Спосіб визначення цитотоксичності промислового пилу

ДЛЯ СЛУЖЕБНОГО ПОЛЬЗОВАНИЯ ЭКЗ СОЮЗ СОВЕТСНИХ СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСПУБЛИК «SUM, (51)4 І 365887 J* A1 G 01 N Т/28; А 61 В Ш/00 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ СССР ПО ДЕЛАМ ИЗОБРЕТЕНИЙ И ОТНРЫТИИ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ И АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 3736166/28-14 (22) 29.04.84 (71) Киевский научно-исследовательский институт гигиены труда и профзаболеваний (72) А.А.Волобоева и Л.Н.Горбань (53) 616-089,9(088.8). (56) Дориковская А.П., Кацнельсон Б.А., Бабушкина Л.Г. "К использованию метода тканевых культур для быстрой сравнительной оценки кониозоопасности промышленных пылей* . Гигиена труда и профзаболеваний. К. 1966, вып. 3, 27-32. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЦИТОТОКСИЧНОСТИ ПРОМЫШЛЕННЫХ ПЬШЕЙ (57) Изобретение относится к гигиене. Цель изобретения - повышение точности способа. Пыль разводят поддерживающей средой, размешивают, инкубируют и вводят в культуру эмбриональных фибробластов. Проводят инкубацию, готовят препараты и окрышивают их. В препаратах подсчитывают количество поврежденных клеток, определяют плотность клеток в абсолютных числах в 10 полях зрения и митотическую активность. Стойкое изменение этих показателей свидетельствует о высокой степени цитотоксичности пыли. 1 табл. (Л с ел 00 00 1-88 1 1365887 Изобретение относится к области медицины, а именно к профпатологии. Целью изобретения является повышение точности способа за счет использования клеточной культуры в период до образования сплошного монослоя, когда отмечается ее наибольшая чувствительность к повреждающему действию пьшей, и определение воздействия ве- 10 дется по критериям, характеризующим морфофункциональное состояние клеток. Предлагаемый способ осуществляют следующим образом. Испытуемые пыли разводят поддержи- 15 вающей средой (199 среда) с пятикратным шагом, тщательно размешивают до получения равномерной суспензии и сутки инкубируют в термостате при 37°С. Исследуемые пыли вводят в культуру 20 эмбриональных фибробластов млекопитающих через 26-28 ч после посева 120150 тыс. клеток/мл среды. Контролем служат необработанные культуры. Все культуры ставят в термостат при 37 °С 25 с постоянным поступлением 3% С0$. Проводят инкубацию в течение 24-48 ч. Готовят препараты по общепринятой методике, окрашивают гематоксилин-эозином и просматривают под микроскопом при 30 увеличении (об. 10 X, ок. 40Х). В препаратах одновременно подсчитывают количество клеток на площади 0,1 мм 2 (плотность клеток в абсолютных числах в 10 полях зрения); количество поврежденных клеток (изменение числа, формы, объема ядра и ядрышек), % от общего количества клеток; митотическую активность (количество митозов на 1000 клеток); коэффициент фаз (Кф) - отношение количества в профазе и метафазе к их числу в анафазе и телофазе; количество патологических митозов на 50 делящихся клеток по схеме Алова и Блюмкина. Стойкое изменение первых трех показателей свидетельствует о высокой степени цитотоксичности исследуемых пылей. При отсутствии цитотоксичного 35 эффекта эти показатели изменяются незначительно и временно. Значительное угнетение размножения клеток при высоком количестве "поврежденных" клеток и патологических митозов указывает на необходимость проведения кариометрических измерений площади и периметра (объема ядер клеток) на цитоанализаторе. Резкое увеличение объема ядер свидетельствует о необходимости дальнейшего исследования этих пылей при помощи общепринятых цитогенетических приемов на мутагенную и/или канцерогенную активность. Результаты определения цитотоксического эффекта двух сварочных пьшей различного химического состава приведены в таблице. Как видно из представленных данных, обе пыли обладают сильным сическим эффектом, вызывая не только гибель значительного числа клеток, но и серьезные повреждения самих клеток, резкое и стойкое угнетение их митотической активности с одновременным увеличением патологических митозов. Но пыль 2 вызывает резкое увеличение площади и периметра ядер, что свидетельствует о возможной потенциальной мутагенной и/или канцерогенной активности. Ф о р м у л а и з о б р е т е н и я Способ определения цитотоксичности промышленных пьшей. путем их инкубации с первичной клеточной культу40 рой и установлении токсичности по изменениях в клетках, о т л и ч а ю щ и й с я тем, что, с целью повышения точности способа, инкубацию про-/ водят в течение 24-48 ч, при этом ис45 пользуют 26-28 часовую культуру фибробластов легких или эмбриональных фибробластов человека, далее определяют показатель плотности клеток, митотической активности и количество 50 патологических митозов, по изменению которых определяют цитотоксичность промышленных пылей. 1365887 Пыль Контроль Ип Плотность Поврежден- Мнтотическая клеток ные клет- активность, * ки, X 60,110,53 Ki 6,9 37,2*2,36 1» 75+0,30 9,510,77 11,910,67 39,5 9,010,82 Fe 7,5 12,5 А,0 -. 45,0 4,5 6,5Ю,85 291* И , ! 50,311,39 3,310,41 16,511*65 221,118*85 53,611,75 5,2*0,26 29,5113,0 97,7*2,13 9,0 9,0 Патологичес- Средние значения кие митозы и мркметря I 20,4*0,97 26,5 Cr 1 І К Ф Редактор Н.Тнмонина Заказ 1704/ДСП 475)1,4? Составитель Л.Стебаева Техред М.Ходанич Корректор Г.Решетник Тираж 751 Подписное ВНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий 113035, Москва, Ж-35, Раушская йаб.> д. 4/5 Производственно-полиграфическое предприятие, г.Ужгород, ул.Проектная,