Антитіла проти fgfr3 і способи їх застосування

Реферат: Винахід стосується антитіл проти FGFR3 і композицій, що містять ці антитіла, і способів їх застосування. UA 104459 C2 (12) UA 104459 C2 UA 104459 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 Перехресне посилання на споріднені заявки По даній заявці вимагається пріоритет патентної заявки США номер 61/163222, поданої 25 березня 2009 року, зміст якої включений в цей документ як посилання в повному обсязі. Галузь техніки, до якої належить винахід Даний винахід стосується, головним чином, галузі молекулярної біології. Більш конкретно, винахід стосується антитіл проти FGFR3 і їх застосування. Рівень техніки Фактори росту фібробластів (FGF) і їх рецептори (FGFR) грають основну роль в процесі ембріонального розвитку, гомеостазу тканин і метаболізму (1-3). У людини є 22 FGF (FGF1-14, FGF16-23) і чотири рецептори FGF з тирозинкіназним доменом (FGFR1-4). FGFR складаються з позаклітинної області, що зв'язує ліганд, який має два або три імуноглобуліноподібних домени (IgD1-3), трансмембранної області, однократно пронизуючої мембрану, і цитоплазматичного розділеного тирозинкіназного домену. Кожний з FGFR1, 2 і 3 має дві основних альтернативно сплайсованих ізоформи, позначуваних як IIIb і IIIc. Ці ізоформи відрізняються приблизно 50 амінокислотами у другій половині IgD3 і мають різну локалізацію в тканинах і відмінну специфічність відносно ліганду. Як правило, ізоформа IIIb зустрічається в епітеліальних клітинах, в той час як IIIc експресується в мезенхімних клітинах. При зв’язуванні FGF в тісній взаємодії з гепаринсульфатними протеогліканами, FGFR димеризуються і фосфорилуються по конкретних залишках тирозину. Це сприяє залученню основних адапторних білків, таких як субстрат FGFR 2α (FRS2α), що приводить до активації множини каскадів передачі сигналу, включаючи каскади активованої мітогеном протеїнкінази (MAPK) і PI3K-AKT (1, 3, 4). Отже, FGF і їх рецептори регулюють широкий набір клітинних процесів, включаючи проліферацію, диференціювання, міграцію і виживання, залежним від умов чином. FGFR з порушеною активацією залучені до конкретних злоякісних пухлин людини (1, 5). Зокрема, хромосомна транслокація t(4;14) (p16.3;q32) відбувається приблизно у 15-20% пацієнтів з множинною мієломою, що приводить до надекспресії FGFR3, і коррелює з більш короткою загальною виживаністю (6-9). FGFR3 також залучений у надання хеморезистентності клітинним лініям мієломи в культурі (10), що узгоджується з поганою клінічною відповіддю пацієнтів t(4;14)+ на загальноприйняту хіміотерапію (8). Надекспресія мутаційно активованого FGFR3 є достатньою для індукції онкогенної трансформації в кровотворних клітинах і фібробластах (11-14, 15), трансгенних моделях на мишах (16) і на моделях трансплантації кісткового мозку у мишей (16, 17). Таким чином, FGFR3 був запропонований як можлива терапевтична мішень для лікування множинної мієломи. Дійсно, декілька низькомолекулярних інгібіторів, націлених на FGFR, які хоч і не селективні відносно FGFR3 і мають перехресну інгібіторну активність відносно деяких інших кіназ, продемонстрували цитотоксичність проти позитивних по FGFR3 клітин мієломи в культурі і в моделях на мишах (18-22). Надекспресія FGFR3 була описана у високій частці випадків раку сечового міхура (23, 24). Більше того, соматичні активуючі мутації в FGFR3 були ідентифіковані в 60-70% папілярних і 16-20% м’язово-інвазивних карцином сечового міхура (24, 25). У експериментах на клітинній культурі, РНК-інтерференція (11, 26) або одноланцюжковий Fv-фрагмент антитіла проти FGFR3 інгібували проліферацію клітин раку сечового міхура (27). У нещодавніх дослідженнях було показано, що кон’югат антитіло проти FGFR3-токсин знижує ріст ксенотрансплантата клітинної лінії раку сечового міхура через опосередковувану FGFR3 доставку токсинів в пухлини (28). Однак залишається неясним, чи дійсно передача сигналу FGFR3 є онкогенним пусковим фактором росту пухлин сечового міхура in vivo. Більше того, не була визначена терапевтична потужність націлювання на FGFR3 при раку сечового міхура на основі моделей in vivo. Публікації, що стосуються FGFR3 і антитіл проти FGFR3, включають публікацію патенту США № 2005/0147612; Rauchenberger et al., J Biol Chem 278 (40):38194-38205 (2003); WO 2006/048877; Martinez-Torrecuadrada et al., (2008) Mol. Cancer Ther 7(4): 862-873; WO 2007/144893; Trudel et al. (2006) 107(10): 4039-4046; Martinez-Torrecuadrada et al. (2005) Clin Cancer Res 11 (17): 6280-6290; Gomez-Roman et al. (2005) Clin Cancer Res 11: 459-465; Direnzo R. et al., (2007) Proceedings of AACR Annual Meeting, Abstract № 2080; WO 2010/002862. Очевидно, що продовжує існувати необхідність в засобах, які мають клінічні ознаки, оптимальні для розробки як лікарських засобів. Винахід, описаний в цьому документі, задовольняє цю потребу і забезпечує інші переваги. Всі посилання, цитовані в цьому документі, включаючи патентні заявки і публікації, включені як посилання в повному обсязі. Суть винаходу Винахід частково оснований на ідентифікації різних зв'язуючих FGFR3 агентів (таких як антитіла і їх фрагменти). FGFR3 являє собою важливу і переважну терапевтичну мішень, і 1 UA 104459 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 винахід стосується композицій і способів, основаних на зв’язуванні цих агентів з FGFR3. Зв'язуючі FGFR3 агенти за винаходом, як описано в цьому документі, забезпечують важливі терапевтичні і діагностичні засоби для використання для націлювання на патологічні стани, пов'язані з експресією і/або активністю каскадів передачі сигналу FGFR3. Таким чином, винахід стосується способів, композицій, наборів і виробів, що стосуються зв’язування FGFR3. Даний винахід стосується антитіл, які зв'язуються з FGFR3. У одному з аспектів винахід стосується виділеного антитіла, яке зв'язує FGFR3. У деяких варіантах здійснення антитіло зв'язує ізоформу FGFR3-IIIb і/або ізоформу FGFR3-IIIc. У деяких варіантах здійснення антитіло зв'язує мутантний FGFR3 (наприклад, один або декілька з R248C, S249C, G372C, Y375C, K652E FGFR3-IIIb і/або один або декілька з R248C, S249C, G370C, Y373C, K650E FGFR3-IIIc). У деяких варіантах здійснення антитіло зв'язує мономерний FGFR3 (наприклад, мономерні ізоформи FGFR3-IIIb і/або -IIIc). У деяких варіантах здійснення антитіло забезпечує утворення мономерного FGFR3, наприклад, шляхом стабілізації мономерної форми FGFR3 відносно димерної форми FGFR3. У одному з аспектів винахід стосується виділеного антитіла проти FGFR3, де повнорозмірна -7 форма IgG антитіла зв'язує FGFR3 людини з Kd 1×10 або міцніше. Як відомо в даній галузі, афінність зв’язування ліганду з його рецептором можна визначати будь-яким з множини аналізів і виражати у вигляді різних кількісних величин. Таким чином, в одному з варіантів здійснення афінність зв’язування виражають як величини Kd і вони відображають по суті афінність зв’язування (наприклад, з мінімізованими ефектами авідності). Як правило, і переважно, афінність зв’язування вимірюють in vitro, як в безклітинних умовах, так і в умовах на основі клітин. Для одержання показників афінності зв’язування можна використовувати будьякий з множини аналізів, відомих в даній галузі, включаючи аналізи, описані в цьому документі, в тому числі, наприклад, Biacore, радіоімунний аналіз (RIA) і ELISA. У деяких варіантах -8 здійснення повнорозмірна IgG-форма антитіла зв'язує FGFR3 людини з Kd 1×10 або міцніше, з -9 -10 Kd 1×10 або міцніше, або з Kd 1×10 або міцніше. Головним чином, антитіла проти FGFR3 за даним винаходом являють собою антитілаантагоністи. Таким чином, в одному з аспектів антитіла проти FGFR3 інгібують активність FGFR3 (наприклад, активність FGFR3-IIIb і/або FGFR3-IIIc). У деяких варіантах здійснення антитіло проти FGFR3 (головним чином, в двовалентній формі) не має суттєву функцію агоніста FGFR3. У деяких варіантах здійснення антитіло-антагоніст проти FGFR3 (головним чином, в двовалентній формі) має невелику функцію агоніста FGFR3 або не має її. У одному з варіантів здійснення антитіло за винаходом (головним чином, в двовалентній формі) не виявляє рівень активності агоніста FGFR3, який перевищує фоновий рівень і який має статистичну значущість. У одному з аспектів зв’язування антитіла з FGFR3 може інгібувати димеризацію рецептора з іншою молекулою рецептора, причому активація рецептора інгібується (внаслідок, щонайменше частково, відсутності димеризації рецептора). Інгібування може бути прямим або непрямим. У одному з аспектів винахід стосується антитіл проти FGFR3, які не мають суттєву апоптотичну активність (наприклад, не індукують апоптоз клітини, наприклад клітини карциноми перехідних клітин або клітини множинної мієломи, такі як клітина множинної мієломи, що містить транслокацію FGFR3, таку як транслокація t(4;14)). У деяких варіантах здійснення антитіло проти FGFR3 має невелику апоптотичну функцію або не має її. У деяких варіантах здійснення антитіла проти FGFR3 не мають апоптотичну функцію, яка перевищує фоновий рівень і яка є статистично значущою. У одному з аспектів винахід стосується антитіл проти FGFR3, які не індукують суттєве пригнічення FGFR3. У деяких варіантах здійснення антитіло проти FGFR3 індукує невелике пригнічення рецептора або не індукує його. У деяких варіантах здійснення антитіла проти FGFR3 не індукують пригнічення рецептора, яке перевищує фоновий рівень і яке є статистично значущим. У одному з аспектів винахід стосується антитіл проти FGFR3, які мають ефекторну функцію. У одному з варіантів здійснення ефекторна функція включає антитілозалежну клітинну цитотоксичність (ADCC). У одному з варіантів здійснення антитіло проти FGFR3 (в деяких варіантах здійснення "голе" антитіло проти FGFR3) здатне викликати загибель клітини, в деяких варіантах здійснення клітин множинної мієломи (наприклад, клітин множинної мієломи, що містять транслокацію, наприклад транслокацію t(4;14)). У деяких варіантах здійснення антитіло проти FGFR3 здатне викликати загибель клітини, яка експресує приблизно 10000 молекул FGFR3 на клітину або більше (наприклад, приблизно 11000, приблизно 12000, приблизно 13000, приблизно 14000, приблизно 15000, приблизно 16000, приблизно 17000, приблизно 18000 або більше FGFR3 молекул на клітину). У інших варіантах здійснення клітина експресує 2 UA 104459 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 приблизно 2000, приблизно 3000, приблизно 4000, приблизно 5000, приблизно 6000, приблизно 7000, приблизно 8000 або більше молекул FGFR3 на клітину. У одному з аспектів антитіло проти FGFR3 за винаходом інгібує конститутивну активність FGFR3. У деяких варіантах здійснення конститутивна активність FGFR3 являє собою залежну від ліганду конститутивну активність FGFR3. У деяких варіантах здійснення конститутивна активність FGFR3 являє собою незалежну від ліганду конститутивну активність FGFR3. У одному з аспектів антитіло проти FGFR3 інгібує FGFR3, що містить мутацію, відповідну R248C FGFR3-IIIb . Як використовується в цьому документі, термін "містить мутацію, відповідну R248C R248C R248C FGFR3-IIIb ", включає FGFR3-IIIb і FGFR3-IIIc , а також додаткові форми FGFR3, що містять мутацію R на С в положенні, відповідному R248 FGFR3-IIIb. Фахівцю в даній галузі зрозуміло, яким чином провести вирівнювання послідовності FGFR3 для ідентифікації відповідних залишків між відповідними послідовностями FGFR3, наприклад вирівнювання послідовності FGFR3-IIIc з послідовністю FGFR3-IIIb для ідентифікації положення в FGFR3, відповідного положенню R248 в FGFR3-IIIb. У деяких варіантах здійснення антитіло проти R248C R248C FGFR3 інгібує FGFR3-IIIb і/або FGFR3-IIIc . У одному з аспектів антитіла проти FGFR3 інгібують FGFR3, який містить мутацію, K652E відповідну FGFR3-IIIb . Як використовується в даній заявці термін "містить мутацію, K652E K652E K650E відповідну FGFR3-IIIb ", включає FGFR3-IIIb і FGFR3-IIIc , а також додаткові форми FGFR3, що містять мутацію K на Е в положенні, відповідному K652 FGFR3-IIIb. Фахівцю в даній галузі зрозуміло, яким чином провести вирівнювання послідовності FGFR3 для ідентифікації відповідних залишків між відповідними послідовностями FGFR3, наприклад вирівнювання послідовності FGFR3-IIIc з послідовністю FGFR3-IIIb для ідентифікації положення в FGFR3, відповідного положенню K652 в FGFR3-IIIb. У деяких варіантах здійснення антитіло проти K652E K650E FGFR3 інгібує FGFR3-IIIb і/або FGFR3-IIIc . У одному з аспектів антитіла проти FGFR3 інгібують FGFR3, що містить мутацію, відповідну S249C FGFR3-IIIb . Як використовується в даній заявці термін "містить мутацію, відповідну FGFR3S249C S249C S249C IIIb ", включає FGFR3-IIIb і FGFR3-IIIc , а також додаткові форми FGFR3, що містять мутацію S на С в положенні, відповідному S249 FGFR3-IIIb. У деяких варіантах здійснення S249C S249C антитіло проти FGFR3 інгібує FGFR3-IIIb і/або FGFR3-IIIc . У одному з аспектів антитіла проти FGFR3 інгібують FGFR3, що містить мутацію, відповідну G372C FGFR3-IIIb . Як використовується в даній заявці термін "містить мутацію, відповідну FGFR3G372C G372C G370C IIIb ", включає FGFR3-IIIb і FGFR3-IIIc , а також додаткові форми FGFR3, що містять мутацію G на С в положенні, відповідному G372 FGFR3-IIIb. У деяких варіантах здійснення G372C G370C антитіло проти FGFR3 інгібує FGFR3-IIIb і/або FGFR3-IIIc . У одному з аспектів антитіла проти FGFR3 інгібують FGFR3, що містить мутацію, відповідну Y375C FGFR3-IIIb . Як використовується в даній заявці термін "містить мутацію, відповідну FGFR3Y375C Y375C Y373C IIIb ", включає FGFR3-IIIb і FGFR3-IIIc , а також додаткові форми FGFR3, що містять мутацію S на С в положенні, відповідному S249 FGFR3-IIIb. У деяких варіантах здійснення Y375C Y373C антитіло проти FGFR3 інгібує FGFR3-IIIb і/або FGFR3-IIIc . K652E У одному з аспектів антитіла проти FGFR3 інгібують (a) FGFR3-IIIb і (b) один або R248C Y375C S249C G372C декілька з FGFR3-IIIb , FGFR3-IIIb , FGFR3-IIIb і FGFR3IIIb . K650E У одному з аспектів антитіла проти FGFR3 інгібують (a) FGFR3-IIIc і (b) один або R248C Y373C S249C G370C декілька з FGFR3-IIIc , FGFR3-IIIc , FGFR3-IIIc і FGFR3IIIc . R248C У одному з аспектів антитіла проти FGFR3 інгібують (a) FGFR3-IIIb і (b) один або K652E Y375C S249C G372C декілька з FGFR3-IIIb , FGFR3-IIIb , FGFR3-IIIb і FGFR3-IIIb . R248C У одному з аспектів антитіла проти FGFR3 інгібують (a) FGFR3-IIIc і (b) один або K650E Y373C S249C G370C декілька з FGFR3-IIIc , FGFR3-IIIc , FGFR3-IIIc і FGFR3-IIIc . G372C У одному з аспектів антитіла проти FGFR3 інгібують (a) FGFR3-IIIb і (b) один або K652E Y375C S249C R248C декілька з FGFR3-IIIb , FGFR3-IIIb , FGFR3-IIIb і FGFR3-IIIb . G370C У одному з аспектів антитіла проти FGFR3 інгібують (a) FGFR3-IIIc і (b) один або K650E Y373C S249C R248C декілька з FGFR3-IIIc , FGFR3-IIIc , FGFR3-IIIc і FGFR3-IIIc . R248C K652E У одному з аспектів антитіла проти FGFR3 інгібують FGFR3-IIIb , FGFR3-IIIb , FGFR3Y375C S249C G372C IIIb , FGFR3-IIIb і FGFR3-IIIb . R248C K650E У одному з аспектів антитіла проти FGFR3 інгібують FGFR3-IIIc , FGFR3-IIIc , FGFR3Y373C S249C G370C IIIc , FGFR3-IIIc і FGFR3-IIIc . У одному з аспектів винахід стосується виділеного антитіла проти FGFR3, що містить: (a) щонайменше одну, дві, три, чотири або п'ять послідовностей гіперваріабельних областей (HVR), вибраних з: (i) HVR-L1, що містить послідовність A1-A11, де A1-A11 являє собою RASQDVDTSLA (SEQ ID NO:87), 3 UA 104459 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 (ii) HVR-L2, що містить послідовність B1-B7, де B1-B7 являє собою SASFLYS (SEQ ID NO:88), (iii) HVR-L3, що містить послідовність C1-C9, де C1-C9 являє собою QQSTGHPQT (SEQ ID NO:89), (iv) HVR-H1, що містить послідовність D1-D10, де D1-D10 являє собою GFTFTSTGIS (SEQ ID NO:84), (v) HVR-H2, що містить послідовність E1-E18, де E1-E18 являє собою GRIYPTSGSTNYADSVKG (SEQ ID NO:85), і (vi) HVR-H3, що містить послідовність F1-F20, де F1-F20 являє собою ARTYGIYDLYVDYTEYVMDY (SEQ ID NO:86); і (b) щонайменше один варіант HVR, де послідовність варіанта HVR містить модифікацію щонайменше одного залишку (щонайменше двох залишків, щонайменше трьох або більше залишків) послідовності SEQ ID NO:1-18, 48-131 і 140-145. Бажано, щоб модифікація являла собою заміну, вставку або делецію. У деяких варіантах здійснення варіант HVR-L1 містить 1-6 (1, 2, 3, 4, 5 або 6) замін в будьякій комбінації з наступних положень: A5 (V або D), A6 (V або I), A7 (D, Е або S), A8 (Т або I), A9 (А або S) і A10 (V або L). У деяких варіантах здійснення варіант HVR-L2 містить 1-2 (1 або 2) заміни в будь-якій комбінації з наступних положень: B1 (S або G), B4 (F або S або Т) і B6 (А або Y). У деяких варіантах здійснення варіант HVR-L3 містить 1-6 (1, 2, 3, 4, 5 або 6) замін в будьякій комбінації з наступних положень: C3 (G або S або Т), C4 (Т або Y або А), C5 (G або S або Т або А), C6 (А або Н або D або Т або N), C7 (Q або Р або S) і C8 (S або Y або L або Р або Q). У деяких варіантах здійснення варіант HVR-H1 містить 1-3 (1, 2 або 3) заміни в будь-якій комбінації з наступних положень: D3 (S або Т), D5 (W або Y або S або Т), D6 (S або G або Т). У деяких варіантах здійснення варіант HVR-H2 містить 1-6 (1, 2, 3, 4, 5 або 6) замін в будь-якій комбінації з наступних положень: E2 (R або S), E6 (Y або А або L або S або Т), E7 (А або Q або D або G або Y або S або N або F), E8 (А або D або G), E9 (Т або S), E10 (K або F або Т або S), E11 (Y або Н або N або I). У одному з аспектів винахід стосується виділеного антитіла проти FGFR3, що містить: (a) щонайменше одну, дві, три, чотири або п'ять послідовностей гіперваріабельних областей (HVR), вибраних з: (i) HVR-L1, що містить послідовність RASQX1X2X3X4X5X6A, де X1 являє собою V або D, X2 являє собою V або I, X3 являє собою D, Е або S, X4 являє собою Т або I, X5 являє собою А або S, і X6 являє собою V або L (SEQ ID NO:146), (ii) HVR-L2, що містить послідовність X1ASFLX2S, де X1 являє собою S або G і X2 являє собою А або Y (SEQ ID NO:147), (iii) HVR-L3, що містить послідовність QQX1X2X3X4X5X6T, де X1 являє собою G, S або Т, X2 являє собою Т, Y або А, X3 являє собою G, S, Т або А, X4 являє собою А, Н, D, Т або N, X5 являє собою Q, Р або S, X6 являє собою S, Y, L, Р або Q (SEQ ID NO:148), (iv) HVR-H1, що містить послідовність GFX1FX2X3TGIS, де X1 являє собою S або Т, X2 являє собою W, Y, S або Т, X3 являє собою S, G або Т (SEQ ID NO:149), (v) HVR-H2, що містить послідовність GRIYPX1X2X3X4X5X6YADSVKG, де X1 являє собою Y, А, L, S або Т, X2 являє собою А, Q, D, G, Y, S, N або F, X3 являє собою А, D або G, X4 являє собою Т або S, X5 являє собою K, F, Т або S, X6 являє собою Y, Н, N або I (SEQ ID NO:150), і (vi) HVR-H3, що містить послідовність ARTYGIYDLYVDYTEYVMDY (SEQ ID NO:151). У деяких варіантах здійснення HVR-L1 містить послідовність RASQX1VX2X3X4VA, де X1 являє собою V або D, X2 являє собою D, Е або S, X3 являє собою Т або I, X 4 являє собою А або S (SEQ ID NO:152). У деяких варіантах здійснення HVR-L3 містить послідовність QQX1X2X3X4X5X6T, де X1 являє собою S, G або Т, X2 являє собою Y, Т або А, X3 являє собою Т або G, X4 являє собою Т, Н або N, X5 являє собою Р або S, X6 являє собою Р, Q, Y або L (SEQ ID NO:153). У деяких варіантах здійснення HVR-H2 містить послідовність GRIYPX1X2GSTX3YADSVKG, де X1 являє собою Т або L, X2 являє собою N, Y, S, G, А або Q; X 3 являє собою N або Н (SEQ ID NO:154). У іншому аспекті винахід стосується виділеного антитіла проти FGFR3, яке містить одну, дві, три, чотири, п'ять або шість HVR, де кожна HVR містить послідовність, вибрану з SEQ ID NO:1-18, 48-131 і 140-145, складається або по суті складається з них, і де SEQ ID NO:1, 7, 13, 48, 54, 60, 66, 72, 78, 84, 90, 96, 102, 108, 114, 120, 126 або 143 відповідає HVR-H1, SEQ ID NO:2, 8, 14, 49, 55, 61, 67, 73, 79, 85, 91, 97, 103, 109, 115, 121, 127 або 144 відповідає HVR-H2, SEQ ID NO:3, 9, 15, 50, 56, 62, 68, 74, 80, 86, 92, 98, 104, 110, 116, 122, 128 або 145 відповідає HVR-H3, SEQ ID NO:4, 10, 16, 51, 57, 63, 69, 75, 81, 87, 93, 99, 105, 111, 117, 123, 129 або 140 відповідає HVR-L1, SEQ ID NO:5, 11, 17, 52, 58, 64, 70, 76, 82, 88, 94, 100, 106, 112, 118, 124, 4 UA 104459 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 130 або 141 відповідає HVR-L2, і SEQ ID NO:6, 12, 18, 53, 59, 65, 71, 77, 83, 89, 95, 101, 107, 113, 119, 125, 131 або 142 відповідає HVR-L3. У одному з аспектів винахід стосується антитіла проти FGFR3, яке містить HVR-H1, що містить послідовність SEQ ID NO:1, 7, 13, 48, 54, 60, 66, 72, 78, 84, 90, 96, 102, 108, 114, 120, 126 або 143. У одному з аспектів винахід стосується антитіла проти FGFR3, яке містить HVR-H2, що містить послідовність SEQ ID NO:2, 8, 14, 49, 55, 61, 67, 73, 79, 85, 91, 97, 103, 109, 115, 121, 127 або 144. У одному з аспектів винахід стосується антитіла проти FGFR3, яке містить HVR-H3, що містить послідовність SEQ ID NO:3, 9, 15, 50, 56, 62, 68, 74, 80, 86, 92, 98, 104, 110, 116, 122, 128 або 145. У одному з аспектів винахід стосується антитіла проти FGFR3, яке містить область HVR-L1, що містить послідовність SEQ ID NO:4, 10, 16, 51, 57, 63, 69, 75, 81, 87, 93, 99, 105, 111, 117, 123, 129 або 140. У одному з аспектів винахід стосується антитіла проти FGFR3, яке містить область HVR-L2, що містить послідовність SEQ ID NO:5, 11, 17, 52, 58, 64, 70, 76, 82, 88, 94, 100, 106, 112, 118, 124, 130 або 141. У одному з аспектів винахід стосується антитіла проти FGFR3, яке містить область HVR-L3, що містить послідовність SEQ ID NO:6, 12, 18, 53, 59, 65, 71, 77, 83, 89, 95, 101, 107, 113, 119, 125, 131 або 142. У одному з аспектів антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:1, 2, 3, і/або варіабельну область легкого ланцюга, що містить HVR-L1, HVR-L2 і HVR-L3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:4, 5, 6. У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:7, 8, 9, і/або варіабельну область легкого ланцюга, що містить HVR-L1, HVR-L2 і HVR-L3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:10, 11, 12. У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:13, 14, 15, і/або варіабельну область легкого ланцюга, що містить HVR-L1, HVR-L2 і HVR-L3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:16, 17, 18. У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:48, 49, 50, і/або варіабельну область легкого ланцюга, що містить HVR-L1, HVR-L2 і HVR-L3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:51, 52, 53. У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:54, 55, 56, і/або варіабельну область легкого ланцюга, що містить HVR-L1, HVR-L2 і HVR-L3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:57, 58, 59. У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:60, 61, 62, 63, і/або варіабельну область легкого ланцюга, що містить HVR-L1, HVR-L2 і HVR-L3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:63, 64, 65. У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:66, 67, 68, і/або варіабельну область легкого ланцюга, що містить HVR-L1, HVR-L2 і HVR-L3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:69, 70, 71. У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:72, 73, 74, і/або варіабельну область легкого ланцюга, що містить HVR-L1, HVR-L2, і HVR-L3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:75, 76, 77. У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:78, 79 80, і/або варіабельну область легкого ланцюга, що містить HVR-L1, HVR-L2, і HVR-L3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:81, 82, 83. У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:84, 85, 86, і/або варіабельну область легкого ланцюга, що містить HVR-L1, HVR-L2 і HVR-L3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:87, 88, 89. 5 UA 104459 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:90, 91, 92, і/або варіабельну область легкого ланцюга, що містить HVR-L1, HVR-L2, і HVR-L3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:93, 94, 95. У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:96, 97, 98, і/або варіабельну область легкого ланцюга, що містить HVR-L1, HVR-L2, і HVR-L3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:99, 100, 101. У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:102, 103, 104, і/або варіабельну область легкого ланцюга, що містить HVR-L1, HVR-L2, і HVR-L3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:105, 106, 107. У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:108, 109, 110, і/або варіабельну область легкого ланцюга, що містить HVR-L1, HVR-L2, і HVR-L3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:111, 112, 113. У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:114, 115, 116, і/або варіабельну область легкого ланцюга, що містить HVR-L1, HVR-L2, і HVR-L3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:117, 118, 119. У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:120, 121, 122, і/або варіабельну область легкого ланцюга, що містить HVR-L1, HVR-L2, і HVR-L3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:123, 124, 125. У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:126, 127, 128, і/або варіабельну область легкого ланцюга, що містить HVR-L1, HVR-L2, і HVR-L3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:129, 130, 131. У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить HVR-H1, HVR-H2, HVR-H3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:140, 141, 142, і/або варіабельну область легкого ланцюга, що містить HVR-L1, HVR-L2, і HVR-L3, де кожна з них, по порядку, містить SEQ ID NO:143, 144, 145. Амінокислотні послідовності SEQ ID NO:1-18, 48-131 і 140-145 пронумеровані відносно окремих HVR (тобто H1, H2 або H3), як указано на фігурі 1, причому нумерація відповідає системі нумерації Кебат, як описано нижче. У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:132, і варіабельну область легкого ланцюга. У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область легкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:133, і варіабельну область важкого ланцюга. У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:132, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:133. У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:134, і варіабельну область легкого ланцюга. У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область легкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:135, і варіабельну область важкого ланцюга. У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область легкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:139, і варіабельну область важкого ланцюга. У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:134, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:135. У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:136, і варіабельну область легкого ланцюга. У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область легкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:137, і варіабельну область важкого ланцюга. У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:136, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:137. У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область важкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:138, і варіабельну область легкого ланцюга. У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область легкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:139, і варіабельну область важкого ланцюга. У іншому аспекті антитіло проти FGFR3 містить варіабельну область важкого ланцюга, що 6 UA 104459 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 містить SEQ ID NO:138, і варіабельну область легкого ланцюга, що містить SEQ ID NO:139. У одному з аспектів винахід стосується антитіла проти FGFR3, що містить: щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять і/або шість послідовностей гіперваріабельної області (HVR), вибраних з групи, що складається з: (a) HVR-L1, що містить послідовність SASSSVSYMH (SEQ ID NO:155), SASSSVSYMH (SEQ ID NO:156) або LASQTIGTWLA (SEQ ID NO:157), (b) HVR-L2, що містить послідовність TWIYDTSILAS (SEQ ID NO:158), RWIYDTSKLAS (SEQ ID NO:159) або LLIYAATSLAD (SEQ ID NO:160), (с) HVR-L3, що містить послідовність QQWTSNPLT (SEQ ID NO:161), QQWSSYPPT (SEQ ID NO:162) або QQLYSPPWT (SEQ ID NO:163), (d) HVR-H1, що містить послідовність GYSFTDYNMY (SEQ ID NO:164), GYVFTHYNMY (SEQ ID NO:165) або GYAFTSYNMY (SEQ ID NO:166), (е) HVR-H2, що містить послідовність WIGYIEPYNGGTSYNQKFKG (SEQ ID NO:167), WIGYIEPYNGGTSYNQKFKG (SEQ ID NO:168) або WIGYIDPYIGGTSYNQKFKG (SEQ ID NO:169), і (f) HVR-H3, що містить послідовність ASPNYYDSSPFAY (SEQ ID NO:170), ARGQGPDFDV (SEQ ID NO:171) або ARWGDYDVGAMDY (SEQ ID NO:172). У одному з аспектів винахід стосується антитіла проти FGFR3, що містить: щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять і/або шість послідовностей гіперваріабельної області (HVR), вибраних з групи, що складається з: (a) HVR-L1, що містить послідовність SASSSVSYMH (SEQ ID NO:155), (b) HVR-L2, що містить послідовність TWIYDTSILAS (SEQ ID NO:158), (с) HVR-L3, що містить послідовність QQWTSNPLT (SEQ ID NO:161), (d) HVR-H1, що містить послідовність GYSFTDYNMY (SEQ ID NO:164), (е) HVR-H2, що містить послідовність WIGYIEPYNGGTSYNQKFKG (SEQ ID NO:167), і (f) HVR-H3, що містить послідовність ASPNYYDSSPFAY (SEQ ID NO:170). У одному з аспектів винахід стосується антитіла проти FGFR3, що містить: щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять і/або шість послідовностей гіперваріабельної області (HVR), вибраних з групи, що складається з: (a) HVR-L1, що містить послідовність SASSSVSYMH (SEQ ID NO:156), (b) HVR-L2, що містить послідовність RWIYDTSKLAS (SEQ ID NO:159), (с) HVR-L3, що містить послідовність QQWSSYPPT (SEQ ID NO:162), (d) HVR-H1, що містить послідовність GYVFTHYNMY (SEQ ID NO:165), (е) HVR-H2, що містить послідовність WIGYIEPYNGGTSYNQKFKG (SEQ ID NO:168), і (f) HVR-H3, що містить послідовність ARGQGPDFDV (SEQ ID NO:171). У одному з аспектів винахід стосується антитіла проти FGFR3, що містить: щонайменше одну, дві, три, чотири, п'ять і/або шість послідовностей гіперваріабельної області (HVR), вибраних з групи, що складається з: (a) HVR-L1, що містить послідовність LASQTIGTWLA (SEQ ID NO:157), (b) HVR-L2, що містить послідовність LLIYAATSLAD (SEQ ID NO:160), (с) HVR-L3, що містить послідовність QQLYSPPWT (SEQ ID NO:163), (d) HVR-H1, що містить послідовність GYAFTSYNMY (SEQ ID NO:166), (е) HVR-H2, що містить послідовність WIGYIDPYIGGTSYNQKFKG (SEQ ID NO:169), і (f) HVR-H3, що містить послідовність ARWGDYDVGAMDY (SEQ ID NO:172). У одному з аспектів винахід стосується антитіла проти FGFR3, що містить (a) легкий ланцюг, який містить (i) HVR-L1, що містить послідовність SASSSVSYMH (SEQ ID NO:155); (ii) HVR-L2, що містить послідовність TWIYDTSILAS (SEQ ID NO:158); і (iii) HVR-L3, що містить послідовність QQWTSNPLT (SEQ ID NO:161); і/або (b) важкий ланцюг, який містить (i) HVR-H1, що містить послідовність GYSFTDYNMY (SEQ ID NO:164); (ii) HVR-H2, що містить послідовність WIGYIEPYNGGTSYNQKFKG (SEQ ID NO:167); і (iii) HVR-H3, що містить послідовність ASPNYYDSSPFAY (SEQ ID NO:170). У одному з аспектів винахід стосується антитіла проти FGFR3, що містить (a) легкий ланцюг, який містить (i) HVR-L1, що містить послідовність SASSSVSYMH (SEQ ID NO:156); (ii) HVR-L2, що містить послідовність RWIYDTSKLAS (SEQ ID NO:159); і (iii) HVR-L3, що містить послідовність QQWSSYPPT (SEQ ID NO:162); і/або (b) важкий ланцюг, який містить (i) HVR-H1, що містить послідовність GYVFTHYNMY (SEQ ID NO:165); (ii) HVR-H2, що містить послідовність WIGYIEPYNGGTSYNQKFKG (SEQ ID NO:168); і (iii) HVR-H3, що містить послідовність ARGQGPDFDV (SEQ ID NO:171). У одному з аспектів винахід стосується антитіла проти FGFR3, що містить (a) легкий ланцюг, який містить (i) HVR-L1, що містить послідовність LASQTIGTWLA (SEQ ID NO:157); (ii) 7 UA 104459 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 HVR-L2, що містить послідовність LLIYAATSLAD (SEQ ID NO:160); і (iii) HVR-L3, що містить послідовність QQLYSPPWT (SEQ ID NO:163); і/або (b) важкий ланцюг, який містить (i) HVR-H1, що містить послідовність GYAFTSYNMY (SEQ ID NO:166); (ii) HVR-H2, що містить послідовність WIGYIDPYIGGTSYNQKFKG (SEQ ID NO:169); і (iii) HVR-H3, що містить послідовність ARWGDYDVGAMDY (SEQ ID NO:172). Деякі варіанти здійснення антитіл за винаходом містять варіабельний домен легкого ланцюга гуманізованого антитіла 4D5 (huMAb4D5-8) ® . (HERCEPTIN , Genentech, Inc , South San Francisco, CA, USA) (що також вказується в патенті США № 6407213, і Lee et al., J. Mol. Biol. (2004), 340(5): 1073-1093), як представлено в SEQ ID NO:173 нижче: 1 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 107 (SEQ ID NO:173) (залишки HVR підкреслені). У одному з варіантів здійснення послідовність варіабельного домену легкого ланцюга huMAb4D5-8 модифікована в одному або декількох положеннях 30, 66 і 91 (Asn, Arg і His, як вказано напівжирним шрифтом/курсивом вище, відповідно). У конкретному варіанті здійснення, модифікована послідовність huMAb4D5-8 містить Ser в положенні 30, Gly в положенні 66 і/або Ser в положенні 91. Таким чином, в одному з варіантів здійснення антитіло за винаходом містить варіабельний домен легкого ланцюга, що містить послідовність SEQ ID NO:174 нижче: 1 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 107 (SEQ ID NO:174) (залишки HVR підкреслені). Залишки, замінені в huMAb4D5-8, вказані напівжирним шрифтом/курсивом. Антитіла за винаходом можуть містити будь-яку придатну каркасну послідовність варіабельного домену, за умови, що активність зв’язування з FGFR3 по суті зберігається. Наприклад, в деяких варіантах здійснення антитіла за винаходом містять консенсусну каркасну послідовність важкого ланцюга людини підгрупи III. У одному з варіантів здійснення цих антитіл, консенсусна каркасна послідовність містить заміну в положенні 71, 73 і/або 78. У деяких варіантах здійснення цих антитіл, положення 71 являє собою А, 73 являє собою Т і/або 78 являє собою A. В одному з варіантів здійснення ці антитіла містять каркасні послідовності ® варіабельного домену важкого ланцюга huMAb4D5-8 (HERCEPTIN , Genentech, Inc., South San Francisco, CA, США) (що також вказується в патентах США №№ 6407213 і 5821337, і Lee et al., J. Mol. Biol. (2004), 340(5): 1073-1093). В одному з варіантів здійснення ці антитіла, крім того, містять консенсусну каркасну послідовність легкого ланцюга κI людини. У конкретному варіанті здійснення ці антитіла містять послідовності HVR легкого ланцюга huMAb4D5-8 (як описано в патентах США №№ 6407213 і 5821337). У одному з варіантів здійснення ці антитіла містять ® послідовності варіабельних доменів легкого ланцюга huMAb4D5-8 (HERCEPTIN , Genentech, Inc., South San Francisco, CA, США) (що також вказується в патентах США №№ 6407213 і 5821337, і Lee et al., J. Mol. Biol. (2004), 340(5): 1073-1093). У одному з варіантів здійснення антитіло за винаходом містить варіабельний домен важкого ланцюга, де каркасна послідовність містить послідовність SEQ ID NO:19 і 203-205, 20 і 206-208, 21 і 209-211, 22 і 212-214, 23 і 215-217, 24 і 218-220, 25 і 221-223, 26 і 224-226, 27 і 227229, 28 і 230-232, 29 і 233-235, 30 і 236-238, 31 і 239-241, 32 і 242-244, 33 і 245-247, 34 і 248-250, 35 і 251-253, 36 і 254-256 і/або 37 і 257-259, і послідовності H1, H2 і H3 HVR являють собою SEQ ID NO:13, 14 і/або 15, відповідно. У іншому варіанті здійснення каркасна послідовність містить послідовність SEQ ID NO:19 і 203-205, 20 і 206-208, 21 і 209-211, 22 і 212-214, 23 і 215-217, 24 і 218-220, 25 і 221-223, 26 і 224-226, 27 і 227-229, 28 і 230-232, 29 і 233-235, 30 і 236-238, 31 і 239241, 32 і 242-244, 33 і 245-247, 34 і 248-250, 35 і 251-253, 36 і 254-256 і/або 37 і 257-259, і послідовності H1, H2 і H3 HVR являють собою SEQ ID NO:48, 49 і/або 50, відповідно. У іншому варіанті здійснення, каркасна послідовність містить послідовність SEQ ID NO:19 і 203-205, 20 і 206-208, 21 і 209-211, 22 і 212-214, 23 і 215-217, 24 і 218-220, 25 і 221-223, 26 і 224-226, 27 і 227229, 28 і 230-232, 29 і 233-235, 30 і 236-238, 31 і 239-241, 32 і 242-244, 33 і 245-247, 34 і 248-250, 35 і 251-253, 36 і 254-256 і/або 37 і 257-259, і послідовності H1, H2 і H3 HVR являють собою SEQ ID NO:84, 85 і/або 86, відповідно. У іншому варіанті здійснення, каркасна послідовність містить послідовність SEQ ID NO:19 і 203-205, 20 і 206-208, 21 і 209-211, 22 і 212-214, 23 і 215-217, 24 і 8 UA 104459 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 218-220, 25 і 221-223, 26 і 224-226, 27 і 227-229, 28 і 230-232, 29 і 233-235, 30 і 236-238, 31 і 239241, 32 і 242-244, 33 і 245-247, 34 і 248-250, 35 і 251-253, 36 і 254-256 і/або 37 і 257-259, і послідовності H1, H2 і H3 HVR являють собою SEQ ID NO:108, 109 і/або 110, відповідно. У конкретному варіанті здійснення антитіло за винаходом містить варіабельний домен легкого ланцюга, де каркасна послідовність містить послідовність SEQ ID NO:38 і 260-262, 39 і 263-265, 40 і 266-268 і/або 41 і 269-271, і послідовності L1, L2 і L3 HVR являють собою SEQ ID NO:16, 17 і/або 18, відповідно. У іншому варіанті здійснення антитіло за винаходом містить варіабельний домен легкого ланцюга, де каркасна послідовність містить послідовність SEQ ID NO:38 і 260-262, 39 і 263-265, 40 і 266-268 і/або 41 і 269-271, і послідовності L1, L2 і L3 HVR являють собою SEQ ID NO:51, 52 і/або 53, відповідно. У додатковому варіанті здійснення антитіло за винаходом містить варіабельний домен легкого ланцюга, де каркасна послідовність містить послідовність SEQ ID NO:38 і 260-262, 39 і 263-265, 40 і 266-268 і/або 41 і 269-271, і послідовності L1, L2 і L3 HVR являють собою SEQ ID NO:87, 88 і/або 89, відповідно. У іншому варіанті здійснення антитіло за винаходом містить варіабельний домен легкого ланцюга, де каркасна послідовність містить послідовність SEQ ID NO:38 і 260-262, 39 і 263-265, 40 і 266-268 і/або 41 і 269-271, і послідовності L1, L2 і L3 HVR являють собою SEQ ID NO:111, 112 і/або 113, відповідно. У іншому аспекті антитіло за винаходом містить варіабельний домен важкого ланцюга, що містить послідовність SEQ ID NO:132, і/або варіабельний домен легкого ланцюга, що містить послідовність SEQ ID NO:133. У іншому аспекті антитіло за винаходом містить варіабельний домен важкого ланцюга, що містить послідовність SEQ ID NO:134, і/або варіабельний домен легкого ланцюга, що містить послідовність SEQ ID NO:135. У іншому аспекті антитіло за винаходом містить варіабельний домен важкого ланцюга, що містить послідовність SEQ ID NO:136, і/або варіабельний домен легкого ланцюга, що містить послідовність SEQ ID NO:137. У іншому аспекті антитіло за винаходом містить варіабельний домен важкого ланцюга, що містить послідовність SEQ ID NO:138, і/або варіабельний домен легкого ланцюга, що містить послідовність SEQ ID NO:139. У одному з аспектів винахід стосується антитіла проти FGFR3, яке зв'язує поліпептид, що містить наступну амінокислотну послідовність: LAVPAANTVRFRCPA (SEQ ID NO:179) і/або SDVEFHCKVYSDAQP (SEQ ID NO:180), який по суті складається або складається з неї. У деяких варіантах здійснення антитіло зв'язує поліпептид, що містить амінокислоти номер 164-178 і/або 269-283 амінокислотної послідовності зрілої FGFR3 людини, який по суті складається або складається з них. У одному з варіантів здійснення антитіло проти FGFR3 за винаходом специфічно зв'язує амінокислотну послідовність, що має щонайменше 50, 60, 70, 80, 90, 95, 98% ідентичність послідовності або схожість з послідовністю LAVPAANTVRFRCPA (SEQ ID NO:179) і/або SDVEFHCKVYSDAQP (SEQ ID NO:180). У одному з аспектів антитіло проти FGFR3 за даним винаходом зв'язується щонайменше з одним, двома, трьома, чотирма або будь-якою кількістю аж до всіх із залишків 154, 155, 158, 159, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 177, 202, 205, 207, 210, 212, 214, 216, 217, 241, 246, 247, 248, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 314, 315, 316, 317 і/або 318 поліпептиду FGFR3-IIIb або еквівалентних залишків поліпептиду FGFR3-IIIc. Фахівцю в даній галузі зрозуміло, як провести вирівнювання послідовності FGFR3 для ідентифікації відповідних залишків між відповідними послідовностями FGFR3. Поєднання двох або більше залишків можуть включати будь-які із залишків 154, 155, 158, 159, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 167, 168, 169, 170, 171, 172, 173, 174, 175, 177, 202, 205, 207, 210, 212, 214, 216, 217, 241, 246, 247, 248, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 314, 315, 316, 317 і/або 318 поліпептиду FGFR3-IIIb або еквівалентних залишків поліпептиду FGFR3-IIIc. У деяких варіантах здійснення антитіло проти FGFR3 зв'язується щонайменше з одним, двома, трьома, чотирма або будь-якою кількістю аж до всіх із залишків 158, 159, 169, 170, 171, 173, 175, 205, 207 і/або 315 поліпептиду FGFR3-IIIb або еквівалентних залишків поліпептиду FGFR3-IIIc. У деяких варіантах здійснення антитіло проти FGFR3 зв'язується щонайменше з одним, двома, трьома, чотирма або будь-якою кількістю аж до всіх із залишків 158, 170, 171, 173, 175 і/або 315 поліпептиду FGFR3-IIIb або еквівалентних залишків поліпептиду FGFR3-IIIc. У одному з аспектів винахід стосується антитіла проти FGFR3, яке конкурує з будь-яким з вказаних вище антитіл за зв’язування з FGFR3. У одному з аспектів винахід стосується антитіла проти FGFR3, яке зв'язується з тим же або аналогічним епітопом на FGFR3, що і будь-яке із згаданих вище антитіл. Як відомо в даній галузі і як більш детально описано в цьому документі нижче, позначення амінокислотного положення/границь гіперваріабельної області антитіла може змінюватися, 9 UA 104459 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 залежно від контексту і різних визначень, відомих в даній галузі (як описано нижче). Деякі положення у варіабельному домені можуть розглядатися як гібридні гіперваріабельні положення, оскільки ці положення можна вважати такими, що знаходяться в межах гіперваріабельної області згідно з одним набором критеріїв, і їх можна вважати такими, що знаходяться поза гіперваріабельною областю згідно з іншим набором критеріїв. Одне або декілька з цих положень також можуть бути виявлені в подовжених гіперваріабельних областях (як додатково визначено нижче). У деяких варіантах здійснення антитіло являє собою моноклональне антитіло. У інших варіантах здійснення антитіло являє собою поліклональне антитіло. У деяких варіантах здійснення антитіло вибране з групи, що складається з химерного антитіла, антитіла, що пройшло стадію дозрівання афінності, гуманізованого антитіла і антитіла людини. У певних варіантах здійснення антитіло являє собою фрагмент антитіла. У деяких варіантах здійснення антитіло являє собою Fab, Fab', Fab'-SH, F(ab')2 або scFv. У деяких варіантах здійснення антитіло проти FGFR3 являє собою антитіло з одним плечем (тобто варіабельний домен важкого ланцюга і варіабельний домен легкого ланцюга утворюють одне антигензв'язувальне плече), що містить Fc-область, де Fc-область містить перший і другий поліпептиди Fc, де перший і другий поліпептиди Fc присутні в комплексі і утворюють Fcобласть, яка збільшує стабільність вказаного фрагмента антитіла в порівнянні з молекулою Fab, що містить вказане антигензв'язувальне плече. Див., наприклад, WO 2006/015371. В одному з варіантів здійснення антитіло являє собою химерне антитіло, наприклад антитіло, що містить антигензв'язувальні послідовності з донора, що не є людиною, пересаджені в гетерологічну послідовність, що не є послідовністю людини, послідовність людини або гуманізовану послідовність (наприклад, каркасні послідовності і/або послідовності константного домену). У одному з варіантів здійснення донором, що не є людиною, є миша. У іншому варіанті здійснення антигензв'язувальна послідовність є штучною, наприклад одержаною мутагенезом (наприклад, при скринінгу способом фагового дисплея і тому подібне). У конкретному варіанті здійснення химерне антитіло за винаходом має V-області миші і Собласть людини. У одному з варіантів здійснення V-область легкого ланцюга миші злита з легким ланцюгом каппа людини. У іншому варіанті здійснення V-область важкого ланцюга миші злита з С-областю IgG1 людини. Гуманізовані антитіла за винаходом включають антитіла, які мають амінокислотні заміни в каркасній області (FR), і варіанти, що пройшли стадію дозрівання афінності, із змінами в пересаджених CDR. Замінені амінокислоти в CDR або FR не обмежуються амінокислотами, представленими в донорному або реципієнтному антитілі. У інших варіантах здійснення антитіла за винаходом, крім того, містять зміни в амінокислотних залишках в Fc-області, які забезпечують поліпшення ефекторної функції, в тому числі посилення функції CDC і/або ADCC і знищення В-клітин. Інші антитіла за винаходом включають антитіла, що мають певні зміни, які підвищують стабільність. У інших варіантах здійснення антитіла за винаходом містять зміни в амінокислотних залишках в Fc-області, які приводять до зниження ефекторної функції, наприклад зниження функції CDC і/або ADCC і/або зниженого знищення В-клітин. У деяких варіантах здійснення антитіла за винаходом характеризуються зниженням зв’язування (таким як відсутність зв’язування) з фактором комплементу C1q людини і/або Fc-рецептором людини на природних кілерних (NK) клітинах. У деяких варіантах здійснення антитіла за винаходом характеризуються зниженням зв’язування (наприклад, відсутністю зв’язування) з FcγRI, FcγRIIA і/або FcγRIIIA. У деяких варіантах здійснення антитіла за винаходом являють собою антитіла класу IgG (наприклад, IgG1 або IgG4) і містять щонайменше одну мутацію в положеннях E233, L234, G236, D265, D270, N297, E318, K320, K322, A327, A330, P331 і/або P329 (нумерація згідно з індексом EU). У деяких варіантах здійснення антитіла містять мутації L234A/L235A або D265A/N297A. Якщо антитіло містить Fc-область, то може бути змінений вуглевод, приєднаний до нього. Наприклад, антитіла зі зрілою вуглеводною структурою, яка позбавлена фукози, приєднаної до Fc-області антитіла, описані в патентній заявці США US 2003/0157108 (Presta L.). Див. також US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd). Антитіла з бісекторним N-ацетилглюкозаміном (GlcNAc) у вуглеводі, приєднаному до Fc-області антитіла, вказані в WO 2003/011878, JeanMairet et al., і патенті США № 6602684, Umana et al. Антитіла щонайменше з одним залишком галактози в олігосахариді, приєднаному до Fc-області антитіла, описані в WO 1997/30087, Patel et al. Див. також WO 1998/58964 (Raju S.) і WO 1999/22764 (Raju S.), що стосуються антитіл із зміненим вуглеводом, який приєднаний до їх Fc-області. Також див. US 2005/0123546 (Umana et al.), де описані антигензв'язувальні молекули з модифікованим глікозилуванням. У одному з аспектів винахід стосується зв'язуючих FGFR3 поліпептидів, що містить будь-яку 10 UA 104459 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 антигензв’язувальну послідовність, представлену в цьому документі, де зв'язуючі FGFR3 поліпептиди специфічно зв'язуються з FGFR3, наприклад з FGFR3 людини і/або яванського макака, і/або миші. Антитіла за винаходом зв'язують (наприклад, специфічно зв'язують) FGFR3 (наприклад, FGFR3-IIIb і/або FGFR3-IIIc) і в деяких варіантах здійснення можуть модулювати (наприклад, інгібувати) один або декілька аспектів передачі сигналу FGFR3 (таких як фосфорилування FGFR3) і/або порушення якого-небудь біологічно значущого каскаду FGFR3 і/або ліганду FGFR3, і/або лікування і/або профілактику пухлини, клітинно-проліферативного порушення або злоякісної пухлини; і/або лікування або профілактику порушення, пов'язаного з експресією і/або активністю FGFR3 (таких як підвищена експресія і/або активність FGFR3). У деяких варіантах здійснення антитіло проти FGFR3 специфічно зв'язується з поліпептидом, що складається або по суті складається з FGFR3 (наприклад, FGFR3 людини або миші). У деяких варіантах -7 здійснення антитіло специфічно зв'язує FGFR3 з Kd 1×10 M або міцніше. У деяких варіантах здійснення антитіло проти FGFR3 за винаходом не є антитілом проти FGFR3, описаним в публікації патенту США 2005/0147612 (наприклад, антитіло MSPRO2, MSPRO12, MSPRO59, MSPRO11, MSPRO21, MSPRO24, MSPRO26, MSPRO28, MSPRO29, MSPRO43, MSPRO55), антитілом, описаним в Rauchenberger et al., J Biol. Chem. 278 (40): 38194-38205 (2003); антитілом, описаним в публікації PCT WO 2006/048877 (наприклад, антитіло PRO-001), антитілом, описаним в Martinez-Torrecuadrada et al., Mol. Cancer Ther (2008) 7(4): 862-873 (наприклад, scFvαFGFR3 3C), антитілом, описаним в Direnzo, R et al. (2007) Proceedings of AACR Annual Meeting, Abstract № 2080 (наприклад, D11), або антитілом, описаним в WO 2010/002862 (наприклад, антитіла 15D8, 27H2, 4E7, 2G4, 20B4). У одному з аспектів винахід стосується композицій, які містять одне або декілька антитіл за винаходом і носій. У одному з варіантів здійснення носій є фармацевтично прийнятним. У іншому аспекті винахід стосується нуклеїнових кислот, кодуючих антитіло проти FGFR3 за винаходом. У іншому аспекті винахід стосується векторів, які містять нуклеїнову кислоту за винаходом. У іншому аспекті винахід стосується композицій, які містять одну або декілька нуклеїнових кислот за винаходом і носій. У одному з варіантів здійснення носій є фармацевтично прийнятним. У одному з аспектів винахід стосується клітин-хазяїнів, що містять нуклеїнову кислоту або вектор за винаходом. Вектор може бути будь-якого типу, наприклад рекомбінантний вектор, такий як вектор експресії. Можна використовувати будь-яку клітину-хазяїна з існуючої різноманітності. У одному з варіантів здійснення клітина-хазяїн являє собою прокаріотичну клітину, наприклад Е. coli. У іншому варіанті здійснення клітина-хазяїн являє собою еукаріотичну клітину, наприклад клітину ссавця, таку як клітина яєчника китайського хом'ячка (CHO). У іншому аспекті винахід стосується способів одержання антитіла за винаходом. Наприклад, винахід стосується способів одержання антитіла проти FGFR3 (яке, як визначено в цьому документі, включає повнорозмірне антитіло і його фрагменти), причому вказаний спосіб передбачає експресію у придатній клітині-хазяїні рекомбінантного вектора за винаходом, кодуючого антитіло, і виділення антитіла. У деяких варіантах здійснення спосіб передбачає культивування клітини-хазяїна, що містить нуклеїнову кислоту, кодуючу антитіло, так що експресується нуклеїнова кислота. У деяких варіантах здійснення спосіб додатково передбачає виділення антитіла з культури клітин-хазяїнів. У деяких варіантах здійснення антитіло виділяють з культурального середовища клітин-хазяїнів. У деяких варіантах здійснення спосіб додатково передбачає об'єднання виділеного антитіла з фармацевтично прийнятним носієм, ексципієнтом або носієм з одержанням фармацевтичного складу, що містить гуманізоване антитіло. У одному з аспектів винахід стосується виробу, який містить контейнер; і композиції, що міститься в контейнері, де композиція містить одне або декілька антитіл проти FGFR3 за винаходом. У одному з варіантів здійснення композиція містить нуклеїнову кислоту за винаходом. У іншому варіанті здійснення композиція, що містить антитіло, додатково містить носій, який в деяких варіантах здійснення є фармацевтично прийнятним. У одному з варіантів здійснення виріб за винаходом, крім того, містить інструкцію по застосуванню композиції (наприклад, антитіла) індивідуумом (наприклад, інструкцію за будь-яким зі способів, описаних в цьому документі). У іншому аспекті винахід стосується набору, який містить перший контейнер, що містить композицію, яка містить одне або декілька антитіл проти FGFR3 за винаходом; і другий контейнер, що містить буфер. У одному з варіантів здійснення буфер є фармацевтично прийнятним. У одному з варіантів здійснення композиція, що містить антитіло, крім того, 11 UA 104459 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 містить носій, який в деяких варіантах здійснення є фармацевтично прийнятним. У іншому варіанті здійснення набір, крім того, містить інструкції по застосуванню композиції (наприклад, антитіла) індивідуумом. У іншому аспекті винахід стосується антитіла проти FGFR3 за винаходом, яке використовується як лікарський засіб. У іншому аспекті винахід стосується антитіла проти FGFR3 за винаходом, яке використовується для лікування або профілактики порушення, такого як патологічний стан, пов'язаний з активацією і/або експресією (в деяких варіантах здійснення надекспресією) FGFR3. У деяких варіантах здійснення порушення являє собою злоякісну пухлину, пухлину і/або клітинно-проліферативне порушення. У деяких варіантах здійснення злоякісна пухлина, пухлина і/або клітинно-проліферативне порушення являє собою множинну мієлому або рак сечового міхура (наприклад, карциному перехідних клітин), рак молочної залози або рак печінки. У іншому аспекті винахід стосується антитіла проти FGFR3 за винаходом, яке використовується для лікування або профілактики порушення, такого як хвороби скелета. У деяких варіантах здійснення порушення являє собою ахондроплазію, гіпохондроплазію, карликовість, летальну дисплазію (TD; клінічні форми TDI і TDII) або синдром краніосиностозу. У іншому аспекті винахід стосується антитіла проти FGFR3 за винаходом, яке використовується для зниження проліферації клітин. У іншому аспекті винахід стосується антитіла проти FGFR3 за винаходом, яке використовується для знищення клітини. У деяких варіантах здійснення клітина являє собою клітину множинної мієломи. У деяких варіантах здійснення загибель клітин викликана ADCC. У деяких варіантах здійснення антитіло являє собою "голе" антитіло. У деяких варіантах здійснення клітина надекспресує FGFR3. У іншому аспекті винахід стосується антитіла проти FGFR3 за винаходом, яке використовується для зменшення кількості клітин, таких як клітини множинної мієломи. У деяких варіантах здійснення загибель клітин викликана ADCC. У деяких варіантах здійснення антитіло являє собою "голе" антитіло. У деяких варіантах здійснення клітина надекспресує FGFR3. У іншому аспекті винахід стосується застосування антитіла проти FGFR3 за винаходом для одержання лікарського засобу для терапевтичного і/або профілактичного лікування порушення, такого як патологічний стан, пов'язаний з активацією і/або експресією (в деяких варіантах здійснення надекспресією) FGFR3. У деяких варіантах здійснення порушення являє собою злоякісну пухлину, пухлину і/або клітинно-проліферативне порушення. У деяких варіантах здійснення злоякісна пухлина, пухлина і/або клітинно-проліферативне порушення являє собою множинну мієлому або рак сечового міхура (наприклад, карциному перехідних клітин), рак молочної залози або рак печінки. У деяких варіантах здійснення порушення являє собою хвороби скелета, наприклад ахондроплазію, гіпохондроплазію, карликовість, летальну дисплазію (TD; клінічні форми TDI і TDII) або синдром краніосиностозу. У одному з аспектів винахід стосується застосування нуклеїнової кислоти за винаходом для одержання лікарського засобу для терапевтичного і/або профілактичного лікування порушення, такого як патологічний стан, пов'язаний з активацією і/або експресією (в деяких варіантах здійснення надекспресією) FGFR3. У деяких варіантах здійснення порушення являє собою злоякісну пухлину, пухлину і/або клітинно-проліферативне порушення. У деяких варіантах здійснення злоякісна пухлина, пухлина і/або клітинно-проліферативне порушення являє собою множинну мієлому або рак сечового міхура (наприклад, карциному перехідних клітин), рак молочної залози або рак печінки. У деяких варіантах здійснення порушення являє собою хвороби скелета, наприклад ахондроплазію, гіпохондроплазію, карликовість, летальну дисплазію (TD; клінічні форми TDI і TDII) або синдром краніосиностозу. У іншому аспекті винахід стосується застосування вектора експресії за винаходом для одержання лікарського засобу для терапевтичного і/або профілактичного лікування порушення, такого як патологічний стан, пов'язаний з активацією і/або експресією (в деяких варіантах здійснення надекспресією) FGFR3. У деяких варіантах здійснення порушення являє собою злоякісну пухлину, пухлину і/або клітинно-проліферативне порушення. У деяких варіантах здійснення злоякісна пухлина, пухлина і/або клітинно-проліферативне порушення являє собою множинну мієлому або рак сечового міхура (наприклад, карциному перехідних клітин), рак молочної залози або рак печінки. У деяких варіантах здійснення порушення являє собою хвороби скелета, наприклад ахондроплазію, гіпохондроплазію, карликовість, летальну дисплазію (TD; клінічні форми TDI і TDII) або синдром краніосиностозу. У іншому аспекті винахід стосується застосування клітини-хазяїна за винаходом для одержання лікарського засобу для терапевтичного і/або профілактичного лікування порушення, 12 UA 104459 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 такого як патологічний стан, пов'язаний з активацією і/або експресією (в деяких варіантах здійснення надекспресією) FGFR3. У деяких варіантах здійснення порушення являє собою злоякісну пухлину, пухлину і/або клітинно-проліферативне порушення. У деяких варіантах здійснення злоякісна пухлина, пухлина і/або клітинно-проліферативне порушення являє собою множинну мієлому або рак сечового міхура (наприклад, карциному перехідних клітин), рак молочної залози або рак печінки. У деяких варіантах здійснення порушення являє собою хворобу скелета, наприклад ахондроплазію, гіпохондроплазію, карликовість, летальну дисплазію (TD; клінічні форми TDI і TDII) або синдром краніосиностозу. У іншому аспекті винахід стосується застосування виробу за винаходом для одержання лікарського засобу для терапевтичного і/або профілактичного лікування порушення, такого як патологічний стан, пов'язаний з активацією і/або експресією (в деяких варіантах здійснення надекспресією) FGFR3. У деяких варіантах здійснення порушення являє собою злоякісну пухлину, пухлину і/або клітинно-проліферативне порушення. У деяких варіантах здійснення злоякісна пухлина, пухлина і/або клітинно-проліферативне порушення являє собою множинну мієлому або рак сечового міхура (наприклад, карциному перехідних клітин), рак молочної залози або рак печінки. У деяких варіантах здійснення порушення являє собою хворобу скелета, наприклад ахондроплазію, гіпохондроплазію, карликовість, летальну дисплазію (TD; клінічні форми TDI і TDII) або синдром краніосиностозу. У одному з аспектів винахід також стосується застосування набору за винаходом для одержання лікарського засобу для терапевтичного і/або профілактичного лікування порушення, такого як патологічний стан, пов'язаний з активацією і/або експресією (в деяких варіантах здійснення надекспресією) FGFR3. У деяких варіантах здійснення порушення являє собою злоякісну пухлину, пухлину і/або клітинно-проліферативне порушення. У деяких варіантах здійснення злоякісна пухлина, пухлина і/або клітинно-проліферативне порушення являє собою множинну мієлому або рак сечового міхура (наприклад, карциному перехідних клітин), рак молочної залози або рак печінки. У деяких варіантах здійснення порушення являє собою хворобу скелета, наприклад ахондроплазію, гіпохондроплазію, карликовість, летальну дисплазію (TD; клінічні форми TDI і TDII) або синдром краніосиностозу. У іншому аспекті винахід стосується застосування антитіла проти FGFR3 за винаходом для одержання лікарського засобу для інгібування проліферації клітин. У іншому аспекті винахід стосується застосування антитіла проти FGFR3 за винаходом для одержання лікарського засобу для знищення клітин. У деяких варіантах здійснення клітина являє собою клітину множинної мієломи. У деяких варіантах здійснення загибель клітини викликана ADCC. У деяких варіантах здійснення антитіло являє собою "голе" антитіло. У деяких варіантах здійснення клітина надекспресує FGFR3. У іншому аспекті винахід стосується застосування антитіла проти FGFR3 за винаходом для одержання лікарського засобу для зменшення кількості клітин, таких як клітини множинної мієломи. У деяких варіантах здійснення загибель клітини викликана ADCC. У деяких варіантах здійснення антитіло являє собою "голе" антитіло. У деяких варіантах здійснення клітина надекспресує FGFR3. Винахід стосується способів і композицій, придатних для модулювання порушень, пов'язаних з експресією і/або передачею сигналу FGFR3, таких як підвищена експресія і/або передача сигналу або небажана експресія і/або передача сигналу. Способи за винаходом можна використовувати при будь-якому придатному патологічному стані. Характерні порушення описані в цьому документі і включають злоякісну пухлину, вибрану з групи, що складається з недрібноклітинного раку легені, раку яєчника, раку щитовидної залози, раку яєчка, раку ендометрія, раку голови і шиї, злоякісної пухлини головного мозку (наприклад, нейробластоми або менінгіоми), раку шкіри (наприклад, меланоми, базальноклітинної карциноми або плоскоклітинної карциноми), раку сечового міхура (наприклад, карциноми перехідних клітин), карциноми молочної залози, раку шлунка, раку ободової і прямої кишки (CRC), печінковоклітинної карциноми, раку шийки матки, раку легені, раку підшлункової залози, раку передміхурової залози і гематологічних злоякісних пухлин (наприклад, Т-клітинного гострого лімфобластного лейкозу (T-ALL), В-клітинного гострого лімфобластного лейкозу (B-ALL), гострого мієлогенного лейкозу (AML), В-клітинних злоякісних пухлин, лімфоми Ходжкіна і множинних мієлом). У деяких варіантах здійснення порушення являє собою інвазивну карциному перехідних клітин. У деяких варіантах здійснення порушення являє собою множинну мієлому. Інші характерні порушення включають хвороби скелета, такі як ахондроплазія, гіпохондроплазія, карликовість, летальна дисплазія (TD; клінічні форми TDI і TDII) або синдром краніосиностозу. У певних варіантах здійснення злоякісна пухлина експресує FGFR3, ампліфікований 13 UA 104459 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 FGFR3, транслокований FGFR3 і/або мутантний FGFR3. У певних варіантах здійснення злоякісна пухлина експресує активований FGFR3. У певних варіантах здійснення злоякісна пухлина експресує транслокований FGFR3 (наприклад, з транслокацією t(4;14)). У певних варіантах здійснення злоякісна пухлина експресує конститутивний FGFR3. У деяких варіантах здійснення конститутивний FGFR3 містить мутацію в тирозинкіназному домені і/або юкстамембранному домені і/або лігандзв'язувальному домені. У певних варіантах здійснення злоякісна пухлина експресує незалежний від ліганду FGFR3. У деяких варіантах здійснення злоякісна пухлина експресує лігандзалежний FGFR3. У деяких варіантах здійснення злоякісна пухлина експресує FGFR3, що містить мутацію, S248C відповідну FGFR3-IIIb . У деяких варіантах здійснення злоякісна пухлина експресує FGFR3S248C S248C IIIb і/або FGFR3-IIIc . У деяких варіантах здійснення злоякісна пухлина експресує FGFR3, що містить мутацію, K652E відповідну FGFR3-IIIb . У деяких варіантах здійснення злоякісна пухлина експресує FGFR3K652E K650E IIIb і/або FGFR3-IIIc . У деяких варіантах здійснення злоякісна пухлина експресує FGFR3, що містить мутацію, S249C відповідну FGFR3-IIIb . У деяких варіантах здійснення злоякісна пухлина експресує FGFR3S249C S249C IIIb і/або FGFR3-IIIc . У одному з аспектів злоякісна пухлина експресує FGFR3, що містить мутацію, відповідну G372C G372C FGFR3-IIIb . У деяких варіантах здійснення злоякісна пухлина експресує FGFR3-IIIb G370C і/або FGFR3-IIIc . У одному з аспектів злоякісна пухлина експресує FGFR3, що містить мутацію, відповідну Y375C Y375C FGFR3-IIIb . У деяких варіантах здійснення злоякісна пухлина експресує FGFR3-IIIb Y373C і/або FGFR3-IIIc . K652E У деяких варіантах здійснення злоякісна пухлина експресує (a) FGFR3-IIIb і (b) один або R248C Y375C S249C G372C декілька з FGFR3-IIIb , FGFR3-IIIb , FGFR3-IIIb і FGFR3-IIIb . R248C У деяких варіантах здійснення злоякісна пухлина експресує (a) FGFR3-IIIb і (b) один або K652E Y375C S249C G372C декілька з FGFR3-IIIb , FGFR3-IIIb , FGFR3-IIIb і FGFR3-IIIb . G372C У деяких варіантах здійснення злоякісна пухлина експресує (a) FGFR3-IIIb і (b) один або K652E Y375C S249C R248C декілька з FGFR3-IIIb , FGFR3-IIIb , FGFR3-IIIb і FGFR3-IIIb . R248C K652E У деяких варіантах здійснення злоякісна пухлина експресує FGFR3-IIIb , FGFR3-IIIb , Y375C S249C G372C FGFR3-IIIb , FGFR3-IIIb і FGFR3-IIIb . У певних варіантах здійснення злоякісна пухлина експресує підвищені рівні фосфо-FGFR3, фосфо-FRS2 і/або фосфо-MAPK в порівнянні з контрольним зразком (наприклад, із зразком нормальної тканини) або рівнем. У деяких варіантах здійснення злоякісна пухлина експресує (наприклад, на поверхні клітини) приблизно 10000 молекул FGFR3 на клітину або більше (наприклад, 11000, 12000, 13000, 14000, 15000, 16000, 17000, 18000 або більше рецепторів FGFR3). У деяких варіантах здійснення злоякісна пухлина експресує приблизно 13000 молекул FGFR3. У інших варіантах здійснення злоякісна пухлина експресує приблизно 5000, 6000, 7000, 8000 або більше молекул FGFR3. У деяких варіантах здійснення злоякісна пухлина експресує менше ніж приблизно 4000, 3000, 2000, 1000 або менше молекул FGFR3. У деяких варіантах здійснення злоякісна пухлина експресує менше ніж приблизно 1000 молекул FGFR3. У одному з варіантів здійснення клітина, на яку націлений спосіб за винаходом, являє собою злоякісну клітину. Наприклад, злоякісна клітина може являти собою клітину, вибрану з групи, що складається з клітини раку молочної залози, клітини раку ободової і прямої кишки, клітини раку легені (наприклад, клітини недрібноклітинного раку легені), клітини раку щитовидної залози, клітини множинної мієломи, клітини раку яєчка, клітини папілярної карциноми, клітини раку товстого кишечнику, клітини раку підшлункової залози, клітини раку яєчника, клітини раку шийки матки, клітини злоякісної пухлини центральної нервової системи, клітини остеогенної саркоми, клітини карциноми нирки, клітини печінковоклітинної карциноми, клітини раку сечового міхура (наприклад, клітини карциноми перехідних клітин), клітини карциноми шлунка, клітини плоскоклітинної карциноми голови і шиї, клітини меланоми, клітини лейкозу, клітини множинної мієломи (наприклад, клітини множинної мієломи, що містять транслокацію t(4:14) FGFR3) і клітини аденома товстого кишечнику. У одному з варіантів здійснення клітина, на яку націлений спосіб за винаходом, являє собою гіперпроліферативну і/або гіперпластичну клітину. У іншому варіанті здійснення клітина, на яку націлений спосіб за винаходом, являє собою диспластичну клітину. У іншому варіанті здійснення клітина, на яку націлений спосіб за винаходом, являє собою метастатичну клітину. У одному з аспектів винахід стосується способів інгібування проліферації клітин у індивідуума, причому спосіб передбачає введення індивідууму ефективної кількості антитіла 14 UA 104459 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 проти FGFR3 для зниження проліферації клітин. У одному з аспектів винахід стосується способів знищення клітини у індивідуума, причому спосіб передбачає введення індивідууму ефективної кількості антитіла проти FGFR3 для знищення клітини. У деяких варіантах здійснення клітина являє собою клітину множинної мієломи. У деяких варіантах здійснення загибель клітини викликана ADCC. У деяких варіантах здійснення антитіло являє собою "голе" антитіло. У деяких варіантах здійснення клітина надекспресує FGFR3. У одному з аспектів винахід стосується способів зменшення кількості клітин (таких як клітини множинної мієломи) у індивідуума, причому спосіб передбачає введення індивідууму ефективної кількості антитіла проти FGFR3 для знищення клітини. У деяких варіантах здійснення загибель клітини викликана ADCC. У деяких варіантах здійснення антитіло являє собою "голе" антитіло. У деяких варіантах здійснення клітина надекспресує FGFR3. У одному з аспектів винахід стосується способів лікування або профілактики хвороб скелета. У деяких варіантах здійснення хвороба являє собою ахондроплазію, гіпохондроплазію, карликовість, летальну дисплазію (TD; клінічні форми TDI і TDII) або синдром краніосиностозу. Способи за винаходом можуть, крім того, передбачати додаткові стадії лікування. Наприклад, в одному з варіантів здійснення спосіб додатково передбачає стадію, на якій клітину і/або тканину, на які здійснюють націлювання (наприклад, злоякісну клітину), піддають радіаційній обробці або піддають впливу хіміотерапевтичним засобом. У одному з аспектів винахід стосується способів, які передбачають введення ефективної кількості антитіла проти FGFR3 в поєднанні з ефективною кількістю іншого лікарського засобу (такого як засіб проти ангіогенезу, інше антитіло, хіміотерапевтичний засіб, цитотоксичний засіб, імунодепресивний засіб, проліки, цитокін, цитотоксична променева терапія, кортикостероїд, протиблювотний засіб, протиракова вакцина, анальгетик або засіб, інгібуючий ріст). Наприклад, антитіла проти FGFR3 використовують в поєднаннях з протираковим засобом або антиангіогенним засобом для лікування різних неопластичних або ненеопластичних станів. У конкретних прикладах антитіла проти FGFR3 використовують в поєднанні з велкейдом, ревлімідом, тамоксифеном, лектрозолом, екземестаном, анастрозолом, іринотеканом, цетуксимабом, фулвестрантом, вінорелбіном, бевацизумабом, вінкристином, цисплатином, гемцитабіном, метотрексатом, вінбластином, карбоплатином, паклітакселом, доцетакселом, пеметрекседом, 5-фторурацилом, доксорубіцином, бортезомібом, леналідомідом, дексаметазоном, мелфаланом, преднізоном, вінкристином і/або талідомідом. Залежно від конкретної злоякісної пухлини, на яку направлене лікування, комбіновану терапію за винаходом можна поєднувати з додатковими лікарськими засобами, такими як хіміотерапевтичні засоби, або додатковими способами лікування, такими як променева терапія або хірургічна операція. У випадку комбінованої терапії за винаходом можна використовувати різні відомі хіміотерапевтичні засоби. Переважно, використовують хіміотерапевтичні засоби, які є стандартними для лікування конкретного показання. Дозування або частота введення кожного використовуваного лікарського засобу в комбінованій терапії, переважно, є таким же або менше дозування або частоти введення відповідного засобу у випадку використання без іншого засобу (засобів). У іншому аспекті винахід стосується будь-якого антитіла проти FGFR3, описаного в цьому документі, причому антитіло проти FGFR3 містить детектовану мітку. У іншому аспекті винахід стосується комплексу будь-якого з антитіл проти FGFR3, описаних в цьому документі, і FGFR3. У деяких варіантах здійснення комплекс являє собою комплекс in vivo або in vitro. У деяких варіантах здійснення комплекс містить злоякісну клітину. У деяких варіантах здійснення антитіло проти FGFR3 мічене детектованою міткою. Короткий опис креслень ФІГУРИ 1A, 1B і 1C: Послідовності HVR-петель важкого ланцюга і легкого ланцюга антитіл проти FGFR3. На фігурах представлені послідовності HVR важкого ланцюга, H1, H2 і H3, і послідовності HVR легкого ланцюга, L1, L2 і L3. Нумерація послідовностей є наступною: клон 184.6 (HVR-H1 являє собою SEQ ID NO:1; HVR-H2 являє собою SEQ ID NO:2; HVR-H3 являє собою SEQ ID NO:3; HVR-L1 являє собою SEQ ID NO:4; HVR-L2 являє собою SEQ ID NO:5; HVR-L3 являє собою SEQ ID NO:6); клон 184.6.1 (HVR-H1 являє собою SEQ ID NO:7; HVR-H2 являє собою SEQ ID NO:8; HVRH3 являє собою SEQ ID NO:9; HVR-L1 являє собою SEQ ID NO:10; HVR-L2 являє собою SEQ ID NO:11; HVR-L3 являє собою SEQ ID NO:12); клон 184.6.58 (HVR-H1 являє собою SEQ ID NO:13; HVR-H2 являє собою SEQ ID NO:14; HVR-H3 являє собою SEQ ID NO:15; HVR-L1 являє собою SEQ ID NO:16; HVR-L2 являє собою SEQ ID NO:17; HVR-L3 являє собою SEQ ID NO:18); 15 UA 104459 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 клон 184.6.62 (HVR-H1 являє собою SEQ ID NO:48; HVR-H2 являє собою SEQ ID NO:49; HVR-H3 являє собою SEQ ID NO:50; HVR-L1 являє собою SEQ ID NO:51; HVR-L2 являє собою SEQ ID NO:52; HVR-L3 являє собою SEQ ID NO:53); клон 184.6.21 (HVR-H1 являє собою SEQ ID NO:54; HVR-H2 являє собою SEQ ID NO:55; HVR-H3 являє собою SEQ ID NO:56; HVR-L1 являє собою SEQ ID NO:57; HVR-L2 являє собою SEQ ID NO:58; HVR-L3 являє собою SEQ ID NO:59); клон 184.6.49 (HVR-H1 являє собою SEQ ID NO:60; HVR-H2 являє собою SEQ ID NO:61; HVR-H3 являє собою SEQ ID NO:62; HVR-L1 являє собою SEQ ID NO:63; HVR-L2 являє собою SEQ ID NO:64; HVR-L3 являє собою SEQ ID NO:65); клон 184.6.51 (HVR-H1 являє собою SEQ ID NO:66; HVR-H2 являє собою SEQ ID NO:67; HVR-H3 являє собою SEQ ID NO:68; HVR-L1 являє собою SEQ ID NO:69; HVR-L2 являє собою SEQ ID NO:70; HVR-L3 являє собою SEQ ID NO:71); клон 184.6.52 (HVR-H1 являє собою SEQ ID NO:72; HVR-H2 являє собою SEQ ID NO:73; HVR-H3 являє собою SEQ ID NO:74; HVR-L1 являє собою SEQ ID NO:75; HVR-L2 являє собою SEQ ID NO:76; HVR-L3 являє собою SEQ ID NO:77); клон 184.6.92 (HVR-H1 являє собою SEQ ID NO:78; HVR-H2 являє собою SEQ ID NO:79; HVR-H3 являє собою SEQ ID NO:80; HVR-L1 являє собою SEQ ID NO:81; HVR-L2 являє собою SEQ ID NO:82; HVR-L3 являє собою SEQ ID NO:83); клон 184.6.1.N54S (HVR-H1 являє собою SEQ ID NO:84; HVR-H2 являє собою SEQ ID NO:85; HVR-H3 являє собою SEQ ID NO:86; HVR-L1 являє собою SEQ ID NO:87; HVR-L2 являє собою SEQ ID NO:88; HVR-L3 являє собою SEQ ID NO:89); клон 184.6.1.N54G (HVR-H1 являє собою SEQ ID NO:90; HVR-H2 являє собою SEQ ID NO:91; HVR-H3 являє собою SEQ ID NO:92; HVR-L1 являє собою SEQ ID NO:93; HVR-L2 являє собою SEQ ID NO:94; HVR-L3 являє собою SEQ ID NO:95); клон 184.6.1.N54A (HVR-H1 являє собою SEQ ID NO:96; HVR-H2 являє собою SEQ ID NO:97; HVR-H3 являє собою SEQ ID NO:98; HVR-L1 являє собою SEQ ID NO:99; HVR-L2 являє собою SEQ ID NO:100; HVR-L3 являє собою SEQ ID NO:101); клон 184.6.1.N54Q (HVR-H1 являє собою SEQ ID NO:102; HVR-H2 являє собою SEQ ID NO:103; HVR-H3 являє собою SEQ ID NO:104; HVR-L1 являє собою SEQ ID NO:105; HVR-L2 являє собою SEQ ID NO:106; HVR-L3 являє собою SEQ ID NO:107); клон 184.6.58.N54S (HVR-H1 являє собою SEQ ID NO:108; HVR-H2 являє собою SEQ ID NO:109; HVR-H3 являє собою SEQ ID NO:110; HVR-L1 являє собою SEQ ID NO:111; HVR-L2 являє собою SEQ ID NO:112; HVR-L3 являє собою SEQ ID NO:113); клон 184.6.58.N54G (HVR-H1 являє собою SEQ ID NO:114; HVR-H2 являє собою SEQ ID NO:115; HVR-H3 являє собою SEQ ID NO:116; HVR-L1 являє собою SEQ ID NO:117; HVR-L2 являє собою SEQ ID NO:118; HVR-L3 являє собою SEQ ID NO:119); клон 184.6.58.N54A (HVR-H1 являє собою SEQ ID NO:120; HVR-H2 являє собою SEQ ID NO:121; HVR-H3 являє собою SEQ ID NO:122; HVR-L1 являє собою SEQ ID NO:123; HVR-L2 являє собою SEQ ID NO:124; HVR-L3 являє собою SEQ ID NO:125); клон 184.6.58.N54Q (HVR-H1 являє собою SEQ ID NO:126; HVR-H2 являє собою SEQ ID NO:127; HVR-H3 являє собою SEQ ID NO:128; HVR-L1 являє собою SEQ ID NO:129; HVR-L2 являє собою SEQ ID NO:130; HVR-L3 являє собою SEQ ID NO:131); клон 184.6.1.NS D30E (HVR-H1 являє собою SEQ ID NO:143; HVR-H2 являє собою SEQ ID NO:144; HVR-H3 являє собою SEQ ID NO:145; HVR-L1 являє собою SEQ ID NO:140; HVR-L2 являє собою SEQ ID NO:141; HVR-L3 являє собою SEQ ID NO:142). Амінокислотні положення пронумеровані згідно з системою нумерації Кебат, як описано нижче. ФІГУРИ 2A і 2B: Представлені (А) амінокислотні послідовності варіабельних областей важкого ланцюга і варіабельних областей легкого ланцюга антитіл проти FGFR3: 184.6.1.N54S, 184.6.58 і 184.6.62; і (В) гіперваріабельні області антитіл проти FGFR3: 1G6, 6G1 і 15B2. ФІГУРИ 3A, 3B і 4: Представлені характерні акцепторні консенсусні каркасні послідовності людини для використання на практиці даного винаходу з наступними ідентифікаторами послідовностей: Консенсусні каркасні області варіабельної області важкого ланцюга (VH) (ФІГ. 3A, 3B) консенсусна каркасна область VH людини підгрупи I мінус CDR по Кебат (SEQ ID NO:19 і 203-205); консенсусна каркасна область VH людини підгрупи I мінус подовжені гіперваріабельні області (SEQ ID NO:20 і 206-208, 21 і 209-211, 22 і 212-214); консенсусна каркасна область VH людини підгрупи II мінус CDR по Кебат (SEQ ID NO:23 і 215-217); 16 UA 104459 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 консенсусна каркасна область VH людини підгрупи II мінус подовжені гіперваріабельні області (SEQ ID NO:24 і 218-220, 25 і 221-223, 26 і 224-226); консенсусна каркасна область VH людини підгрупи II мінус подовжені консенсусна каркасна область VH людини підгрупи III мінус CDR по Кебат (SEQ ID NO:27 і 227-229); консенсусна каркасна область VH людини підгрупи III мінус подовжені гіперваріабельні області (SEQ ID NO:28 і 230-232, 29 і 233-235, 30 і 236-238); акцепторна каркасна область VH людини мінус CDR по Кебат (SEQ ID NO:31 і 239-241); акцепторна каркасна область VH людини мінус подовжені гіперваріабельні області (SEQ ID NO:32 і 242-244, 33 і 2245-247); каркасна область акцептора 2 VH людини мінус CDR по Кебат (SEQ ID NO:34 і 248-250); каркасна область акцептора 2 VH людини мінус подовжені гіперваріабельні області (SEQ ID NO:35 і 251-253, 36 і 254-256, 37 і 257-259); Консенсусні каркасні області варіабельної області легкого ланцюга (VL) (ФІГ. 4) консенсусна каркасна область VL-каппа людини підгрупи I (SEQ ID NO:38 і 260-262); консенсусна каркасна область VL-каппа людини підгрупи II (SEQ ID NO:39 і 263-265); консенсусна каркасна область VL-каппа людини підгрупи III (SEQ ID NO:40 і 266-268); консенсусна каркасна область VL-каппа людини підгрупи IV (SEQ ID NO:41 і 269-271). ФІГУРА 5: Представлені послідовності каркасної області легкого (SEQ ID NO:42-45) і важкого ланцюгів (SEQ ID NO:46, 47, 175, 176) huMAb4D5-8. Номери надрядковими знаками/напівжирним шрифтом вказують на положення амінокислот згідно з Кебат. ФІГУРА 6: Представлені модифіковані/варіантні послідовності каркасної області легкого (SEQ ID NO:42, 43, 177, 45) і важкого ланцюгів (SEQ ID NO:46, 47, 178 і 176) huMAb4D5-8. Номери надрядковими знаками/напівжирним шрифтом вказують на положення амінокислот згідно з Кебат. ФІГУРА 7: Нокдаун FGFR3 в клітинах раку сечового міхура RT112 інгібує проліферацію і індукує зупинення клітинного циклу в фазі G1 in vitro, і пригнічує ріст пухлини in vivo. Три різних shРНК для FGFR3 клонували в індукований Tet вектор експресії. Клітини RT112, стабільно експресуючі shРНК для FGFR3 або контрольну shРНК, одержували за допомогою селекції пуроміцином. (А) Характерні блоти, на яких показана експресія FGFR3 у вибраних клонах, оброблених доксициліном або не оброблених ним (Dox, 0, 0,1 і 1 мкг/мл, зліва направо). (В) 3 Включення [ H]-тимідину в стабільні клітини RT112. Стабільні клони RT112 культивували з 1 3 мкг/мл доксициліну або без нього протягом 3 діб, а потім інкубували протягом 16 годин з [ H]3 тимідином (1 мкКі на ямку). Кількість імпульсів для включеного [ H]-тимідину нормалізували з кількістю імпульсів для клітин без індукції доксициліном. Величина помилки відповідає SEM. (С) Гістограми проточної цитометрії з флуоресценцією ДНК для стабільних клітин RT112. Клони RT112, що експресували контрольну shРНК або shРНК4 для FGFR3, культивували з 1 мкг/мл доксициліну або без нього протягом 72 годин, і ядра забарвлювали йодидом пропідію (PI). Для shРНК2 і 6 FGFR3 були одержані аналогічні результати (фігура 16). (D) Ріст клітин RT112, що експресували контрольну shРНК (n=9 на групу введення) або shРНК4 для FGFR3 (n=11 на групу введення) у мишей. Мишам вводили 5% сахарозу без додавання або з додаванням 1 мг/мл доксициліну, і розмір пухлини вимірювали два рази на тиждень. Величина помилки відповідає SEM. Для shРНК2 і 6 FGFR3 були одержані аналогічні результати (фігура 16). Нижня панель: експресія білка FGFR3 в лізатах пухлин, екстрагованих з тканин ксенотрансплантатів стабільних клітин, оброблених контрольною shРНК або shРНК4 для FGFR3. ФІГУРА 8: R3Mab блокує взаємодію FGF/FGFR3. (А) Селективне зв’язування FGFR3 людини за допомогою R3Mab. Химерні білки Fc і FGFR1-4 людини іммобілізували і інкубували збільшуваною кількістю R3Mab. Виявлення специфічного зв’язування проводили за допомогою антитіла проти Fab людини. (B-C) Блокування зв’язування FGF1 з FGFR3-IIIb (В) або -IIIc (С) людини за допомогою R3Mab. Виявлення специфічного зв’язування проводили з використанням біотинільованого специфічного до FGF1 поліклонального антитіла. (D-E) Блокування зв’язування FGF9 з FGFR3-IIIb (D) або -IIIc (Е) людини за допомогою R3Mab. Виявлення специфічного зв’язування проводили з використанням біотинільованого специфічного до FGF9 поліклонального антитіла. Величина помилки відповідає стандартній помилці середнього значення (SEM) і іноді менше символів. ФІГУРА 9: R3Mab інгібує проліферацію клітин Ba/F3, індуковану FGFR3 дикого типу і мутантним FGFR3. (А) Інгібіторний ефект R3Mab на життєздатність клітин Ba/F3, експресуючих FGFR3-IIIb людини дикого типу. Клітини культивували в середовищі без FGF1 (немає FGF1) або в присутності 10 нг/мл FGF1 разом з 10 мкг/мл гепарину окремо (FGF1), або в поєднанні з контрольним антитілом (контроль) або R3Mab. Життєздатність клітин оцінювали за допомогою 17 UA 104459 C2 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 CellTiter-Glo (Promega) після інкубації протягом 72 год. з антитілами. (В) Інгібування фосфорилування FGFR3 і MAPK за допомогою R3Mab в стабільних клітинах Ba/F3-FGFR3WT IIIb . Клітини обробляли сумішшю 15 нг/мл FGF1 і 10 мкг/мл гепарину (+) або тільки гепарином (-) протягом 10 хвилин після преінкубації з контрольним Ab (контроль), знижуваними кількостями R3Mab (1, 0,2, 0,04 мкг/мл, відповідно) в PBS або PBS окремо (імітація) протягом 3 годин. Лізати піддавали імуноблотингу для оцінки фосфорилування FGFR3 і p44/42 MAPK з Y653/654 Thr202/Tyr204 антитілами до pFGFR і pMAPK , відповідно. (С) Схематичне представлення гарячих точок мутації FGFR3 і їх частоти при раку сечового міхура (нумерація представлених послідовностей основана на амінокислотній послідовності ізоформи FGFR3-IIIb), згідно з опублікованими даними (32). TM, трансмембранний домен; TK1 і TK2, тирозинкіназний домен 1 і 2. (D-H) Інгібіторний ефект R3Mab на життєздатність клітин Ba/F3, експресуючих зв'язані зі злоякісною пухлиною мутанти FGFR3. G372C походить з ізоформи IIIc, а інші мутанти походять з ізоформи IIIb. Нумерація послідовностей всіх мутантів основана на амінокислотній послідовності ізоформи FGFR3-IIIb (включаючи мутант G372C, який був би пронумерований як G370C, виходячи з амінокислотної послідовності ізоформи FGFR3-IIIc). Життєздатність клітин оцінювали після інкубування протягом 72 годин з антитілами, як описано в (А). Величина помилки відповідає SEM. ФІГУРА 10: Картування епітопа для R3Mab і кристалічна структура комплексу між Fabфрагментом R3Mab і IgD2-D3 FGFR3-IIIb людини. (А) Епітоп, визначений зв’язуванням 13 пептидів, що охоплюють IgD2-D3 FGFR3 людини, з R3Mab. Кожний біотинільований пептид іммобілізували на покриті стрептавідином ямки мікропланшета для титрування і інкубували з R3Mab. Виявлення специфічно зв'язаного R3Mab проводили за допомогою антитіла кози проти IgG людини. (В) Вирівнювання послідовностей пептидів FGFR3 людини 3 (LAVPAANTVRFRCPA (SEQ ID NO:179) і 11 (SDVEFHCKVYSDAQP (SEQ ID NO:180) з позаклітинними сегментами FGFR1 людини (пептид 3: HAVPAAKTVKFKCPS (SEQ ID NO:181); пептид 11: SNVEFMCKVYSDPQP (SEQ ID NO:182)). Залишки FGFR1, залучені до первинної взаємодії FGF2-FGFR1, зв’язування гепарину і асоціації рецептор-рецептор, показані напівжирним шрифтом, курсивом і підкресленням, відповідно. Функціональний аналіз залишків FGFR1 оснований на Plotnikov et al. (34). (С) Структура Fab R3Mab (показана за допомогою стрічковоспіральної структури, легкий ланцюг: сірий, важкий ланцюг: чорний) в комплексі з IgD2-D3 FGFR3 людини (показаному у вигляді молекулярної поверхні, білий). Залишки рецептора, що беруть участь у зв’язуванні ліганду і димеризації, забарвлені сірим кольором/заштриховані і темно-сірим кольором відповідно, на основі Plotnikov et al. (34). (D) Наближення кристалічної структури показує, що CDR-H3 і -H2 з Fab є основними ділянками взаємодії з IgD2 і IgD3 в FGFR3. (Е) Накладення комплексу FGFR3-IIIc-FGF1 (код PDB 1RY7) і комплексу FGFR3-IIIb-Fab. FGFR3-IIIc і FGF1 забарвлені сірим кольором і темно-сірим кольором, відповідно. FGFR3-IIIb показаний білим кольором і Fab показаний світло-сірим кольором для легкого ланцюга, темносірим кольором для важкого ланцюга. IgD2 використовували як основу для накладення. Було зазначено, що IgD2 обох структур мали високу міру збігу, а IgD3 з FGFR3-IIIb приймали нову конформацію при їх зв’язуванні з R3Mab. (F) Інше представлення накладення комплексу FGFR3-IIIc-FGF1 (код PDB 1RY7) і комплексу FGFR3-IIIb-Fab. FGFR3-IIIc і FGF1 представлені як молекулярні поверхні, які мають сірий колір/комірчасту текстуру і темно-сірий колір/точкову текстуру, відповідно. FGFR3-IIIb показаний білим кольором і Fab показаний сірим кольором для легкого ланцюга, чорним кольором для важкого ланцюга. IgD2 використовували як основу для накладення. Потрібно відмітити високозбіжні IgD2 з обох структур і нову конформацію, що приймається IgD3 з FGFR3-IIIb, коли вони зв'язані R3Mab. ФІГУРА 11: R3Mab інгібує проліферацію, клональний ріст і передачу сигналу FGFR3 в S249C клітинах раку сечового міхура, експресуючих FGFR3 дикого типу або мутантний S249C 3 FGFR3 . (А) Інгібування включення [ H]-тимідину за допомогою R3Mab в клітинній лінії раку сечового міхура RT112. Величина помилки відповідає SEM. (В) Блокування активованої FGF1 передачі сигналу FGFR3 за допомогою R3Mab (15 мкг/мл) в клітинній лінії раку сечового міхура RT112 в порівнянні з середовищем для обробки окремо (імітація) або контрольним антитілом (контроль). Клітинні лізати піддавали імунопреципітації з антитілом проти FGFR3 і оцінювали їх фосфорилування FGFR3 з антитілом проти фосфотирозину (4G10). Лізати піддавали S473 імуноблотингу для виявлення фосфорилування AKT (pAKT ) і p44/42 MAPK Thr202/Tyr204 (pMAPK ). (С) Інгібування клонального росту за допомогою R3Mab (10 мкг/мл) в S249C клітинній лінії раку сечового міхура UMUC-14 (що містить FGFR3 ) в порівнянні з середовищем для обробки окремо (імітація) або контрольним антитілом (контроль). (D) Кількісне визначення в дослідженні (С), що вказує на число колоній, діаметр яких перевищував -9 120 мкм з 12 повторюваних ямок. Величина помилки відповідає SEM. P