон’югат з формулою (A)-(L)-(C), де: (A) — антитіло, антиген-зв’язуючий фрагмент або поліпептид згідно з винаходом, (L) - лінкер, і (C) цитотоксичний агент, причому згаданий лінкер (L) з'єднує (A) з (C). [0024] В одному варіанті втілення лінкер вибраний з групи, що складається з розщеплюваного лінкера, нерозщеплюваного лінкера, гидрофильного лінкера і лінкера на основі двохосновної карбонової кислоти. У ще одному варіанті втілення лінкер вибраний із групи, яка складається з: N-сукцинімідил 4-(2-піридилдитіо)пентаноату (SPP) або N-сукцинімідил 4-(2-піридилдитіо)-2-сульфопентаноату (sulfo-SPP), N-сукцинімідил 4-(2-піридилдитіо)бутаноату (SPDB) або N-сукцинімідил 4-(2-піридилдитіо)-2-сульфобутаноату (sulfo-SPDB), N-сукцинімідил 4-(малеімідометил) циклогексанкарбоксилату (SMCC), N-сульфосукцинімідил 4(малеімідометил) циклогексанкарбоксилату (sulfoSMCC), N-сукцинімідил-4-(йодацетил)амінобензоату (SIAB) і N-сукцинімідил-[(N-малеімідопропіонамідо)-тетраетиленгліколевого] ефіру (NHS-PEG4-малеіміду). В певному варіанті втілення лінкер являє собою N-сукцинімідил[(N-малеімідопропіонамідо)-тетраетиленгліколевий] ефір (NHS-PEG 4-малеімід). [0025] В одному варіанті втілення імунокон’югати містять цитотоксичний агент, який вибраний із групи, що складається з майтансиноїду, аналога майтансиноїду, бензодіазепіну, таксоїду, CC-1065, аналога CC-1065, дуокарміцину, аналога дуокарміцину, каліхеаміцину, доластатину, аналога доластатину, ауристатину, похідного томаіміцину і похідного лептоміцину або пролікарської форми агента. У ще одному варіанті втілення цитотоксичний агент є майтансиноїдом. В іншому варіанті втілення цитотоксичний агент може бути N(2′)-деацетилN(2′)-(3-меркапто-1-оксопропіл)-майтансином або N(2′)-деацетил-N2-(4-меркапто-4-метил-1оксопентил)-майтансином. [0026] В одному варіанті втілення у винаході пропонується імунокон’югат, що містить: (A) гуманізоване антитіло, що містить варіабельний домен важкого ланцюга з послідовністю SEQ ID NO: 4 і варіабельний домен легкого ланцюга з послідовністю SEQ ID NO: 10 або SEQ ID NO: 11; (L) N-сукцинімідил-[(N-малеімідопропіонамідо)-тетраетиленгліколевий] ефір (NHS-PEG4малеіміду); і (C) N(2′)-деацетил-N2-(4-меркапто-4-метил-1-оксопентил)-майтансин; де (L) зв'язує (A) і (C). [0027] В одному варіанті втілення у винаході пропонується імунокон’югат, що містить: (A) гуманізоване антитіло, що містить варіабельний домен важкого ланцюга з послідовністю SEQ ID NO: 4 і варіабельний домен легкого ланцюга з послідовністю SEQ ID NO: 10 або SEQ ID NO: 11; (L) (L) N-сукцинімідил 4-(2-піридилдитіо)бутаноат (SPDB); і (C) N(2′)-деацетил-N2-(4-меркапто-4метил-1-оксопентил)-майтансин; де (L) зв'язує (A) і (C). [0028] В одному варіанті втілення у винаході пропонується імунокон’югат, що містить: (A) гуманізоване антитіло, що містить варіабельний домен важкого ланцюга з послідовністю SEQ ID NO: 4 і варіабельний домен легкого ланцюга з послідовністю SEQ ID NO: 10 або SEQ ID NO: 11(L) N-сукцинімідил 4-(2-піридилдитіо)2-сульфобутаноат (sulfo-SPDB); і (C) N(2′)-деацетил-N2(4-меркапто-4-метил-1-оксопентил)-майтансин; де (L) зв'язує (A) і (C). [0029] В одному варіанті втілення у винаході пропонується імунокон’югат, що містить: (A) гуманізоване антитіло, що містить варіабельний домен важкого ланцюга з послідовністю SEQ ID NO: 4 і варіабельний домен легкого ланцюга з послідовністю SEQ ID NO: 10 або SEQ ID NO: 11; (L) N-сукцинімідил 4-(2-піридилдитіо)-2-сульфопентаноат (sulfo-SPP); і (C) N(2′)-деацетил-N(2′)(3-меркапто-1-оксопропіл)-майтансин; де (L) зв'язує (A) і (C). [0030] В одному варіанті втілення у винаході пропонується імунокон’югат, що містить: (A) гуманізоване антитіло, що містить варіабельний домен важкого ланцюга з послідовністю SEQ ID NO: 4 і варіабельний домен легкого ланцюга з послідовністю SEQ ID NO: 10 або SEQ ID NO: 11; (L) N-сукцинімідил 4-(2-піридилдитіо)пентаноат (SPP); і (C) N(2′)-деацетил-N(2′)-(3-меркапто-1оксопропіл)-майтансин; де (L) зв'язує (A) і (C). 4 UA 110783 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 [0031] У винаході також пропонується фармацевтична композиція, що містить антитіло, антиген-зв’язуючий фрагмент, поліпептид або імунокон’югат, згідно з винаходом, і фармацевтично прийнятний носій. У певному варіанті втілення фармацевтична композиція, крім цього, містить другий протипухлинний агент. [0032] У винаході також пропонується діагностичний реактив, що містить мічені антитіло, антиген-зв’язуючий фрагмент, поліпептид або імунокон’югат згідно з винаходом. В одному варіанті втілення мітка вибрана із групи, що складається з радіомітки, флуорофору, хромофору, візуалізуючого засобу й іона металу. [0033] У винаході також пропонується набір, що містить антитіло, антиген-зв’язуючий фрагмент, поліпептид або імунокон’югат згідно з винаходом. [0034] У винаході також пропонується спосіб інгібування росту пухлини в суб'єкта, що включає введення суб'єкту терапевтично ефективної кількості антитіла, антиген-зв’язуючого фрагмента, поліпептиду, імунокон’югата або фармацевтичної композиції згідно з винаходом. У певному варіанті втілення у винаході пропонується спосіб інгібування росту пухлини у суб'єкта, що включає введення суб'єкту терапевтично ефективної кількості імунокон’югата з формулою (A)-(L)-(C), де: (A) — антитіло або антиген-зв’язуючий фрагмент, які специфічно зв'язуються з людським рецептором фолієвої кислоти 1; (L) — лінкер; і (C) — цитотоксин, вибраний із групи, що складається з майтансиноїду і аналога майтансиноїду; причому лінкер (L) з'єднує (A) з (C), а імунокон’югат зменшує середній об’єм пухлини на моделі ксенотрансплантата KB щонайменше удвічі. У певному варіанті втілення спосіб включає введення антитіла або його антигензв’язуючого фрагмента, що містять (a) CDR1 важкого ланцюга, що містить GYFMN (SEQ ID NO: 1); CDR2 важкого ланцюга, що містить RIHPYDGDTFYNQXaa1FXaa2Xaa3 (SEQ ID NO: 56); і CDR3 важкого ланцюга, що містить YDGSRAMDY (SEQ ID NO: 3); і (б) CDR1 легкого ланцюга, що містить KASQSVSFAGTSLMH (SEQ ID NO: 7); CDR2 легкого ланцюга, що містить RASNLEA (SEQ ID NO: 8); CDR3 легкого ланцюга, що містить QQSREYPYT (SEQ ID NO: 9); де Xaa1 вибраний з K, Q, H і R; Xaa2 вибраний з Q, H, N і R; і Xaa3 вибраний з G, E, T, S, A і V. У ще одному варіанті втілення антитіло містить послідовність CDR2 важкого ланцюга, що містить RIHPYDGDTFYNQKFQG (SEQ ID NO: 2). [0035] У певному варіанті втілення у винаході пропонується спосіб інгібування росту пухлини, що містить введення антитіла або його антиген-зв’язуючого фрагмента, кодованого плазмідною ДНК, депонованою в ATCC 7 квітня 2010 під номерами депонентів ATCC PTA-10772 і PTA-10773 або 10774. [0036] В іншому варіанті втілення в способі пропонується введення імунокон’югата, що містить гуманізоване антитіло, яке містить варіабельний домен важкого ланцюга з послідовністю SEQ ID NO: 4 і варіабельний домен легкого ланцюга з послідовністю SEQ ID NO: 10 або SEQ ID NO: 11; (L) N-сукцинімідил-[(N-малеімідопропіонамідо)-тетраетиленгліколевий] ефір (NHS-PEG4-малеіміду); і (C) N(2′)-деацетил-N2-(4-меркапто-4-метил-1-оксопентил)майтансин. [0037] В іншому варіанті втілення в способі пропонується введення імунокон’югата, що містить (A) гуманізоване антитіло, яке містить варіабельний домен важкого ланцюга з послідовністю SEQ ID NO: 4 і варіабельний домен легкого ланцюга з послідовністю SEQ ID NO: 10 або SEQ ID NO: 11; (L) N-сукцинімідил 4-(2-піридилдитіо)бутаноат (SPDB); і (C) N(2′)деацетил-N2-(4-меркапто-4-метил-1-оксопентил)-майтансин; ; де (L) зв'язує (A) і (C). [0038] В іншому варіанті втілення в способі пропонується введення імунокон’югата, що містить (A) гуманізоване антитіло, яке містить варіабельний домен важкого ланцюга з послідовністю SEQ ID NO: 4 і варіабельний домен легкого ланцюга з послідовністю SEQ ID NO: 10 або SEQ ID NO: 11; (L) N-сукцинімідил 4-(2-піридилдитіо)2-сульфобутаноат (sulfo-SPDB); і (C) N(2′)-деацетил-N2-(4-меркапто-4-метил-1-оксопентил)-майтансин; де (L) зв'язує (A) і (C). [0039] В іншому варіанті втілення в способі пропонується введення імунокон’югата, що містить (A) гуманізоване антитіло, яке містить варіабельний домен важкого ланцюга з послідовністю SEQ ID NO: 4 і варіабельний домен легкого ланцюга з послідовністю SEQ ID NO: 10 або SEQ ID NO: 11; (L) N-сукцинімідил 4-(2-піридилдитіо)-2-сульфопентаноат (sulfo-SPP); і (C) N(2′)-деацетил-N(2′)-(3-меркапто-1-оксопропіл)-майтансин; де (L) зв'язує (A) і (C). [0040] В іншому варіанті втілення в способі пропонується введення імунокон’югата, що містить (A) гуманізоване антитіло, яке містить варіабельний домен важкого ланцюга з послідовністю SEQ ID NO: 4 і варіабельний домен легкого ланцюга з послідовністю SEQ ID NO: 10 або SEQ ID NO: 11; (L) N-сукцинімідил 4-(2-піридилдитіо)пентаноат (SPP); і (C) N(2′)деацетил-N(2′)-(3-меркапто-1-оксопропіл)-майтансин; де (L) зв'язує (A) і (C). [0041] В іншому варіанті втілення спосіб включає введення імунокон’югата, що містить антитіло huFR-1-21, депоноване в ATCC 7 квітня 2010 під номерами депонентів ATCC PTA 5 UA 110783 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 10775 і PTA-10776. У певному варіанті втілення антитіло huFR-1-21 включає (a) CDR1 важкого ланцюга, що містить SSYGMS (SEQ ID NO: 30); CDR2 важкого ланцюга, що містить TISSGGSYTY (SEQ ID NO: 31); і CDR3 важкого ланцюга, що містить DGEGGLYAMDY (SEQ ID NO: 32); і (б) CDR1 легкого ланцюга, що містить KASDHINNWLA (SEQ ID NO: 27); CDR2 легкого ланцюга, утримуючу GATSLET (SEQ ID NO: 28); і CDR3 легкого ланцюга, що містить QQYWSTPFT (SEQ ID NO: 29). У певних варіантах втілення спосіб включає введення імунокон’югата, що містить антитіло, що є антитілом huFR1-48, яке містить: (a) CDR1 важкого ланцюга, що містить TNYWMQ (SEQ ID NO: 60); CDR2 важкого ланцюга, що містить AIYPGNGDSR (SEQ ID NO: 61); і CDR3 важкого ланцюга, що містить RDGNYAAY (SEQ ID NO: 62); і (б) CDR1 легкого ланцюга, що містить RASENIYSNLA (SEQ ID NO: 57); CDR2 легкого ланцюга, що містить AATNLAD (SEQ ID NO: 58); і CDR3 легкого ланцюга, що містить QHFWASPYT (SEQ ID NO: 59). У певних варіантах втілення спосіб включає введення імунокон’югата, що містить антитіло, що є антитілом huFR1-49, яке містить: (a) CDR1 важкого ланцюга, що містить TNYWMY (SEQ ID NO: 66); CDR2 важкого ланцюга, що містить AIYPGNSDTT (SEQ ID NO: 67); і CDR3 важкого ланцюга, що містить RHDYGAMDY (SEQ ID NO: 68); і (б) CDR1 легкого ланцюга, що містить RASENIYTNLA (SEQ ID NO: 63); CDR2 легкого ланцюга, що містить TASNLAD (SEQ ID NO: 64); і CDR3 легкого ланцюга, що містить QHFWVSPYT (SEQ ID NO: 65). У певних варіантах втілення спосіб включає введення імунокон’югата, що містить антитіло, що є антитілом huFR1-57, яке містить: (a) CDR1 важкого ланцюга, що містить SSFGMH (SEQ ID NO: 72); CDR2 важкого ланцюга, що містить YISSGSSTIS (SEQ ID NO: 73); і CDR3 важкого ланцюга, що містить EAYGSSMEY (SEQ ID NO: 74); і (б) CDR1 легкого ланцюга, що містить RASQNINNNLH (SEQ ID NO: 69); CDR2 легкого ланцюга, що містить YVSQSVS (SEQ ID NO: 70); і CDR3 легкого ланцюга, що містить QQSNSWPHYT (SEQ ID NO: 71). У певних варіантах втілення спосіб включає введення імунокон’югата, що містить антитіло, що є антитілом huFR1-65, яке містить: (a) CDR1 важкого ланцюга, що містить TSYTMH (SEQ ID NO: 78); CDR2 важкого ланцюга, що містить YINPISGYTN (SEQ ID NO: 79); і CDR3 важкого ланцюга, що містить GGAYGRKPMDY (SEQ ID NO: 80); і (б) CDR1 легкого ланцюга, що містить KASQNVGPNVA (SEQ ID NO: 75); CDR2 легкого ланцюга, що містить SASYRYS (SEQ ID NO: 76); і CDR3 легкого ланцюга, що містить QQYNSYPYT (SEQ ID NO: 77). [0042] В одному варіанті втілення спосіб інгібує ріст пухлини яєчника, пухлини мозку, пухлини молочної залози, пухлини матки, пухлини ендометрію, пухлини підшлункової залози, пухлини нирки або пухлини легенів. У певному варіанті втілення спосіб інгібує ріст пухлини яєчника. В іншому варіанті втілення, згідно з винаходом, відбувається інгібування росту пухлини легенів. У певному варіанті втілення інгібування росту пухлини використовується для лікування онкологічного захворювання. У ще одному варіанті втілення спосіб містить введення другого протипухлинного препарату суб'єкту. У певному варіанті втілення другий протипухлинний агент є хіміотерапевтичним агентом. [0043] У винаході також пропонується ізольована клітина, яка продукує антитіло, антигензв’язуючий фрагмент або поліпептид згідно з винаходом. [0044] У винаході також пропонується ізольований полінуклеотид, що містить послідовність, щонайменше на 90% ідентичну послідовності, вибраній із групи, що складається з SEQ ID Nos: 5, 14, 15, 37, 38, 43, 44, 47, 48 і 120-127. У певному варіанті втілення ізольований полінуклеотид щонайменше на 95% ідентичний послідовності, вибраній із групи, що складається з SEQ ID Nos: 5, 14, 15, 37, 38, 43, 44, 47, 48 і 120-127. В іншому варіанті втілення ізольований полінуклеотид щонайменше на 99% ідентичний послідовності, вибраній із групи, що складається з SEQ ID Nos: 5, 14, 15, 37, 38, 43, 44, 47, 48 і 120-127. У винаході також пропонується вектор, що містить будь-який полінуклеотид з SEQ ID Nos: 5, 14, 15, 37, 38, 43, 44, 47, 48 і 120-127. В іншому варіанті втілення у винаході пропонується клітина-хазяїн, що містить вектор, що включає полінуклеотид з SEQ ID Nos: 5, 14, 15, 37, 38, 43, 44, 47, 48 і 120-127. Короткий опис креслень [0045] Фігура 1. Поверхневі залишки мишачого (muMov19) і гуманізованого (huMov19) Mov19. (A) Поверхневі залишки легкого ланцюга мишачого і гуманізованого Mov19. Представлені поверхневі варіабельні залишки каркасного регіонуті легких ланцюгів мишачого і гуманізованого Mov19, і номер позиції (система Kabat). Людські залишки, які відрізняються від оригінальних мишачих послідовностей підкреслені. *Положення 74 не є поверхневим положенням, але для того, щоб позбутися консенсусного N-зв'язаного сайту глікозилювання у версії 1.00, це положення було замінено на Треонін (найчастіший людський залишок у цьому положенні), в результаті чого була одержана версія 1.60. (B) Поверхневі залишки важких ланцюгів мишачого й людського Mov19. Представлені поверхневі варіабельні залишки важких ланцюгів каркасного регіону мишачого й гуманізованого Mov19 і номер позиції (система Kabat). 6 UA 110783 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 Людські залишки, що відрізняються від вихідних мишачих послідовностей, підкреслені. Аналогічні поверхневі залишки представлені для FR1-21 (C) і (D). [0046] Фігура 2. Вирівнювання варіабельних доменів важкого і легкого ланцюгів хімерного Mov19 і huMov19 і варіабельних доменів важкого і легкого ланцюгів muFR1-21 і huFR1-21. Вирівнювання перебудованих послідовностей варіабельних регіонів Mov19 і Fr1-21 з їх мишачими еквівалентами. A) і З) варіабельні домени легкого ланцюга; B) і D) варіабельний домен важкого ланцюга. Рисками «-» показані ідентичні з мишачою послідовністю залишки. Регіони, що визначають комплементарність (визначення Kabat) підкреслені. [0047] Фігура 3. Експресія хімерного Mov19 і huMov19 у клітинах HEK. Плазміди експресії хімерного і людського Mov19 були транзієнтно трансфіковані в суспензію клітин HEK293-T, зібрані через 7 днів, експресоване антитіло було визначено способом кількісного ІФА. Плазміди легкого ланцюга і важкого ланцюга були трансфіковані в співвідношенні або 3:1, або 6:1, відповідно. [0048] Фігура 4. Специфічність зв'язування антитіл проти FOLR1, визначена за їх зв'язуванням з клітинами 300-19, що експресують FOLR 1. Зв'язування huMov19 із клітинами 300-19-FOLR1 відповідно до проточної цитометрії. Батьківські клітини 300-19, що експресують FOLR-1. Суцільне сіре заливання показує клітинну власну флуоресценцію; чорні пунктирні лінії показують клітини, інкубовані із вторинним анти-людським антитілом, кон’югованим з FITC; чорні суцільні лінії показують клітини, інкубовані з антитілом huMov-19 і вторинним антилюдським антитілом, кон’югованим з FITC. [0049] Фігура 5. Зв’язуюча здатність і цитотоксична активність in vitro антитіл проти FOLR1 і імунокон’югатів. Зв’язуюча здатність huMov19 і різних мишачих і гуманізованих антитіл FR-1 була визначена на клітинах SKOV3. Також вимірювалась цитотоксична активність in vitro кон’югатів PEG4-Mal-DM4 з перерахованими антитілами. [0050] Фігура 6. Антитіло-залежна клітинна цитотоксичність імунокон’югатів. АЗКЦ-активність huMov19, huFR1-21 і Mor003 визначалася на клітинах Igrov1. Igrov 1 були інкубовані при 15000 клітин/ямку зі співвідношенням клітин-мішеней: НК-клітин 1:4. [0051] Фігура 7. Цитотоксична активність при тривалому експонуванні huFR1-21-PEG4-malDM4 і huMov19-PEG4-mal-DM4 на клітини KB. Надлишок некон’югованих антитіл пригнічував активність імунокон’югатів при їх спільному інкубуванні в присутності клітин KB, що свідчить про антиген-залежний характер цитотоксичної активності. [0052] Фігура 8. Ефективність in vivo кон’югатів, націлених на huMov19 у моделі ксенотрансплантата KB. На встановленій ксенотрансплантатній моделі клітин KB, імплантованих підшкірно мишам з ТКІН, були протестовані FOLR 1-націленний, розщеплюваний кон’югат huMov19-SPDB-DM4 (B) у порівнянні з ненаціленим на FOLR1 huc242-SPDB-DM4 (D), а, що також нерозщеплюваний кон’югат huMov19-PEG4-Mal-DM4 (C) в порівнянні з ненаціленим huc242-PEG4Mal-DM4( E). Націлювання FOLR1 на huMov19 приводило до істотного зменшення середнього об’єму пухлини. [0053] Фігура 9. Ефективність in vivo huMov19-PEG4-Mal-DM4 у порівнянні з мишачими антитілами проти FOLR1 FR-1 у моделі ксенотрансплантата KB. Серія антитіл FR-1, як некон’югованих, так і кон’югованих з PEG4-Mal-DM4, була протестована на здатність знижувати середній об’єм пухлини в порівнянні з huMov19-PEG4-Mal-DM4 у моделі ксенотрансплантатної пухлини KB. (A) FR-1-9, (B) FR-1-13, (C) FR-1-22 і (D) FR-1-23. [0054] Фігура 10. Ефективність in vivo кон’югатів huMov19-PEG4-Mal-DM4 і huFR1-21-PEG4Mal-DM4 у моделі ксенотрансплантата KB. На 6 день після інокуляції проводились однократні ін'єкції по 10 мг/кг huMov19-PEG4-Mal-DM4 і huFR1-21-PEG4-Mal-DM4. І huMov19-PEG4-MalDM4, і huFR1-21-PEG4-Mal-DM4 приводили до істотного зменшення середнього об’єму пухлини. «Середній ОП» позначає середній об’єм пухлини. [0055] Фігура 11. HuMov19-PEG4-mal-DM4 проявляє залежну від дози активністьу моделі ксенотрансплантата KB. Залежна від дози активність імунокон’югата оцінювалась для інтервалу перевірених доз. При введенні раз на тиждень спостерігалось підвищення протипухлинної активності. Високі навантаження препарату лише незначною мірою підвищували активність у групах дозування 10 мг/кг, у групах менших дозувань активність знижувалась. 3,7 DAR означає 3,7 молекул препарату на антитіло. [0056] Фігура 12. Ефективність in vivo huMov19, кон’югованого з DM1 і DM4 через різні лінкери. huMov19 було кон’юговане з SMCC-DM1 при 3,9 молекул препарату на антитіло; sulfomal-DM4 - при 3,7 молекул препарату на антитіло (B), а sulfo-mal-DM4 - при 8,23 молекул препарату на антитіло (C), потім була досліджена їх здатність знижувати середній об’єм пухлини при різних концентраціях у порівнянні з huMov19-PEG4-mal-DM4. 7 UA 110783 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 [0057] Фігура 13. Ефективність in vivo huMov19, кон’югованого з DM1 і DM4 через різні лінкери. huMov19 було кон’юговане з SPP-DM1 при 4,3 молекул препарату на антитіло; sulfoSPDB-DM4 - при 3,8 молекул препарату на антитіло, а SPDB-DM4 - при 3,8 молекул препарату на антитіло, і з sulfo-SPDB-DM4 - при 6,8 молекул препарату на антитіло; потім була досліджена їх здатність знижувати середній об’єм пухлини. Миші одержували по 5 мг/кг (A) і 2,5 мг/кг (B) одного з кон’югатів, наведених вище, або тільки фосфатно-сольовий буфер. [0058] Фігура 14. Ефективність in vivo huMov19-sulfo-SPDB-DM4 у моделі ксенотрансплантатної пухлини OVCAR-3. Миші одержували по 25, 50 або 100 мкг/кг huMov19sulfo-SPDB-DM4 або тільки фосфатно-сольовий буфер. [0059] Фігура 15. Ефективність in vivo huMov19-sulfo-SPDB-DM4 у моделі ксенотрансплантатної пухлини IGROV-1. Миші одержували по 25, 50 або 100 мкг/кг huMov19sulfo-SPDB-DM4 або тільки фосфатно-сольовий буфер. [0060] Фігура 16. Ефективність in vivo huMov19-sulfo-SPDB-DM4 у моделі ксенотрансплантатної пухлини OV-90. Миші одержували по 25, 50 або 100 мкг/кг huMov19-sulfoSPDB-DM4 або тільки фосфатно-сольовий буфер. [0061] Фігура 17. Вплив розщеплюваних і нерозщеплюваних лінкервв на ефективність імунокон’югатів в в ксенотрансплантатних моделях KB. [0062] Фігура 18. Вплив розщеплюваних лінкерів на ефективність імунокон’югатів в (А) ксенотрансплантатній моделі KB, (В) ксенотрансплантатній моделі OVCAR-3. [0063] Фігура 19. Ефективність in vitro і in vivo huFR1-48, huFR1-49, huFR1-57 і huFR1-65SMCC-DM1 у ксенотрансплантатних моделях пухлини KB. Миші одержували 200 мкг/кг однократно. Детальний опис винахоДУ [0064] У даному винаході пропонуються нові агенти, включаючи такі поліпептиди як антитіла й імуноглобуліни, які з'єднуються з людським рецептором фолієвої кислоти 1 (FOLR1), не обмежуючись перерахованим. Також пропонуються споріднені поліпептиди і полінуклеотиди, композиції, що містять FOLR 1-зв’язуючі агенти, і способи одержання FOLR 1-зв’язуючих агентів. Крім цього, пропонуються способи використання нових FOLR 1-зв’язуючих агентів, такі як способи інгібування пухлинного росту і/або лікування онкологічного захворювання. I. Визначення  [0065] Для полегшення розуміння даного винаходу нижче дані визначення ряду термінів і оборотів.  [0066] Терміни «людський рецептор фолієвої кислоти 1» або «FOLR1» при використанні тут відносяться до будь-якого нативного людського FOLR1, якщо не зазначене інше. Термін «FOLR1» охоплює «повнорозмірний» непроцесований FOLR1, а також будь-яку форму FOLR1, що виходить при процесінгу в клітині. Термін також охоплює природні варіанти FOLR1, наприклад, сплайс-варіанти, алельні варіанти й ізоформи. Поліпептиди FOLR1, описані тут, можуть бути виділені з великої кількості джерел, наприклад, з тканин людини або з інших джерел, або можуть бути одержані рекомбінантними або синтетичними способами. Прикладами послідовностей FOLR1 слугують, не обмежуючись перерахованим, ідентифікаційні номери NCBI P15328, NP_001092242.1, AAX29268.1, AAX37119.1, NP_057937.1 і NP_057936.1.  [0067] Термін «антитіло» означає молекулу імуноглобуліну, яка розпізнає і специфічно зв'язується з мішенню, наприклад, білком, поліпептидом, пептидом, вуглеводом, полінуклеотидом, ліпідом або комбінацією перерахованого, через щонайменше один сайт розпізнавання антигену у варіабельному регіоні молекули імуноглобуліну. При використанні тут термін «антитіло» охоплює незмінені поліклональні антитіла, незмінені моноклональні антитіла, фрагменти антитіл (наприклад, фрагменти Fab, Fab', F(ab')2 і Fv), одноланцюгові мутанти Fv (scFv), мультиспецифічні антитіла, наприклад, біспецифічні антитіла, одержані щонайменше із двох незмінених антитіл, хімерні антитіла, гуманізовані антитіла, людські антитіла, злиті білки, що містять антиген-визначальну частину антитіла, і інші модифіковані молекули імуноглобулінів, що містять антигенрозпізнавальний сайт, за умови прояву антитілами бажаної біологічної активності. Антитіло може належати до одного з п'яти основних класів імуноглобулінів: IgA, IgD, IgE, IgG і IgM або їх підкласів (ізотипів) (наприклад, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 і IgA2), залежно від типу константних доменів важкого ланцюга, називаних альфа, дельта, епсилон, гама і мю, відповідно. Різні класи імуноглобулінів володіють різними і добре відомими структурами субодиниць і тривимірними конфігураціями. Антитіла можуть бути вільними або кон’югованими з іншими молекулами, наприклад, токсинами, радіоізотопами і т.д.  [0068] «Блокувальне» антитіло або «антитіло-антагоніст» являє собою антитіло, яке інгібує або зменшує біологічну активність антигену, який воно зв'язує, наприклад, FOLR1. У деяких варіантах втілення блокувальні антитіла або антитіла-антагоністи частково або повністю 8 UA 110783 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 інгібують біологічну активність антигену. Бажано, щоб біологічна активність була зменшена на 10%, 20%, 30%, 50%, 70%, 80%, 90%, 95% або навіть на 100%.  [0069] Терміни «антитіло проти FOLR1» або «антитіло, яке зв'язується з FOLR1» відносяться до антитіла, яке здатне зв'язувати FOLR1з афінністю, достатньою для застосування антитіла в діагностичних або терапевтичних цілях у відношенні FOLR1. Зайве зв'язування антитіла проти FOLR1з невідповідним білком, що не є FOLR1, становить менше ніж приблизно 10% від зв'язування антитіла з FOLR1згідно даних, наприклад, радіоімунологічного аналізу (РІА). У певних варіантах втілення антитіло, яке зв'язується з FOLR1, має константу дисоціації (Kd) ≤1 мкМ, ≤100 нМ, ≤10 нМ, ≤1 нМ або ≤0,1 нМ.  [0070] Термін «фрагмент антитіла» відноситься до частини незміненого антитіла і відноситься до антиген-визначальних варіабельних регіонів інтактного антитіла. Прикладами фрагментів антитіл слугують, не обмежуючись перерахованим, фрагменти Fab, Fab', F(ab')2 і Fv, лінійні антитіла, одноланцюгові антитіла, мультиспецифічні антитіла, утворені із фрагментів антитіл.  [0071] «Моноклональне антитіло» відноситься до гомогенної популяції антитіл, залученої у високоспецифічне розпізнавання і зв'язування однієї антигенної детермінанти – епітопу. Цим вони відрізняються від поліклональних антитіл, які звичайно включають різні антитіла, спрямовані проти різних антигенних детермінант. Термін «моноклональне антитіло» охоплює незмінені повнорозмірні антитіла, а також фрагменти антитіл (наприклад, фрагменти Fab, Fab', F(ab')2 і Fv), одноланцюгові мутанти (scFv), злиті білки, що містять частину антитіла і інші модифіковані молекули імуноглобулінів, що містять сайт, який розпізнає антиген. Крім того, «моноклональне антитіло» відноситься до таких антитіл, виготовлених за допомогою будь-якої кількісті способів, включаючи, але не обмежуючись перерахованим, використання гібридом, фагової селекції, рекомбінантної експресії і трансгенних тварин.  [0072] Термін «гуманізоване антитіло» відноситься до форм нелюдських (наприклад, мишачих) антитіл, що є специфічними імуноглобуліновими ланцюгами, хімерними імуноглобулінами або їх фрагментами, які містять мінімальні нелюдські (наприклад, мишачі) послідовності. Як правило, гуманізовані антитіла є людськими імуноглобулінами, у яких залишки із регіону, що визначає комплементарність (CDR) замінені на залишки CDR нелюдського виду (наприклад, миші, щура, кролика, хом'ячка), що володіють бажаними специфічністю, афінністю, здатністю (Jones et al., 1986, Nature, 321:522-525; Riechmann et al., 1988, Nature, 332:323-327; Verhoeyen et al., 1988, Science, 239:1534-1536). У деяких випадках залишки Fv- каркасного регіону (FR) людського імуноглобуліну замінені на відповідні залишки антитіла нелюдського виду, які володіють бажаною специфічністю, афінністю і здатністю. Гуманізоване антитіло може бути далі модифіковане заміщенням додаткових залишків в Fv-каркасному регіоні і/або в замінюваних нелюдських залишках для покращення і оптимізації специфічності, афінності і/або здатності антитіла. Загалом гуманізоване антитіло містить всі з щонайменше одного, а як правило - двох або трьох варіабельних доменів, які містять всі або практично всі CDR-регіони, що відповідають нелюдському імуноглобуліну, в яких практично всі з FR-регіонів походять від людської консенсусної послідовності імуноглобуліну. Гуманізоване антитіло також може містити щонайменше частину константного регіону або домену імуноглобуліну (Fc), як правило, людського імуноглобуліну. Приклади і способи одержання гуманізованих антитіл описані в патентах США 5225539 або 5639641.  [0073] «Варіабельний регіон» антитіла відноситься до варіабельного регіону легкого ланцюга антитіла або до варіабельного регіону важкого ланцюга, окремо або в комбінації. Варіабельні регіони важкго і легкого ланцюгів складаються із чотирьох каркасних регіонів (FR), з'єднаних трьома регіонами, що визначають комплементарність (CDR), також відомими як гіперваріабельні регіони. Регіони, що визначають комплементарність, у кожному ланцюзі тримаються близько з каркасними регіонами і з регіонами, що визначають комплементарність іншого ланцюга, утворюючи антигензв’язуючий сайт антитіла Відомо щонайменше дві техніки визначення CDR: (1) підхід, заснований на перехресно-видовій варіабельності послідовностей (наприклад, Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, (5th ed., 1991, National Institutes of Health, Bethesda Md.)); і (2) підхід, заснований на кристалографічному дослідженні комплексів антиген-антитіло (Al-lazikani et al (1997) J. Molec. Biol. 273:927-948)). Крім цього, для визначення CDR у даній галузі техніки іноді ці підходи застосовуються в комбінації.  [0074] Система нумерації Kabat, як правило, використовується для позначення залишку у варіабельному домені (приблизно залишки 1-107 легкого ланцюга і залишки 1-113 важкого ланцюга) (наприклад, Kabat et al., Sequences of Immunological Interest. 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)). 9 UA 110783 C2 5 10 15  [0075] Нумерація позицій амінокислот Kabat відноситься до системи нумерації, що використовується для варіабельних доменів важкого ланцюга або варіабельних доменів легкого ланцюга в огляді антитіл Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Віфезда, Мериленд. (1991). При використанні цієї системи нумерації актуальна лінійна амінокислотна послідовність може містити меншу кількість амінокислот або додаткові амінокислоти, що відповідає укорочуванню або впровадженню варіабельного домену в FR або в CDR. Наприклад, варіабельний домен важкого ланцюга може містити вставку однієї амінокислоти (залишок 52a згідно Kabat) після залишку 52 (Нумерація Kabat) H2 і впроваджені залишки (наприклад, залишки 82a, 82b і 82c, і т.д., згідно Kabat) після 82 залишку FR. Нумерація залишків Kabat може бути визначена для заданого антитіла шляхом вирівнювання послідовності в гомологічних ділянках з антитілом із «стандартною» нумерацією послідовності Kabat. Система Chothia використовує замість цього розташування структурних (Нумерація петель (Chothia, Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). Кінець петлі Chothia CDR-H1 по нумерації Chothia) Kabat відповідає H32-H34, залежно від довжини петлі (тому що в системі нумерації Kabat вставки розташовуються між H35A і H35B; якщо 35A і 35B відсутні, петля закінчується на 32; якщо є присутнім тільки 35A, петля закінчується на 33; якщо присутні і 35A, і 35B, петля закінчується на 34). Гіперваріабельні регіони AbM представляють компроміс між CDR Kabat і структурними петлями Chothia і використовуються ПЗ моделювання антитіл Oxford Molecular's AbM. (Нумерация Kabat ) (Нумерация Chothia) 20 25 30 35 40 45 [0076] Термін «людське антитіло» означає антитіло, що продукується людиною, або антитіло з амінокислотною послідовністю, яка є відповідною до антитіла, що продукується людиною, виготовленому згідно з будь-якою технікою, відомою у даній галузі техніки. Це визначення людського антитіла включає незмінені або повнорозмірні антитіла, їх фрагменти і/або антитіла, що містять щонайменше один поліпептид людського важкого і/або легкого ланцюгів, наприклад, антитіло, що містить поліпептиди мишачого легкого ланцюга і людського важкого ланцюга. [0077] Термін «хімерні антитіла» відноситься до антитіл, у яких амінокислотна послідовність молекули імуноглобуліну походить від двох і більше видів. Як правило, варіабельні регіони легкого і важкого ланцюгів відповідають варіабельним регіонам антитіл, одержаних від одного виду ссавців (наприклад, миші, щура, кролика і т.д.), з бажаною специфічністю, афінністю і активністю, у той час як константні регіони є гомологічними послідовностям антитіл, одержаних від іншого виду (звичайно людини) для виключення формування імунної відповіді у цього виду. [0078] Терміни «епітоп» або «антигенна детермінанта» використовуються тут як взаємозамінні й відносяться до тієї частини антигену, яка може бути розпізнана і специфічно зв'язана з конкретним антитілом. Якщо антиген є поліпептидом, епітопи можуть бути утворені як послідовними амінокислотами, так і непослідовними, але розташованими поруч у третинній структурі білка. Епітопи, утворені послідовними амінокислотами, як правило, зберігаються при денатурації білка, у той час як епітопи, що утворюються в третинній структурі білка, як правило, не зберігаються при денатурації білка. Епітоп, як правило, включає щонайменше 3, а частіше щонайменше 5 або 8-10 амінокислот в унікальній просторовій конформації. [0079] «Зв’язуюча здатність» взагалі відноситься до сумарної сили всіх нековалентних взаємодій між одиночним зв’язуючим сайтом молекули (наприклад, антитіла) і її партнером у зв'язуванні (наприклад, антигеном). Якщо не зазначене інше, при використанні тут, «зв’язуюча здатність» означає природну зв’язуючу здатність, що віддзеркалює 1:1 взаємодію між членами пари, що зв'язується (наприклад, антитіла і антигену). Афінність молекули X до її партнера Y 10 UA 110783 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 може бути охарактеризована константою дисоціації (Kd). Афінність може бути виміряна звичайними способами, відомими в даній галузі техніки, включаючи ті, які описані тут. Низькоафінні антитіла, як правило, зв'язують антиген повільно і легко дисоциюють, у той час як високоафінні антитіла, як правило, швидко зв'язують антиген і залишаються зв'язаними довше. У даній галузі техніки відома велика кількість способів вимірювання зв’язуючої афінності, будьякий з яких може використовуватися для цілей даного винаходу. Специфічні ілюстративні варіанти втілення описані нижче. [0080] Вислів «або краще», при використанні тут, відноситься до більш сильного зв'язування між молекулою і її партнером по зв'язуванню. «Або краще», при використанні тут, відноситься до більш сильного зв'язування, що характеризується меншим чисельним значенням величини Kd. Наприклад, у антитіла, що володіє афінністю до антигену «0,6 нМ або краще», афінність антитіла до антигену дорівнює