Спосіб підвищення цитотоксичності хіміотерапевтичного агента та спосіб підвищення цитотоксичності днк-алкілувального хіміотерапевтичного агента

1 Способ увеличения цитотоксичности химиотерапевтического агента в отношении солидных опухолей, восприимчивых к лечению указанным химиотерапевтическим агентом, включающий введение млекопитающему с такой опухолью усиливающего цитотоксичность количества соединения, имеющего формулу в которой X представляет водород, (1-4С) углеводородный радикал, (1-4С) углеводородный радикал, замещенный ОН, NH2, NHR, NRR, (1-4C) алкокси или галогеном, галоген, ОН, (1-4С) алкокси, NH2, NHR или NRR, в которых каждый R независимо выбран из следующих групп (1-4С) низший алкил, (1-4С) низший ацил, (1-4С) низший алкил или (1-4С) низший ацил, замещенный ОН, NH2, вторичной (1-4С) алкиламино, третичной (1-4С) диалкиламино группами, (1-4С) алкокси или галогеном, и когда X представляет NRR, оба R, взятые вместе непосредственно или через кислородный мостик, образуют морфолиновое, пиперидиновое или пирролидиновое кольцо, п равно 0 или 1, и Y1 и Y2 представляют независимо водород, нитро, галоген, (1-14С) углеводородный радикал, включая циклические, ациклические и ненасыщенные углеводородные радикалы, необязательно замещенные одним или двумя заместителями, выбранными из группы галоген, гидрокси, эпокси, (14С) алкокси, (1-4С) алкилтио, первичный амино (NH2), вторичный (1-4С) алкиламино, третичный (1-4С) диалкиламино, в котором два алкила связаны вместе, образуя морфолиновое, пирролидиновое или пиперидиновое кольцо, (1-4С) ацилокси, (1-4С) ациламидо и его тиоаналоги, (1-4С) ацетиламиноалкил, карбокси, (1-4С) алкоксикарбонил, карбамил, (1-4С) алкилкарбамил, (1-4С) алкилсульфонил или (1-4С) алкилсульфонил, в котором углеводородный радикал может необязательно прерываться одной эфирной (-О-) связью, или в котором Y1 и Y2 независимо представляют морфолино, пирролидино, пиперидино, NH2, NHR', NR'R1, O(CO)R', NH(CO)R', O(SO)R' или O(POR')R', в которых R' представляет (1-4С) углеводородный радикал, который может быть замещен ОН, NH2, вторичным (1-4С) алкиламино, третичным (1-4С) диалкиламино, морфолино, пирролидино, пиперидино, (1-4С) алкокси или галогеном, или фармакологически приемлемой соли названного соединения, отличающийся тем, что указанное соединение вводят примерно за 0,5 - 24 часа до введения или примерно через 1 - 2 часа после введения химиотерапевтического агента 2 Способ по п 1, отличающийся тем, что в соединении формулы I X представляет водород, первичный амино (NH2), незамещенный (1-4С) углеводородный радикал с прямой или разветвленной цепью или замещенный (1-4С) углеводородный радикал с прямой или разветвленной цепью, п равно 1,и О 1 00 49787 Y1 и Y2 независимо представляют водород, нитро, карбокси, алкоксикарбонил или алкоксисульфонил 3 Способ по п 2, отличающийся тем, что применяют соединение, выбранное из следующей группы 1,2,4-бензотриазин 1,4-диоксид, З-амино-1,2,4-бензотриазин 1,4-диоксид, З-этил-1,2,4-бензотриазин 1,4-диоксид, 3-пропил-1,2,4-бензотриазин 1,4-диоксид и 3-(1 -гидроксиэтил)-1,2,4-бензотриазин 1,4диоксид 4 Способ по п 3, отличающийся тем, что применяют 1,4-диоксид З-амино-1,2,4-бензотриазина 5 Способ по п 1, отличающийся тем, что в качестве химиотерапевтического агента применяют ДНК-алкилирующий химиотерапевтическии агент 6 Способ по п 5, отличающийся тем, что в качестве ДНК-алкилирующего агента применяют цисплатин 7 Способ по п 1, отличающийся тем, что названное соединение вводят примерно за 1 - 18 часов до введения названного химиотерапевтического агента 8 Способ по п 7, отличающийся тем, что названное соединение вводят примерно за 2 - 3 часа до введения названного химиотерапевтического агента 9 Способ увеличения цитотоксичности ДНКалкилирующего химиотерапевтического агента по отношению к раковой опухоли, включающий введение млекопитающему с такой опухолью усиливающего цитотоксичность количества соединения, имеющего формулу, определенную в любом из пп 1-4, или его фармакологически приемлемой соли в количестве, усиливающем цитотоксичность, отличающийся тем, что указанное соединение вводят приблизительно за 0,5 - 24 часа до введения или примерно через 1 - 2 часа после введения химиотерапевтического агента 10 Способ по п 9, при котором названный химиотерапевтическии агент является алкилирующим агентом, определенным в пп 5 или 6 11 Способ по п 9, при котором названное соединение вводят приблизительно за 1 - 18 часов до введения названного химиотерапевтического агента 12 Способ по п 11, при котором названное соединение вводят приблизительно за 2 - 3 часа до введения названного химиотерапевтического агента Настоящее изобретение относится к области лечения злокачественных опухолей В частности, настоящее изобретение относится к лечению раковых опухолей комбинациями химиотерапевтичееких агентов и оксидов 1,2,4-бензотриазина Большинство обычно применяемых противораковых лекарств являются более цитотоксичными по отношению к нормально снабжаемым кислородом опухолевым клеткам по сравнению с гипоксичными опухолевыми клетками Широко известна также резистентность гипоксичных клеток к облучению Следовательно, гипоксия опухолей и, как результат, их резистентность к лечению имеют большое значение в проблеме лечения рака Солидные раковые опухоли содержат как адекватно оксигенированные клетки, так й различные количества неадекватно оксигенированных или гипоксичных клеток Гипоксию обычно наблюдают в тех случаях, когда опухолевые клетки расположены вдали от кровеносных сосудов Такие клетки имеют также тенденцию к замедленной пролиферации Считается, что резистентность гипоксичных клеток к противоопухолевым препаратам происходит вследствие неадекватного поглощения ими лекарственного агента, а также вследствие их медленного роста и удаленности от кровеносных сосудов, приносящих лекарственный агент, однако это явление еще не получило исчерпывающего объяснения Таким образом, относительная доля гипоксичных клеток в опухоли может иметь огромное значение для результативности лечения Резистентные гипоксичные клетки, которые выживают после облучения или лекарственного лечения, могут быть реоксигенированы, восстанавливая, таким образом, чувствительность опухоли к дальнейшему лечению Тем не менее, вместо того, чтобы рассчитывать на такие неопределенные явления, желательно разрабатывать такие способы лечения рака, при которых раковые клетки, включая гипоксичные, инактивируются или погибают непосредственно в ходе применяемой терапии Патент США 5 175 287 раскрывает применение оксидов 1,2,4-бензотриазина в сочетании с облучением для лечения опухолей Оксиды 1,2,4-бензотриазина сенсибилизируют опухолевые клетки к действию радиации, вследствие чего они становятся более восприимчивыми к этому способу лечения Holden и др (1992) в статье "Enhancement of Alkylatmg Agent Activity by SR-4233 in the FSaLLC Munne Fibrosarcoma" JNCI 84 187-193 раскрывают применение вещества SR-4233, известного так же, как тирапазамин, в сочетании с противоопухолевым алкилирующим агентом Каждый из четырех противоопухолевых алкилирующих агентов, цисплатин, циклофосфамид, кармустин и мелфалан, применялся для проверки способности тирапазамина преодолевать резистентность гипоксичных опухолевых клеток к противоопухолевым алкилирующим агентами Тирапазамин испытывали отдельно и в сочетании с различными количествами каждого из этих противоопухолевых алкилирующих агентов В случаях, когда тирапазамин применяли непосредственно перед воздействием разовой дозы 49787 циклофосфамида, кармустина или мелфалана, наблюдали заметное усиление действия этой дозы, ведущее к синергистическим цитотоксическим воздействиям на опухолевые клетки В случаях, когда тирапазамин применяли непосредственного перед введением разовой дозы цисплатина, усиление дозы приводило только к дополнительному эффекту, за исключением наивысших доз цисплатина Нитроимидазольные цититоксические агенты комбинировали с различными противораковыми лекарствами и обнаружили, что терапевтическое усиление эффекта достигалось, когда эти агенты применялись в сочетании с различными противораковыми лекарствами, в частности, с алкилирующими агентами, циклофосфамидом и мелфаланом, и нитрозомочевинами, в CNU и CCNU Однако, позже обнаружили, что дополнительный терапевтический эффект не являлся следствием избирательного действия нитроимидазолов на гипоксичные клетки, приводящего к гибели последних, а возникал благодаря механизму, усиливающему образование поперечных сшивок ДНК метаболитами - нитроимидазолов, индуцированное алкилирующим агентом (Murray и др , (1983) Br J Cancer 47 195-203) В настоящем документе описан способ лечения раковых опухолей, в частности, твердых, который включает введение млекопитающим, нуждающимся в таком лечении, эффективного количества соединения формулы 1 о где X представляет водород, (1-4С) углеводородный радикал, (1-4С) углеводородный радикал замещенный ОН, NH2, NHR, NRR, (1-4С)алкокси или галогеном, галоген, ОН, (1-4С)алкокси, NH2, NHR или NRR, в который каждый R независимо выбирают из следующих низший алкил (1-4С), низший ацил (1-4С), низший алкил (1-4С) и низший ацил (1-4С), замещенный ОН, NH2, вторичными (14С)алкил и третичными (1-4С)диалкил аминогруппами, (1-4С)алкокси или галогеном, и когда X представляет NRR, оба R могут быть связаны между собой непосредственно или через кислородный мостик, образуя морфолиновое, пирролидиновое или пиперидиновое кольцо, п равно 0 или 1, и Y1 и Y2 независимо друг от друга представляют водород, нитрогруппу, галоген, (1-4С) углеводородный радикал, включая циклические, ациклические и ненасыщенные углеводородные радикалы, необязательно замещенные одним или двумя заместителями, выбранными из следующей группы галоген, гидрокси, эпокси (1-4С)алкокси, (1-4С)алкилтио, первичный амино (NH2), вторич ный (1-4С)алкил амино, третичный (1-4С)диалкил амино, третичный (1-4С)диалкил амино, в котором два алкила связаны вместе, образуя морфолиновое, пирролидиновое или пиперидиновое кольцо, (1-4С)ацилокси, (1-4С)ациламидо и его тиоаналоги, ацетиламиноалкил (1-4С), карбокси, алкоксикарбонил (1-4С), карбамил, (1-4С)алкилкарбамил, (1-4С)алкилсульфонил или (1-4С)алкилфосфонил, где углеводородная цепь необязательно может прерываться одной эфирной (-0-) связью, и где Y1 и Y независимо друг от друга представляют морфол ино, пиррол ид ино, пиперидино, NH2, NHR', NR'R1, O(CO)R', NH(CO)R', O(SO)R', или O(POR')R', в котором R' является (1-4С) углеводородным радикалом, который может быть замещен ОН, NH2, вторичным (1-4С) алкил амино, третичным (1-4С) диалкил амино, морфолино, пирролидино, пиперидино, (1-4С) алкокси или галогеном, или фармакологически приемлемых солей названного соединения, и введение млекопитающим 9 спустя примерно от получаса до 24 часов после введения соединения формулы 1, определенного выше, эффективного количества химиотерапевтического агента, к которому чувствительна (восприимчива) данная опухоль Согласно настоящему изобретению, предоставляется способ повышения цитотоксичности химиотерапевтического агента по отношению к твердой опухоли, восприимчивой к лечению названным химиотерапевтическим агентом, который включает введение млекопитающим с такими опухолями примерно от получаса до 24 часов до введения или примерно от 1 до 2 часов после введения химиотерапевтического агента, увеличивающего цитотоксичность количества названного соединения формулы 1, определенного выше Описан также способ лечения раковых опухолей млекопитающих, включающий введение млекопитающим соединения формулы 1, определенного выше, спустя один - два часа после введения химиотерапевтического агента Было обнаружено, что введение вышеназванного соединения формулы 1, как до, так и после введения химиотерапевтического агента, убивало раковые клетки в значительно большем количестве, чем введение каждого агента по отдельности или обоих агентов одновременно Например, когда тирапазамин вводили до 24 часов перед введением цисплатина, обнаружили, что раковых клеток погибало в 10 - 1000 раз больше, чем в том случае, когда тирапазамин и цисплатин вводили одновременно Наибольший синергистический эффект этого сочетания агентов обнаруживали, когда тирапазамин вводили за 2,5 часа до введения цисплатина Заявленный способ представляет огромное увеличение противоопухолевой эффективности химиотерапевтического агента ( т е , его цитотоксического действия на опухолевые клетки) Помимо этого, при испытаниях на системную токсичность цисплатина (азот мочевины в сыворотке крови и острая токсичность) в комбинации, при максимальной эффективности по отношению 49787 к опухоли, обнаружили почти отсутствие усиления или полное отсутствие усиления системной токсичности по сравнению с цисплатином, который вводился один Таким образом, большая часть, если не вся дополнительная гибель опухолевых клеток, выражается в терапевтическом улучшении при использовании этого сочетания Синергистическое взаимодействие тирапазамина и цисплатина также является важным, поскольку большое возрастание гибели опухолевых клеток достигалось при относительно низких дозах цисплатина Еще одним аспектом настоящего изобретения является применение соединения формулы 1, способного усиливать цитотоксическии эффект в отношении раковой опухоли, или его фармакологически приемлемой соли, для производства лекарственного препарата, который применяется для лечения млекопитающих и вводится за 0,5 24 часа до начала лечения данной опухоли химиотерапевтическим агентом Настоящее изобретение более конкретно описывается в приводимых предпочтительных вариантах практического осуществления, в последующем описании, которые, однако, не должны истолковываться как ограничительные Рисунок 1 графически изображает зависимость относительного количества клоногенных клеток на опухоль в экспериментальных опухолях RIF-I от времени (от -3 до +2 часов) введения тирапазамина по отношению к времени введения цисплатина Рисунок2 графически изображает зависимость относительного количества клоногенных клеток на опухоль в экспериментальных опухолях RIF-I от времени (от -24 до 0 часов) введения тирапазамина по отношению к времени введения цисплатина Для способа лечения раковых опухолей млекопитающих, включая раковые опухоли человека, в частности твердые опухоли, термин "чувствительность опухоли к химиотерапевтическому агенту" означает, что названный химиотерапевтический агент способен демонстрировать терапевтический эффект в отношении этой опухоли с помощью любого механизма, такого как гибель опухолевых клеток, уменьшение клеточной пролиферации или уменьшение размера опухоли "Эффективное количество" соединения формулы 1, упоминаемое здесь, относится к количеству, способному убивать опухолевые клетки, или к количеству, способному убивать опухолевые клетки, в сочетании с химиотерапевтическим агентом "Эффективное количество" химиотерапевтического агента относится к такому его количеству, которое способно убивать раковые клетки или иным образом оказывать терапевтическое воздействие, например, уменьшая размер опухли или замедляя рост и пролиферацию опухолевых клеток Для способа увеличения цитотоксичности химиотерапевтического агента по отношению к твердой опухоли, чувствительной к этому химиотерапевтическому агенту, термин "количество, усиливающее цитотоксичность относится к такому количеству соединения формулы 1, которое способно увеличивать цитотоксическое воздействие химиотерапевтического агента на клетки Предпочтительно, количество, усиливающее цитотоксичность, является достаточным для проявления синергистического эффекта, т е , эффект больше, чем сумма эффектов химиотерапевтического агента и соединения формулы 1, когда они применяются по одному Количества соединения формулы 1, усиливающие цитотоксичность, можно установить испытаниями подобных соединений с химиотерапевтическими агентами (агентом) in vivo и/или in vitro на экспериментальных моделях опухолей, описанных здесь, или на любой другой модели опухоли, известной специалистам Количество, усиливающее цитотоксичность, которое определялось на экспериментальных моделях опухолей in vivo" И in vitro, затем используется как руководство для определения количеств двух агентов, которые будут применяться для лечения опухолей млекопитающих В настоящее время считается, что комбинация бензотриазинового химиотерапевтического агента формулы 1, описанного выше, который является цитотоксичным по отношению к гипоксичным раковым клеткам, и химиотерапевтического агента, обладающего наибольшей активностью в отношении нормально оксигенируемых раковых клеток, обеспечивает усиленную или синергистическую гибель опухолевых клеток Оксиды бензотриазинов формулы 1, в частности, требуют более низкую, чем нормальная, концентрацию, кислорода для проявления своего действия Эта потребность в гипоксии является большим преимуществом, поскольку она обеспечивает основу для опухолеспецифичного взаимодействия между двумя лекарственными агентами Обычно нормальные ткани существуют при концентрации кислорода свыше 10 - 15мм рт ст При этих и более высоких парциальных давлениях кислорода цитотоксическии эффект тирапазамина очень мал С другой стороны, многие опухоли имеют значительное количество клеток, существующих при концентрациях кислорода ниже 10мм рт ст, при таких парциальных давлениях метаболизм тирапазамина и других бензотриазинов формулы 1 для цитотоксических видов сильно возрастает Применяемый здесь термин "гипоксические опухолевые клетки" относится к опухолевым клеткам, существующим при парциальном давлении кислорода менее 10мм рт ст Способы, описанные в настоящем документе, являются полезными для лечения раковых опухолей млекопитающих, включая человека, в частности, для лечения твердых опухолей, имеющих гипоксичные участки Примеры таких опухолей включают, но не исчерпываются этим перечнем, адренокарциономы, глиобластомы (и другие опухоли мозга), опухоли груди, шейки матки, толстой и прямой кишки, эндометрия, желудка, печени, легких (мелкоклеточные и не мелкоклеточные), лимфомы (включая не 49787 Ходжкина, Беркитта, диффузные гигантоклеточные, фолликулярные и диффузные Ходжкина), меланому (метастатическую), нейробластому, остеосаркому, опухоли яичника, ретинобластому, мягкие тканевые саркомы, опухоли семенника и другие опухоли, которые поддаются химиотерапии Таким образом, способы настоящего изобретения могут применяться для лечения раковых опухолей, включая экспериментально индуцированные раковые опухоли, у любого вида млекопитающих, включая человека, наиболее часто используемых лабораторных животных, таких как крысы, мыши, кролики и собаки, приматов, таких как обезьяны, лошадей, кошек и других животных Способы, описанные в настоящем описании, можно практиковать с любым типом химиотерапевтических агентов В любом практическом варианте осуществления настоящего изобретения химиотерапевтический агент нужно подбирать с учетом многих факторов, таких как тип раковой опухоли или эффективность, химиотерапевтического агента для лечения именно этого типа опухоли Химиотерапевтический агент можно выбирать из алкилирующих агентов, антиметаболитов, природных продуктов, гормонов и антагонистов и других типов соединений Примеры алкилирующих агентов включают 2хлорэтиламины, такие как например, хлорметин, хлорамбуцил, мелфалан, урамустин, манномустин, экстрамустин фосфат, мехлор-таминоксид, циклофосфамид, ифозамид и трифосфамид, алкилирующие агенты с замещенной азиридиновой группой, такие как, например, третамин, тиотепа, триазиквон и митомицин, алкилирующие агенты алкилсульфонатного типа, такие как, например, бусульфан и пипосульфан, алкилирующие производные г\1-алкил-г\1-нитрозомочевины, такие как, например, кармустин, ломустин, семустин или стрептозотоцин, алкилирующие агенты типа митобронитола, дакарбазина и прокарбазина и платиновые комплексы, такие как, например, цисплатин и карбоплатин Примеры антиметаболитов включают производные фолиевой кислоты, такие как, например, метотрексат, аминоптерин и 3'дихлорметотрексат, пиримидиновые производные, такие как, например, 5-фторурацил, флоксуридин, тегафур, цитарабин, идоксуридин и флуцитозин, пуриновые производные, такие как, например, меркаптопурин, тиогуанин, азатиоприн, тиамиприн, видарабин, пентостатин и пуромицин Примеры природных продуктов включают алкалоиды, такие как, например, винбластин и винкристин, эпиподофилотоксины, такие как, например, этопозид и тенипозид, антибиотики, такие как, например, адримицин, дауномицин, даунорубицин, дактиномицин, доксорубицин, митрамицин, блеомицин и митомицин, ферменты, такие как, например, L-аспарагиназа, модификаторы биологических ответных реакций, такие как, например, альфа-интерферон, камптотецин, таксол и ретиноиды, такие как ретиновая кислота Примеры, гормонов и антагонистов включают адренокортикоиды, такие как, например, предни 10 зон, прогестины, такие как например, гидроксипрогестерона ацетат, медроксипрогестерона ацетат и мегестрола ацетат, эстрогены, такие как, например, диэтилстилбестрол, и этинилэстрадиол, антиоэстрогены, такие как, например, тамоксифен, андрогены, такие как, например, тестостерона пропионат и флуоксиместрон, антиандрогены, такие как, например, флутамид, аналоги гонадотропин-высвобождающего фактора, такие как, например, лейпролид Примеры смешанных агентов включают антрацендионы, такие как, например, митоксантрон, замещенные мочевины, такие как, например, гидроксимочевины, адренокортикальные супрессанты, такие как, например, митотан и аминоглютетимид Помимо этого, химиотерапевтический агент может быть иммуносупрессором, таким как, например, циклоспорин, азатиоприн, сульфазалазин, метозален италидомид Химиотерапевтические агенты, полезные для практики настоящего изобретения, являются коммерчески доступными или могут быть приготовлены с помощью стандартных методик Химиотерапевтический агент можно применять отдельно или в комбинации с одним или более других химиотерапевтических агентов Например, для лечения раковых опухолей можно применять сочетание трех различных химиотерапевтических агентов и одного или более соединений формулы 1, в соответствии со способом настоящего изобретения В соединениях формулы 1 о X представляет водород, незамещенный (14С) углеводородный радикал с прямой или разветвленной цепью, такой как метил, этил, вторбутил или изопропил, галоген, гидрокси, (14С)алкокси, такой как метокси, этокси, пропокси, и трет-бутокси, первичный амино (Nbb), вторичный амино (NHR), в котором R представляет алкил или ацил с 1-4 атомами углерода, такой как метиламино или этиламино, третичный амино (NRR), в котором каждый R представляет алкил или ацил с 1-4 атомами углерода, например, диэтиламино и т п , или два R соединены, образуя морфолиновое, пирролидиновое или пиперидиновое кольцо В случае различных алкильных или ацильных R групп, последние далее могут быть замещены ОН, МШ, вторичным (1-4С)алкил низщим амино и третичным (1-4С)диалкил амино, морфолино, пирролидино, пиперидино, (1-4С) алкокси или галогеном (фтором, хлором, бромом или иодом) Углеводородные X группы могут быть в дальнейшем замещены ОН, NH2, вторичным алкил 11 амино, третичным диалкил амино, (1-4С) алкокси или галогеном (фтором, хлором, бромом или иодом) Более предпочтительно, чтобы X представлял водород, первичный амин (Nbb), незамещенный (I4С) углеводородный радикал с прямой или разветвленной цепью, или замещенный (1-4С) углеводородный радикал с прямой или разветвленной цепью п равно 0 или 1, предпочтительно, 1, Y1 и Y2 независимо друг от друга представляют водород, нитро, галоген (фтор, хлор, бром или иод), или (1-14С)углеводородный радикал Когда они являются углеводородными радикалами, Y1 и Y2 могут быть насыщенными и ненасыщенными, циклическими и ациклическими, и необязательно могут прерываться одной эфирной связью Так, незамещенными углеводородными формами Y1 или Y2 могут быть, например, метил, этил, н-пропил, втор-бутил, н-гексил, 2-метил-нпентил, 2-этоксиэтил, 3-(н-пропокси)-н-пропил, 4метоксибутил, циклогексил, тетрагидрофурфурил, фурфурил, циклогексенил, 3-(н-децилокси)-нпропил и 4-метилоктил, 4,7-д и мети локти л Углеводородные Y1 и Y группы необязательно могут быть замещены одним или двумя заместителями, выбранными из следующей группы галоген (любой), гидрокси, эпокси, алкокси (1-4С), такой как, например, метокси, н-пропокси и третбутоксм, алкилтио, (1-4С) первичный амино (Nbb), морфолино, пирролидино, пиперидино, вторичный амино (NHR1), где R' представляет 1-4С алкил, такой как метиламин, пропиламин и т п , третичный амино (NR'R1), ацилокси и ациламидо, представленные группами R'COO- И R'CONH-, соответственно, и их тиольные аналоги, представленные группами R'CSO- и R'CSNH-, соответственно, карбокси (-С(О)ОН), алкоксикарбонил (-C-(O)OR'), карбамил (-CfOJNbb), алкилкарбамил (1-4С) (-C(O)NHR'), алкилсульфонил (14С) (R'SO2) и алкилфосфонил (R'P(1-4C)(OR')O-) Помимо этого, Y1 и Y2 каждый независимо может представлять -NH2, -NHR1, -NR'R1, -OCOR1, NH(CO)R', -O(SO)R' или - O(POR')R', в которых различные R' группы представляют низшие алкилы, которые, в свою очередь, могут быть замещены ОН, NH2, вторичным и третичным алкил амино, пирролидино, пиперидино, (1-4С) алкокси или галогеном Более предпочтительно, Y1 и Y2 независимо представляют водород, нитро, карбокси, алкоксикарбонил или алкилсульфонил Особенно предпочтительные соединения формулы 1 для использования в настоящем изобретении включают 1,2,4-бензотриазин 1,4-диоксид (где X представляет водород, Y1 и Y2 оба представляют водород, а п равно 1), З-амино-1,2,4-бензотриазин 1,4-диоксид (т е , тирапазамин, где X представляет NH2, Y1 и Y2 оба представляют водород, а п равно 1), 3-этил-1,2,4-бензотриазин 1,4-диоксид (где X представляет этил, Y1 и Y2 оба представляют водород, а п равно 1), 49787 12 3-пропил-1,2,4-бензотриазин 1,4-диоксид (где X представляет пропил, Y1 и Y2 оба представляют водород,а п равно 1)и 3-(1-гидроксиэтил)-1,2,4-бензотриазин 14диоксид (где X представляет 1-гидроксиэтил, Y и Y2 оба представляют водорода, а п равно 1), особенно предпочтителен З-амино-1,2,4бензотриазин 1,4-диоксид Фармацевтически приемлемые соли соединений формулы 1 включают соли, образованные неорганическими кислотами, такими как хлористоводородная, бромистоводородная или фосфорная кислоты, органическими кислотами, такими как уксусная, пировиноградная, янтарная, миндальная и н-толуолсульфоновая кислоты, соли, образованные неорганическими основаниями, такими как гидроксиды натрия, калия или кальция или органическими основаниями, такими как кофеин, этиламин или лизин Соединения формулы 1 могут применяться перорально или парентерально (внутривенно, подкожно, внутримышечно, интраспинально, интраперитонеально и т п ) Для парентерального применения эти соединения входят в состав форм для инъекций (раствор, суспензия, эмульсия), содержащих фармацевтически приемлемый носитель Такие носители обычно не токсичны и не являются лекарственными агентами Примеры таких носителей включают воду, физиологический раствор, раствор Рингера, раствор декстрозы, раствор Хенка, и неводные растворы, такие как жирные масла (например, кукурузное, хлопковое, арахисовое и кунжутное масла), этилолеат и изопропилмиристат Стерильный физиологический раствор является предпочтительным Носитель может содержать небольшие количества добавочных веществ, таких как вещества, усиливающие растворимость, изотоничность и химическую стабильность, например, антиоксиданты, буферы и консерванты Для перорального (или ректального) применения эти соединения входят в состав соответствующих фармацевтических форм, таких как таблетки, капсулы, суппозитории или пастилки Такие рецептуры обычно включают твердый, полутвердый или жидкий носитель или растворитель Примерами таких растворителей и носителей являются лактоза, декстроза, сахароза, сорбитол, маннитол, крахмалы, аравийская камедь, фосфат кальция, нефтепродукты, масло какао, кокосовое масло, альгинаты, трагакант, желатин, метилцеллюлоза, полиоксиэтилен, сорбитана монолуарат, метил гид роксибензоат, пропил гид роксибензоат, тальк и стеарат магния Химиотерапевтический агент вводят млекопитающим стандартными способами, соответствующими конкретному химиотерапевтическому агенту Химиотерапевтический агент и соединение формулы 1 можно вводить одним и тем же способом или разными способами, в зависимости от конкретной комбинации препарата и соединения формулы 1 Млекопитающим можно вводить только одно соединение формулы 1 или же в сочетании с одним или более соединений формулы 1 13 49787 Соединения формулы 1 вводят млекопитающим в количествах, достаточных для того, чтобы произвести цитотоксическое действие или же убить гипоксичные опухолевые клетки Количество это будет зависеть от таких факторов, как тип раковой опухоли, возраст и состояние здоровья млекопитающего, максимально переносимая и/или летальная доза хими-отерапевтического агента, вид соединения формулы 1и характер взаимодействия между ним и химиотерапевтическим агентом В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения тирапазамин вводят количествах приблизительно от 10мг/м2 до 450мг/м2, более предпочтительно, приблизительно от 20мг/м2 до 350мг/м2, наиболее предпочтительно, приблизительно от 30мг/м2 до 250мг/м2 Когда соединение формулы 1 вводят млекопитающим разделенными дозами, предпочтительной может быть более низкая доза, в зависимости от максимально переносимой дозы этого соединения и его взаимодействия с химиотерапевтическим агентом Химиотерапевтический агент вводят млекопитающим в количествах эффективных для лечения чувствительных опухолей Эти количества хорошо известны специалистам и могут быть уточнены по литературным научным источникам или из приложений-инструкций к препаратам В предпочтительных вариантах осуществления изобретения химиотерапевтический агент и соединение формулы 1 воздействуют на опухоль как синергисты, и поэтому становится возможным назначать химиотерапевтический агент в дозах, которые ниже, чем если бы применяли один этот препарат Такое снижение дозы может быть желательным, если данный химиотерапевтический агент имеет тяжелые побочные эффекты Если химиотерапевтический агент должен вводиться млекопитающему разделенными дозами, достаточные количества соединения формулы 1 вводят таким образом, чтобы синергистический эффект комбинации двух агентов поддерживался, например, до первоначальной дозы химиотерапевтического агента или до каждой отдельной дозы химиотерапевтического агента Способы настоящего изобретения также могут применяться совместно с другими видами лечения рака, такими как лучевая терапия и хирургическое удаление опухоли Соединение формулы 1 предпочтительно вводят млекопитающим приблизительно за полчаса и до 24 часов до введения химиотерапевтического агента В другом варианте соединение формулы 1 можно вводить приблизительно от одного до двух часов после введения химиотерапевтического агента Для некоторых комбинаций химиотерапевтического агента и соединения формулы 1 возможно введение последнего более, чем за 24 часа до введения химиотерапевтического агента при сохранении преимуществ настоящего изобретения Разница во времени введения, обеспечиваю 14 щая наиболее высокое увеличение цитотоксичности, может быть определена посредством испытаний комбинации химиотерапевтического агента и соединения формулы 1 на экспериментальных моделях опухолей in vitro и/или in vivo подобных той, что описана ниже, или на любой другой модели опухоли Разница во времени введения препаратов, определенная на таких моделях, затем используется как ориентировочная при лечении опухолей млекопитающих, и в процессе лечения корректируется, если это необходимо Для комбинации тирапазамина и цисплатина обнаружено, что наибольшее взаимодействие между этими двумя агентами наблюдалось, когда тирапазамин вводили между 1 и 18 часами, предпочтительно, между 1 и 3 часами, наиболее предпочтительно, между 2 и 3 часами перед введением циплатина, причем наибольшая гибель клеток наблюдалась, когда тирапазамин вводили приблизительно за 2,5 часа до цисплатина Когда тирапазамин вводили 2,5 часа спустя после введения цисплатина, усиление цитотоксического эффекта также наблюдалось, однако не настолько большое Для некоторых соединений формулы 1 может быть желательным их введение одновременно с химиотерапевтическими агентами Настоящее изобретение обеспечивает также наборы для лечения опухолей млекопитающих, включающие, по меньшей мере, один химиотерапевтический агент и, по меньшей мере, одно соединение формулы 1 Соединение формулы 1 предпочтительно представлено в наборе в количествах или дозах, усиливающих цитотоксичность Удобные фармацевтические формы соединения формулы 1 раскрываются в настоящем документе Конкретная фармацевтическая форма химиотерапевтического агента и соединения формулы 1 зависит от типа раковой опухоли, предпочтительного пути введения и типа химиотерапевтического агента Химиотерапевтический агент и соединение формулы 1 предпочтительно помещают в отдельные контейнеры, чтобы облегчить введение того и другого в различное время, согласно способу настоящего изобретения Соединения формулы 1, полезные для практики настоящего изобретения, можно, приготовить согласно способам, раскрытым в патенте США 5 175 287 Основные способы приготовления 3-амино производных можно найти, например, в патенте США 3 980 779, Ley и др Эти соединения могут быть приготовлены из бензофуроксана формулы 49787 15 путем реакции с солью цианамида, с последующим подкислением реакционной смеси Бензофуроксановый исходный материал не является симметричным вследствие в отношении его 5-й 6положений (которые являются положениями 6 и 7 в полученном оксиде 3-амино бензотриазина) Следовательно, в результате может получиться смесь 6- и 7-замещенных материалов По желанию, эту смесь можно разделить на отдельные компоненты с помощью стандартных методик, имеющие заместители в 6 или в 7 положении Диоксид можно также получить из исходного монооксида или 1,2,4-бензотриазина с помощью окисления над кислотой (см Robbms и др, J Chem Soc 3186 (1957) и Mason и др, JChemSoc В 911 (1970)) Помимо этого, монооксид можно приготовить посредством (1) циклизации 1-нитро-2-аминобензольного соединения с помощью H2NCN 2HCI, (2) окисления соединения следующей структуры 16 или контролируемого восстановления соответствующего диоксида (см Mason, выше, и Wolf и др , J Am Chem Soc 76 355 (1954)) 1,2,4-бензотриазины можно приготовить путем циклизации предшественников формазана, применяя BF3/ACOH (см схему 1-й Atallah and Nazer, Tetrahedron 38 1793(1982)) З-амино-1,2,4-бензотриазины можно приготовить или циклизацией исходного соединения (см схему 11 и Arndt, Chem Ber 3522 (1913)) или восстановлением монооксида или диоксида, как описано выше 3-гидрокси-1,2,4-бензотриазина оксиды можно приготовить с использованием пероксида и вольфрамата натрия (схема 111), процедуры синтеза для получения 3-гидрокси-1,4-диоксида, или концентрированной серной кислоты и нитрата натрия (схема IV) для получения монооксида ut Sxe 1 ce I ha ei m № І!