Імуногенна або вакцинна композиція для захисту від кокцидіозу та спосіб індукування імунної відповіді у курчат
Формула / Реферат
1. Імуногенна або вакцинна композиція для захисту від кокцидіозу, який викликається Еimeria acervulina, Еimeria maxima, Еimeria mitis, Еimeria tenella, що складається з фармацевтично прийнятного ексципіенту і суміші спорульованих ооцист, ізольованих з ранодозріваючих ліній Е. acervulina, Е. maxima, E. mitis, E. tenella, де суміш складається з близько 500 ооцист Е. acervulina, близько 50-100 ооцист Е. maxima, близько 500 ооцист E. mitis і близько 100-250 ооцист E. tenella.
2. Композиція за п. 1, яка складається з близько 500 ооцист Е. acervulina, близько 100 ооцист Е. maxima, близько 500 ооцист E. mitis і близько 100 ооцист E. tenella.
3. Композиція за п. 1, де суміш спорульованих ооцист складається з близько 500 ооцист Е. acervulina, близько 50 ооцист Е. maxima, близько 500 ооцист E. mitis і близько 250 ооцист E. tenella.
4. Імуногенна або вакцинна композиція для захисту від кокцидіозу, який викликається Е. acervulina, Е. maxima, E. mitis, E. tenella, яка складається з фармацевтично прийнятного ексципіенту і суміші спорульованих ооцист, де суміш складається з спорульованих ооцист, ізольованих з ранодозріваючих ліній Е. acervulina, Е. maxima, E. mitis, E. tenella, в якій на кожних 10 спороцист Е. acervulina доводиться 1-2 спороцисти Е. maxima, близько 10 спороцист E. mitis і близько 2-10 спороцист E. tenella.
5. Композиція за п. 4, в якій на кожних 10 спороцист Е. acervulina доводиться близько 2 спороцист Е. maxima, близько 10 спороцист E. mitis і близько 2 спороцист E. tenella.
6. Спосіб викликання імунної відповіді у курчат, що включає введення ефективної кількості імуногенної або вакцинної композиції за п. 1.
7. Спосіб індукування імунологічної або захисної відповіді у курчат, що включає введення ефективної кількості імуногенної або вакцинної композиції за п. 1.
8. Спосіб викликання імунної відповіді у курчат, що включає введення ефективної кількості імуногенної або вакцинної композиції за п. 4.
9. Спосіб індукування імунологічної або захисної відповіді у курчат, що включає введення ефективної кількості імуногенної або вакцинної композиції за п. 4.
10. Спосіб за п. 6, в якому ефективна кількість складає близько 500 ооцист Е. acervulina, близько 50-100 ооцист Е. maxima, близько 500 ооцист E. mitis і близько 100-250 ооцист E. tenella.
11. Спосіб за п. 7, в якому ефективна кількість складає близько 500 ооцист Е. acervulina, близько 50-100 ооцист Е. maxima, близько 500 ооцист E. mitis і близько 100-250 ооцист E. tenella.
12. Спосіб за п. 6, в якому ефективна кількість складає близько 500 ооцист Е. acervulina, близько 100 ооцист Е. maxima, близько 500 ооцист E. mitis і близько 100 ооцист E. tenella.
13. Спосіб за п. 7, в якому ефективна кількість складає близько 500 ооцист Е. acervulina, близько 100 ооцист Е. maxima, близько 500 ооцист E. mitis і близько 100 ооцист E. tenella.
14. Спосіб за п. 8, в якому ефективна кількість суміші спорульованих ооцист складає на кожних 10 спороцист Е. acervulina близько 2 спороцист Е. maxima, близько 10 спороцист E. mitis і близько 2 спороцист E.tenella.
15. Спосіб за п. 9, в якому ефективна кількість суміші спорульованих ооцист складає на кожних 10 спороцист Е. acervulina близько 2 спороцист Е. maxima, близько 10 спороцист E. mitis і близько 2 спороцист E. tenella.
16. Спосіб за п. 6, в якому ефективна кількість, достатня для опору тварини ударній дозі, складає приблизно 100000-500000 ооцист Е. acervulina, приблизно 10000-100000 Е. maxima, приблизно 100000-500000 ооцист E. mitis або приблизно 10000-100000 ооцист E. tenella.
17. Спосіб за п. 7, в якому ефективна кількість, достатня для опору тварини ударній дозі, складає приблизно 100000-500000 ооцист Е. acervulina, приблизно 10000-100000 Е. maxima,приблизно 100000-500000 ооцист E. mitis або приблизно 10000-100000 ооцист E. tenella.
18. Спосіб за п. 8, в якому ефективна кількість, достатня для опору тварини ударній дозі, складає приблизно 100000-500000 ооцист Е. acervulina, приблизно 10000-100000 Е. maxima, приблизно 100000-500000 ооцист E. mitis або приблизно 10000-100000 ооцист E. tenella.
19. Спосіб за п. 9, в якому ефективна кількість, достатня для опору тварини ударній дозі, складає приблизно 100000-500000 ооцист Е. acervulina, приблизно 10000-100000 Е. maxima, приблизно 100000-500000 ооцист E. mitis або приблизно 10000-100000 ооцист E. tenella.
Текст
1. Імуногенна або вакцинна композиція для захисту від кокцидіозу, який викликається Еimeria acervulina, Еimeria maxima, Еimeria mitis, Еimeria tenella, що складається з фармацевтично прийнятного ексципіенту і суміші спорульованих ооцист, ізольованих з ранодозріваючих ліній Е. acervulina, Е. maxima, E. mitis, E. tenella, де суміш складається з близько 500 ооцист Е. acervulina, близько 50100 ооцист Е. maxima, близько 500 ооцист E. mitis і близько 100-250 ооцист E. tenella. 2. Композиція за п.1, яка складається з близько 500 ооцист Е. acervulina, близько 100 ооцист Е. maxima, близько 500 ооцист E. mitis і близько 100 ооцист E. tenella. 3. Композиція за п.1, де суміш спорульованих ооцист складається з близько 500 ооцист Е. acervulina, близько 50 ооцист Е. maxima, близько 500 ооцист E. mitis і близько 250 ооцист E. tenella. 4. Імуногенна або вакцинна композиція для захисту від кокцидіозу, який викликається Е. acervulina, Е. maxima, E. mitis, E. tenella, яка складається з фармацевтично прийнятного ексципіенту і суміші спорульованих ооцист, де суміш складається з 2 (19) 1 3 87815 4 15. Спосіб за п.9, в якому ефективна кількість суміші спорульованих ооцист складає на кожних 10 спороцист Е. acervulina близько 2 спороцист Е. maxima, близько 10 спороцист E. mitis і близько 2 спороцист E. tenella. 16. Спосіб за п.6, в якому ефективна кількість, достатня для опору тварини ударній дозі, складає приблизно 100000-500000 ооцист Е. acervulina, приблизно 10000-100000 Е. maxima, приблизно 100000-500000 ооцист E. mitis або приблизно 10000-100000 ооцист E. tenella. 17. Спосіб за п.7, в якому ефективна кількість, достатня для опору тварини ударній дозі, складає приблизно 100000-500000 ооцист Е. acervulina, приблизно 10000-100000 Е. maxima, приблизно 100000-500000 ооцист E. mitis або приблизно 10000-100000 ооцист E. tenella. 18. Спосіб за п.8, в якому ефективна кількість, достатня для опору тварини ударній дозі, складає приблизно 100000-500000 ооцист Е. acervulina, приблизно 10000-100000 Е. maxima, приблизно 100000-500000 ооцист E. mitis або приблизно 10000-100000 ооцист E. tenella. 19. Спосіб за п.9, в якому ефективна кількість, достатня для опору тварини ударній дозі, складає приблизно 100000-500000 ооцист Е. acervulina, приблизно 10000-100000 Е. maxima, приблизно 100000-500000 ооцист E. mitis або приблизно 10000-100000 ооцист E. tenella. Ця заявка заявляє пріоритет попередньої заявки США №60/432,298, що має назву «Кокцидіальна вакцина та методи її приготування і використання», поданої 9 грудня 2002 p., розкриття якої включено повністю як посилання в дану заявку. Вищезгадана заявка і всі документи, цитовані тут чи під час їх виконання («документи додатка»), і всі документи, які цитуються або на які посилаються в документах додатка, разом з будь-якими промисловими інструкціями, описами, специфікаціями продуктів і інструкціями з їх використання для будь-яких продуктів, згаданих тут чи у будьяких документах, включених як посилання сюди, є включеними сюди посиланнями і можуть бути використані в практиці винаходу. Даний винахід відноситься до приготування імуногенних препаратів і вакцин проти захворювань, спричинених кокцидіями. Даний винахід забезпечує також одержання ослабленої вакцини проти кокцидіозу. Рівень техніки Кокцидіоз - це захворювання, яке виникає внаслідок зараження одним чи кількома з багатьох видів кокцидій, які відносяться до типу Protozoa, і є внутрішньоклітинними найпростішими паразитами підтипу Арісотріеха, роду Еіmеriа. Рід Еіmеriа включає види, які мають велике економічне значення при розведенні домашніх птахів, таких як кури, качки, гуси, цесарки, павичі, фазани, голуби й індики. Хоча кокцидіози зустрічаються практично у всіх видів птахів, паразити специфічні для кожного хазяїна, і кожен вид паразитує в одному чи в обмеженій групі близьких видів хазяїнів. З іншого боку, відомо, що хазяїни-птахи є притулком більш ніж одного виду кокцидій. До видів роду Еіmеriа, що викликають кокцидіози, відносяться E.acervulina, E.brunetti, E.hagani, Ε.maxima, E.mitis, E.mitvati, E.necatrix, Е.рrаесох і E.tenella. Одним з видів, які найчастіше виявляються у смітті птахоферм для бройлерів є E.acervulina. Цей вид має величезний репродуктивний потенціал і розглядається як патогенний, оскільки призводить до значного зниження приросту ваги птаха, більш швидкого перетравлювання корму і викликає значне ураження верхнього відділу тонкого кишечнику. Серед домашніх птахів найбільш вразливі до кокцидіозу кури, що приводить до значних еконо мічних втрат, хоча втрати можуть бути також і серед індичок, гусей, качок і цесарок. Кокцидіоз призводить також до значних втрат серед фазанів і перепелів, які утримуються у неволі. Вплив кокцидіозної інфекції може приймати добре помітну форму спустошливої смертності поголів'я, але іншим небажаним ефектом є захворюваність і/чи втрата ваги в результаті інфекції. Під час життєвого циклу паразит Еіmеriа проходить ряд стадій (див. як огляд патент США №6100241). Життєвий цикл починається, коли курча проковтує паразита в інфекційній стадії, відомій як спорулірована ооциста, при скльовуванні корму з ґрунту чи вдихаючи пил. Стінка спорулірованоі ооцисти руйнується за рахунок комбінації механічного перемелювання і хімічного впливу в шлунково-кишковому тракті, що приводить до звільнення спороцисти. Спороциста потрапляє в дванадцятипалу кишку, де вона піддається впливу жовчі і травних ферментів, що супроводжується виходом зі спороцисти двох спорозоїдів. Спорозоїди рухливі і шукають придатні епітеліальні клітини хазяїна для того, щоб проникнути в них і розмножитися. Після інфекції епітеліальної клітини паразит входить у шизонтну фазу життєвого циклу, роблячи від 8-16 до більше 200 мерозоїдів на шизонт. Після двох-п'яти таких безстатевих циклів розмноження внутрішньоклітинні мерозоїди виростають і перетворюються в статеву форму, відому як самка (чи макрогаметоцит) і самець (чи мікрогаметоцит). Після запліднення макрогаметоцита мікрогаметами, що звільняються з мікрогаметоцита, формується зигота, яка створює навколо себе стінку цисти. Знову утворена ооциста виходить з інфікованого курчати з фекаліями. За придатних умов (потрібній температурі, вологості і достатній кількості кисню в повітрі) ооциста проходить споруляцію і входить в інфекційну стадію, перетворюючись у форму, готову до інфікування нового хазяїна, внаслідок чого захворювання поширюється. Таким чином, для переходу паразита від птаха до птаха не потрібний проміжний хазяїн. У результаті інфікування паразитом Еіmerіа травного тракту у курей може знижуватися вага тіла, збільшуватися перетравлювання їжі, припинятися кладка яєць, і в деяких випадках настає 5 смерть. Збільшення інтенсивності виробництва індичок може супроводжуватися серйозними втратами, обумовленими наявністю цього паразита; дійсно, кокцидіоз став економічно важливим паразитарним захворюванням. У минулому було використано кілька методів у намаганні контролювати кокцидіоз. До появи хіміотерапевтичних агентів основним застосовуваним методом було поліпшення санітарних умов з використанням дезинфікантів разом з механічним видаленням підстилки, однак звичайно залишалося достатньо ооцист для передачі захворювання. Введення кокцидіостатичних агентів у корм чи питну воду в поєднанні з якісним обслуговуванням привело до деякого успіху в контролі захворювання. Було, однак, виявлено, що у таких агентів з роками відбувається зниження ефективності в зв'язку з розвитком ліній кокцидій, резистентних до агентів. Більш того, було виявлено, що деякі хіміотерапевтичні агенти зберігаються в м'ясі, роблячи його непридатним для споживання. Патенти США №4 438 097; 4 639 372; 4 808 404; 5 055 292; 5 068 104, 5 387 414; 5 602 033; 5 614 195; 5 636 181; 5 637 487; 5 674 484; 5 677 438; 5 709 862; 5 780 289; 5 795 741; 5 814 320; 5 843 722; 5 846 527; 5 885 568; 5 932 225; 6 001 363 і 6 100 241 мають відношення до кокцидіозних вакцин, включаючи живі і рекомбінантні вакцини. Однак у існуючих кокцидіозних вакцин є окремі недоліки, такі як знижена ефективність, перехресна інфекція з іншими паразитами (наприклад, Clostridium spp.) і погана ефективність для птахів. Таким чином, існує потреба в більш ефективних кокцидіозних вакцинах зі зниженою чи відсутньою перехресною інфекційністю, яка не впливає несприятливо на ефективність для птахів. Цитування чи ототожнення будь-якого документа цієї заявки не допускається, оскільки такий документ є таким, що випереджає даний винахід. Цей винахід заснований, зокрема, на ослабленій кокцидіозній вакцині, яка ефективна щодо вірулентного виклику, має знижену перехресну інфекційність з Clostridium spp. і кращу ефективність для птахів, визначену за швидкостями перетравлювання їжі в порівнянні з іншими кокцидіозними вакцинами. Винахід відноситься до суміші спорульованих ооцист з рано дозріваючих ліній Е.acervulina, Ε.maxima, E.mitis і Е.tenella. Спорульовані ооцисти були ізольовані з насінної культури, зібраної з одного чи більше курчат, висіяної з культурою рано дозріваючих ліній Е.acervulina, Ε.maxima, E.mitis і Е.tenella, тобто одне чи більше курча були засіяні однією з ліній Е.acervulina, Ε.maxima, E.mitis і Е.tenella, що привело до наявності чотирьох груп курчат, кожна з який була заражена різним видом Еіmеriа. Ізольовані спорульовані ооцисти були об'єднані для одержання суміші спорульованих ооцист з рано дозріваючих ліній Е.acervulina, Ε.maxima, E.mitis і Е.tenella. У кращому втіленні винаходу були узяті SPF курчата у віці від 2 до 8 тижнів. В іншому кращому втіленні для виробництва насінної культури одне курча було засіяне ооцистами в кількості від близько 100 до близько 15000. Ще в одному кращому 87815 6 втіленні спорульовані ооцисти з насінної культури були ізольовані шляхом центрифугування. Даний винахід забезпечує також перевірку спорульованих ооцист, характерних для рано дозріваючих ліній Е.acervulina, Ε.maxima, E.mitis і Е.tenella. Винахід відноситься до суміші спорульованих ооцист із рано дозріваючих ліній Е.acervulina, Ε.maxima, Ε.mitis і Е.tenella, яка складається з приблизно 10-1000 спорульованих ооцист Е.acervulina, приблизно 10-100 ооцист Е.maxima, приблизно 10-1000 ооцист Е.mitis і приблизно 101000 ооцист Е.tenella. Доцільна також суміш із приблизно 500 ооцист Е.acervulina, приблизно 50100 ооцист Е.maxima, близько 500 ооцист Е.mitis і близько 100-500 ооцист Е.tenella. Ще краща суміш із приблизно 500 ооцист Е.acervulina, близько 500 ооцист Е.maxima, приблизно 500 ооцист Е.mitis і близько 100 ооцист Е.tenella. Винахід також відноситься до конкретного співвідношення спорульованих ооцист, ізольованих з рано дозріваючих ліній Е.acervulina, Ε.maxima, Ε.mitis і Е.tenella, де співвідношення Е.acervulina:E.maxima:E.mitis:E.tenella становить від 10:1 до 2:10:2 до 10 (наприклад, на кожні 10 спороцист Е.acervulina присутні близько 1-2 спороцист Е.maxima, близько 10 спороцист Е.mitis і від 2 до 10 спороцист Е.tenella). Доцільне також співвідношення Е.acervulina:E.maxima:E.mitis:E.tenella приблизно 5:1:5:1 (наприклад, 10:2:10:2). Винахід також відноситься до тестування ефективності суміші спорульованих ооцист із рано дозріваючих ліній Е.acervulina, Ε.maxima, Ε.mitis і Е.tenella. Переважно тестування відноситься до введення тварині ударної одноразової дози приблизно від 100000 до 500000 ооцист Е.acervulina, приблизно від 10000 до 100000 ооцист Е.maxima, приблизно від 100000 до 500000 ооцист Е.mitis і приблизно від 10000 до 100000 ооцист Е.tenella. У кращому втіленні ударна доза складає приблизно 200000 ооцист Е.acervulina, приблизно від 20000 до 50000 ооцист Е.maxima, близько 200000 ооцист Е.mitis і приблизно від 20000 до 50000 ооцист Е.tenella. Даний винахід відноситься до імунізації курей, переважно курчат-бройлерів. Однак методи приготування вакцини, описані тут, можуть бути екстрапольовані на інших тварин, інфікованих Еіmеriа, зокрема, таких птахів як (але не обмежуючись цим списком) качки, гуси, цесарки, павичі, фазани, голуби, перепели й індички. Винахід включає імуногенну чи вакцинну композицію, яка містить суміш спорульованих ооцист, ізольованих з рано дозріваючих ліній Е.acervulina, Ε.maxima, Ε.mitis і Е.tenella. У кращому втіленні суміш складається з приблизно 10-100 ооцист Е.acervulina, приблизно 10-100 ооцист Е.maxima, приблизно 10-1000 ооцист Е.mitis і приблизно 101000 ооцист Е.tenella. Краща суміш із приблизно 500 ооцист Е.acervulina, приблизно 50-100 ооцист Е.maxima, приблизно 500 ооцист Е.mitis і приблизно 100-500 ооцист Е.tenella. Ще кращою є суміш із приблизно 500 ооцист Е.acervulina, приблизно 100 7 ооцист Е.maxima, приблизно 500 ооцист Е.mitis і приблизно 100 ооцист Е.tenella. Винахід також відноситься до імуногенної чи вакцинної композиції, яка містить конкретне співвідношення спорульованих ооцист, ізольованих з рано дозріваючих ліній Е.acervulina, Ε.maxima, Ε.mitis і Е.tenella, де відношення Е.acervulina:E.maxima:E.Mitis:E.tenella становить від приблизно 10:1 до 2:10:2 (наприклад, на кожні 10 спороцист Е.acervulina присутні від 1 до 2 спороцист Е.maxima, приблизно 10 спороцист Е.mitis і приблизно 2-10 спороцист Ε.tenella). Краще співвідношення Ε.acervulina:E. maxima:E. mitis:Е.tenella є приблизно рівним 5:1:5:1 (тобто, 10:2:10:2). Винахід також забезпечує викликання імунної відповіді або індукцію імунологічної чи захисної відповіді, що включає введення ефективної кількості імуногенної чи вакцинної суміші, яка складається зі спорульованих ооцитів, ізольованих з рано дозріваючих ліній Е.acervulina, Ε.maxima, Ε.mitis і Е.tenella для викликання чи індукції відповіді у тварин. Переважно тваринами, у даному випадку, є птахи, такі як (але не обмежуючись цим списком) кури, качки, гуси, цесарки, павичі, фазани, голуби, перепели й індички. У найкращих втіленнях птахами є кури, переважно курчата-бройлери. Спосіб викликання імунної відповіді чи індукції імунологічної відповіді може також включати введення ад'юванта, цитокіну або того і іншого. Переважно ефективною кількістю для викликання імунної відповіді чи індукції імунологічної або захисної відповіді є від приблизно 10 до 1000ооцист Е.acervulina, від приблизно 10 до приблизно 100 ооцист Е.maxima, від приблизно 10 до 1000 ооцист Е.mitis і від приблизно 10 до 1000 ооцист Е.tenella. Переважно ефективна кількість становить близько 500 ооцист Е.acervulina, близько 50-100 ооцист Е.maxima, приблизно 500 ооцист Е.mitis і приблизно від 100 до 500 ооцист Е.tenella. Краща комбінація ефективної кількості це приблизно 500 ооцист Е.acervulina, приблизно 100 ооцист Е.maxima, приблизно 500 ооцист Е.mitis і близько 100 ооцист Е.tenella. В іншому втіленні ефективної кількості достатньо для опору ударній дозі від приблизно 100000 до приблизно 500000 ооцист Е.acervulina, від приблизно 10000 до приблизно 100000 ооцист Е.maxima, від приблизно 100000 до 500000 ооцист Е.mitis чи від приблизно 10000 до 100000 ооцист Е.tenella на тварину. Краще, якщо ударна доза становить від приблизно 200000 ооцист Ε.acervulina, від приблизно 20000 до приблизно 50000 ооцист Е.maxima, приблизно 200000 ооцист Е.mitis чи від приблизно 20000 до приблизно 50000 ооцист Е.tenella. Ефективна кількість для викликання імунної відповіді чи індукції імунологічної або захисної відповіді може бути також виражена як співвідношення спорульованих ооцист із рано дозріваючих ліній Е.acervulina, Ε.maxima, Ε.mitis і Ε.tenella, де співвідношення Е.acervulina:E.maxima:E.mitis:E.tenella складає приблизно 10:1 до 2:10:2 до 10 (наприклад, на кожні 10 спороцист Е.acervulina припадає приблизно 1-2 спороциста Е.maxima, близько 10 спороцист Е.mitis і приблизно 2-10 спороцист 87815 8 Е.Tenella). Доцільне співвідношення Е.acervulina:E.Maxima:E.mitis:E.tenella приблизно 5:1:5:1 (наприклад, 10:2:10:2). З огляду на поширеність і патогенність різних видів Еіmеriа вдала ослаблена кокцидіальна вакцина повинна містити найменшу кількість ліній Еіmеriа, достатніх для викликання імунної відповіді чи індукції імунологічної або захисної відповіді, яка не є патогенною для реципієнта вакцини. Представлені співвідношення відносяться до комбінації ооцист із чотирьох специфічних рано дозріваючих ліній Еіmеriа, а саме: Е.acervulina, Ε.maxima, Ε.mitis і Е.tenella, які приводять до ефективної і непатогенної вакцини. Додавання інших ліній Еіmеriа, таких як Е.brunetti, E.necatrix і Ε.praecox може бути несприятливим з точки зору ефективності, перехресної інфекції чи патогенності вакцини. Оскільки Е.brunetti, E.necatrix і Ε.praecox не є необхідними для ефективності кокцидіозної вакцини, виявленої тут, було б доцільно виключити ці лінії з вакцини представленого винаходу. Відзначимо, що в цьому описі і, зокрема, у формулі винаходу такі терміни як «містить», «є» і подібні можуть мати значення, приписане законом про патенти США, тобто вони можуть означати «включає», «включений», «включаючий» і подібне, і терміни, такі як «є по суті» і «складається власне кажучи» мають значення, запропоноване ім законом про патенти США, тобто вони дозволяють не докладно повідомляти елементи, але виключати елементи, які знайдені в рівні техніки чи які впливають на основну чи нову характеристику винаходу. Ці та інші втілення розкриті і/або є очевидними завдяки наступному докладному опису. Даний винахід, зокрема, засновано на ослабленій кокцидіальній вакцині, яка ефективна щодо вірулентного виклику, має знижену перехресну інфекційність з Clostridium spp. і має більш високу ефективність для птахів, що визначено за швидкістю перетравлювання їжі в порівнянні з іншими кокцидіальними вакцинами. Винахід відноситься до суміші спорульованих ооцист із рано дозріваючих ліній Е.acervulina, Ε.maxima, Ε.mitts і Е.tenella. Спорульовані ооцисти були ізольовані з насінної культури, зібраної з одного чи більше курчат, засіяних культурою рано дозріваючих ліній Е.acervulina, Ε.maxima, Ε.mitis і Е.tenella, тобто одне чи більше курча були засіяні однією з рано дозріваючих ліній Е.acervulina, Ε.maxima, Ε.mitis і Е.tenella, що дало 4 групи курчат, кожна з який була засіяна різними лініями Еіmеriа. Переважно лінія Еіmеriа є рано дозріваючою лінією. Рано дозріваючі лінії походять з поля ліній і не є патогенними, якщо вводяться в правильній дозі. У кращому втіленні лінія Еіmеriа є рано дозріваючою лінією відповідних мікроорганізмів, як описано в статті (Avian Pathology, 17: 305-314, 1988), озаглавленій "Еіmеriа of American Chicken: Characteristics of Six Attenuated Strains Produced by Selection for Precocious Development", P.L. Long and Joyce K. Johnson, опис як посилання включено в цей опис. Коротко, мікроорганізми ослаблені селекцією на ранньому передознаковому періоді, тобто, коли ооцисти вперше були виявлені у фе 9 каліях. Такі методи добре відомі кожному фахівцю і є рутинними експериментами. Вихідні культури ліній Еіmеriа для насінних культур включають, але не обмежуються наступним. Вважають, що батьківська Еіmеriа acervulina, отримана з лабораторії Т.К. Jeffers at Hess and Clark Laboratories у 1969p., була ізольована доктором Μ.Μ. Farr at USDA, Beltsville, MD і походила з єдиного ооциста. Культура Еіmеriа maxima походить від схрещеної суміші 10 очищених ізолятів, отриманих із Джорджії, Делавера, Мериленда, Вірджинії і Техаса. Батьківська культура Еіmеriа mitis була виділена в Gainesville, Джорджія у липні 1978р. і була очищена шляхом ізоляції єдиної ооцисти. Батьківська культура Еіmеriа tenella була отримана з культури, що підтримується у Пенсільванії (Pennsylvania State University) доктором Patten, дещо раніше 1960-х і була придбана Університетом Джорджії в 1982р. Інші рано дозріваючі лінії Еіmеriа включають LSI00, рано дозріваючу Е.acervulina, ізолят 809-13, і LS, рано дозріваючу лінію Е.mitis, отримані з Merk Research Laboratories, які були отримані від доктора Peter Long. Альтернативно, ослаблені рано дозріваючі лінії Еіmеriа, які зберігалася у вигляді спороцист у European Collection of Animal Cell Cultures «ECACC» як патентний депозит (див. наприклад, патент США №5 055 2 92, розкриття якого включено в цей як посилання), є корисним набором культур для генерації насінних культур Еіmеriа, описаним тут. Специфічно, депозити Е.acervulina (депозит №ЕСАСС 86072203), Е.maxima (депозит №ЕСАСС 86112011 і 86112012), Е.mitis (депозит №ЕСАСС 86072206) і Е.tenella (депозит №ЕСАСС 86072201), як описано в патенті США №5 055 292, є корисними вихідними культурами для насінних культур даного винаходу. Бажано мікроорганізми ослаблені їхньою селекцією для передчасного розвитку, як описано ранішe. Іншим вигідним втіленням є те, що культури не містять патогенів. Вихідні культури, описані вище, переважно підтримувалися на рідкій чи газоподібній фазі рідкого азоту. Такий метод відомий фахівцям. Краще, якщо вік курчат становить від двох до восьми тижнів. Спорульовані ооцисти були успішно пасирувані, без обмеження пасажів, у курчатах доти, доки число ооцист не стало достатнім для використання їх як насінних для продукції. Переважно культури повинні бути витримані довше, ніж 12 місяців, для того щоб підтримати життєздатність/інфекційність. У кращому втіленні необхідні умови підтримувалися для кожного виду Еіrmеrm. Переважно достатній об'єм спорульованих ооцист (для посіву) змішувався з їжею або, альтернативно, вводився орально для забезпечення кожного курчати мінімальною дозою. У кращому втіленні для виробництва насінної культури на кожне курча припадало близько 5000-15000 ооцист. Спорульовані ооцисти з насінної культури були ізольовані з фекалій птахів переважно центрифугуванням. У кращому втіленні це було зроблено в такий спосіб. Краплини фекалій гомогенізували в приблизно 10% (вага/об'єм) воді. Великі частки 87815 10 видаляли, пропускаючи гомогенат крізь сітку. Тверді частки були відділені або центрифугуванням, або фільтруванням, або витримуванням при 5+3°С до 24 годин. Якщо тверді частки були відділені витримуванням при 5+3°С, вони надалі концентрувалися центрифугуванням. Супернатант відкидали, і тверді частки ресуспендували в насиченому водному розчині NaCl (80% вага/об'єм). Отриманий розчин центрифугували. Ооцисти були зібрані (вилучені) зверху рідини і ресуспендовані у воді. Необов'язково рідина, що залишилася була розведена до 20-40% NaCl водою і центрифугована. Осад потім ресуспендували в насиченому розчині NaCl і рецентрифугували доти, допоки знаходили додаткові ооцисти. Ооцисти були промиті не більше, ніж два рази. Ооцисти були відмиті від солі повторними циклами ресуспендування/центрифугування, слідом за якими проводили ресуспендування в 0,5% розчині гіпохлориту натрію протягом 10-15хв. Потім ооцисти були відмиті від гіпохлориту натрію повторюваними (ЗХ) стадіями центрифугування і ресуспендування. Останнє ресуспендування проведено в 2,5% водному розчині біхромату калію (K2СrO7) . Потім ооцисти були перенесені в посуд для споруляції. Споруляцію полегшували барботажем суспензії повітрям у період, який не перевищував 72 години при 27+3°С. Після споруляції ооцисти були витримані при 27+3°С до виробництва кінцевого продукту. В іншому втіленні ооцисти, які повинні бути використані відповідно до даного методу вакцинації, можуть бути отримані кожним з декількох методів, відомих фахівцям. Такі методи включають описані Ryley et al., Parasitololy 73:311-326, 1976, P.L. Long et al., Folia Veterinaria Latina V#3, 201-217, 1976 і патент США №6 627 205, опис якого повністю включено в дану заявку як посилання. Відповідно до одного методу комерційні курчата-бройлери у віці приблизно 2 тижні були інфіковані певними видами Еіmеriа оральним введенням придатної дози спорульованих ооцист. За цим слідувала добре відома процедура збору й очищення ооцист з інфікованих птахів. Для більшості видів Еіmеriа фекалії збираються через 5-7 днів після інфікування, змішуються і фільтруються для видалення осаду, потім центрифугуються зі швидкістю, достатньою для осадження фекального матеріалу, що залишається. Осад ресуспендується в насиченому сольовому розчині, у якому ооцисти флотують, і велика частина забруднюючого сміття може бути вилучена центрифугуванням. Суспензія ооцист повторно відмивається для видалення солей і ресуспендується в розчині біхромату калію (2,5% вага/ об'єм). Суспензія ооцист інкубується при 29°С і перемішуванні (наприклад, 140 оборотах за хв.) протягом приблизно 72 годин для індукування споруляції ооцист. Альтернативно, ооцисти можуть бути оброблені гіпохлоритом калію і потім спорульовані. Кількість спорульованих ооцист/мл визначається прямим підрахунком з використанням гемоцитометра чи предметного скла Макмастера, і культура зберігається в холодильнику до використання. Для приготування спороцист біхромат калію відмивається від суспензії ооцист, описаної вище, 11 повторним відмиванням ооцист, яке включає збирання ооцист центрифугуванням і ресуспендуванням у деіонізованій чи дистильованій воді. Коли біхромат був відмитий, що оцінювалося за відсутністю жовто-жовтогарячого забарвлення, суспензія ооцист змішується з рівним об'ємом гіпохлориту натрію (відбілювання) і інкубується при кімнатній температурі протягом 15 хвилин. Відбілювач потім видаляється повторними відмиваннями, і ооцисти ресуспендуються у фізіологічному розчині чи деіонізованій воді. Ооцисти можуть бути зруйновані для звільнення спороцист шляхом змішування ооцист зі скляними бусинами діаметром 1-4мм і струшування вручну, міксером вортекс або в інкубаторі-шейкері, чи з використанням ручного гомогенізатора. Незруйновані ооцисти і стінки ооцист можуть бути відділені від звільнених спороцист диференціальним центрифугуванням у 50% розчині перколлу (PERCOLL), колоїдної суспензії покритих полівінілпіролідоном кремнієвих часток (що їх продає Pharmacia Biotech) чи 1 Μ сахарозою, як описано в Dulski et al., Avian Diseases, 32:235-239, 1988. У даному методі вакцинації спороцисти можуть бути використані або змішаними, або відділеними від незруйнованих ооцист і стінок ооцист. Переважно порція спороцист відокремлюється від ооцист і стінок ооцист. У кращому втіленні технічні вимоги для прийнятного збору посівної культури є наступними. Поперше, було визначене співвідношення спорульованих ооцист до загальної кількості ооцист. Прийнятним розглядався тільки збір, у якому кількість спорульованих ооцист дорівнювало чи перевищувало 40% споруляції. По-друге, розмір, форма і зовнішній вигляд кожного збору повинен бути характерним для виду, що планується продукувати. Наприклад, параметри, розглянуті для характеристики видів Еіmеriа, включають (але не обмежуються) технології, засновані на ДНК, визначення плавучої щільності ДНК, зміна активності ферментів, специфічність відносно хазяїна і сайту, імунологічну специфічність, патогенність, передознаковий період, час споруляції (див, наприклад, Long & Joyner, J Protozool. 1984 Nov; 31(4):535-41 and Shirley, Acta Vet Hung. 1997; 45 (3): 331-47, розкриття якого повністю включено в даний опис як посилання). Ізольовані спорульовані ооцисти посівної культури, описані тут, комбінуються для створення суміші спорульованих ооцист із рано дозрівачих ліній Е.acervulina, Ε.maxima, Ε.mitis і Е.tenella. В основному, суміш складається приблизно з 101000 ооцист Е.acervulina, близько 10-1000 ооцист Е.maxima, близько 10-1000 ооцист Е.mitis і близько 10-1000 ооцист Е.tenella. Переважно кількість спорульованих ооцист різного виду в суміші складає близько 125-500 ооцист Е.acervulina, близько 25100 ооцист Е.maxima, близько 125-500 ооцист Е.mitis і близько 25-500 ооцист Е.tenella. В одному втіленні найменша доза складає близько 125 ооцист Е.acervulina, близько 25 Е.maxima, близько 125 ооцист Е.mitis і близько 25 ооцист Е.tenella. В іншому втіленні середня доза складає близько 250 ооцист Е.acervulina, близько 50 ооцист Е.maxima, близько 250 ооцист Е.mitis і близько 50 ооцист 87815 12 Е.tenella. У ще одному втіленні найвища доза складає близько 500 ооцист Е.acervulina, близько 100 ооцист Е.maxima, близько 500 ооцист Е.mitis і близько 100 ооцист Е.tenella. Винахід також стосується конкретних співвідношень спорульованих ооцист, ізольованих з рано дозріваючих ліній Е.acervulina, Ε.maxima, Ε.mitis і Е.tenella, де співвідношення Е.acervulina : Ε.maxima: Ε.mitis : Ε.tenella складає від близько 10:1 до 2:10:2 до 10 (тобто на кожні 10 спороцист Е.acervulina припадає близько 1-2 спороцист Е.maxima, близько 10 спороцист Ε.mitis і близько 2-10 спороцист Ε.tenella). Краще співвідношення Ε.acervulina:Ε.Maxima:Ε.mitis:Ε.tenella складає приблизно 5:1:5:1 (тобто, 10:2:10:2) . Переважно в суміші знаходиться близько 500 ооцист Е.acervulina, близько 50-100 ооцист Е.maxima, близько 500 ооцист Е.mitis і близько 100-500 ооцист Е.tenella. У кращому втіленні суміш складається з близько 500 ооцист Е.acervulina, близько 100 ооцист Е.maxima, близько 500 ооцист Е.mitis і близько 100 ооцист Е.tenella. Переважно ооцисти суспендуються в консервуючому розчині: 0,01Μ буферний розчин, який містить гентаміцин. В іншому втіленні ооцисти суспендовані в кожному з різних консервантів або органічних кислот, таких як (але не обмежуючись цим переліком) оцтова кислота, лимонна кислота, біхромат калію чи пропіонова кислота. Наприклад (але без обмежень), власне кажучи, стерильний 0,01Μ фосфатний буферний розчин, який містить не більше, ніж 30мг/мл гентаміцину, використовується для одержання 2мл на пляшку з 2000 доз, 5мл на пляшку з 5000 доз і 10мл на пляшку для 10000 доз. Переважно ооцисти зберігаються в стерильних пляшечках з боросилікатного скла. Наприклад (але не як обмеження), ооцистами асептично заповнюють пляшечки для вакцини з використанням напівавтоматичного диспенсера, механічно чи вручну вставляються пробки, зверху поміщають алюмінієві прошарки і запечатують. В іншому втіленні ооцисти суспендуються в стерильній дистильованій воді, яка містить суспендуючий агент, наприклад, полісахаридний суспендуючий агент, такий як клей, тобто ксантановий клей чи акацієвий клей. Похідне целюлози, тобто карбоксиметилцелюлоза, гідроксипропілметилцелюлоза чи мікрокристалічна целюлоза, карагенан, альгінат натрію, чи пектин крохмаль; поліпептидний суспендуючий агент, такий як желатин, синтетичний полімерний суспендуючий агент, такий як поліакрилова кислота; чи силікатний суспендуючий агент, такий як силікат магнію й алюмінію (див. наприклад, патент США №5 055 292, розкриття якого повністю включено в дану заявку як посилання). Даний винахід забезпечує також верифікацію спорульованих ооцист, характерних для рано дозріваючих ліній Е.acervulina: Ε.maxima: Ε.mitis:Ε.tenella. Переважно всі ооцисти ослаблені, оскільки вони є рано дозрівачими. В іншому прийнятному втіленні розмір, форма і зовнішній вигляд кожного збору ооцист повинні бути характерні для виду, що планується виробляти. І ще в одному прийнятному втіленні суміш спорульованих ооцист 13 тестується на чистоту, зовнішні патогени і/чи викликану ними смерть чи серйозні ураження піддослідних тварин, наприклад, курчат. Характеристики різних видів Еmerіа повністю описані Long P.L. and Reid W.M. (1982: A Guide for the Diagnosis of Coccidiosis in Chickens; University of georgis Research Report 404) і Joyner L.P. (1978:Identification and Diagnosis, Avian Coccidosis, Poultry-Science Symposium N13, British Poultry Science Ltd), розкриття яких повністю включено в дану заявку як посилання. Даний винахід також стосується тестування ефективності суміші спорульованих ооцист із рано дозріваючих ліній Е.acervulina, Ε.maxima, Ε.mitis і Е.tenella. Переважно це тестування проводиться введенням тварині ударних доз приблизно від 100000 до 500000 ооцист Е.acervulina і приблизно від 10000 до 100000 ооцист Е.maxima, приблизно від 100000 до 50000 ооцист Е.mitis чи приблизно від 10000 до 100000 ооцист Е.tenella. У ще кращому втіленні ці ударні дози становлять приблизно 200000 ооцист Е.avervulina, приблизно від 20000 до 50000 ооцист Е.maxima, приблизно 200000 ооцист Е.mitis чи приблизно від 20000 до 50000 ооцист Е.tenella. Винахід також відноситься до тестування ефективності суміші спорульованих ооцист із рано дозріваючих ліній Е.acervulina, Ε.maxima, Ε.mitis і Е.tenella для птахів. Ефективність перетравлювання їжі визначається як кількість фунтів корму, необхідного для виробництва фунта м'яса. Загальний результат складає 1,9-2,0. Одна точка в переварюванні корму на загальному жаргоні складає 0,1, що рівне приблизно 0,5% (половині відсотка). Якщо використовувати метричну систему, переварювання їжі дорівнює відношенню - кг корму на кг м'яса і пропорційне вищевказаному. Даний винахід відноситься до імунізації курчат, переважно курчат-бройлерів. Однак метод приготування вакцини, описаний тут, може бути екстрапольований на інших тварин, інфікованих Еіmеriа, зокрема, таких птахів як (але не обмежуючись цим переліком) курей, качок, гусей, цесарок, павичів, фазанів, голубів, перепелів чи індичок, або, у менш прийнятному втіленні, кроликів. Винахід охоплює імуногенну чи вакцинну препарат, який містить суміш спорульованих ооцист, ізольований з рано дозріваючих ліній Е.acervulina, Ε.maxima, Ε.mitis і Е.tenella. Ізольовані спорульовані ооцисти змішані для виробництва композиції спорульованих ооцист із рано дозріваючих ліній Е.acervulina, Ε.maxima, Ε.mitis і Е.tenella. Звичайно суміш складається приблизно з 10-1000 ооцист Е.acervulina, приблизно 10-100 ооцист Е.maxima, приблизно 10-1000 ооцист Е.mitis і приблизно 101000 ооцист Е.tenella. Переважно діапазон кількостей спорульованих ооцист у суміші складає від близько 125 до 500 ооцист Е.acervulina, близько 25-100 ооцист Е.maxima, близько 125-500 ооцист Е.mitis і близько 25-250 ооцист Е.tenella. В одному втіленні мінімальна доза складає близько 125 ооцист Е.acervulina, близько 25 ооцист Е.maxima, близько 125 ооцист Е.mitis і близько 25 ооцист Е.tenella. В іншому втіленні середня доза складає близько 250 ооцист Ε.acervulina, близько 50 оо 87815 14 цист Ε.maxima, близько 250 ооцист Ε.mitis і близько 50 ооцист Е.tenella. В іншому втіленні більша доза складає близько 500 ооцист Е.acervulina, близько 100 ооцист Е.maxima, близько 500 ооцист Е.mitis і близько 100 ооцист Е.tenella. Переважно композиція-містить близько 500 ооцист Е.acervulina, близько 50-100 ооцист Е.maxima, близько 500 ооцист Е.mitis і близько 100-500 ооцист Е.tenella. У більш доцільному втіленні композиція містить близько 500 ооцист Е.acervulina, 100 ооцист Е.maxima, 500 ооцист Е.mitis і 100 ооцист Е.tenella. Композиція також відноситься до конкретних співвідношень спорульованих ооцист, ізольованих з рано дозріваючих ліній Е.acervulina, Ε.maxima, Ε.mitis і Е.tenella, де співвідношення Е.acervulina:Ε.maxima:Ε.mitis:Ε.tenella складає від близько 10:1 до 2:10:2 до 10 (тобто 10 спороцист Е.acervulina до приблизно 1-2 спороцист Е.maxima до приблизно 10 спороцист Е.mitis і до приблизно 2-10 спороцист Е.tenella). Переважно співвідношення Е.acervulina:Ε.maxima:Ε.Mitis:Ε.tenella складає 5:1:5:1 (тобто 10:2:10:2). Таким чином, термін «імуногенна композиція» означає будь-яку композицію, здатну, будучи введеною тваринам, наприклад, птахам, викликати захисну імунну відповідь проти паразита чи антигену або імуногенного епітопа. Термін «вакцина» означає тут будь-яку композицію, здатну після одноразового введення тварині, наприклад, птаху, індукувати захисну імунну відповідь проти вірусу чи ефективно захищати тварину проти інфікування паразитом. Імуногенні препарати чи вакцини відповідно до винаходу можуть також включати патоген чи імуноген, антиген чи епітоп патогена, або, принаймні, один імуноген, антиген або епітоп іншого патогена, паразита чи вірусу, тобто кокціідальна вакцина є комбінованою з іншими пташиними вакцинами. Такий імуноген, антиген чи епітоп може бути в тому числі і бактеріальним, паразитарним чи вірусним, або інактивованою, чи ослабленою формою патогена, паразита чи вірусу. Винахід також охоплює набори для приготування цих комбінованих препаратів, а також методи приготування цих комбінованих препаратів і використання компонентів комбінованих препаратів для приготування комбінованих препаратів. Відповідно, винахід забезпечує набір для приготування комбінацій імуногенних компонентів чи компонентів вакцини за винаходом, наприклад, такий набір, що складається з (а) організму, патогена чи вірусу, чи антигену, чи епітопа (переважно патогена, згаданого вище) і (б) організму, патогена, чи вірусу, чи імуногена, чи антигену епітопа (переважно цього вірусу чи імуногена, антигену, чи епітопа, але інші патогени, як згадані тут, також разглядаються), що відрізняються (а) роздільними контейнерами, необов'язково в тому ж упакуванні чи необов'язково з інструкціями для змішування і/чи введення. Імуногенні препарати і/чи вакцини відповідно до винаходу можуть включати культуру чи препарат Еіmеriа (наприклад, інактивовані чи ослаблені Еіmеriа чи імуноген, чи антиген цього епітопа) і, принаймні, імуноген, антиген чи епітоп іншого па 15 тогена птахів (включаючи без обмежень патоген, у інактивованій чи ослабленій формі). У пташині мультивалентні імуногенні композиції і мультивалентні вакцини включаються додаткові патоген(и) птахів, такі як: додаткові антиген(и) птахів чи імуноген(и), чи епітоп(и) цього і/чи експресованими мультивалентними імуногенними композиціями і мультивалентними вакцинами є віруси, хвороби чи патогени хвороби вірусу Марека (MDV) (тобто серотипами 1 і 2, переважно 1), вірусу хвороби Н'юкастла (NDV), інфекційного вірусу бронхіту (IBV), інфекційного вірусу анеміі чи вірусу анемії курчат (PMDV2 до PMDV7), інфекційного вірусу ларинготрахеїту (ILTV), інфекційного вірусу хвороби бурси (IMBDV), вірусу енцефаломієліту чи вірусу пташиного енцефаломієліту (AEV) чи вірусу пташиного лейкозу (ALV), геморагічного вірусу індичок (HEV), вірусу пневмовірозису (TRTV), вірусу пташиної чуми (грип птахів), вірусу гідроперикардиту птахів, пташині реовіруси, кокцидіози, синдром руйнування яйця (EDS76), вірусу чуми птахів, ікулюзійного гепатиту (аденовірус), лімфопроліферативної хвороби індичок, ретикулоендотеліозу курчат, ретикулоендотеліозу індичок, ентероротовіруси і вірус рінотрахеіту індичок, Clostridium spp., Escherihia coli, Mycoplasma gallinarum, Mycoplasma gallisepticum, Haemophilus avium, Pasteurella gallinarum, Pasteur ellamultocids gallicida та їх суміші. Для MDV імуногеном є переважно gB і/чи gD, наприклад, gB і gD; для NDV імуногеном переважно є HN і/чи F, наприклад, ΗΝ i F; для IBDV імуногеном переважно є VP2; для IBV імуногеном переважно є S (більш вигідним S1) і/чи М, і/чи N, наприклад, S (чи S1) i Μ і/чи Ν; для CAV імуногеном переважно є VP1 і/чи VP2; для ILTV імуноген переважно gB і/чи gD для AEV імуногеном переважно є env і/чи gag/pro, наприклад, env і gag/pro; для HEV імуногеном переважно є 100К білок і/чи гексон; для TRTV імуногеном переважно є F і/чи G і для пташиної чуми імуногеном переважно є НА і/чи N, і/чи NP, наприклад, НА і N і/чи NP. Таким чином, винахід також включає методи виготовлення цих композицій, також як і їхні набори (кіти). Імуногенна композиція чи вакцина відповідно до винаходу також містить такий додатковий імуногенний компонент (додатковий імуноген, антиген чи епітоп), що має перевагу, оскільки він індукує імунну відповідь чи захист проти декількох інфекцій чи хвороб або містить агент, що є причиною цього. Цей додатковий імуногенний компонент може бути ослабленим чи інактивованим мікроорганізмом, рекомбінантним констрактом чи субодиницями (наприклад, білками, глікопротеінами, поліпептидами чи епітопами). Процедури визначення епітопа, такі як виробництво бібліотеки пептидів, що перекриваються, (Hemmer et al., Immunology Today, 1998, 19(4), 163-168), Pepscan (Geysen H.M. et al., Proc, Natl. Acad. Sci USA, 1984, 81(13), 39984002; Gezsen H.M. et al., Proc. Natl. Acad. Sci USA, 1984, 81(13), 3998-4002; Gezsen H.M. et al., Proc. Natl.Acad. Sci USA, 1985, 82(1), 178-182; Van der Zee R et al., Eur. J. Immunol, 1989, 19(1), 43-47; Geysen H.M., Southeast Asian J. Trop. Med. Public. Health, 1990, 21(4), 523-533; Multipin Peptide Synthesis Kits de Chiron) і алгоритми (De Groot A et 87815 16 al., Nature Biotechnology, 1999, 17, 533-561) можуть бути використані в практиці винаходу для визначення епітопів імуногенів, антигенів, поліпептидів, глікопротеінів і подібного без зайвих експериментів. За допомогою цієї інформації можна сконструювати молекули нуклеїнової кислоти, які кодують такий епітоп, використовуючи ці знання і навички, можна сконструювати вектори і конструкти, наприклад, рекомбінантні віруси або вектори чи плазмиди, які експресують імуногени, епітопи чи антигени; і усе без зайвих експериментів. Фармакологічно чи ветеринарно прийнятні переносники чи носії або ексципієнти добре відомі фахівцям, наприклад, 09% розчин NaCl чи фосфатний буфер. Наприклад, фармакологічно чи ветеринарно прийнятні переносники чи носії або ексципієнти можуть бути будь-яким препаратом чи комбінацією препаратів, які полегшують введення вектора (чи білка, експресованого вектором за винаходом in vitro); переважно чи переносники чи носії ексципієнти можуть полегшувати трансфекцію і/чи поліпшувати консервацію вектора (чи білка). Дози й об'єм доз обговорюються в базових описах методів імунізації і вакцинації, а також можуть бути визначені фахівцем у даній області з цього прочитаного розкриття, разом зі знанням предмета без додаткових експериментів. Імуногенні композиції і вакцини відповідно до винаходу можуть включати чи містити, власне кажучи, один або більше ад'ювантів. Ад'ювантами, які підходять для використання в практиці даного винаходу, є (1) полімери акрилової і метакрилової кислоти, малеїновий ангідрид і полімери алкенілових полімерів, (2) імуностимулючі послідовності (ISS), такі як олігодезоксирибонуклеотидні послідовності, які мають один чи більше неметильованих одиниць CpG (Klinman et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 1996, 93, 2879-2883; WO98/16247), (3) емульсія олії у воді, така як емульсія SPT, описана на стор.147 книги «Vaccine Design, The Subunit and Adjuvant Approach", опублікованої М. Powell, N. Newman, Plenum Press 1995, і емульсія MF59, описана на стор.183 тієї ж роботи, (4) ліпіди з позитивно зарядженими угрупованнями (катіонні ліпіди), такі як четвертинні солі амонію, (5) цитокіни, (6) гідрооксид і фосфат алюмінію чи (7) інші ад'юванти, обговорювані в будь-яких цитованих документах і включених як посилання в дану заявку, чи (8) будь-які їх комбінації і суміші. Емульсія олії у воді (3), що особливо сприятлива для вірусних векторів, може мати як основу: легку рідку парафінову олію (європейського фармакопейного типу), ізопреноідну олію, таку як сквалан, сквален, олія, що утворюється при олігомерізації алкенів, наприклад, ізобутен або децен, ефіри кислот чи спиртів, які мають нерозгалужені алкильні угруповання, такі як рослинні олії, етилолеат, пропіленгліколь, ди(каприлат/капрат), гліцерин три(каприлат/капрат) і пропіленглікольдіолеат, або ефіри розгалужених жирних спиртів чи кислот, особливо ефіри ізостеринової кислоти. Для утворення емульсії олія використовується в комбінації з емульгаторами. Емульгаторами можуть бути неіонні сурфактанти, такі як ефіри сорбітану, маніду (наприклад, олеат ангідроманітол), 17 гліцерину, чи полігліцерину пропіленгліколя й олеїнової, ізостеринової, рицинололеінової чи гідрокистеаринової кислот, які оптично цексиліровані, чи співполімерні блоки поліоксипропіленполіоксиетилен, такі як Плюнорік (Plunoric), наприклад, L121. Серед ад'ювантів-полімерів перевага віддається полімерам перехреснозшитих акрилової і метакрилової кислоти, особливо зшитих поліалкенильними ефірами цукрів або поліспиртів. Ці препарати відомі під назвою карбомер (Pharmeuropa, vol.8, №2, червень 1996). Фахівець може також звернутися до патенту США №2 909 462, який забезпечує такий акриловий полімер, поперечно зшитий за допомогою полігідроксильної сполуки, яка має, принаймні, три гідроксильних групи, переважно не більше восьми таких груп, атоми водню, принаймні, трьох таких груп заміщені ненасиченими аліфатичними радикалами, що мають, принаймні, два атоми вуглецю. Переважно це радикали, які містять від 2 до 4 атомів вуглецю, наприклад, вініли, аліли й інші етилен-подібні ненасичені групи. Ненасичені радикали можуть також містити інші замісники, такі як метил. Продукти, що продають під назвою карбопол (BF Goodrich, Ohio, USA), особливо прийнятні. Вони поперечно зшиті алілсахарозою чи алілпентаеритриолом. Серед них можна послатися на карбопол 974Р, 934Р і 971Ρ. Кращими сополімерами, похідних алкенілмалеінового альдегіду, є ЕМА (Monsanto), які є нерозгалуженими чи поперечно зшитими сополімерами етилену і малеїнового альдегіду, і вони поперечно зшиті, приміром, дивініловим ефіром. Можна також зробити посилання на J. Fields et al., Nature 186: 778-780, червень 4,1960. Полімери акрилової і метакрилової кислоти й ЕМА утворюються переважно основними одиницями, які мають наступну формулу: у якій: R1 і R2, можуть бути однаковими або різними, і є Η чи СН3, - х=0 або 1, переважно х=1; - у=1 або 2, причому - х+у=2. Для ЕМВ х=0 і у=2 і для карбомера х=у=1. Ці полімери розчинні у воді і фізіологічних сольових розчинах (20г/л NaCI), і рН може бути доведений до 7,3-7,4, наприклад, їдким натром (NaOH), для одержання розчину ад'юванта, у який може бути включений(і) експресійний(і) вектор(и). Концентрація полімеру в кінцевій композиції вакцини може змінюватися в межах 0,01-1,5%, переважно від 0,05 до 1% (об'єм/вага) і переважно від 0,1 до 0,4% (об'єм/вага). Катіонні ліпіди (4), які містять сіль четвертинного амонію, які є переважно, але не виключно, прийнятними для плазмід, і переважно мають наступну формулу: 87815 18 у який R1, є насиченим чи ненасиченим нерозгалуженим аліфатичним радикалом, що має 12-18 атомів вуглецю, R2 є іншим аліфатичним радикалом, що містить 2-3 атома вуглецю, і X є аміно чи гідроксильною групою. Серед цих катіонних ліпідів, кращими є DMRIE (N-(гідроксиетил)-N,N-диметил-2,3біс)тетрадецилокси)-1-пропан амонію; WO96/34109), переважно асоційований з нейтральним ліпідом, переважно DOPE (діолеілфосфатидилетаноламін; Behr J.P., 1994, Bioconjugate Chemistry, 5, 382-389) з утворенням DMRIE- DOPE. Переважно суміш формується імпровізовано і переважно синхронно з введенням препарату чи незабаром після введення препарату: наприклад, суміш плазміда-ад'ювант формується незадовго до чи перед введенням, переважно так, щоб дати досить часу до введення, щоб суміш утворила комплекс, наприклад, за 10 чи 60 хвилин до введення, приблизно 30 хвилин до введення. Коли є присутнім DOPE, молярне співвідношення DMRIE:DOPE складає переважно приблизно від 95:5 до приблизно 5:95, краще, близько 1:1. DMRIE чи DMRIE:DOPE ад'ювант:плазмида молярне співвідношення може бути між близько 50:1 і близько 1:10, таке як приблизно 10:1 і близько 1:5, краще - 1:1 і близько 1:2. Цитокін чи цитокіни (5) можуть бути в білковій формі в імуногенній композиції чи вакцині або можуть спільно експресуватися в хазяїні з імуногеном чи імуногенами або його епітопом(пами). Перевага віддається спільній експресії цитокіну чи цитокінів тим же вектором, що експресує імуноген чи імуногени або його епітоп(и), чи окремому вектору. Винахід включає приготування комбінацій таких композицій, наприклад, шляхом змішування активних компонентів, переважно разом і з ад'ювантом, переносником, цитокіном, і/чи розчинником. Цитокіни, які можуть бути використані в даному винаході, включають, але не обмежуються колоніє-стимулюючим фактором гранулоцитів (GCSF), колоніє-стимулюючим фактором гранулоцитів/макрофагів (GM-CSF), інтерфероном α (INF α), інтерфероном β (INF β), інтерфероном γ (INF g), інтерлейкіном-1α (IL-1α), інтерлейкіном-1β (IL-1β), інтерлейкіном-2 (IL-2), інтерлейкіном-3 (IL-3), інтерлейкіном-4 (IL-4), інтерлейкіном-5 (IL-5), інтерлейкіном-6 (IL-6), інтерлейкіном-7 (IL-7), інтерлейкіном-8 (IL-8), інтерлейкіном-9 (IL-9), інтерлейкіном-10 (IL-10), інтерлейкіном-11 (IL-11), інтерлейкіном-12 (IL-12), фактором некрозу пухлин α (TNF α), фактором некрозу пухлин β (TNF β), трансформуючим ростовим фактором β (TGF β). Було зрозуміло, що цитокіни можуть бути введені спільно і/чи послідовно з імуногенною композицією чи з композицією вакцини даного винаходу. Так, наприклад, в окремому випадку вакцина даного винаходу може також містити молекулу екзогенної нуклеїнової кислоти, що експресує in vivo придатний цитокін, наприклад, цитокін, підібраний для того хазяїна, що був вакцинований чи в якого була виявлена імунологічна відповідь (наприклад, пташиний цитокін для препаратів, уведених птахам). 19 Винахід також забезпечує імунну відповідь або індукцію імунної чи імунологічної чи захисної відповіді, що включає в себе введення ефективних кількостей імуногенної чи вакцинної композиції, яка містить суміш спорульованих ооцист, ізольованих з рано дозріваючих ліній Е.acervulina, Ε.maxima, Ε.mitis, Ε.tenella для чи виявлення індукції відповіді у тварин. Тут переважно тварини є птахи, такі як (але не обмежуючись наступним списком) кури, качки, гуси, цесарки, павичі, фазани, голуби, перепели й індички. У більшості прийнятних утілень птахами є кури, переважно курчатабройлери. Спосіб викликання імунної відповіді чи індукції імунологічної відповіді може також включати введення ад'юванта, цитокіну або того й іншого. Ефективна кількість для викликання імунної відповіді або індукції імунологічної чи захисної відповіді складає приблизно 10-1000 ооцист Е.acervulina, приблизно 10-100 ооцист Е.maxima, приблизно 10-1000 ооцист Е.mitis і приблизно 101000 ооцист Е.tenella. Переважно ефективна кількість для викликання імунної відповіді або індукції імунологічної чи захисної відповіді складає приблизно 500 ооцист Е.acervulina, близько 50-100 ооцист Е.maxima, близько 500 ооцист Е.mitis і близько 100-500 ооцист Е.tenella. Більш доцільна ефективна кількість складає близько 500 ооцист Е.acervulina, близько 100 ооцист Е.maxima, приблизно 500 ооцист Е.mitis, і приблизно 100 ооцист Е.tenella. В іншому втіленні ефективна кількість, достатня для протистояння ударній дозі, що складає приблизно 100000-500000 ооцист Е.acervulina, близько 10000-100000 Е.maxima, близько 100000500000 Е.mitis і близько 10000-100000 Е.tenella для тварини. Переважно ударна доза складає приблизно 200000 ооцист Е.acervulina, близько 20000-50000 ооцист Е.maxima, близько 200000 ооцист Е.mitis і близько 20000-50000 ооцист Е.tenella. Ефективна кількість для викликання імунної відповіді чи індукції імунологічної або захисної відповіді також стосується конкретних співвідношень спорульованих ооцист, ізольованих з рано дозріваючих ліній Е.acervulina, Ε.maxima, Ε.mitis, Ε.tenella, де співвідношення Ε.acervulina:Ε.Maxima:Ε.Mitis:Ε.tenella складає приблизно від 10:1 до 2:10:1 до 10 (наприклад, на кожні 10 спороцист Е.acervulina приходиться близько 1-2 спороцист Е.maxima, близько 10 спороцист Е.mitis і близько 2-10 спороцист Е.tenella). Переважно співвідношення Е.acervulina:Ε.Maxima:Ε.Mitis:Ε.tenella складає приблизно 5:1:5:1 (тобто 10:2:10:2). Іншим аспектом даного винаходу є спосіб імунізації чи спосіб вакцинації з використанням імуногенних композицій чи композицій вакцин відповідно до винаходу. Спосіб включає, принаймні, одне введення тварині ефективної кількості імуногенної композиції чи вакцини відповідно до винаходу. Тварина може бути як самцем, так і самкою. Введення може бути зроблено головним чином шляхом внутрішньом1язевої (IМ), внутрішньошкірної (ID) чи підшкірної (SC) ін'єкції чи шляхом інтраназального чи орального введення, де оральне введення вклю 87815 20 чає, але не обмежується введенням до корму або питної води, гелі чи спреї. Імуногенна композиція чи вакцина відповідно до винаходу може бути введена шприцом чи безтолковим апаратом (подібно, наприклад, Pigjet чи Biojector (Bioject, Oregon, USA). Найбільш вигідним є оральне введення. Відповідно до винаходу композиції можуть бути також введені ссавцям, наприклад, мишам чи лабораторним тваринам, наприклад, для виробництва поліклональних антитіл чи для виробництва гібридом, необхідних для приготування моноклональних антитіл. Даний винахід забезпечує імунізацію тварин, переважно птахів. Спосіб введення кокцидіозних вакцин описаний у патентах США №4 438 097, 4 639 372, 4 808 404, 5 055 292, 5 068 104, 5 387 414, 5 602033, 5 614 195, 5 635 181, 5 637487, 5 674 484, 5 677 438, 5 709 862, 5 780 289, 5 780 289, 5 795 741, 5 814 320, 5 843 722, 5 846 527, 5 885 568, 5 932 225, 6 001 363 і 6 100 241, розкриття яких включено повністю у заявку як посилання. Спосіб включає введення тварині ефективної імунізуючої дози вакцини даного винаходу. Вакцина може бути введена кожним з методів, відомим фахівцю, наприклад, внутрішньом'язево, підшкірно, внутрішньочеревно, внутрішньовенно, інтраназально, орально, внутрішньошкірно, інтрабурсально in ovo чи окулярно. Методи введення відомі фахівцям, Наприклад, патенти США №5 693 622, 5 589 466, 5 580 859 і 5 566 064, що як посилання повністю включені в дану заявку. Птахам вакцина може бути введена також in ovo, як описано в патентах США №4 458 630 і 6 627 205, розкриття яких повністю включено в дану заявку як посилання. Переважно, птахам вводяться вакцини у футлярі для спреїв, тобто у футлярі (ящику), у який поміщуються птахи і піддаються впливу пару вакцини чи впливу спрея. В інших кращих втіленнях імуногенні композиції чи вакцини вводяться орально. Альтернативно, імуногенні композиції чи вакцини можуть бути введені до питної води чи в корм. Винахід охоплює імуногенну композицію, що складається із суміші спорульованих ооцист із рано дозріваючих ліній Е.acervulina, Ε.maxima, Ε.mitis, Ε.tenella. Спорульовані ооцисти з рано дозріваючих ліній Ε.acervulina, Ε.maxima, Ε.mitis, Ε.tenella ізолюються знасінної культури, описаної тут. В основному, доза спорульованих ооцист у складі - це приблизно від 10 до 1000 ооцист Ε.acervulina, приблизно від 10 до 100 ооцист Ε.maxima, приблизно від 10 до 1000 ооцист Ε.mitis і приблизно від 10 до 1000 ооцист Ε.tenella. Переважно доза спорульованих ооцист у композиції складає приблизно 125-500 ооцист Ε.acervulina, приблизно 25-100 ооцист Ε.maxima, приблизно 125-500 ооцист Ε.mitis і приблизно 25-500 ооцист Ε.Tenella. В одному втіленні найменша доза складає приблизно від 125 ооцист Ε.acervulina, приблизно 25 ооцист Ε.maxima, приблизно від 125 ооцист Ε.mitis і приблизно 25 ооцист Ε.tenella. В іншому втіленні середня доза складає приблизно 250 ооцист Ε.acervulina, приблизно 50 ооцист Ε.maxima, приблизно 250 ооцист Ε.mitis і приблизно 50 ооцист Ε.tenella. І ще в одному втіленні ви 21 сока доза складає приблизно 500 ооцист Ε.acervulina, приблизно 100 ооцист Ε.maxima, приблизно 500 ооцист Ε.mitis, і приблизно 100 ооцист Ε.tenella. Переважно доза імуногенної композиції чи вакцини складає приблизно 500 ооцист Ε.acervulina, приблизно 50-100 ооцист Ε.maxima, приблизно 500 ооцист Ε.mitis і приблизно 100-500 ооцист Ε.tenella. У більш кращому втіленні доза складає приблизно 500 ооцист Ε.acervulina, приблизно 100 ооцист Ε.maxima, приблизно 500 ооцист Ε.mitis і приблизно 100 ооцист Ε.tenella. Винахід також стосується конкретних співвідношень спорульованих ооцист із рано дозріваючих ліній Ε.acervulina, Ε.maxima, Ε.mitis, Ε.tenella, де співвідношення Ε.acervulina:Ε.maxima:Ε.mitis:Ε.tenella складає приблизно від 10:1 до 2:10:2 до 10 (тобто на кожні 10 спороцист Ε.acervulina припадає приблизно 1-2 спороцисти Ε.maxima, близько 10 спороцист Ε.mitis, приблизно від 2 до 10 спороцист Ε.tenella). Переважно співвідношення Ε.acervulina:Ε.maxima:Ε.mitis:Ε.tenella складає приблизно 5:1:5:1 (тобто 10:2:10:2). Переважно ооцисти суспендовані в консерванті, який складається з 0,01 Μ фосфатносольового буферного розчину, що містить гентаміцин. В іншому втіленні ооцисти були суспендовані в кожному з різних консервантів і органічних кислот, таких як (але не обмежуючись цим переліком) оцтова кислота, лимонна кислота, біхромат калію чи пропіонова кислота. Наприклад, але не обмежуючись цим, власне кажучи, стерильний 0,01Μ фосфатний буфер, який містить не більше, ніж 30мкг/мл гентаміцину, використовувався для одержання 2мл на пляшку для 2000 доз, 5мл на пляшку для 5000 доз і 10мл на пляшку, що містить 10000 доз. Переважно ооцисти зберігалися в стерильних пляшечках з боросилікатного скла. Наприклад, але не обмежуючись цим, ооцисти асептично поміщали в пляшку для вакцини з напівавтоматичним чи автоматичним диспенсером, чи механічно вручну вставлялися пробки, накладалися алюмінієві прокладки, і пляшки запечатувалися. Вакцина продається як така ,що має багато доз - 2000 доз на пляшечку, 5000 доз на пляшечку, 10000 доз на пляшечку чи 20000 доз на пляшечку. Термін придатності продукту не повинен перевищувати 13 місяців від дати ініціації тесту на ефективність (potency data initiation). Тварини, переважно птахи, можуть бути вакциновані в будь-якому придатному віці, і звичайно до першої вакцинації їх вік становить один-три дні. Переважно вакцинують один раз. У випадку, коли використовуються дві дози вакцини, оптимально, якщо перша вводиться тварині у віці 3 дні - тиждень і згодом після 1-10 тижнів у залежності від типу вакцинованої тварини. Застосування, дози і шлях введення для кожного виду тварин у кращому втіленні є наступними. Імуногенна композиція чи вакцина даного винаходу була використана для вакцинації здорових курчат у віці один день чи старше з метою запобігання захворювання, обумовленого кокцидіозом. 87815 22 Бажано, щоб дозування було у вигляді однієї дози на курча водного спрея з великих краплин по 20мл на 100 курчат. Тепер винахід буде описано шляхом наведення наступних (але не обмежуючих) прикладів. Приклади Приклад 1: Продукція·кокцидій Композиція продукту. Використовуваними мікроорганізмами є Ε.acervulina, Ε.maxima, Ε.mitis, Ε.tenella. Походження вихідних культур мікроорганізмів наступне. Батьківська культура Ε.acervulina була отримана від K. Jeffers at Hess and Clarck Laboratories у 1969p. і, як думають, була ізольована доктором Μ.Farr у USD A, Betsville, MD, вона походила від однієї ооцисти. Культура Ε.maxima походила зі схрещеної між собою суміші 10 очищених ізолятів, отриманих із Джорджії, Делавeра, Мериленду, Вірджинії і Техаса. Батьківська форма культури Ε.mitis була виділена в Gainesville, Джорджія в липні 1978p. і була очищена шляхом ізоляції єдиної ооцисти. Батьківська культура Ε.tenella була отримана з культури, підтримуваної в Пенсільванії (Pennsylvania State University) доктором Patten з 1960-х pp. і була куплена університетом Джорджії (University of Georgia) у 1982p. Кожна використана лінія Eimeria була рано дозріваючою лінією відповідного мікроорганізму, як описано в статті в Avian Pathology, 17: 305-314, 1988p., озаглавленій «Eimeria of American Chickens: Characteristics of Six Attenuated Strains Produced by Selection for Precocious Development,p.L. Long and Joyce K. Johnson, розкриття якої включено повністю у даний опис як посилання. Мікроорганізми були ослаблені за рахунок селекції на передчасний розвиток відповідно до цього методу. Культури. Кожна лінія Eimeria, використана в продукті, була ідентифікована завдяки унікальному зовнішньому вигляду, формі і розмірам мікроскопічно, а інфікована зона шлунково-кишкового тракту чи сліпої кишки, як описано в роботі Longp.L. and W.M. Reid, A guide for diagnosis of cocciodiosis in chickens. Re. Report 404 (Report 355 revised) Athens, GA: College of Agriculture Experiment Station, Univ. of Georgia; 1982, розкриття якої повністю включено в даний опис як посилання. Мікроорганізми були ослаблені завдяки їх селекції на передчасний розвиток, як це описано вище. Кожна культура була без патогенів, що показано тестуванням з використанням процедур, описаних у 9CFR113.37. Вихідні культури, описані вище, зберігалися в рідкій чи газовій фазі рідкого азоту. Для одержання насінної культури були використані курчата у віці 2-8 тижнів. Спосіб введення був per os (тобто, орально). Усі посіви були здійснені спорулірованими ооцистами і проводилася на курчатах SPF у віці 2-8 тижні. Призначені умови підтримувалися для кожної лінії Eimeria. Достатній об'єм спорульованих ооцист (посів) був змішаний з кормом без антикокцидіальних агентів чи був введений орально для забезпечення кожного курчати мінімальною дозою, зазначеною в таблиці 1. Спорульовані ооцисти були успішно пасирувані, без 23 87815 обмеження в пасажах, у 2-8 тижневих курчатах SPF доти, доки кількість ооцист не стала достатньою для використання їх як посів для виробництва. Культури не могли підтримуватися довше, ніж 12 місяців, для того щоб зберігалася життєздатність/інфекційність. Таблиця 1 Мінімальна доза спорульованих ооцист (посів) вид Е.acervulina Ε.maxima Ε.mitis Ε.tenella Ооцисти/курча 100-15000 100-15000 100-15000 100-15000 Фекальні краплі збирали протягом дня з третього по восьмий день після посіву. Випадковим чином обраних курчат забивали і спостерігали характеристики інфекції для кожного виду, за винятком Ε.mitis. He проводили збору, якщо не було яких-небудь зовнішніх ознак захворювання. Вихідні культури для контролю зберігалися в рідкому азоті. Продукуючі культури зберігалися при 5+3°С і пасирувались на SPF курчатах 2-8 тижневого віку. Препарати суспензій для чи посіву інокуляції були присутніми в серійних пасажах посівних культур на курчатах SPF у віці 2-8 тижнів доти, доки не напрацьовувалося досить ооцист для виробництва. Достатній об'єм спорульованих ооцист був змішаний з кормом, у якому були відсутні антикокцидіальні агенти, і введений для забезпечення кожного курчати мінімальною дозою, перерахованою в таблиці 1. Фекальні краплі були зібрані як один розчин із третього по восьмий день після інокуляції. Обраних випадковим чином курчат забивали і досліджували характеристики інфекції для кожного виду, за винятком Ε.mitis. He проводили збору, якщо не було яких-небудь зовнішніх ознак захворювання. Мікроорганізми були ослаблені шляхом селекції на передчасне дозрівання, як описано вище. Збір. До узяття мікрорганизмів з метою їх виробництва курчата утримувалися в кімнаті, призначеній для виробництва індивідуальних видів. Курчата утримувалися на дієті без антикокцидіальних агентів і мали вільний доступ до води. Фекальні краплі збиралися щодня з третього по восьмий день після інокуляції і були витримані при 5+3°С до вживання. Техніка збору мікроорганізмів з метою виробництва була наступною. Фекальні краплі гомогенізували приблизно в 10% (вага/об'єм) воді. Великі частки були вилучені шляхом пропущення гомогената крізь сітку. Тверді частки були відділені або центрифугуванням, або пропущенням крізь сітку, або витримуванням при 5+3°С протягом 24 годин. Якщо тверді частки були вилучені витримуванням при 5+3°С, вони потім були сконцентровані центрифугуванням. Супернатант був відкинутий, а частки були ресуспендовані в насиченому водному розчині NaCl (80%, вага/об'єм). Отриманий розчин було центрифуговано. Ооцисти були зібрані 24 (вилучені з поверхні рідини) і ресуспендовані у воді. Оптимально, рідина, яка залишається була розведена до 20-40% NaCl з водою і центрифугована. Осад було потім ресуспендовано у насиченому розчині NaCl і рецентрифуговано і так доти, доки виявлялися додаткові ооцисти. Ооцисти були промиті, але не більше двох разів. Ооцисти були відмиті від солі шляхом повторних циклів ресуспендування-центрифугування з наступним ресуспендуванням у 0,5% розчині гіпохлориту натрію протягом 10-15 хвилин. Потім ооцисти були відмиті від гіпохлориту натрію повторюваними (ЗХ) стадіями центрифугування і ресуспендування. Останнє ресуспендування було проведено в 2,5% водному розчині біхромату калію (K2СrO7) . Потім ооцисти були перенесені в судину для споруляції. Споруляція полегшувалася шляхом пропущення крізь суспензію повітря протягом періоду, який не перевищував 72 години, при 27±3°С. Після споруляції ооцисти тримали при температурі 5±3°С доти, доки не був зроблений кінцевий продукт. У кращому втіленні специфікації для прийнятного збору були наступними. По-перше, було визначено співвідношення спорульованих ооцист і загальної кількості ооцист. По-друге, розмір, форма і зовнішній вигляд кожного збору ооцист повинні бути характерні для виду, який мають намір продукувати. Матеріал, що відкидається і не використовується у виробництві, був ліквідований способом, узгодженим з 9CRF 114.15. Приготування продукту. Серії і суб-серії кінцевого продукту були зроблені з використанням основної маси зібраної рідини. Всі ооцисти були ослаблені, що означає - вони були рано дозріваючими, як це описано вище. Ооцисти були суспендовані в консерванті, який містить 0,01Μ фосфатно-сольового буфера, який містить не більше 30,0мкг гентаміцину. Продукт був стандартизований, даючи, принаймні, кінцеву кількість спорульованих ооцист кожного виду, як показано в таблиці 2. Таблиця 2 Стандартизована доза спорульованих ооцист Види Е.acervulina Ε.maxima Ε.mitis Ε.tenella Ооцисти на дозу 500 50 500 500 Серія була приготовлена в такий спосіб. Сумарна суспензія кожного з чотирьох видів Еіmеrіа була вилучена зі зберігання при 5+3°С, і їй дозволили нагрітися до температури навколишнього середовища при перемішуванні. Достатній об'єм кожного виду збудника був вилучений асептично, і вони були змішані таким чином, щоб забезпечити одержання не меншої кількості ооцист на дозу, ніж зазначено в таблиці 2, як було визначено розрахунками, заснованими на підрахунку мікроорганізмів у кожній порції суспензії, яка додавалася. Якщо було необхідно, складені лоти кожного виду Еіmеrіа були скомбіновані для того, щоб забезпе 25 87815 чити необхідну кількість спорульованих ооцист. Для одержання 2мл пляшечки на 2000 доз, 5мл пляшечки на 5000 доз і 10мл пляшечки на 10000 доз було використано, власне кажучи, стерильний 0,01 Μ фосфатно-сольовий буфер, який містить не більш 30мкг/мл гентаміцину. Серія зберігалася при постійному перемішуванні. Таблиця 3 Приклад серійного об'єму (заснованого на 10000000 сумарній дозі продукту, що вміщує 10000 доз) Вид Ε.acervulina Ε.maxima Ε.mitis Ε.tenella 0,01Μ PBS/гентаміцин Загальний об'єм Об'єм 7 500мл @ 1,0´10 ооцист/мл 6 300мл @ 1,67´10 ооцист/мл 6 750мл @ 6,7´10 ооцист/мл 6 1050мл @ 2,4´10 ооцист/мл 17400мл 20000мл У середньому серія, яка містить 10000 доз, мала об'єм 20-40л. Об'єм, внесений у пляшку, становив 1,0мл і вміщував 1000 доз. Пляшка з вакциною була стерильною, з боросилікатного скла. Метод і техніка заповнення і запечатування контейнерів були наступними. Вакцина була асептичним шляхом перенесена в пляшечки для вакцини напівавтоматичним чи автоматичним диспенсером. Механічно або вручну були вставлені пробки. Зверху були поміщені алюмінієві покришки, і пляшки були запечатані. Кожна доза містила кількість спорульованих ооцист не менше, ніж зазначено в таблиці 2, за розрахунками сумарного вмісту. Кожній кількості матеріалу, розлитій запечатаній в одній процедурі, було присвоєно серійний номер. Тестування. Кожна серія була перевірена на чистоту з використанням методу, описаного в CFR 113.27(e). Середній рахунок у будь-якому інкубаційному середовищі не повинен перевищувати 1 колонії на дозу. Якщо в початковому тесті середній рахунок при будь-якій інкубації перевищує одну колонію на дозу, проводиться один повторний тест 26 на вибір з використанням 20 невідкритих кінцевих контейнерів. Якщо середній рахунок у будь-яких інкубаційних умовах кінцевого теста перевищує одну колонію на дозу, серія вважається незадовільною. Було показано, що Salmonella ефективно убивається гіпохлоритом натрію і біхроматом калію, таким чином, додаткові тести не проводилися. Кожна серія була тестована на зовнішні патогени відповідно до 9CFR 113.37. Для тестування безпеки вакцини кожного, принаймні, з 25 одноденних курчат, позбавленого патогенів, було вакциновано шляхом вакцинації спреєм з 10 дозами вакцини. Курчат контролювали щодня протягом 21 доби. Курчата, що померли в цей період, були перевірені, і була визначена причина смерті. Якщо, принаймні, 20 курчат не пережили період спостереження, тест був непереконливим. Якщо будь-яке захворювання чи смерть виникли через вакцину, серія була незадовільною. Невеликі ушкодження кишечника, характерні для вакцини, розглядалися як нормальні і не впливали на визначення цінності тесту. Якщо менше 20 курчат виживали за період спостереження і не було зафіксовано смертей чи серйозних ушкоджень, викликаних вакциною, тест на вибір повторювався один раз. Якщо тест не повторювався, серія визнавалася незадовільною. Перша серія кінцевого продукту, зробленого в кожній новій партії продукції, була перевірена на ефективність. Продукт був тестовано на бройлерах чи SPF курчатах у віці 1-14 днів. Наступні серії, отримані з продукції, були оцінені на ефективність з використанням пре-редактованого рахунку, зазначеного вище, і виявлення ооцист у інокульованих птахах. Використовувалося не більше 70 курчат. Не більше ніж 35 були вакциновані per os з однією дозою вакцини. Через 26-30 днів після початкової вакцинації всі курчата були індивідуально ідентифіковані, і їхня вага була зареєстрована. Не більше ніж 10 вакцинованих і 10 контрольних з кожної групи, перерахованих вище, зазнали впливу ударної дози, введеної per os, з 1мл кожної дози, з зазначених в таблиці 4. Таблиця 4 Ударні дози Ударна доза, група 1 Ударна доза, група 2 Ударна доза, група 3 Види Е.acervulina Е.maxima Е.mitis Е.tenella Ударну дозу було обрано на основі патогенності, у якій обраний рівень давав мінімальний рахунок, принаймні, два рази. Через шість днів після введення ударної дози вакциновані і контрольні тварини з кожної групи в таблиці 4 були забиті, зважені, і кишечник і сліпа Ударна доза Від 100000 до 500000 ооцист Від 10000 до 100000 ооцист Від 100000 до 500000 ооцист Від 10000 до 100000 ооцист кишка були перевірені на ушкодження й оцінені в балах. Бали були дані відповідно до кокцидіальної бальної системи Johnson and Reid, як це описано в роботі Experimental Pathology, Vol.28, p.30-36, 1970, розкриття якої включено в даний опис повністю як посилання. Це показано в таблиці 5. 27 87815 Таблиця 5 Оцінка ушкоджень у балах Оцінка 0 +1 +2 +3 +4 Ушкодження Відсутні Помірні ушкодження Середні Серйозні Дуже серйозні ушкодження або смерть Постпрепараційна стадія. Вакцина продається як така, що містить багато доз, в пляшечках по 2000, 5000, 10000 чи 20000 доз. Накопичення, зберігання і представлення репрезентативних зразків було проведено у відповідності до 9CFR 113.3. Термін зберігання продукту не перевищував 13 місяців з дати проведення тесту на ефективність і підтверджувався відповідно до 9CFR 113.3. Застосування, дозування і шлях введення для кожного виду тварин були наступними. Цей продукт був використаний для вакцинації здорових курчат у віці 1 день з метою запобігання захворюванню, обумовленому кокцидіозом. Дозування становило одну дозу на курча за допомогою крупнокраплинного водного спрею, 20мл на 100 курчат. Приклад 2. Ефективність експериментальної вакцини, що містить ослаблені лінії кокцидій птахів у порівнянні з комерційною живою кокцидіальною 28 вакциною і саліноміцином, як антикоцидіальним агентом для комерційних птахів. Метою цього приклада було визначення ефективності ослабленої вакцини ооцист Еіmеrіа у порівнянні зі схваленою USDA живою вакциною з ооцист (Coccivac-B) для захисту курчат бройлерного типу від ударної дози вірулентних видів Еіmеrіа і порівняння використання ослабленої вакцини з традиційним антикокцидіальним агентом·саліноміцином. Мішені-змінні були наступними. Первинною мішенню була оцінка уражень кишечнику в балах. Прийнятим критерієм було мінімальне після ударної дози кокцидіальне ушкодження кишечнику в балах у порівнянні з не вакцинованими контрольними птахами, які зазнали впливу ударної дози. Другою змінною були (1) збільшення ваги і швидкості перетравлювання корму протягом 7-тижневої фази і (2) смертність. Прийнятий критерій включав рівний або більший приріст ваги і перетравлювання корму у вакцинованих птахів у порівнянні з контрольними, вакцинованими Coccivac В, або такими, яких лікували антикокцидіальним агентом, і низьку смертність у вакцинованих птахів у порівнянні з ревакцинованими контрольними птахами, вакцинованими Coccivac птахами, і таких птахів, яких лікували антикокцидіальним агентом. Матеріали. Вакцини описані в таблиці 6. Таблиця 6 Вакцини Експериментальна вакцина Вакцина Шерінг-Плау Е.acervulina, Ε.maxima, Ε.tenella, Ε.mivati Шерінг-Плау Наукова назва Е.acervulina, Ε.tenella, Ε.maxima, Ε.mitis Виробник Отримана з ослаблених ліній Лонга Ооцисти були приготовлені шляхом оральної інокуляції сприйнятливих курчат, отримання ооцист з фекалій, споруляція, підрахунок і розве- Власна інформація дення до придатної для інокуляції дози Приблизно один рік Приблизно один рік 4°-10°С - зберігання в 1,5% 4°-10°С-зберігання в 1,5% розчині біхромату калію приблизно 9 місяців розчині біхромату калію приблизно 9 місяців Полівалентна інокуляція з їх вакциною, де їх визначається як Ε.tenella Власна інформація 100 ооцист/птаха, Ε.acervulih, 500 ооцист/птаха, Ε.mitis 500 ооцист/птаха, Ε.maxima 100 ооцист/птаха Spra-Vac для орального введення Оральне введення Приготування Термін придатності Умови зберігання Доза Спосіб введення Таблиця 7 Вірулентні/ударні організми Наукова назва Е.acervulina, Ε.mitis, Ε.tenella, Ε.maxima Джерело Набір ізолятів чи вірулентних ліній Приготування Дивися таблицю 6 Умови зберігання Дивися таблицю 6 Полівалентна оральна інокуляція сприйнятливих курчат від 20000 до 50000 ооцист Ε.tenella і Доза Ε.maxima і 200000 ооцист Ε.acervulina і Ε.mitis Спосіб Оральний 29 87815 30 Таблиця 8 Тварини Види Gallus domesticus (курча) Комерційні птахи Самці і самки Один день Приблизно 400 Курчата були поміщені на ферму відразу після вакцинації Лінія/порода Стать Вік Кількість Утримання З тваринами поводились однаково, особливу увагу звертаючи на їх гарне самопочуття. Тварини утримувалися відповідно до усіх необхідних вимог. Дизайн експерименту. Дизайн експерименту був наступним. Таблиця 9 Експериментальні групи Група Вік Птахи/ повтор Повтор/ Усього Спосіб група птахів введення 1 1 день 650 2 1300 Спрей* 2 1 день 650 2 1300 Спрей* 3 1 день 650 2 1300 Ν/Α 4 1 день TBD 1 TBD Ν/Α Inoculum Обробка Експериментальна Один раз вакцина Coccivac-B Один раз 60 г/тонну в корми кожен день до 42 дня (зупинСаліноміцин ка на 28 день, коли птахів готували до ударної дози) Нeвакциновані N/A * 20мл на 100 курчат. Тимчасова шкала була наступною. У день 0 птахи були зважені в загоні. Птахи групи 1 і 2 були вакциновані, як описано в таблиці 9, з 1300 птахами на режим вакцини, розділені на 2 загони, кожний з який складав половину ферми. Птахи групи 3 стартували на саліноміцині, 60г/тонну, розділені, як описано на групу 1 і 2. Загони були стандартного розміру. На дротяних сітках було збережене додаткове маркування, що це не вакциновані курчата. На 21 день корм був замінений з початкового на корм для вирощування для всіх птахів. Саліноміцин продовжували давати групі 3. На 28 день птахи, яким повинна бути введена ударна доза, були поміщені в дротяні клітки. Саліноміцин перестали давати птахам групи 3, яким повинна бути введена ударна доза. Усі птахи і корм були зважені. Зразки свіжих фекалій були зібрані на ґрунті кожної групи у великих площадках, 20 зразків на загін. Ооцисти були охарактеризовані за видами. На 29 день птахи в клітках були піддані дії ударної дози з використанням кількості ооцист, зазначеної у таблиці 7. На 35 день птахи, піддані дії ударної дози, були забиті, ушкодження були оцінені в балах, і приріст ваги був визначений. На 42 день усі групи були переведені на нелікарський остаточний корм і були зважені. На 49 день усі птахи і корм були зважені, і експеримент був закінчений. Експериментальні процедури Вакцинація/Медикація. Три способи обробки птахів, ідентифікованих як групи 1-3 у таблиці 9, було поміщено у половині приміщень, три загони на приміщення, 650 птахів на загін, у цілому 1300 птахів на обробку. Птахи в групах з 1 по 3 були вакциновані, як описано в таблиці (9). Додаткова група (4) утримувалася окремо в чистих клітках, як не вакцинований необроблений контроль тільки для використання в тесті з ударною дозою. Групам 1, 2 і 4 давали корм без ліків. Групі 3 давали саліноміцин (60г/тону), починаючи з першого дня по 42 день. Птахам групи 3, які повинні були піддаватися дії ударної дози, давали корм без ліків після переміщення в клітки, де була обробка ударною дозою. Стартовий корм давали до 21 дня, корм для вирощування до 42 дня і кінцевий - до 49 дня. Спостереження. Птахи були зважені в загоні на 0 і 28 день і на 6 і 49 день. Мертвих птахів збирали двічі на день і була виконана некроскопія для визначення причини смерті. Зразки фекалій, зібрані на 28 день, були тестовані на життєздатні ооцисти і ідентифіковані за видами. Ударна доза. На 28 день 3 з 10 птахів з кожного загону (всього 60 на обробку) були зважені і переміщені в батарею кліток для обробки ударною дозою з польовими лініями Еіmеrіа (відповідні видам, використовуваним у вакцині). Усім птахам у клітках давали корм без медикаментів. На 29 день птахи груп 1-4 були оброблені ударною дозою і забиті на 35 день. Ушкодження, оцінені в балах, і вага були зареєстровані. Тварини були відібрані в кожну групу випадковим чином, з боксів до вакцинації їх підбирали також у випадковому порядку. Підтримувалися істот 31 87815 ні заходи безпеки для запобігання перехресного зараження між групами. Супутня медикація і менеджмент несприятливих подій. Птахи, вакциновані Coccivac, ставали хворими на 14 день експерименту. Діагноз був некротичний ентерит. Агент, який спричинив хворобу, був ідентифікований як Clostridium sordelli. Усім птахам в експерименті був уведений пеніцилін G для зменшення зараження і його ефектів між загонами і для елімінації розходжень в обробці серед груп, що могли змінити результати кокцидіозу. Аналіз даних Критерії для вимірювань. Первинними змінними для фази «загін з настилом» були жива вага на 28 і 49 дні і переварювання корму на 49 день. Для фази обробки ударною дозою, первинними змінними були приріст ваги за шість днів після введення дози й ушкодження, оцінені в балах, верхнього, середнього і заднього відділів кишечнику також на шостий день після ударної дози. Статистичний аналіз. Весь статистичний аналіз був проведений з використанням SA, Саrу, NC (версія 8.2). Статистична значимість була заснована на дво-хвостових тестах нуль гіпотези, яка була перевірена в цьому дослідженні, результуюче значення p - 0,05 або менше. Оцінка ушкоджень кишечника. Інциденти і важкість (бальність) кокцидіальних ушкоджень кишечника після ударної дози були проаналізовані з використанням логіт-моделі з факторами обробленої групи і блоком і/чи моделлю аналізу виживання з факторами обробленої групи і блоком (залежно від природи даних). Смертність. Якщо смертність відносилася до вірулентних ліній Еіmеrіа при ударній дозі, був проведений ANOVA (тобто аналіз розбіжностей) з факторами оброблених груп і блоком, якщо існу 32 вали значні розходження між значеннями загальної смертності (незалежно від дня, коли це мало місце) для кожної обробленої групи. Приріст ваги і перетравлювання Фаза «загін з настилом». У межах оброблених груп був проведений спарений t-тест (блок і ціла група, без розгляду ефекту блоку) для визначення, чи існують значні розходження в середній живій вазі всередині кожної групи. Спарені порівняння включали вагу на 0 день проти 28 дня (перед ударною дозою) і 28 день проти 49 дня (після ударної дози). Спарені t-тести (блоком і як ціла група без значного ефекту блоку) були проведені для визначення, є чи значні розходження в середній вазі перетравлювання їжі всередині кожної обробленої групи. Спарені порівняння включали дні 28 проти 49 дня ваги переварювання корму (ефект вирішального корму без медикаментів). Між обробленими групами повторні виміри ANOVA з факторами оброблених груп, удень, блоком і взаємодією група/день були використані для визначення, чи існують значні розходження в середній живій вазі між групами, і вага була зареєстрована в усі дні. Фаза ударної дози. Усередині оброблених груп були проведені спарені t-тести (блоком і цілою групою, без значного ефекту блоку) для визначення, чи є значні розходження в середній живій вазі в межах кожної групи. Спарені порівняння включали вагу на 28 день проти 35 дня (6 днів після ударної дози). Аналізи показників середньої живої ваги між обробленими групами після ударної дози були проведені з використанням результатів аналізу між обробленими групами для фази підлоги з настилом з фокусуванням на порівнянні на 28 день і 35 день. Результати Таблиця 10 Сумарні дані 28 дня Обробка Експериментальна вакцина Coccivac Саліноміцин Середня жива вага 1,41 1,39 1,45 % смертності (NE)* 0,23 11,77 0,46 % усієї смертності 2,69 15,69 3,76 Переварювання корму 1,429 1,453 1,383 Таблиця 11 Сумарні дані 28 дня Обробка Експериментальна вакцина Coccivac Cаліноміцин Середня жива вага самців Середня жива Середня загальна Перетворення % смертності вага самок жива вага їжі NE % смертності загальний 3,21 2,62 2,90 1,84 0,23 4,69 3,11 3,17 2,55 2,63 2,82 2,90 1,92 1,86 11,76 0,53 17 5,38 33 87815 34 Таблиця 12 Результати введення ударної дози Початкова Кінцева вага вага Обробка Негативний контроль Контроль ударної дози Екс. вакцина Coccivaс Саліноміцин 6-денний Ушкодження Ушкодження прирісτ верхнього середнього ваги відділу відділу Ушкодження нижнього відділу TLS 1 ATLS 2 % смертність від кокцидіозу 1425,55 аб 1849,72 а 424,17 а 0,00 в 0,00 г 0,00 г 0,00 г 0,00 г 0 1396,95 б 1538,75 б 141,80 в 2,48 а 3,43 а 2,38 б 8,30 а 2,77 а 6,67 1459,60 аб 1777,53 а 317,93 б 1469,68 1851,53 а 381,85 а 1435,47 аб 1488,97 б 53,50 г 0,78 б 0,85 б 2,50 а 1,30 в 0,93 в 2,90 б 2,17 б 0,55 в 3,25 а 5,25 б 2,33 в 8,65 а 1,42 б 0,78 в 2,88 а 0 0 0 60 птахів були оброблені ударною дозою. * Значення статистичних розходжень по групах, а, б, в, г є поділом середніх за Дунканом (тест Дункана є статистичним hoc тестом для поділу середніх значень). 1 є загальним балом ушкоджень. 2 є середнім загальним балом ушкоджень. Обговорення. При використанні ударної дози Ε.maxima, Ε.acervulina, Ε.mitts не було виявлено значних розходжень у балах ушкоджень між експериментальною вакциною і вакциною Coccivac. Coccivac мав більш низькі бали ушкоджень для Ε.tenella у порівнянні з експериментальними лініями. Важливо відзначити, що птахи, вакциновані Coccivac, ставали інфікованими Clostridium sordelli. Клостридіальна хвороба була пов'язана з інфекцією кокцидіозом. Незважаючи на те, що інфекція не поширюється на інші обробки, вакциновані Coccivac птахи були більш уразливими, демонструючи 11,77% смертність. Комп’ютерна верстка Т. Чепелева Висновок. Було показано, що експериментальні лінії Еіmеrіа є ефективними проти вірулентних форм. Птахи, вакциновані експериментальною лінією, мали кращі показники, що визначено за швидкістю перетравлювання їжі, коли порівнювати з птахами, обробленими Coccivac і саліноміцином на 49 день, що демонструє економічну перевагу для виробника птаха. Маючи в деталях цей опис кращого втілення даного винаходу, зрозуміло, що винахід не обмежений певним набором деталей у приведеному описі, оскільки багато видимих їх варіацій можливі без втрати духу і рамок даного винаходу. Підписне Тираж 28 прим. Міністерство освіти і науки України Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна ДП “Український інститут промислової власності”, вул. Глазунова, 1, м. Київ – 42, 01601
ДивитисяДодаткова інформація
Назва патенту англійськоюImmunogenic or vaccine composition for protection against coccidiosis and method for inducing an immunological or protective response in chickens
Автори англійськоюMcdougald Larry R., Alberta Fuller L.
Назва патенту російськоюИммуногенная или вакцинная композиция для защиты от кокцидиоза и способ индуцирования иммунного ответа у цыплят
Автори російськоюМакдугалд Лери Р., Фулер Алберта Л.
МПК / Мітки
МПК: A61P 33/00, A61K 39/012
Мітки: кокцидіозу, курчат, композиція, вакцинна, спосіб, імунної, відповіді, захисту, імуногенна, індукування
Код посилання
<a href="https://ua.patents.su/17-87815-imunogenna-abo-vakcinna-kompoziciya-dlya-zakhistu-vid-kokcidiozu-ta-sposib-indukuvannya-imunno-vidpovidi-u-kurchat.html" target="_blank" rel="follow" title="База патентів України">Імуногенна або вакцинна композиція для захисту від кокцидіозу та спосіб індукування імунної відповіді у курчат</a>
Вакцинна композиція проти респіраторно-синцитіального вірусу, спосіб стимулювання імунної системи індивідуума для індукції захисту проти респіраторно-синцитіального вірусу
Номер патенту: 41315
Опубліковано: 17.09.2001
Автори: Ченок Роберт Мєрріт, Мьорфі Брайєн Роберт, Любек Майкл Девід, Коннорс Марк, Хсу Куо-хом Лі, Селлінг Бернард Х'ю, Девіс Алан Роберт, Крауе Джеймс Ерл
МПК: A61P 31/12, A61K 39/155, A61P 31/14, C12N 7/04, C12N 7/00
Мітки: захисту, вірусу, респіраторно-синцитіального, імунної, стимулювання, індивідуума, композиція, вакцинна, спосіб, індукції, системі
Формула / Реферат:
1. Вакцинная композиция против респираторно-синцитиального вируса, включающая чувствительный к температуре (ts) мутант вируса, отличающаяся тем, что содержит в физиологически приемлемом носителе один аттенуированный респираторно-синцитиальный вирус, по меньшей мере, с двумя аттенуирующими мутациями, который выбран из чувствительных к температуре мутантов пассированного на холоде респираторно-синцитиального вируса с ограниченным кругом хозяев...
Спосіб стимуляції імунної відповіді, композиція, що містить імуностимулюючу нуклеїнову кислоту, спосіб лікування раку та спосіб лікування або профілактики алергії або астми
Номер патенту: 77152
Опубліковано: 15.11.2006
Автори: Фолльмер Йорг, Шеттер Крістіан, Кріг Артур М.
МПК: A61P 37/08, A61P 37/04, A61K 39/39, A61K 31/7088, A61P 35/00
Мітки: кислоту, астми, стимуляції, містить, профілактики, імунної, композиція, відповіді, імуностимулюючу, раку, алергії, нуклеїнову, спосіб, лікування
Формула / Реферат:
1.Спосіб стимуляції імунної відповіді, що включає в себе введення збагаченої піримідином імуностимулюючої нуклеїнової кислоти суб'єкту, відмінному від гризунів, у кількості, ефективній для індукції імунної відповіді у суб'єкта, відмінного від гризунів, в якому нуклеїнова кислота являє собою тимідин (Т)-збагачену нуклеїнову кислоту, яка містить більше 60% Т і містить динуклеотид CpG.2.Спосіб за п.1, де Т-збагачена імуностимулююча...
Спосіб вакцинації свійської птиці проти кокцидіозу
Номер патенту: 28012
Опубліковано: 16.10.2000
Автори: Файндлі Роберт Крейг, Еванс Найджел Ентоні, Вебер Фредерік Генрі
МПК: A61K 39/012
Мітки: спосіб, птиці, свійської, вакцинації, кокцидіозу
Текст:
...до 107 спороцист или ооцист или их смесь, в которой общее количество названных спороцист и ооцист варьирует от 105 до 107 Другая предпочтительная доза включает от 104 до 106 спороцист или ооцист или их смесь, в 28012 которой общее количество названных спороцист и ооцист варьирует от 104 до 106 Другая предпочтительная доза включает от 103 до 106 спороцист или ооцист или их смесь, в которой общее количество названных спороцист и ооцист...
Спосіб вакцинації птиці in ovo проти кокцидіозу
Номер патенту: 41381
Опубліковано: 17.09.2001
Автори: Еванс Найджел А., Вебер Фредерік Х., Фіндлі Р.Крейг
МПК: A61D 99/00, A61K 39/002
Мітки: спосіб, вакцинації, кокцидіозу, птиці
Формула / Реферат:
1. Способ вакцинации птицы против кокцидиоза, предусматривающий инъекцию эффективной иммунизирующей дозы вакцины, содержащей иммуноген Eimeria in ovo в последней четверти инкубации, отличающийся тем, что в качестве иммуногена указанной вакцины используют живые спорозоиты или мерозоиты или их смесь.2. Способ по п.1, отличающийся тем, что доза содержит от 10 до 106, или от 103до 106, или от 102 до 105 спорозоитов или мерозоитов,...
Спосіб корекції імунної відповіді
Номер патенту: 60667
Опубліковано: 15.10.2003
Автори: Куценко Неля Леонідівна, Боброва Нелля Олександрівна, Кайдашев Ігор Петрович, Мамонтова Тетяна Василівна
МПК: A61K 38/00
Мітки: спосіб, імунної, корекції, відповіді
Формула / Реферат:
Спосіб корекції імунної відповіді, що включає вплив фармакологічних речовин, який відрізняється тим, що як фармакологічні речовини використовують антилейкотрієни та антигістамінні препарати 2-го покоління.
Попередній патент: Заклепувальний кріпильний засіб з головкою (варіанти)
Наступний патент: Система передачі даних з рознесенням за часом (варіанти)
Випадковий патент: Спосіб визначення патогенетичного чинника у виникненні поліпозних риносинуїтів