Речовина для кріоконсервування тканинних лімфоцитів

ДЛЯ СЛУЖЕБНОГО ПОЛЬЗОВАНИЯ ЭКЗ СОЮЗ СОВЕТСКИХ СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ РЕСііУьЛин 1 ( 5 ї ) 5 А 01 N 1/02 ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТНРЫТИЯМ ПРИ ГННТ СССР К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4308801/28-14 (22) 2 8 . 0 7 , 8 7 (71) Институт проблем криобиологии и криомедицины АН УССР (72) А.А. Дудаева, Н„Н. Попов, Г,С„ Тупчиенко, В,И. Гарбуз, В 0 П, Архиреев и И,А, Морозов (53) 615.475 (088.Я) (56) Авторское свидетельство СССР 1 № 1-481926, кл о А 01 N 1/02, 1988. (54) СРЕДА ДЛЯ КРИОКОИСЕРВИРОВАНИЯ ТКАНЕВЫХ ЛИМФОЦИТОВ ( 5 7 ) Изобретение относится к биологии и медицине. Цель изобретения повышение к а ч е с т в а продукта з а с ч е т , увеличения числа жизнеспособных к л е ток и упрощения подготовки к т р а н с фузии,, Среда содержит в к а ч е с т в е основного компонента полиглюкии; 5-7,5% п о л и э т и л е н о к с и д а ; 5-7,5% антиоксиданта 378, Изобретение относится к биологии и медицине и может быть использовано для криоконсирвирования тканевых лимфоцитов с целью последующей т р а н с фузии, а также для создания запасов этих клеток для лечения иммунодефиЦИтных состояний различного г е н е з а . Целью изобретения является повыше-! нне качества продукта за счет увеличения тела жизнеспособных клеток и упрощение процесса подготовки к трансфузии. Среда для криоконсервирования тканевых лимфоцитов содержит 5-7,5% ПЭО-400, 5,0-7,5% антиоксиданта 378, остальное раствор кровезаменителя полиглюкина. П р и м е р 1, Клетки тканевых лимфоцитов замораживают в предлагаемой среде (полиглюкин 87,5%; антиоксидант 7,5%, ПЭО-400 5%) и в и з в е с т ной среде (среда Игла 90%, ПЭО-400 10%). Суспензию тканевых лимфоцитов получают мягким гомогенизированием тиму6-90 сов мышей в среде Игла и фильтруют через капроновый фильтр, центрифугируют. Осадок клеток ресуспендируют, доводя до концентрации клеток, р а в ной 2*10 кл/мл. Отливают по 2,5 мл в три пробирки. Суспензию первой пробирки не замораживают - одна служит контролем, К суспензии второй пробирки добавляют 2,5 мл 20% раствор ПЭО-400 на среде Игла, Таким образом, конечная концентрация ПЭО-400 составл я е т 10%, После 15-минутной экспозиции замораживают, отогревают и тестируют. После размораживания клетки й отмывают центрифугированием и ресуспендируют для подготовки к трансфузии в ПОЛИГЛІОКИНЄ. Вновь проводят оценку сохранности клеток. Содержимое 3-й пробирки центрифугируют» К осадку добавляют до 2,5 мл полиглюкин с антиоксидантом в концентрации 7,5%, К этой суспензии добавляют 2,5 мп полиглюкина с антиоксидантом в концентрации 7,5% и ПЭО-400 в I концентрации 10%. Таким образом, по 543583 * сервирования (7,5% антиоксиданта лучают суспензию клеток в концентра378,5% ПЭО-400 и 87,5% полиглюкина). ции 1-Ю7 кл/мп в среде из 7,5% АО, После размораживания при 40°С 1* 5% ПЭО-400 и 87,5% лолиглюкина. После МО клеток в 0,2 мл среды вводят 15-минутной экспозиции замораживаютj летально облученным мышамо Затем проотогревают и тестируют как в примеводят иммунизацию их 0,5 мл 10% сусре 1, Для трансфузии данная среда пензией эритроцитов и определяют титр готова к применению» поэтому операция антител в сыворотке крови мышей на отмывки в этом случае исключается. Результаты представлены в таблице. 10 7, 9 и 14 сутки после иммунизации. Контролем служат трансфузии леТаким образом, процесс оті*івания тально облученным мышам в тех же конклеток от среды прототипа приводит центрациях и объемах нативных сплек уменьшению сохранности клеток по ноцитов и криоконсервированных на сресравнению с предлагаемой средой на де прототипа. 38%. Эта среда, не предполагающая \5 отмывания клеток, обеспечивает более Полученные данные позволяют заквысокую сохранность их, что обусловлючить, что после переноса летально ливает значительное увеличен! е тера-' облученным мышам спленоцитов, криолевтического эффекта. консервированных на среде прототипа титр антител на 14 сутки после имму20 низации составляет лишь 25% от контСохран- Сохранность рольного переноса нативных спленоциг Состав среды затов, тогда как при переносе спленоцимораживания ность лимфоцитов лимфоперед транс- ттов на предлагаемой среде титр антифузией от-25 е л был в 2 раза больше. Это свидецитов фузией OT-J5 тельствует о том, что криоконсервипосле носительно рование клеток в предлагаемой среде размора- контроля,% обеспечивает в 2 раза большую сохживания ранность функциональной активности относиклеток, чем при консервировании клетельно 30 ток на среде прототипа," • контроля, % Формула и з о б р е т е н и я 1. Полиглюкин 87,5% АО-7,5% ИЗО-400 5,0% 2 . Среда Игла Среда для криоконсервирования тканевых лимфоцитов, содержащая поли93+5 этил єно к с ид- 4 00 и физиологический разбавитель, о т л и ч а ю щ а я с я тем, что, с целью повышения качества п Р°ДУ к т а з а счет увеличения числа 90% жизнеспособных клеток и упрощения 55-10 (отПЭО-400 10% 77±3 подготовки к трансфузии, в качестве мывали) 100 100 3 . Контроль физиологического разбавителя она содержит полиглюкин, дополнительно содержит антиоксидант 378 при следующем П р и м е р 2. Для оценки функцио45 соотношении компонентов,%: нальной активности тканевых лимфоциПолиэтилентов используют способность лимфоцитов оксид- 400 5-7,5 к антителоабразованию. Антиоксидант Криоконсервирование проводят для 3785-7,5 лимфоцитов селезенки мышей в одном 50 Полиглюкин Остальное из предлагаемых вариантов среды конСоставитель А, Лычкова Корректор М. Максимишинец Редактор В, Трубченко Техред А.Кравчук 93-5 (не отмывали) Заказ 193/ДСП Тираж 283 Подписное ВНИИЇЇИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР 113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5 Производственно-издательский комбинат "Патент", г, Ужгород, ул. Гагарина, 101